胃泌素及其受体基因在绵羊部分组织中表达量的检测

为了探究胃泌素(GAS)及其特异性CCK-B受体(CCK-BR)在反刍动物各组织的分布量,用实时荧光定量PCR方法检测了4只新疆细毛羊各组织中GAS和CCK-BR基因的相对表达量,用2~(-△△Ct)法比较Ct值。结果显示,GAS基因在皱胃窦中表达量最高(1 321±482),且极显著高于其他组织(P0.01),而其他组织之间差异不显著(P0.05);CCK-BR基因在皱胃底中表达量最高(62.5±11.5),且极显著高于其他组织(P0.01),在垂体表达量极显著高于除皱胃底以外的其他组织(P0.01),在空肠、瓣胃、睾丸和肺中的表达量显著高于肾上腺和肾(P0.05),其他各组织之间差异不显著(P0.05)。说明反刍动物GAS主要来源于皱胃窦,而且主要在皱胃底和垂体等部位发挥生物学作用。     

Ghrelin及其相关基因mRNA在海兰褐蛋鸡不同产蛋阶段的表达变化

本文旨在探讨海兰褐蛋鸡Ghrelin、Ghrelin受体(GHSR)和Ghrelin酰基转移酶(GOAT)在产蛋周期不同阶段的表达变化规律,为通过诱导Ghrelin表达促进蛋鸡卵泡生长发育以提高产蛋率及延长产蛋周期提供理论依据。应用ELISA检测蛋鸡产蛋周期血浆和卵巢Ghrelin含量,实时定量PCR检测腺胃与卵巢Ghrelin、GHSR和GOAT表达变化。结果表明:不同产蛋阶段外周血Ghrelin的含量和腺胃中Ghrelin、GHSR和GOAT mRNA的表达变化不明显;产蛋高峰期卵巢中Ghrelin mRNA表达水平比产蛋前期升高98.2%(P0.05),而产蛋后期Ghrelin表达水平比产蛋高峰期有所下降(P0.05);GHSR和GOAT的表达模式和Ghrelin基本一致,均表现为产蛋高峰期表达量最高,产蛋后期略有下降,产蛋高峰期GHSR和GOAT mRNA表达水平显著高于产蛋前期和产蛋后期(P0.05),但产蛋前期和后期差异不显著(P0.05)。推测海兰褐蛋鸡卵巢中Ghrelin、GHSR和GOAT的转录表达水平与产蛋周期具有一定的相关性。     

Ghrelin在马鹿器官组织中的表达

为研究Ghrelin在马鹿体内可能表达的器官,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)方法检测马鹿的舌、食管、瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、肝、胰、颌下腺、腮腺、气管、肺、肾、输尿管、膀胱、卵巢、输卵管、子宫、阴道、大脑、下丘脑、垂体、松果体、甲状腺、肾上腺、心肌、心内膜、脾、淋巴结和骨骼肌中Ghrelin表达情况。结果显示,Ghrelin在皱胃内的表达量明显高于其他器官(P0.05);胰、子宫、卵巢、十二指肠和食管次之,与其余30种器官的表达量相比差异也显著(P0.05);其余器官内的表达量相对较少。结论:Ghrelin在所检测的36种器官内均有表达。     

梅花鹿体内脑肠肽的表达及细胞定位分析

为了明确脑肠肽Ghrelin(又名胃饥饿素)在梅花鹿体内的表达及定位,采用反转录-聚合酶链式反应(RTPCR)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫组织化学技术检测了梅花鹿食管、瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、肝、胰、甲状腺、垂体前叶、肺、肾、脾及卵巢等器官中Ghrelin mRNA的相对表达量和Ghrelin蛋白的定位分布情况。RT-qPCR结果显示:Ghrelin mRNA在上述器官中均有表达,其中皱胃内的表达量显著高于其他器官(P0.05);免疫组织化学染色结果表明Ghrelin蛋白在这些器官中均有表达,在消化管内的分布最为广泛。梅花鹿体内Ghrelin mRNA和Ghrelin蛋白的特定表达模式,揭示这一新型分子在梅花鹿的生长发育过程中可能存有广泛的生物学作用,尤其在胃肠道功能方面可能作为一种重要的调节方式而存在。     

Ghrelin在驯鹿器官内的表达及定位检测

为了探索Ghrelin在驯鹿体内的表达及定位,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和免疫组织化学技术对其进行检测。Real-time PCR结果显示Ghrelin在所检测的17种器官中均有转录,在皱胃内的转录量最高,其次是胰、十二指肠、睾丸和食管,且转录量显著高于其他器官(P0.05);免疫组化结果揭示Ghrelin的免疫阳性细胞在食管和皱胃内主要分布于黏膜层、黏膜下层和肌层;在瘤胃、网胃、瓣胃的黏膜层、黏膜下层中也可见Ghrelin的免疫阳性细胞,但肌层中未见表达;在肠道主要位于十二指肠、空肠、回肠、结肠的黏膜层、黏膜下层和肌层,尤其在肠绒毛和黏膜下层分布较多;在肝、胰、甲状腺、垂体前叶、睾丸、肺、肾、脾器官内均有Ghrelin的免疫阳性细胞。Real-time PCR和免疫组化结果显示Ghrelin在所检测的器官内均有分布,且在食管和胃肠道内表达量及分布范围最为广泛,这表明Ghrelin对驯鹿的消化系统可能存在一定的调节作用。     

南江黄羊不同组织FSHR和GnRHR mRNA表达水平研究

为进一步了解FSHR和GnRHR基因的功能,揭示其对山羊繁殖性状的影响。本研究采用荧光定量PCR技术分析了南江黄羊不同组织FSHR和GnRHR基因的表达差异。结果表明:FSHR和GnRHR在下丘脑、垂体、卵巢、输卵管、子宫、睾丸组织中均有表达,其中,FSHR和GnRHR在母羊子宫组织中表达水平较高,而在其他组织中表达水平相差不大;FSHR基因和GnRHR基因在子宫中的表达量均极显著高于其他组织(P0.01);GnRHR基因在卵巢组织中的表达量显著高于垂体、下丘脑、输卵管(P0.05);公羊睾丸组织FSHR和GnRHR基因的表达量显著高于下丘脑和垂体(P0.05)。本研究结果将会为进一步研究该基因对山羊繁殖相关功能影响的研究奠定基础。     

Ghrelin在驯鹿胃肠道的表达及定位检测

通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫组织化学技术对Ghrelin在驯鹿胃肠道的表达及定位进行初步研究。RT-qPCR结果显示,Ghrelin在驯鹿胃肠道内均有表达,且在皱胃内表达量极显著高于其他组织(P0.01),其次是十二指肠、回肠和结肠;免疫组织化学结果显示,Ghrelin免疫阳性细胞在皱胃内主要分布于黏膜层、黏膜下层和肌层;在瘤胃、网胃、瓣胃的黏膜层、黏膜下层中也可见Ghrelin的免疫阳性细胞,但肌层中未见表达;在十二指肠、空肠、回肠、结肠的黏膜层、黏膜下层和肌层均有Ghrelin免疫阳性细胞分布,且在肠绒毛和黏膜下层分布较多。RT-qPCR和免疫组织化学结果显示,Ghrelin在胃肠道内表达量及分布范围基本一致,这表明Ghrelin对驯鹿的消化可能具有潜在的调控作用。     

INHA基因在公绵羊繁殖相关组织的表达研究

为探索INHA基因在公绵羊繁殖中的作用,采用荧光定量PCR技术检测INHA基因在高繁殖力小尾寒羊公羊和低繁殖力苏尼特羊公羊下丘脑-垂体-睾丸轴等繁殖相关组织中的表达。结果表明:INHA基因在小尾寒羊和苏尼特羊睾丸中表达量最高,其次是肾上腺、附睾,在其他组织中均呈痕量表达。INHA基因在苏尼特羊睾丸的表达量极显著高于小尾寒羊(P0.01);在肾上腺的表达量高于小尾寒羊,但差异不显著(P0.05)。结论:INHA基因可能主要在睾丸中对公绵羊繁殖功能发挥抑制作用。     

Ghrelin研究进展

Ghrelin是1999年发现的28肽,为生长激素促分泌素受体天然的内源性配体。由下丘脑、垂体和多种组织产生,其受体(GHS-R1a和GHS-R1b)在体内广泛分布。具有调节生长激素分泌、摄食、能量代谢、神经内分泌、记忆、睡眠、胃肠功能等多种生物学作用。     

PrRP-R在绵羊睾丸和其他组织中的表达与定位分析

为探讨促乳素释放激素受体(prolactin releasing peptide receptor,PrRP-R)基因在不同发育时期绵羊睾丸和不同组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、股二头肌、下丘脑、垂体、松果腺)中表达的差异,以0,2,5,12,24月龄的小尾寒羊为研究对象,应用荧光实时定量PCR(quantitative real-time PCR)和免疫组化(immunohistochemistry)技术分别分析了PrRP-R基因在组织中的差异表达与定位。结果显示:PrRP-R基因在睾丸与心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、股二头肌、下丘脑、垂体、松果腺之间的表达差异极显著(P<0.01),股二头肌、垂体、松果腺之间表达差异不显著(P>0.05),但背最长肌、下丘脑、垂体之间表达差异显著(P<0.05);0,2,5,12,24月龄的睾丸组织中均有一定量的表达,24月龄时表达最高(P<0.01);PrRP-R在0~24月龄绵羊睾丸组织中呈阶段性表达,0,2,5月龄时,可观察到PrRP-R在精原细胞中到阳性表达;12,24月龄时,在初级精母细胞和次级精母细胞中检测到强阳性表达。结果表明:PrRP-R在不同的组织和睾丸中表达并存在一定的差异,可能对绵羊的繁殖性能具有重要的调控作用。     

母源纳米硒对岢岚绒山羊后代睾丸发育的影响

为了研究母源纳米硒对后代羔羊睾丸发育的影响,在哺乳母羊日粮中添加0.5 mg/kg的纳米硒,120 d哺乳期结束后,采用原子荧光和可见光分光光度法、巴氏染色法、TUNEL法和Real-time PCR法,检测母羊与羔羊供试样品的硒含量、抗氧化性能、精子形态、睾丸组织凋亡和凋亡基因表达。结果显示:纳米硒添加组(S组)的母羊及羔羊血液及母乳硒含量均极显著高于正常饲喂组(C组)(P0.01);C组硒含量排序为母羊血硒初乳羔羊血硒常乳,S组中硒含量高低比较为初乳母羊血硒羔羊血硒常乳;C组和S组母羊组织硒的沉积顺序均为肾脏肝脏心肌;C组羔羊组织中硒的沉积顺序是肾脏肝脏≈睾丸心肌,S组羔羊组织硒的沉积顺序为睾丸肾脏肝脏心肌;S组睾丸组织发育显著优于C组(P0.05),S组精子畸形率极显著降低(P0.01);S组羔羊睾丸组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的抗氧化活性极显著高于C组(P0.01),超氧化物歧化酶(SOD)的活性显著提高(P0.05),丙二醛(MDA)的浓度极显著降低(P0.01);TUNEL检测S组羔羊睾丸组织细胞凋亡显著低于C组(P0.05),促凋亡基因(Bax)的表达极显著降低(P0.01)。结果表明:哺乳母羊日粮中添加纳米硒可以通过血乳屏障传递来提高后代公羔血液及睾丸组织的抗氧化力,促进睾丸组织发育,降低精子畸形率。     

妊娠期小鼠下丘N-垂体-卵巢轴中PrRP和PrRP-R mRNA表达规律的研究

为探讨妊娠期小鼠下丘脑一垂体一卵巢轴中催乳素释放肽(PrRP)及其受体(PrRP-R)mRNA的表达规律,选用妊娠6、12、18 d小鼠(n=6),取下丘脑、垂体、卵巢组织,利用半定量PCR方法测定下丘脑-垂体-卵巢轴中PrRP和PrRP-R mRNA表达水平,另外利用放射免疫法(RIA)测定血浆孕酮(P)、雌二醇(E2)和催乳素(PRL)水平,探究下丘脑-垂体-卵巢轴PrRP和PrRP-R mRNA与血浆P、E2、PRL的相关关系.结果表明:妊娠期小鼠下丘脑、垂体、卵巢中都有PrRP、PrRP-R mRNA的表达,其中卵巢PrRP mRNA表达量较高,而下丘脑PrRP-R mRMA的表达量较高.妊娠期小鼠血浆P水平与垂体PrRP mRNA表达量呈显著负相关,而垂体PrRP mRNA与下丘脑PrRP-R mRNA表达量呈显著正相关,结果提示妊娠期m浆高水平的P可能通过抑制垂体PrRP mRNA的表达,进而作用于下丘脑参与妊娠相关调控.妊娠期小鼠血浆PRL水平与下丘腩、垂体、卵巢PrRP和PrRP-R mRNA的表达晕均无显著相关关系,提示血浆PRL水平可能小受上述组织PrRP的影响.     

湖羊和徐淮山羊CaSR基因组织表达水平的初步分析

为分析钙敏感受体(CaSR)基因对湖羊和徐淮山羊消化吸收的作用,以6个月龄的湖羊和徐淮山羊为试验材料,利用荧光定量PCR SYBR GreenⅡ荧光染料法,对湖羊和徐淮山羊瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠10个组织中CaSR基因的表达水平进行相对定量分析。结果表明:在湖羊的样品组织中,CaSR基因在十二指肠中表达量最高,其次是回肠,两者的表达量差异达到显著水平(P0.05);CaSR基因在瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、空肠、盲肠、结肠、直肠中的表达量显著低于在十二指肠及回肠中的表达量(P0.05)。在徐淮山羊的组织样中,CaSR基因在回肠中的表达量最高,其次是十二指肠,且二者差异显著(P0.05);另外,该基因在回肠和十二指肠的表达量显著高于在瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、空肠、直肠中的表达量(P0.05),盲肠和结肠中该基因的表达量最低。通过试验说明CaSR在不同组织里的表达具有特异性,在不同的物种间主要表达组织也不同,表明湖羊和徐淮山羊具有不同的消化吸收方式。     

代乳粉添加枯草芽孢杆菌对7～28日龄湖羊羔羊胃肠道发育的影响

旨在观察代乳粉中添加枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)对7～28日龄湖羊羔羊胃肠道生长发育的影响。本研究选择健康、生长发育正常的7日龄湖羊公羔(双羔)30只,按同质性原则随机分为2组,每组15只,每只为1个重复,分别饲喂枯草芽孢杆菌含量为0和0.2%的代乳粉,试验期21 d。28日龄时每组随机选择8只羔羊进行屠宰,称量各胃室和各肠段内容物重量和净重量,量取各肠段长度,计算各段的相对重量和相对长度及内容物分布。采集皱胃胃底腺区及十二指肠、空肠和回肠中段的组织样品,用多聚甲醛固定后用于组织形态学测定,并测定小肠上皮细胞凋亡率。同时采集十二指肠、空肠和回肠黏膜,测定闭锁蛋白(occludin)、闭锁小带1(zonula occludens-1,ZO-1)和紧密连接蛋白1(claudin 1)mRNA表达量。结果表明:1)枯草芽孢杆菌显著降低7～28日龄湖羊羔羊十二指肠指数(占活体重量百分比,P=0.037)、空肠相对长度(占全肠长度百分比,P=0.009)和十二指肠绒毛宽度(P=0.001),显著升高羔羊结肠相对长度(占全肠长度百分比,P=0.012)、空肠内容物相对重量(占全肠内容物重量百分比,P=0.003)、回肠绒毛高度(P=0.010)和隐窝深度(P=0.034);2)枯草芽孢杆菌显著上调十二指肠黏膜ZO-1蛋白mRNA表达量(P=0.012),此外,枯草芽孢杆菌有上调羔羊回肠黏膜occludin蛋白mRNA表达量以及降低回肠上皮细胞凋亡率的趋势(P=0.053,P=0.079);3)枯草芽孢杆菌对其他胃肠段的相对重量(占活体重量、总胃重量、总肠重量和总胃肠重量百分比)及其内容物相对重量(占活体重量、总胃内容物重量、总肠内容物重量和总胃肠内容物重量百分比)、肠道相对长度(占全肠长度百分比)以及皱胃和小肠组织形态与小肠黏膜occludin蛋白、ZO-1蛋白和claudin 1蛋白mRNA表达量和小肠其他肠段上皮细胞凋亡率均未产生显著影响(P0.05)。枯草芽孢杆菌对7～28日龄湖羊羔羊胃肠道生长发育基本无显著影响,但可提高小肠屏障功能并减少上皮细胞凋亡,有利于保持小肠结构和功能完整。     

Ghrelin生物学功能的研究进展

Ghrelin是一种在大鼠和人胃内新发现的生长激素促分泌素受体(GHS-R)的内源性配基,有28个氨基酸,起促生长激素释放作用。当Ghrelin与位于垂体和下丘脑的GHS-R结合后,产生一系列生物学效应。本文从生长激素释放、机体生长发育、食欲和采食量、能量代谢、胃酸分泌等方面综述了Ghrelin的生物学功能,并初步探讨其在畜牧业上的应用前景。     

Ghrelin对莎能奶山羊下丘脑GHRH和SS mRNA表达的调节

为探讨ghrelin对奶山羊下丘脑促生长激素释放激素(GHRH)、生长抑素(SS) mRNA表达的影响,10只青春前期莎能母奶山羊随机分为2组,试验组和对照组,每组5只.试验组羊经颈静脉注入一定量的ghrelin(3.0 μg/kg)3 h后宰杀,用RT-PCR方法检测ghrelin对下丘脑GHRH、SS mRNA表达的影响.结果表明试验组羊下丘脑GHRH mRNA的表达显著上调(P＜0.01);下丘脑中SS mRNA的表达也显著升高(P＜0.05).表明ghrelin在下丘脑水平上对GHRH和SS mRNA的表达具有上调作用,提示ghrelin可能通过GHRH途径调节垂体GH的分泌.     

不同发育阶段湖羊生殖器官脂联素受体与睾酮分泌关键基因表达模式及相关性研究

旨在探究不同发育阶段湖羊生殖器官中脂联素受体(adiponectin receptor,AdpR)及睾酮(testosterone,T)分泌相关基因mRNA的表达变化及相关性分析。选取3、9、24月龄(M)湖羊各5只,颈静脉采血并收集血清,屠宰后,采集下丘脑、垂体、睾丸、附睾头、体、尾组织;ELISA技术检测各月龄湖羊血清中脂联素(adiponectin,Adp)、T、促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)、促性腺激素抑制激素(gonadotropin inhibitory hormone,GnIH)浓度;qRT-PCT技术检测不同发育阶段湖羊下丘脑-垂体-性腺轴(hypothalamus-pituitary-gonad axis,HPG)中AdpR1和AdpR2及T分泌关键基因mRNA表达规律;免疫组化技术对AdpR1在湖羊睾丸和附睾中进行定位分析。结果表明:不同发育阶段湖羊血清中Adp、GnRH、GnIH浓度呈现不同的变化趋势,其中Adp含量在性成熟后(9和24月龄)显著高于性成熟前(3月龄)(P0.05)。AdpR1mRNA表达量在各个月龄睾丸和附睾尾中均显著高于AdpR2(P0.05),其中AdpR1mRNA表达量在二者中呈上升趋势,且差异显著(P0.05),而在附睾头、体差异不显著(P0.05)。AdpR1存在于睾丸间质细胞、生精细胞、曲精细管管壁肌样细胞、精子细胞以及附睾头、体、尾的上皮细胞。血清中Adp与T含量呈显著正相关(P0.05);Adp含量与GnIH负相关以及与GnRH正相关,但差异不显著(P0.05);AdpR1mRNA表达水平与StAR、3β-HSD mRNA表达水平呈显著正相关(P0.05)。综上表明,在湖羊生殖器官发育过程中,Adp通过与其受体AdpR1结合,促进T的产生,进而影响湖羊睾丸发育。     

荧光定量PCR检测新生犊牛胰高血糖素受体mRNA的组织分布

采用荧光定量PCR的方法,检测新生犊牛中枢和外周组织中胰高血糖受体(glucagon receptor,LNR)mRNA的基因表达.研究结果表明,NR基因在大脑皮质、小脑皮质、下丘脑、垂体、主动脉、颈静脉、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾皮质、胰脏、半腱肌、皮下脂肪、瘤胃、瓣胃、网胃、皱胃、十二指肠、结肠、回肠、盲肠、直肠都有表达.垂体、下丘脑、肝脏、主动脉、皮下脂肪、小脑皮质、大脑皮质、肾皮质、肺脏中GLNR表达量高于其他组织.GLNR基因在组织中广泛分布说明了其功能的重要性.     

雪山草鸡PRL基因的表达差异及其对繁殖性能的影响

从880只250日龄雪山草鸡中选取处于产蛋期、就巢期和恢复期的鸡各20只,屠宰采集下丘脑、垂体、输卵管和卵巢,用荧光实时定量PCR法检测其中催乳素基因mRNA的表达水平,并与繁殖性能进行相关分析,结果表明:PRL基因在4个组织中都有表达,但在垂体中的表达极显著高于其他组织(P<0.01),而且在其他3个组织之间PRL的表达差异并不显著(P>0.05);就巢期鸡PRL基因在垂体中的表达量显著高于产蛋期鸡和恢复期鸡(P<0.05),而在下丘脑、输卵管和卵巢3个组织中3组个体PRL基因的表达量差异不显著(P>0.05);PRL在垂体的表达与种鸡的繁殖性能旱负相关,相关系数为-0.328(P<0.05).