猪凝血酶的亲和层析纯化及其酶原的激活研究

采用柠檬酸钡作吸附剂，ＥＤＴＡ溶解的方法从猪血浆提取凝血酶原，建立了凝血酶原激活的简单方法。并以环氧氯丙烷活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ为载体。采用１－乙基－３－（３－二甲氨丙基）碳二亚胺进行肝素的固定化，将固定化肝素用于猪凝血酶的亲和层析纯化。结果表明，通过一步亲和层析将猪凝血酶粗品提纯了８．２倍，获得了比活超过１１００Ｕ／ｍｇ的凝血酶，收率为６０％。     

猪凝血酶的分离纯化和部分性质研究

以猪血为材料,采用等电点沉淀和７２４树脂离子交换柱层析分离提纯,得凝血酶原,经ＣａＣｌ２激活后,通过ＤＥＡＥ－纤维素离子交换柱层析,获得比活为１２００ＩＵ／ｍｇ的凝血酶制剂,其收率为３２．１％。研究发现,ＮａＣｌ浓度对猪凝血酶活力有较大的影响,加１ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ于凝血酶溶液中,室温（２５℃）放置３ｈ后,活力丧失５０％。猪凝血酶的最适温度和最适ｐＨ分别是３７℃和ｐＨ７．０。猪凝血酶在ｐＨ７．０、４０℃下放置２７ｈ,活力丧失８４％。通过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶层析,测出猪凝血酶的分子量为３０ｋｄ。     

猪凝血酶的分离纯化和部分性质研究

以猪血为材料,采用等电点沉淀和７２４树脂离子交换柱层分离提纯,得凝血的,经ＣａＣｌ４激活后,通过ＤＥＡＥ－纤维素离子交换柱层析,获得比活为１２００ＩＵ／ｍｇ的凝血酶制剂,其收率为３２．１％,研究发现,ＮａＣｌ浓度对猪凝血酶活力有较大的影响,加１ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ于凝血酶溶液中,室温放置３ｈ后,活力丧失５０％。猪凝血酶的最适温度和最适ｐＨ分别是３７℃－和ｐＨ７．０。猪凝血酶在ｐＨ７．０,４０℃下放置     

人早幼粒白血病HL-60细胞蛋白激酶CK2的研究

研究人早幼粒白血病ＨＬ－６０细胞蛋白激酶ＣＫ２的性质。方法经二次ＤＥ－５２离子交换纤维素柱,一次肝素－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４８亲和层析柱纯化后的ＣＫ２,以「γ－＾３２Ｐ」ＡＴＰ和「γ＾－３２Ｐ」ＧＴＰ为磷酸供体,以去磷酸化酷蛋白为底物,对其性质刊物研究。结果：Ｃａ＾２＋、ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ等第二信使对ＩＬ－６０细胞的ＣＫ２活性无显著影响。肝素抑制ＣＫ２活性,而精胺激活ＣＫ２,肝素与精胺对ＣＫ２的作用     

猪精子的体外获能与体外受精

通过5个实验研究了应用咖啡因，肝素和I－A23187促进猪精子体外获能的效果，比较了不同受精次数和不同种类的精液进行猪卵子体外受精的效果，试验表明，用肝素和咖啡因协同作用，猪精子体外获能的效果好，采用2－3次受精法进行体外受精可以提高受精率，使用新鲜精液，新鲜附睾精液或冷冻附睾精液进行体外受精，其效果差异不显著。     

猪凝血酶的分离纯化及部分性质研究

经等电点沉淀,ＤＥＡＥ离子交换纤维素柱层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００分子筛层析从猪血浆中纯化得到到猪凝血酶,酶比活力为２０００Ｕ／ｍｇ,纯化倍数为１００,酶活力回收为５６％,酶反应的最适ＰＨ和温度分别为７．０和３７℃,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００层析测得酶分子量为３６０００。猪凝血酶的稳定性较差,４０℃保温２７ｈ,酶活力下降８４％。高浓度的盐对酶稳定性有较大的影响,在２ｍｏｌ＝／ＬＮａＣｌ下放置３     

亲和层析纯化猪胰蛋白酶的研究

采用猪胰蛋白酶的天然抑制剂－鸡卵类粘蛋白作为配基合成亲和吸附剂，从猪胰脏的粗提液中，通过亲和层析直接获得高纯度的胰蛋白酶。此法具有操作简便、产品纯度，比活力和获得率高等优点。     

四种槲皮素水溶性衍生物对凝血酶诱导的兔血小板聚集的影响

槲皮素（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）是一种天然存在的具有多种药理作用的黄酮类化合物，广泛存在于植物界，化学名为３，５，７，３’，４’－五羟基黄酮。已报导槲皮素具有多方面的心血管药理作用，但是槲皮素的水溶性差，生物可利用度低，限制了其进一步的临床应用。因此，为进一步开发和利用槲皮素，人工半合成四种槲皮素水溶性衍生物：乙氧基槲皮素、槲皮素磷酸酯（Ｂ）、槲皮素单硫酸酯和槲皮素二硫酸酯，并用比浊法研究这四种槲皮素衍生物对凝血酶诱导的兔血小板聚集的影响。结果发现，乙氧基槲皮素对凝血酶诱导的兔血小板聚集无明显的抑制…     

固定化Zymomomas mobilis酒精发酵的研究

以Ｚｙｍｏｍｏｎａｓｍｏｂｉｌｉｓ作为酒精生产菌，用海藻酸钙包埋，制成直径为３ｍｍ左右的细胞固定化球，进行酒精发酵和发酵条件试验，研究表明，固定化细胞和游细胞和游离细胞酒精发酵条件基本一致，最适温度为３０℃，最适ＰＨ为５－６，溶解氧对该菌精发酵有抑制作用，在固定化细胞多批次半连续发酵试验中，在６小时内其乙醇产率系数达到０．４９左右。     

家猪不同品种,杂交组合间同源染色体C—带多态性差异研究

采用淋巴细胞培养和染色体Ｃ－分带方法，测定了二花脸、大约克纯种猪及其大二、二大杂交组合间端着丝粒染色体Ｃ－带的长度，面积和异染色质的量，研究了家猪不同品种，杂交组合间同源染色体Ｃ－带多态性的差异，结果表明，二花脸、大约克、大二、二大之间在同源染色体Ｃ－带长度，面积和异染色质的多态性方面存在着显著差异，具有品种或群体特征，可作为区分不同品种的重要依据。     

Research about Preparation of Porcine Thrombin

A rapid, simple, and reproducible method for the preparation of porcine thrombin was investigated.Porcine prothrombin was isolated by carrying out isoeiectric precipitation. Porcine thrombin was prepared from pro-thrombin which was activated by the prothrombinase complex containing Factor Xa, Factor V, Ca^2 and phospholipids.Factor Xa and Factor V were isolated by DEAE-cellulose chromatography respectively. They were both identified bySDS-PAGE. Yields and specific activity of porcine thrombin were 107μg per milliliter plasma and 4 U per milligram protein.     

仙人掌多糖结构分析及抗凝血活性研究

[目的]分析仙人掌多糖组分和结构,并研究其抗凝血活性。[方法]以米邦塔仙人掌为试验材料,通过热水浸提、醇沉制得粗多糖CP,经交换层析和凝胶层析纯化,研究其单糖组成和重均分子质量分布与主链结构,并对多糖组分抗凝血活性进行了初步研究。[结果]对仙人掌粗多糖分离纯化后共得到3个多糖组分WSP1、WSP2a和WSP3,重均分子量分别为2.32×106、1.24×106和7.92×106。对氨基苯甲酸(PMP)衍生化高效液相色谱法检测表明,WSP1主要成分为半乳糖;WSP2a由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸组成,含量分别为6.3%、32.3%、12.9%、1.5%、4.8%、37.1%、0.64%和4.4%;WSP3主要成分为阿拉伯糖、半乳糖和木糖以及少量鼠李糖、甘露糖、糖醛酸。WSP2能延长活化部分凝血酶原时间(APTT)和凝血酶时间(TT),而对凝血酶原时间(PT)的影响不显著,说明其是通过影响内源性凝血系统而发挥抗凝血作用。纤维蛋白原转化纤维蛋白的抑制试验初步表明WSP2a和WSP3具有抗凝血活性。甲基化分析显示WSP2a含有1,4-连接的半乳糖酸,1,2-连接的鼠李糖和1,2,4-连接的鼠李糖构成的主链。[结论]该研究为仙人掌多糖资源优化和深度开发提供了试验依据。     

仙人掌多糖结构分析及抗凝血活性研究(英文)

[目的]分析仙人掌多糖组分和结构,并研究其抗凝血活性。[方法]以米邦塔仙人掌为试验材料,通过热水浸提、醇沉制得粗多糖CP,经交换层析和凝胶层析纯化,研究其单糖组成和重均分子质量分布与主链结构,并对多糖组分抗凝血活性进行了初步研究。[结果]对仙人掌粗多糖分离纯化后共得到3个多糖组分WSP1、WSP2a和WSP3,重均分子量分别为2.32×106、1.24×106和7.92×106。对氨基苯甲酸(PMP)衍生化高效液相色谱法检测表明,WSP1主要成分为半乳糖;WSP2a由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸组成,含量分别为6.3%、32.3%、12.9%、1.5%、4.8%、37.1%、0.64%和4.4%;WSP3主要成分为阿拉伯糖、半乳糖和木糖以及少量鼠李糖、甘露糖、糖醛酸。WSP2能延长活化部分凝血酶原时间(APTT)和凝血酶时间(TT),而对凝血酶原时间(PT)的影响不显著,说明其是通过影响内源性凝血系统而发挥抗凝血作用。纤维蛋白原转化纤维蛋白的抑制试验初步表明WSP2a和WSP3具有抗凝血活性。甲基化分析显示WSP2a含有1,4-连接的半乳糖酸,1,2-连接的鼠李糖和1,2,4-连接的鼠李糖构成的主链。[结论]该研究为仙人掌多糖资源优化和深度开发提供了试验依据。     

State of coagulation and vascular interactions in newborn calves with iron deficiency after Ferroglucinum intramuscular injection and Glicopin introduction

Normalization of initially activated blood clotting factors I (1.8 g/L), II (72.5%), V (87.5%), VIII (92.8%), and IX (86.4%) was achieved as a result of using Ferroglucinum and Glicopin for 45 newborn calves with iron deficiency anemia. In addition, prothrombin time (17.2 s), activated partial thromboplastin time (39.4 s), and thrombin time (17.1 s) were accelerated up to the level of healthy animals. Normalization of intensity of the vascular wall control over the process of blood clotting by boosting its anticoagulant (1.31) and fibrinolytic (1.38) activities is ascertained.     

一例外伤感染东北虎血液生理生化指标的测定

对阳泉市动物园一只受伤的圈养成年雄性东北虎血液生理生化指标进行了测定,共测定68个项目值,其中凝血酶原时间、国际标准化比率、纤维蛋白原、活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、载脂蛋白AI、载脂蛋白B、载脂A/载脂B、超敏C反应蛋白、抗链0、β2微球蛋白、胱抑素C、类风湿因子等数据为该试验首次报道;球蛋白、单核细胞等项目数值变化较大,与外伤感染关系密切。此次测定为诊断和治疗提供了依据,充实了东北虎血液学数据,同时为东北虎的研究和保护提供了资料和参考。     

Effects of Acetylsalicylic Acid and Calcium Chloride on Photosynthetic Apparatus and Reactive Oxygen-Scavenging Enzymes in Chrysanthemum Under Low Temperature Stress with Low Light

The effects of acetylsalicylic acid （ASA）, CaCl2, and ASA ＋ CaCl2 on the photosynthetic apparatus and antioxidant enzyme activities were investigated in chrysanthemum Jinba （a cut flower cultivar） under low temperature stress with low light （TL stress） （16/12℃, day/night, PFD 100 μmol m^-2 s-1）. The results showed that under TL stress, the net photosynthesis rate （Pn）, carboxylation efficiency （CE）, apparent quantum yield （AQY）, maximal photochemical efficiency （Fv/Fm） of PSII, quantum yield of PSII electron transport （ФPSII）, and photochemical quenching （qP） of the chrysanthemum leaves in all treatments were significantly decreased, but the decreases were alleviated by ASA, CaCl2, and ASA ＋ CaCl2 treatments compared with the controls. The alleviating effect of ASA ＋ CaCI2 was better than either ASA or CaCl2 single treatment. Moreover, the ASA ＋ CaCl2 treatment highly improved the chlorophyll content, relatively improved the number and size of chloroplast and starch grain in the leaves of chrysanthemum plants compared with ASA and CaCl2 treatments. It was indicated that ASA and/or CaCI2 could regulate the photosynthetic functions in the leaves of chrysanthemum plants to enhance the resistance against TL stress. On the other hand, reduction in relative conductance rate implied that ASA and/ or CaCl2 could protect from membrane injury in leaves of chrysanthemum plants. The activities of SOD, POD, and CAT in the treated leaves of chrysanthemum were increased as compared with the controls. It was suggested that ASA and/or CaCl2 had positive regulation effects on the defence enzyme activities in chrysanthemum leaves which could protect the photosynthetic apparatus to a certain degree under the TL stress. In brief, the treatment of ASA together with CaCl2 was better for chrysanthemum plants to adapt TL stress than single ASA or CaCl2 treatments.     

唾液富组蛋白5的原核表达、纯化与抗菌活性鉴定

设计一对3’端互补、5’端带酶切位点的引物,用PCR扩增唾液富组蛋白5(H5)基因(h5),将我体pGEX4T-2和h5双酶切、连接、转化DH5α,将筛选鉴定的重组质粒pGEX4T-2-h5转化BL21 (DE3).诱导重组菌BL21 (DE3) -pGEX4T-2-h5表达,纯化融合蛋白GST-H5,用Thrombin切去GST标签获取重组H5(rH5),测试rH5抗白色念珠菌(Candida albicans)活性.试验成功构建了重组载体pGEX4T-2-h5,在37℃重组菌BL21 (DE3)-pGEX4T-2-h5生长至OD600nm=0.6时用1 mmol/L IPTG于20℃诱导9h,可获得高水平表达的融合蛋白GST-H5;酶切后获得的rH5对白色念珠菌生长有较强的抑制作用,rH 5产率约2 mg/L.     

赭绿青霉 Sp1菌株木聚糖酶最佳产酶条件及部分酶学特性研究

[目的]从土壤中分离筛选获得了一株具有高产木聚糖酶能力的真菌Sp1.[方法]经过28S rDNA测序鉴定为赭绿青霉(Penicillium ochro-chloron ).通过对摇瓶发酵条件优化试验及酶特性研究.[结果]该菌株的最适产酶条件为:2;(W/V)粗制木聚糖+0.5;葡萄糖为碳源,0.44; KNO3+0.06;蛋白胨为氮源,发酵起始pH为5.0,150 mL三角瓶装液量为40 mL,转速为220 r/min,28 ℃下培养72 h木聚糖酶酶活可达387 U/mL.将菌株Sp1发酵所得粗酶液经过纯化后研究其酶学特性,酶最适反应pH为4.0,最适反应温度为55 ℃,在40 ℃,pH 2.2～6.0,酶活性稳定.终浓度为0.01 mol/L的Na+ 、K+ 和Zn2+ 对酶活有促进作用.[结论]所筛选的Sp1菌株具有较好的应用前景.     

猪链球菌2型epf基因的原核表达及其蛋白纯化

为了克隆、表达SS2菌株轲基因片段,分析蛋白活性,根据GenBank SS2 epf基因序列设计引物,克隆epf基因片段并进行序列分析,构建原核表达质粒pGEX4T-2-epf,在大肠杆菌中诱导带有GST标签的融合蛋白rEF-GST的表达;亲和层析法纯化融合蛋白rEF-GST,用凝血酶切除重组蛋白中的GST,获得纯化的EF抗原。经Westernblot鉴定,EF可与SS2多克隆抗血清发生特异性反应。     

羊栖菜硫酸多糖的抗凝血活性研究

[目的]探讨羊栖菜硫酸多糖的抗凝血活性。[方法]从水提液中提取羊栖菜硫酸多糖,通过体内和体外的抗凝血试验系统地研究其抗凝血活性。[结果]利用葡聚糖凝胶G-75分离纯化所提取的羊栖菜硫酸多糖F1,得到5个不同组分。在2.0 g/L的受试条件下,组分F12抗凝血活性的最强,其延长小白鼠的出血时间和凝血时间、大白兔的凝血活酶时间、凝血酶时间、凝血酶原时间分别为粗多糖F0的174.2%、153.7%、311.9%1、57.8%和218.2%。羊栖菜硫酸多糖F1与抗凝血效果有显著的量效关系。在受试条件下(浓度为0.5~2.0g/L),多糖的浓度与小白鼠的抗凝血指标、与大白兔体外抗凝血指标之间均呈现良好的直线回归关系。[结论]该研究为羊栖菜类保健品及临床药物的开发提供理论基础。