氯硝柳胺对肺癌细胞株顺铂敏感性的影响

目的 研究氯硝柳胺对肺癌细胞株顺铂敏感性的影响.方法 氯硝柳胺和(或)顺铂处理人肺癌细胞株A549及顺铂耐药细胞株A549/DDP,用CCK-8法、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡变化.结果 氯硝柳胺呈剂量依赖性抑制A549、A549/DDP细胞增殖,24h IC50分别为(2.607±0.06)、(1.135±0.09) μmol/L.氯硝柳胺联合顺铂明显增加A549/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率(P＜0.05).结论 氯硝柳胺可抑制肺癌细胞生长和增加顺铂耐药细胞的敏感性.     

谷胱甘肽与顺铂联用对肺癌A549细胞增殖的影响

目的探讨谷胱甘肽与顺铂联用对肺癌A549细胞增殖的影响。方法应用MTT法及细胞计数评价细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧(ROS)水平,Western blot检测P53表达。结果 0.3、0.9g/L谷胱甘肽与3mg/L顺铂联用72h,1、3、9g/L谷胱甘肽与9mg/L顺铂联用30h,均可显著降低顺铂对A549细胞增殖的抑制作用(P<0.01)。9g/L谷胱甘肽与9mg/L顺铂联用,可减少A549细胞ROS产生和早期凋亡(P<0.01)。谷胱甘肽、顺铂单独或联用对P53蛋白表达无影响。结论谷胱甘肽与顺铂联用对A549增殖的影响取决于谷胱甘肽剂量。     

FBXO31对肺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨FBXO31基因对肺腺癌细胞系A549增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响.方法 通过脂质体转染法将FBXO31表达质粒及FBXO31 siRNA序列分别转染肺癌A549细胞,用Western blot、MTT、平板克隆、划痕和Transwell实验分别检测A549细胞中FBXO31蛋白表达、细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力.结果Western blot显示FBXO31表达质粒转染上调A549细胞中FBXO31蛋白表达,而转染siRNA下调FBXO31蛋白表达.FBXO31基因过表达增强A549细胞增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力,而FBXO31基因沉默抑制细胞增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力(P＜0.01).结论FBXO31基因可促进肺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力.     

长链非编码RNA-PVT1在顺铂诱导DNA损伤修复中的作用机制

目的 研究长链非编码RNA-PVT1对顺铂诱导DNA损伤修复的影响及其作用机制.方法 建立顺铂诱导非小细胞肺癌细胞株A549细胞DNA损伤模型,用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PVT1表达.通过siPVT1沉默A549细胞中PVT1表达,用qRT-PCR和Western blot检测核苷酸切除修复(NER)相关基因表达.用RNA免疫共沉淀(RIP)检测PVT1与ERCC1相互作用.结果 顺铂处理A549细胞明显下调PVT1表达.沉默PVT1后A549细胞中γH2AX表达显著增高,而NER途径中关键基因如ERCC1、DDB2表达明显降低.RIP实验表明PVT1可与ERCC1蛋白直接相互作用.结论 PVT1可能通过调节NER途径促进顺铂诱导DNA损伤修复.     

内质网应激在肺泡上皮间质转分化发生中的作用

目的 探讨衣霉素诱导的内质网应激在肺泡上皮细胞-间质转分化(EMT)中的影响及作用机制.方法 以质量浓度为1.25、2.5、5.0 mg/L的衣霉素(TM)分别处理人肺腺癌上皮细胞A549 24 h,MTT法检测细胞活力;RT-PCR和免疫印迹法检测GRP78、CHOP、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、Smad2/3、转录因子Snail的表达;以5μg/L TGF-β1分别处理A549细胞24 h或48h后,免疫印迹法检测GRP78和p-elF2α的表达.结果 1.25 mg/L的TM处理A549细胞24 h后,GRP78 mRNA和蛋白表达升高,CHOPmRNA表达上调;E-cadherin蛋白表达下降,Smad2/3活化,Snail表达上调.而TGF-β1处理A549 24 h,GRP78和p-elF2α表达均上调.结论 衣霉素诱导的内质网应激可介导A549细胞发生EMT,同时EMT发生过程中伴随着内质网应激的发生.     

三叶因子3对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响

目的探讨TFF3基因在非小细胞肺癌中的作用及其对凋亡的影响。方法免疫组织化学法检测组织芯片31例肺腺癌、21例肺鳞癌、10例正常肺组织TFF3表达阳性率;慢病毒包装TFF3基因ORF序列及TFF3-shRNA基因质粒、转染、嘌呤霉素筛选获得稳定过表达及沉默TFF3基因的A549细胞株;实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)和蛋白质印迹(Western blot)法验证TFF3基因和蛋白表达水平,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和信号通路分子Akt表达水平。流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果肺腺癌和鳞癌组织TFF3蛋白阳性表达率显著高于正常肺组织(P0.05),Ⅲ级肺癌组织中TFF3阳性表达率高于Ⅰ～Ⅱ级(P0.05),有淋巴结转移的肺腺癌和鳞癌组织中TFF3阳性表达率高于无淋巴结转移组织(P0.01)。过表达TFF3的A549细胞(A549-TFF3)中TFF3基因及蛋白水平显著高于对照组,沉默TFF3基因的A549细胞(A549-shTFF3)中TFF3 mRNA及蛋白水平较对照组明显降低(P值均0.01)。Western blot检测Bcl-2/Bax、p-Akt、p-Akt/Akt在A549-TFF3组显著高于对照组(P0.01);在A549-shTFF3组Bcl-2/Bax、p-Akt表达水平显著低于对照组(P0.01),p-Akt/Akt表达水平低于对照组(P0.05),Akt表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。流式细胞结果显示A549-TFF3细胞凋亡率较低(P0.01),A549-shTFF3细胞凋亡率明显高于对照组(P0.01)。结论非小细胞肺癌组织TFF3高表达,与病理分级及淋巴结转移有相关性。过表达TFF3在非小细胞肺癌细胞中可能通过激活Akt信号通路抑制肺癌细胞凋亡,促进肿瘤细胞恶性增生。     

臭牡丹总黄酮对A549细胞上皮间质转化相关蛋白的影响

目的 观察臭牡丹总黄酮对A549肺腺癌细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白的影响。方法 构建β-catenin真核过表达载体并转染A549细胞,将细胞分为空载组、β-catenin过表达组、空载组+臭牡丹总黄酮组、β-catenin过表达+臭牡丹总黄酮组。MTT法检测不同浓度的臭牡丹总黄酮对A549细胞体外增殖的抑制作用。实时定量PCR检测各组β-catenin mRNA的表达,Western Blot检测各组β-catenin、E-Cardherin 、Vimentin的蛋白水平。结果 MTT显示A549细胞活力随臭牡丹总黄酮浓度的增加受到明显抑制,IC₅₀为2.1 mg/mL。β-catenin 过表达组较空载组的β-catenin、Vimentin表达均明显上调,E-cardherin 表达下调。臭牡丹总黄酮在空载组与β-catenin 过表达组均能明显降低β-catenin mRNA与蛋白水平,增加E-cardherin蛋白表达,略微降低Vimentin蛋白表达。结论 臭牡丹总黄酮对A549肺癌细胞具有一定的体外抑制增殖作用,其抗肿瘤作用的可能机制是通过调控EMT的相关蛋白从而逆转β-catenin诱导的EMT现象而起作用。     

EGF上调TRPM7诱导肿瘤细胞迁移的分子机制研究

目的：探讨表皮生长因子（EGF）上调顺时受体电位 M7（TRPM7）以及 TRPM7参与 EGF诱导肿瘤细胞迁移的分子机制。方法 Western blot技术用于检测 Akt和vimentin的蛋白表达,钙成像技术用于细胞内钙离子浓度的检测,全细胞膜片钳技术用于记录TRPM7电流,激光共聚焦技术检测细胞骨架蛋白 F-actin的形态。结果 Western blot的结果显示EGF显著增加A549细胞Akt的磷酸化水平;PI3K阻断剂wortmanin可显著抑制 EGF上调TRPM7电流的作用;EGF孵育 A549细胞可上调 vimentin的蛋白表达水平,并改变细胞骨架蛋白 F-actin的荧光强度以及形态;稳定转染 TRPM7-shRNA可抑制高钙引起的细胞内钙升高及 EGF对细胞形态及F-actin表达的作用。结论 EGF可能通过PI3K-Akt信号通路上调TRPM7膜蛋白表达和通道功能,抑制钙离子内流,从而影响 EMT的产生和 F-actin的聚合,最终诱导细胞迁移。     

茶氨酸衍生物茶溴香酰胺脂质体对人肺癌细胞 生长和迁移的抑制作用

为了探索研究茶氨酸衍生物茶溴香酰胺制备的脂质体(TBrC-L)对人非小细胞肺癌A549细胞生长和迁移的抑制作用与其分子机制,采用薄膜分散法制备了TBrC-L,通过MTT法检测不同浓度的TBrC-L对人肺癌A549细胞生长的抑制作用;使用流式细胞术检测TBrC-L对人肺癌A549细胞凋亡的诱导作用;利用Transwell chamber法观察TBrC-L对人肺癌A549细胞迁移作用的影响;应用蛋白质印迹法检测人肺癌A549细胞中与凋亡和生长密切相关蛋白的表达和药物可能的作用靶点。实验结果显示,TBrC-L对人肺癌A549细胞生长和迁移有显著的抑制作用,促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长和迁移可能是其抗人肺癌作用的重要机制,其作用的分子机制涉及到抑制EGFR、VEGFR1、VEGFR~2和Met受体介导的Akt和NF-κB信号传导通路,本研究结果提示,TBrC-L具有应用于临床治疗和(或)辅助治疗人肺癌的潜力。     

大黄素对人肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

研究大黄素对人肺癌A549细胞的药效及其诱导细胞凋亡的分子机制。通过MTT法检测大黄素对A549细胞的杀伤作用;通过Annexin V-FITC/PI双染和流式细胞术检测大黄素对A549细胞的凋亡作用;通过免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白的表达量变化。大黄素对A549细胞具有良好的杀伤作用且呈浓度依赖性;荧光显微镜和流式细胞术检测发现大黄素能够诱导A549细胞的凋亡且呈时间依赖性;Western blot检测显示大黄素处理A549细胞后,p-AKT、Bcl-2的表达量明显减少,Bad和cleaved-caspase-3的表达水平明显增加。大黄素通过调控AKT信号传导途径诱导人肺癌A549细胞的凋亡。