青海牦牛和藏羊冷冻精液顶体完整率研究

为了研究牦牛、藏羊离体精子遭受低温打击和冷冻伤害差异,试验对牦牛、藏羊的鲜精采用最佳的冷冻程序进行细管冻精,比较其鲜精及冻后精子顶体完整率差异,并分析冻后精子顶体完整率降低的原因。结果表明:牦牛的冻精顶体完整率显著低于藏羊的(P0.05)。牦牛精子冷冻后,精子顶体完整率为53.92%,较鲜精精子顶体完整率降低30.90个百分点;藏羊精子冷冻后,精子顶体完整率为84.93%,较鲜精精子顶体完整率降低8.53个百分点。牦牛离体精子抗低温打击和冷冻伤害能力显著低于藏羊。     

牛精子冷冻前后的形态学对比试验

精子畸形率和顶体完整率是牛冷冻精液国家标准所规定的必须检查的两项指标,标准(GB4143-84)规定:鲜精的畸形率不得高于15%、冻精的畸形率不得高于20%、冻精的顶体完整率不得低于40%.精子畸形率和顶体完整率的测定不仅是衡量精液品质优劣的两项重要指标,同时也是影响受胎率的主要因素.本文通过研究牛精子在冷冻前后的形态学上的差异,从而找出引起此种形态变化的因素,以便在冻精生产过程中更好地控制这两项指标,达到提高冻精品质的目的.     

日粮能量、蛋白水平对辽宁绒山羊精液品质和受胎率的影响

试验研究日粮能量、蛋白质水平对种公羊精液质量和受胎率的影响。以辽宁绒山羊种公羊为试验材料,采用单因子随机试验设计,将18只成年种公羊按照采精量、产绒量平均分为3组:高能量高蛋白组(HEHP)、高能量低蛋白组(HELP)、低能量低蛋白组(LELP),每组6只。试验结果表明:日粮蛋白质水平显著影响密度、有效精子数和冻精产量;日粮能量和蛋白质水平对鲜精活力和冻精活力、鲜精畸形率、鲜精顶体完整率、母羊受胎率无显著影响。     

羊冷冻精液的制作与应用技术研究

研究筛选出了进行羊冷冻精液制作的绵羊、山羊稀释液配方,冻制羊冷冻精液解冻后活力和顶体完整率都达到了进行羊冷冻精液输精质量标准要求。应用绵羊冷冻精液给母羊输精,情期配种受胎率达到了65%;应用山羊冷冻精液给母羊输精,情期配种受胎率达到了66%,并取得了显著的改良效果。     

精液超低温冷冻对羊繁殖率的影响

冷冻造成精子的结构和功能变化是导致繁殖率低的根本原因。笔者通过对比试验,检测精液冷冻后对羊繁殖率的影响。用假阴道法采集3只~4只公羊精液,用Tris稀释液作为冷冻保存液,用TALP作为解冻液,比较精液冷冻前后活力;对同期发情处理的羊只进行鲜精和冻精人工授精,比较两者在受胎率上的变化。结果表明,冷冻前后精子活力分别为74.43%和46.25%,受胎率分别为83.33%和47.06%,说明超低温冷冻通过影响精子内部结构,显著降低了精子活力和受胎率。     

冷冻保存对公猪精子功能的影响

试验旨在探究公猪精液冷冻保存对其精子功能的影响。取长白猪的鲜精和优质冻精,用精子分析仪检测精子的运动能力,台盼蓝染色检测精子活率,体外受精（IVF）试验检测卵裂率与囊胚率,采用不同功能检测试剂盒检测冻精和鲜精的顶体完整率、线粒体膜通道孔（MPTP）活性、线粒体膜电位（MMP）、线粒体活性、线粒体氧化应激活性氧（ROS）以及精子DNA完整性,实时荧光定量PCR检测弱精子症相关蛋白基因SMCP、TEKT3、DNAH1、TCTE3的表达。结果表明,与猪鲜精相比,猪冻精的活率及活力均显著降低（P<0.05）,冻精的顶体完整率也明显下降（P<0.05）;冻精的卵裂率和囊胚率显著低于鲜精（P<0.05）;精子线粒体功能分析结果显示,冻精的MPTP相对荧光单位值（RFU）、线粒体膜电位荧光比率以及线粒体活性光密度（OD）值均显著低于鲜精（P<0.05）;精子线粒体ROS检测发现,冻精的RFU值显著高于鲜精（P<0.05）;精子DNA完整性检测结果显示,冻精拖尾率显著高于鲜精（P<0.05）;而弱精子症相关蛋白基因的表达与鲜精相比,差异不显著（P>0.05）。综上所述,冷冻导致猪精子活率、活力、线粒体功能、DNA完整性下降,最终使得冷冻精液精子的受精能力降低。     

羊冷冻精液的制作与应用技术研究

课题研究筛选出了进行羊冷冻精液制作的绵羊、山羊稀释液配方,冻制羊冷冻精液解冻后的活力和顶体完整率都达到了进行羊冷冻精液输精质量标准要求,应用绵羊冷冻精液给母羊输精,情期配种受胎率达到了65%,应用山羊冷冻精液给母羊输精,情期配种受胎率达到了66%的较好水平,并取得了显著的改良效果。     

用电子显微镜和生物化学的方法评定绵羊冷冻精液品质

作者对绵羊冷冻精液的精子顶体完整率,精清中的透明质酸酶、谷草转氮酶、乳酸脱氢酶的活力与受胎率的关系进行了研究。利用电子显微镜负染色技术检查冷冻绵羊精子的顶体完整率,同时测定精清中的 Hyase、GOT 和 LDH的活力。根据统计分析,顶体完整率和受胎率之间呈显著相关(P<0.05)。Hyase 和 GOT 与受胎率呈显著负相关(P<0.05),但是 LDH 的活力与受胎率无显著相关(P>0.05)。因此,能够利用这些方法作为评定绵羊冷冻精液品质的指标之一,并在一定程度上反映了精液的受胎能力。     

绵羊精子顶体普通光学显微镜观察

家畜冷冻精液的品质是影响受胎率的重要因素之一。近年来,有些研究者认为,用精子顶体完整率评定精液品质及受精力较活力评定理想。为此,我们对绵羊冻精精子顶体的染色、观察方法、受胎结果进行了一些试验。报告如下: 一、采精与冷冻精液用假阴道采自1983年4—6月本站的2头林肯公羊和2头苏联美利奴种公羊,共计67头次。两头林肯公羊,林LR与林LY的精子密度为15.68±5.67和22.23±5.23亿/毫升,     

猪精液冷冻技术研究

本研究取得突破性进展。每次30毫升以上块状和15毫升塑料安瓿精液冷冻获得成功;利用电镜观察证明,冻后精子顶体完整率与受胎率呈显著正相关;研制优选出的冷冻、解冻稀释保护液及成套冷冻技术操作程序、其冻精活率0.5左右、情期受胎率70.59％,窝产仔8.34～9.73头。     

诱导奶山羊发情及解冻精液的配种技术

利用外源激素诱导母羊同期发情效果,对影响冻精配种受胎率的各种因素进行了试验。结果表明,三合激素处理效果显著,注药后48 h100%母羊发情,冷冻精液配种情期受胎率可达51.06%,产羔率220.35%;利用PMSG处理,同期发情效果不如三合激素明显,发情集中在72 h内,发情率85%;利用IC I(80996)诱导母羊发情效果最差,发情率仅达61.67%,并集中在72 h内。同时用不同解冻方法解冻精液后对精子活力、存活时间、顶体完整率、死活染色率进行了对比分析,80℃干解冻最理想(P0.01),活力达0.4,存活时间18 h以上;采用湿解冻时温度应控制在40℃,在实际生产中采用一次性解冻(80℃干解冻或40℃湿解冻)2~3粒冻精,不影响受胎率。     

五种糖类对犬精液冷冻保存效果的研究

选取8只身体健康、性欲旺盛的比格公犬,采集其精液,对鲜精进行质量检测,主要包括颜色、射精量、精子活率、活力和pH。选取精子活率达到70%以上犬精液用于后续精液冷冻试验。分别将含有葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖和海藻糖的精液稀释液与精液按照1∶2的比例进行稀释。经冷冻解冻后,进行活率、活力、质膜完整性和顶体完整性的精子质量检测。通过对新鲜精液进行品质检测,结果显示5只合格用犬的平均射精量为2.85 mL,密度为2.01×10~8个/mL,pH为6.56。含有果糖的冷冻稀释液中精子活率和活力最高,分别达59.90%和54.00%;其次是添加葡萄糖和乳糖的稀释液中活率较高,分别为59.21%和56.73%,且两组稀释液中精子解冻后活力均为52.00%。进一步评估精子解冻后质膜完整率,结果显示葡萄糖和果糖组显著高于其他组,分别达48.73%和49.52%;而蔗糖添加组精子质膜完整率最低,为42.21%。稀释液中添加果糖的精子解冻后顶体完整率显著高于其他组,而添加蔗糖组顶体完整率最低。在比格犬的精液冷冻保存中,添加果糖的冷冻稀释液能显著提高精子的活率和活力,从而达到提高冻精质量的效果。     

牦牛鲜精与冻精HSP70表达差异比较研究

旨在研究冷冻前后牦牛精子质量和HSP70表达变化。采集健康且繁殖能力正常的6头大通牦牛精液,将试验分为鲜精组和冻精组,以精子活力和质膜完整率作为评价精子质量的指标。采用实时荧光定量PCR、Western blot和免疫荧光技术检测HSP70在精子冷冻前后的表达差异。结果表明,与鲜精相比,冻融后精子活力和质膜完整率均极显著下降(P0.01),HSP70mRNA转录水平显著降低(P0.05),蛋白水平极显著下降(P0.01)。鲜精HSP70蛋白定位于精子顶体区、顶体赤道段、后顶体区和精子中段,而冻融精子HSP70蛋白主要位于后顶体区和精子中段,且平均光密度值极显著降低(P0.01)。综上表明,冻融后牦牛精子质量与HSP70表达量均降低,推测两者之间存在一定关联。     

如何对奶牛适时输精

1提高奶牛受胎率的关键技术1.1采用优质冻精精液的好坏直接关系到奶牛的受胎率。引进冻精时,除要求所选公牛具有很高的TPI性能指数外,还应具备良好的繁殖性能。确定引进的冻精应在当时抽取一定比例的冷冻精液进行包括精子活力、密度、顶体完整率等指标在内的精液品质检查。引进后冻精也应定期进行精液品质检测,保证配种所用冻精的安全性和优质性。     

维生素E提高绵羊颗粒冻精品质的机理研究

以无角多赛特公羊为试验对象,采用2步稀释法,在冷冻精液稀释液中添加维生素E,对维生素E提高绵羊颗粒冻精品质的机理进行初探.试验1证明,试验组的活率(0.435)极显著高于对照组(0.365)(P＜0.01),其精子顶体总异常率(33.72%)极显著低于对照组(44.35%)(P＜0.01),且顶体完整率与冻精活率相关极显著(r＝0.662,P＝0.037).添加维生素E可降低冷冻对精子顶体的损害程度,冷冻精液品质得到显著改善.试验2结果表明添加维生素E后AST、ALP、GGT、CK、LDH与ALT的活性均与对照组无显著差异.但对照组与试验组比较,GOT及CK释放量与解冻精子的活率负相关下降(分别为r＝-0.536,r＝-0.209及r＝-0.419,r＝-0.051),LDH的释放量与解冻精子的活率之间正相关(r＝0.123与r＝0.507).试验3结果证明在绵羊冷冻精液稀释液中添加维生素E可以显著提高精子顶体酶的活力,分别为82.91 mu/ml和99.82 mu/ml(P＜0.05).绵羊冷冻精液精子顶体酶活力与精子活率呈正相关(r=0.490),与精子畸形率呈负相关(r=-0.122),冷冻精子活率随着精子顶体酶活力的提高而提高.     

复合添加剂对解冻后奶牛性控冻精质量及受胎率的影响

【目的】试验旨在研究以褪黑素和地诺前列腺素组成的复合添加剂对奶牛性控冻精解冻后精子质量及奶牛人工授精后受胎率的影响。【方法】30份奶牛性控冻精样均分为2组：试验组和对照组,试验组添加由24 ng/mL褪黑素、1.5 mg/mL地诺前列腺素及精液稀释液组成的250 μL复合添加剂,对照组添加250 μL精液稀释液,试验组和对照组均与解冻后的奶牛性控冻精按照1∶1（V/V）进行混合,室温孵育0、2及4 h,通过免疫荧光染色分析精子活率、顶体完整率、高能线粒体活性精子比率;对216头青年奶牛和82头头胎奶牛输精后通过28 d早孕检测来确定受胎率情况。【结果】与对照组相比,经复合添加剂处理0 h的性控冻精活率、顶体完整率及高能线粒体活性精子比率均无显著变化（P＞0.05）;经复合添加剂处理2 h的性控冻精活率、顶体完整率、高能线粒体活性精子比率均显著升高（P＜0.05）;经复合添加剂处理4 h的性控冻精活率和顶体完整率均无显著变化（P＞0.05）,高能线粒体活性精子比率显著升高（P＜0.05）。在输精试验中,试验组青年奶牛和头胎奶牛中的受胎率分别为65.22%和48.21%,均显著高于对照组（P＜0.05）。【结论】以褪黑素和地诺前列腺素组成的复合添加剂可以促进解冻后奶牛性控冻精精液品质以及青年奶牛和头胎奶牛输精后的受胎率。     

波尔山羊除精浆冷冻精液的试验研究

以波尔山羊精液为试验材料,通过二步稀释法在降温前以葡萄糖-卵黄液为洗涤液,应用离心洗涤法对波尔山羊精液进行1000 r/min离心处理,制作细管冻精,并进行活力、顶体完整率、存活时间以及超微结构的观察分析.结果表明,经离心处理的冻精精子活率显著优于对照组(P<0.05),精子顶体完整率显著高于对照组(P<0.05),精子存活时间处理间差异不显著,除精浆可使精子所受冷冻损伤大为减轻,显著提高冻后精子品质.     

拉布拉多犬冷冻精液宫腔内输精试验研究

比较2种不同的冷冻稀释液:Tris-果糖-柠檬酸钠(Ⅰ号)和葡萄糖-乙酸钠-柠檬酸钠(Ⅱ号)对拉布拉多犬冷冻精液宫腔内输精效果,并分析同一稀释液配方不同解冻温度效果,在此基础上,选取犬专用宫腔输精器开展人工授精。结果显示:Ⅰ号稀释液解冻后,精子活力为0.419±0.15,顶体完整率为(58.26±8.1)%,畸形率为(10.3±0.3)%;Ⅱ号稀释液解冻后,精子活力为0.368±0.04,顶体完整率为(55.4±6.3)%,畸形率为(11.1±0.2)%,前者的冷冻效果明显优于后者。同一稀释液配方解冻温度65℃(4~5 s)解冻后的精液品质明显优于40℃(10~12 s);冻精情期受胎率达90%,比自然交配受胎率高10.0%,差异显著(P0.05)。本试验已突破多年来一直困扰犬冷冻精液人工授精技术发展运用的瓶颈,开发出高效冷冻稀释保护液以及高受胎率的宫腔内输精方法。     

弗莱维赫后代公牛在贵州喀斯特地区繁殖性能的研究

为了全面了解弗莱维赫后代公牛在贵州喀斯特地区的繁殖性能,经过2年时间,对8头18月龄以上弗莱维赫×西门塔尔(弗×西)种公牛和6头18月龄以上法系西门塔尔与法系西门塔尔输配所生种公牛(西×西)冷冻精液(冻精)生产情况进行比较,并分别用其冻精对母牛进行人工授精,观察其繁殖情况。结果表明:弗×西组平均初采月龄比西×西组早,且差异不显著(P0.05);弗×西组次平均采精量、鲜精活力、冻精活力和复苏率比西×西组高,且差异均不显著(P0.05);西×西组鲜精密度比弗×西组高,且差异不显著(P0.05)。2组种公牛均表现出较强的冻精生产能力,冻精产量较高,质量好,精子耐性较强,复苏率高,冻精各项指标符合国家牛冷冻精液GB 4143—2008标准。弗×西组种公牛冻精质量比西×西组好,冻精活力超过国家合格标准9.3%。弗×西组和西×西组种公牛冻精在遵义县进行人工授精输配试验,受胎率分别为80.00%、78.02%,且差异不显著(P0.05);产犊率分别为75.00%、71.83%,差异不显著(P0.05)。弗×西组和西×西组种公牛冻精在纳雍县进行人工授精输配试验,受胎率较高,分别为83.93%、81.82%,且差异不显著(P0.05);产犊率分别为74.47%、74.44%,差异不显著(P0.05)。     

公野牦牛高繁殖力因析

本项研究首次对野牦牛的精液品质、精子超微结构、精液精子酶活力等项指标进行了测定,发现具有以下特点:精子密度大,每毫升精液含精子21.3亿;精子存活时间长,0—4℃存活57小时,解冻后37℃条件下存活12小时;抗力系数144000;解冻后精子畸形率和顶体完整率分别为9.17%、87.53%;精液运动粘度为1.169cP;总氮量1437.7mg/100ml;精子头短尾长,与家牦牛及黄牛差异显著或极显著;精子透明质酸酶活力极显著高于家牦牛,LDH 活力比家牦牛高48%。因此,公野牦牛具有高繁殖力,与家牦牛冻配受胎率达88.9%;与普通牛种(黄牛)反杂交冻配受胎率达71.58%。