高海拔地区不同品种种公牛离体精子遭受低温打击和冷冻伤害研究

精子的耐冻性在牛品种之间、个体之间均存在差异。离体精子遭受低温打击和冷冻伤害后,畸形精子数会增加,精子顶体会受到损伤。本试验对高海拔地区的荷斯坦、西门塔尔和牦牛三个品种种公牛离体精子遭受低温打击和冷冻伤害后的品质变化情况进行了研究,结果显示,荷斯坦牛、牦牛精子畸形率显著增加(P0.05),三个品种种公牛离体精子的顶体受损情况无显著差异(P0.05),但牦牛离体精子遭受低温打击和冷冻伤害后,Ⅳ型(顶体脱落)精子比例显著大于荷斯坦、西门塔尔两个品种(P0.05)。     

湖羊精液冷冻对受胎率的影响

本试验利用前期筛选的湖羊精液冷冻稀释液及冷冻保护剂制作湖羊冻精,对比冻精和鲜精的精子活力和顶体完整率。同时,对40头初产母羊和40头经产母羊进行同期发情处理,然后分组进行鲜精和冻精输精试验,跟踪受胎率。结果表明,冻精的活力和顶体完整率分别为0.396和49.2%,显著低于鲜精;初产母羊和经产母羊的冻精受胎率分别为41.7%和33.3%,也显著低于鲜精。说明湖羊精液冷冻对湖羊精子质量和母羊受胎率都存在显著影响。     

牦牛鲜精与冻精HSP70表达差异比较研究

旨在研究冷冻前后牦牛精子质量和HSP70表达变化。采集健康且繁殖能力正常的6头大通牦牛精液,将试验分为鲜精组和冻精组,以精子活力和质膜完整率作为评价精子质量的指标。采用实时荧光定量PCR、Western blot和免疫荧光技术检测HSP70在精子冷冻前后的表达差异。结果表明,与鲜精相比,冻融后精子活力和质膜完整率均极显著下降(P0.01),HSP70mRNA转录水平显著降低(P0.05),蛋白水平极显著下降(P0.01)。鲜精HSP70蛋白定位于精子顶体区、顶体赤道段、后顶体区和精子中段,而冻融精子HSP70蛋白主要位于后顶体区和精子中段,且平均光密度值极显著降低(P0.01)。综上表明,冻融后牦牛精子质量与HSP70表达量均降低,推测两者之间存在一定关联。     

牛精子冷冻前后的形态学对比试验

精子畸形率和顶体完整率是牛冷冻精液国家标准所规定的必须检查的两项指标,标准(GB4143-84)规定:鲜精的畸形率不得高于15%、冻精的畸形率不得高于20%、冻精的顶体完整率不得低于40%.精子畸形率和顶体完整率的测定不仅是衡量精液品质优劣的两项重要指标,同时也是影响受胎率的主要因素.本文通过研究牛精子在冷冻前后的形态学上的差异,从而找出引起此种形态变化的因素,以便在冻精生产过程中更好地控制这两项指标,达到提高冻精品质的目的.     

冷冻保存对公猪精子功能的影响

试验旨在探究公猪精液冷冻保存对其精子功能的影响。取长白猪的鲜精和优质冻精,用精子分析仪检测精子的运动能力,台盼蓝染色检测精子活率,体外受精（IVF）试验检测卵裂率与囊胚率,采用不同功能检测试剂盒检测冻精和鲜精的顶体完整率、线粒体膜通道孔（MPTP）活性、线粒体膜电位（MMP）、线粒体活性、线粒体氧化应激活性氧（ROS）以及精子DNA完整性,实时荧光定量PCR检测弱精子症相关蛋白基因SMCP、TEKT3、DNAH1、TCTE3的表达。结果表明,与猪鲜精相比,猪冻精的活率及活力均显著降低（P<0.05）,冻精的顶体完整率也明显下降（P<0.05）;冻精的卵裂率和囊胚率显著低于鲜精（P<0.05）;精子线粒体功能分析结果显示,冻精的MPTP相对荧光单位值（RFU）、线粒体膜电位荧光比率以及线粒体活性光密度（OD）值均显著低于鲜精（P<0.05）;精子线粒体ROS检测发现,冻精的RFU值显著高于鲜精（P<0.05）;精子DNA完整性检测结果显示,冻精拖尾率显著高于鲜精（P<0.05）;而弱精子症相关蛋白基因的表达与鲜精相比,差异不显著（P>0.05）。综上所述,冷冻导致猪精子活率、活力、线粒体功能、DNA完整性下降,最终使得冷冻精液精子的受精能力降低。     

不同品种绵羊的细管冻精解冻质量检测分析

选取8个不同品种羊(引进品种2个,本地品种4个,培育品种2个)的细管冻精,进行外观、剂量、精子活力、前向运动精子数和精子顶体完整率指标的检测分析。结果显示,各细管冻精外观均完好,符合生产标准;剂量检测值为(0.21±0.01) mL,均符合国家标准(≥0.18 mL);精子活力为(37.50%±1.70%)～(51.0%±3.70%),其中,陶赛特羊精子活力值最高,黑裘皮藏羊精子活力值最低;前进运动精子数为≥3×10⁷个,符合国标;精子顶体完整率为(71.90%±1.13%)～(81.23%±1.0%),其中,西藏(草地型)羊精子顶体完整率最高,陶赛特羊精子顶体完整率最低。8个品种的羊冻精在解冻复苏后各项指标均达到配种生产要求。引进品种的精子活力比本地品种高,前进运动精子数和顶体完整率等其他指标有高有低。     

使用荧光染色和流式细胞术检测山羊精子

分别使用PI(碘化丙碇),FITC-PSA(异硫氰酸荧光素络合豌豆凝集素)和RH123(罗丹明)对山羊冷冻精子进行染色,再使用流式细胞仪进行检测、分析。试验发现,对于山羊的冷冻精子,PI染色阴性的为质膜完整的精子;FITC-PSA染色阴性的可能为顶体完整的精子,染色FITC-PSA+和FITC-PSA++,可能分别为顶体反应中的精子和顶体破损精子;RH123+应为线粒体无活性精子,有绿色荧光可能是因为染料残留在细胞膜上导致,而RH123++可能应为线粒体有活性的活精子。不同个体羊的精子对于低温敏感度不一样。不同个体羊之间的冻精顶体完整率、质膜完整率、线粒体有活性的精子比率之间差异显著,据此应选择合适的山羊个体进行精液冷冻。     

波尔山羊除精浆冷冻精液的试验研究

以波尔山羊精液为试验材料,通过二步稀释法在降温前以葡萄糖-卵黄液为洗涤液,应用离心洗涤法对波尔山羊精液进行1000 r/min离心处理,制作细管冻精,并进行活力、顶体完整率、存活时间以及超微结构的观察分析.结果表明,经离心处理的冻精精子活率显著优于对照组(P<0.05),精子顶体完整率显著高于对照组(P<0.05),精子存活时间处理间差异不显著,除精浆可使精子所受冷冻损伤大为减轻,显著提高冻后精子品质.     

红景天多糖对藏猪精液冻后品质及精子基因组DNA甲基化的影响

在藏猪精液的冷冻液中添加不同质量浓度的红景天多糖(0,2,4,6,8,10mg/L),制成高密度细管冻精,以冷冻解冻后精子活率、精子畸形率、精子顶体完整率和质膜完整率为精液品质的评价指标,筛选最适红景天多糖添加质量浓度;用甲基化荧光定量法检测3组(鲜精组、未添加组、最适添加组)精子基因组DNA甲基化的水平。结果显示:添加红景天多糖质量浓度为6mg/L组的精子活率显著高于其他组(P<0.05),该组精子畸形率、精子顶体完整率、精子质膜完整率也显著好于未添加组(P<0.05);这3组精子基因组的DNA甲基化水平(0.610 5±0.080 0,0.945 7±0.043 7,0.680 2±0.051 0)中,最适添加组虽显著高于鲜精组(P<0.05),但却显著低于未添加组(P<0.05)。结果表明:在藏猪精液冷冻液中添加质量浓度6mg/L的红景天多糖不仅可以明显改善藏猪精液冻后品质,而且可以明显减少冷冻对藏猪精子基因组DNA甲基化水平的影响,这将为提高藏猪精液冷冻保存效果的进一步研究提供参考。     

不同剂型及稀释精液平衡时间对藏獒冻精品质的影响研究

为了探讨每剂含不同前进运动精子数(≥1 000万个和≥2 000万个)和稀释精液不同平衡时间(1 h、2 h、3.5 h)对藏獒冻精品质的影响,试验比较了0.25 m L细管剂型藏獒冻精解冻后精子活力、精子顶体完整率、精子畸形率、精子37℃存活时间。结果表明:每剂含前进精子数≥2 000万个与≥1 000万个相比,藏獒冻精解冻精子活力、精子顶体完整率、精子畸形率差异不显著(P0.05);而每剂含前进运动精子≥2 000万个组的藏獒冻精解冻后37℃存活时间优于每剂含前进运动精子数≥1 000万个组,且差异显著(P0.05)。藏獒稀释精液平衡2 h组的冻精活力显著高于平衡1 h组和3.5 h组(P0.05),而平衡1 h组和3.5 h组间差异不显著(P0.05)。冻精顶体完整率以平衡2 h组最高,为(41.00±1.47)%,与平衡3.5 h组间存在显著差异(P0.05)。平衡2 h组的冻精畸形率低于平衡1 h组和3.5 h组。说明藏獒0.25 m L细管剂型以每剂含前进运动精子数≥2 000万个,稀释精液平衡时间以2 h为宜,可获得较好的冷冻效果。     

在4℃降温平衡过程中0.2g/L咖啡因与精子共孵育时间对猪颗粒冻精质量的影响

实验旨在探讨在猪精液于4℃平衡2 h过程中0.2 g/L咖啡因与精液共孵育2 h、1 h和0.5 h,对颗粒冻精解冻后精子活率、活力、质膜完整性和顶体完整性以及解冻后精子体外存活时间等指标的影响,以期进一步提高猪颗粒冻精质量。实验结果表明,在精液冷冻之前,咖啡因不同平衡时间组的精子活率和活力都呈现出升高趋势,但与对照组差异不显著;咖啡因与精液共孵育2 h、1 h和0.5 h组的精子顶体完整率和质膜完整率显著低于对照组,前3组之间差异均不显著。而颗粒冻精解冻后,咖啡因与精液共孵育2 h、1 h和0.5 h组精子活率和活力均显著高于对照组,其中共孵育1 h组显著高于其他3组(P0.05),共孵育2 h组和0.5 h组间差异不显著(P0.05);共孵育2 h组精子顶体完整率和质膜完整率显著低于对照组和共孵育0.5 h、1 h组(P0.05),但后3组之间差异不显著;共孵育2 h组精子存活时间显著低于对照组、共孵育1 h和0.5 h组(P0.05),其中共孵育1 h组精子存活时间最长,达7 d以上。总之,在精液4℃降温平衡过程中咖啡因与精液共孵育1 h对冷冻后精子质量最有利,解冻后精子活率和活力显著高于其他各组,且解冻后精子体外存活时间最长。     

鸵鸟卵黄对猪精子冷冻后质量的影响

为了提高猪冷冻精液品质和精子抵抗低温打击的能力,本研究以5%、10%、15%、20%和25%等不同浓度的鸵鸟卵黄作为冷冻保护剂,以20%的鸡蛋卵黄和20%的鸽蛋卵黄为对照,将冷冻-解冻后的精子活率、质膜完整率和顶体完整率作为评价指标,分析鸵鸟卵黄对猪精子的抗冷冻保护作用。结果表明：稀释液中添加20%鸽蛋卵黄时,精子活率、顶体完整率和质膜完整性分别为52.11%、55.62%和54.94%,显著高于其他组（P〈0.05）。虽然稀释液中添加15%鸵鸟卵黄时,冷冻-解冻后精子活率、顶体完整率和质膜完整率显著高于5%、10%、20%和25%鸵鸟卵黄组,但仍然显著低于稀释液中添加20%鸽蛋卵黄处理组。本研究表明,鸵鸟卵黄在冷冻过程中对猪精子具有一定的保护作用,但相对于鸽子蛋和鸡蛋卵黄效果并不理想。     

多浪羊细管冷冻精液制作技术的研究

为保存和利用优秀地方品种多浪羊的遗传资源,试验在多浪羊原产地进行了细管冻精制作试验.用采集的多浪羊种公羊精液,比较5种冻精保存液配方的细管冻精冷冻效果,测定解冻后精子活力.结果表明:4.83%乳糖保存液解冻后精液的活率平均为36% ,优于其它4种保存液,且差异极显著(P<0.01),解冻后精子的畸形率也均低于其它4种稀释液,差异极显著(P<0.01).表明4.83%的乳糖保存液配方是理想的绵羊细管冻精稀释液.     

无角陶赛特羊细管冻精质量检查初报

羊冻精的质量是影响羊群冷配受胎率的关键因素,对羊人工输精的效果和羊冷配技术推广有重要影响.我们在实施良种肉羊细管冻精研制项目中,按照国家技术监督局发布的<山羊冷冻精液质量检测方法>(GB20557-2006)对采用我们制定的细管冻精生产工艺流程生产的无角陶赛特羊细管冻精进行了冻精质量检测,测定了冻精解冻后精子的活力、前进运动精子数、畸形率、顶体完整率、每剂量细菌数、精子存活时间,测定结果表明无角陶赛特羊细管冻精质量指标均达到国家标准.     

猪精子顶体素水平与精液质量参数和体外受精间的联系

本研究目的是评估不同处理对精子顶体素活性的影响以及顶体素活性、精液参数和体外受精间的联系.鲜精、稀释精液(1:1)和液相精液(17℃)的精子顶体素活性分别是5.27,4.28和4.41 mIU/106.冻精或液相精液保存4 d后顶体素活性显著下降(P＜0.05).公猪间液相精液顶体素活性和低渗膨胀精液百分数有显著的差异(P＜0.05).冷、热应激对精子顶体素活性没有影响.鲜精和冻精的顶体素活性与低渗膨胀精子百分数和顶体完整率呈正相关.不同种猪液相精液精子顶体素活性与体外受精率和随后的囊胚发育率相关性不大.因此建议顶体素活性与其它精子功能参数相结合才能精确预测精子受精力.     

犬冷冻精液技术的试验研究初报

介绍了犬微型细管(0.25 mL)冻精制作方法,优选出冷冻稀释液及稀释操作程序。制作结果:冷冻精液解冻活力达0.405±0.058,精子顶体完整率为(43.58±6.73)%,复苏率达54.6%。精子畸形率为(13.80±4.26)%;不同品种公犬鲜精和冻精品质差异不大,但个体差异显著,有的耐冻性很差;不同初始冷冻温度下,解冻效果各异,以-111~-130℃冷冻效果较好;冷冻时间10~15 min为好;稀释方法还待进一步探讨。     

不同稀释液配方对牛冻精品质的影响

选用3种稀释液配方分别对6头种公牛精液进行稀释、封装、冷冻,并检查种公牛冻精解冻后的精子活力、畸形率、顶体完整率、冻后废弃率、存活时间及镜检感光度.结果表明：3种不同稀释液配方对种公牛精液冻后活力影响差异均显著（P＜0.05）,Ⅰ稀释液生产冻精的畸形率极显著高于Ⅱ稀释液和Ⅲ稀释液（P＜0.01）,3种稀释液冻精精子顶体完整率之间差异均极显著（P＜0.01）,Ⅲ稀释液与Ⅰ稀释液和Ⅱ稀释液间对牛精液所生产冻精的冻后废弃率影响均差异显著（P＜0.05）,Ⅰ稀释液与Ⅱ稀释液和Ⅲ稀释液间对牛精液所生产冻精的存活时间影响差异也显著（P＜0.05）,Ⅲ稀释液生产的冻精精子感光度优于Ⅰ稀释液和Ⅱ稀释液,其余各项指标差异均不显著（P＞0.05）.因此,可用自配Ⅱ稀释液替代进口专用Ⅲ稀释液.     

牛冷冻精液稀释液中草药配方的初步研究

通过比较以淫羊藿为主要成分的单方及复方中草药提取液对牛冷冻精液解冻后精子活率、畸形率、顶体完整率及低温保存时间的影响，以期开发牛冷冻精液中式稀释液。将三种不同配方的淫羊藿提取液分别以6．25％、12．5％、25．0％、50．0％的体积分数添加于稀释液中，制作牛颗粒冻精，利用干解冻法（40～42℃）解冻后分别检查精子活率、畸形率和顶体完整率，评定其品质。结果表明：配方三取得了较佳的冷冻效果。其提取液添加12．5％时精子冻后活率平均达到0．56，极显著高于其他各组（P〈0．01）：精子顶体完整率最高达到76．80％。畸形率仅14．61％，低温保存时间长迭138h。配方三最有利于生产牛冷冻精液。     

不同品种纯种肉用绵羊精液品质比较

选取饲养管理水平、年龄、采精频率、季节等条件一致的无角陶赛特羊、萨福克羊、夏洛莱羊、特克塞尔羊4个品种种公羊,采取相应精液进行品质比较。结果表明,所选种公羊的采精量、精子密度、鲜精活率、畸形率、顶体完整率都有差异,但采精量、鲜精活率、畸形率3个指标之间均差异不显著(P>0.05),而密度与顶体完整率两个指标间差异显著(P<0.05)。4个品种中萨福克种公羊的精子密度最高,其次为特克塞尔种公羊和夏洛莱种公羊,最低的为无角陶赛特种公羊。4个品种中无角陶赛特种公羊的精子顶体完整率最高,其次为特克塞尔种公羊和萨福克种公羊,最低的为夏洛莱种公羊。     

猪精液冷冻过程中的脂质过氧化损伤

实验采集长白猪精液,分析猪精液中抗氧化酶活性及冷冻-解冻过程中精子抗氧化酶活性、精子质量与丙二醛(MDA)含量变化的相关性分析,研究猪精液冷冻过程中的脂质过氧化损伤。结果表明:新鲜猪精子和精浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性较高、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、谷胱甘肽还原酶(GR)活性较低,没有检测到过氧化氢酶(CAT);解冻后精子中SOD、GPX活性降低,SOD活性与鲜精相比差异极显著(P<0.01),精子中MDA含量极显著高于鲜精和平衡后精子(P<0.01)。精子中MDA含量与SOD、GPX活性、质膜完整率和顶体完整率呈负相关,但差异不显著(P>0.05),与活力和活率呈极显著负相关(P<0.01)。结果表明,在猪精液冷冻过程中SOD、GPX活性变化从一定程度上影响了猪精子脂质过氧化损伤,又引起精子活力和活率发生变化,继而影响精子的质膜和顶体完整性。