不同寄主分离的稻瘟病菌酯酶及可溶性蛋白质图谱研究

从水稻、马唐、蟋蟀草、龙爪稷及陆稻等寄主上分离的稻瘟病菌，采用ＳＫＹ培养液振荡培养６天获得菌丝体，提取其酶和可溶性蛋白质，经４％－２０％聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳分离，结果表明，上述５个寄主分离的稻瘟病菌酯酶同工酶酶带在１１％－１８％凝胶浓度之间，相似系数为０．６６７－１．０；可溶性蛋白质谱带在１１％－１８％浓度之间，相似系数为０．６８－０．８８，这反映出５种不同寄主上分离的稻瘟病菌菌株间差异不显著。     

源自江苏省的稻瘟病菌营养体亲和能力与无性重组的研究

 将江苏省 2 0个不同小种稻瘟病菌菌株在白米玫瑰红培养基上对峙培养测定营养体亲和性 ,2 5℃、黑暗中对峙培养 18d ,在 173个配对组合中有 12 4个配对组合的菌株之间 ,通过菌丝融合在菌落交界处形成肉眼可见的菌丝融合带 ,在 4 9个配对组合不能形成明显的菌丝融合带 ,表明江苏省不同来源的稻瘟病菌菌株间存在较普遍的营养体亲和性。将分别携有抗稻瘟灵、对多菌灵敏感 (MBCsIPTr) ,以及对稻瘟灵敏感、抗多菌灵 (MBCrIPTs)标记的菌株对峙培养 ,切取菌丝融合带进行单菌丝片段分离 ,从其无性系中获得了经菌丝融合产生的携带双亲抗性标记的(MBCrIPTr)的无性重组体。在检测的 17个不同小种菌株配对的组合中 ,有 13个组合可获得无性重组体。不同配对组合菌株间无性重组频率为 0 .6 %～ 11.3%。表明营养体亲和在江苏省稻瘟病菌中发生较为普遍。     

不同水稻间栽组合田间稻瘟病菌群体遗传结构分析

为了解水稻品种多样性与稻瘟病菌群体变异的关系,采用rep-PCR分子指纹对分离自贵州省雷山县和湄潭县水稻间栽组合上的40个稻瘟病菌单孢菌株进行群体遗传结构分析.结果表明:40个单孢菌株分别扩增出5～9条谱带,大小为0.5～15 kb,80％左右的条带集中在1～10 kb;在0.74遗传相似水平下,供试菌株可划分为6个遗传宗谱,菌株间亲缘关系的远近与其寄主品种相关,3个间栽组合主栽品种上的11个菌株分属5个宗谱4个亚宗谱,净栽主栽品种上的14个菌株分属4个宗谱3个亚宗谱,而净栽糯稻上的8个菌株和间栽糯稻上的7个菌株则分属4个宗谱及3个宗谱3个亚宗谱.结论:间栽田块稻瘟病菌遗传宗谱组成较净栽田块丰富,水稻品种混合间栽有利于增加田间稻瘟病菌的遗传多样性,降低寄主遗传背景单一化对稻瘟病菌的定向选择风险.     

无毒基因在不同寄主梨孢菌中的变异研究

梨孢菌除侵染水稻外,还可侵染禾本科和莎草科等多种植物,已有研究表明稻区草类寄主的梨孢菌与稻瘟病的发生有关。无毒基因在水稻—稻瘟病菌互作系统中扮演了重要角色,并且无毒基因经常发生变异,可以利用无毒基因变异的特性来研究梨孢菌群体的遗传多样性。对35株草类寄主的梨孢菌进行系统进化分析,这些菌株被分为两类,一类是寄主为马唐的菌株,另一类是寄主为牛筋草和狗尾草的菌株。筛选了27对无毒基因引物,对这些草类寄主梨孢菌进行扩增,结果表明无毒基因在这些菌株中的变异类型有完全缺失、插入、不完全缺失、多位点,其中完全缺失为主要的变异类型。进一步对无毒基因的扩出率进行统计,结果表明,供试菌株中没有菌株同时含有所有已克隆的无毒基因,此外,所有供试菌株均没有AVR-Pik/km/kp,PWL3和PWL4基因,以马唐为寄主的菌株中没有ACE1,AVRPiz-t,AVR-Pita1和PWL1;以牛筋草为寄主的菌株中没有AVR-Pia,AVR-Pita1,AVR-Pita2和PWL2;以狗尾草为寄主的菌株中没有AVR-Pii,AVR-Pia,PWL1和PWL2。     

临沧地区不同来源稻瘟病菌致病性分析

【目的】明确分离自临沧地区水稻主栽品种和陆稻地方品种稻瘟病菌的毒性频率及致病性的分化特点。【方法】采用喷雾接种,分别将分离自临沧地区的108个稻瘟病菌单孢菌株在水稻苗期接种于23个稻瘟病抗性单基因系,对其进行致病性测定。【结果】108个供试菌株中,分离自主栽水稻品种上的26个稻瘟病菌单孢菌株对持有抗性基因Piz、Piz-5、Pita、Pi5、Pi9和Pita-2的水稻单基因系的毒性频率均低于20%,分离自沧源县陆稻地方品种的56个稻瘟病菌单孢菌株对持有抗性基因Pik-h、Piz-t、Pib、Pi5、Pi9、Pi12和Pi11的水稻单基因系的毒性频率均低于20%,分离自镇康县陆稻地方品种的26个稻瘟病菌单孢菌株对持有抗性基因Pii、Pik-h、Piz-t、Pib、Pish、Pi1、Pi5、Pi9、Pi12、Pik-m和Pi11的水稻单基因系的毒性频率均低于20%;在稻瘟病菌致病性相似系数为0.45时,将不同来源的108个稻瘟病菌株划分为2个谱系。【结论】持有Pi5和Pi9抗性基因的水稻品种在临沧地区具有较好的应用价值;分离自临沧地区的水稻主栽品种和陆稻地方品种上的稻瘟病菌群体存在明显的致...     

基于丽江新团黑谷的稻瘟病菌致病性分化

为明确普感品种丽江新团黑谷中稻瘟病菌致病性的分化情况,将分离的100个单孢菌株分别接种到7个中国传统鉴别品种和30个抗瘟单基因品系上,根据接种品种的抗感反应确定稻瘟病菌的优势小种类型、生理小种组成、致病力及其所含无毒基因等信息,并与从同一地区其他寄主品种分离到的稻瘟病菌种群的致病性比较。结果表明:从丽江新团黑谷上分离的稻瘟病菌与从整个区域不同品种上分离的病菌致病性分化情况相似,其中从丽江新团黑谷分离的菌株各种群组成为小种ZA占85.00%、ZB占13.00%、ZC占2.00%,优势小种为ZA1、ZA5、ZB13,菌株平均毒性频率为83.33%;从其他寄主品种分离的菌株各种群组成为ZA占53.85%、ZB占38.46%、ZC占5.77%、ZD占1.92%;优势小种为ZA1、ZB15、ZB13,菌株平均毒性频率为78.01%。     

2011~2014年江苏省稻瘟病菌种群动态及毒力变化

2011~2014年从江苏省五大水稻种植区采集1 219份水稻稻瘟病标样,分离得到634株单孢菌株,研究分析了江苏省稻瘟病菌种群动态及毒力变化情况。种群动态分析结果显示,江苏省稻瘟病菌共有5群19个生理小种,各水稻栽培区的种群分布差异较大,连云港、徐州和南通稻区,小种类群较为复杂,均出现了5群10个小种,南京、淮安和扬州地区稻瘟病菌种群组成相对简单,其中南京地区出现了4群5个小种,淮安和扬州地区,仅出现3群5个小种和3群4个小种;在分离得到的稻瘟病菌生理小种中,ZG1种群小种出现频率最高,为优势小种。毒力变化分析结果表明,江苏省稻瘟病菌对已知抗性基因Pi-k、Pi-ks、Pi-b和Pi-t的毒力频率较高,对Pi-ta、Pi-ta2、Pi-z和Pi-zt的毒力频率较低,说明Pi-ta、Pi-ta2等抗性基因在江苏省水稻育种上仍具有较高的应用价值,而Pi-k、Pi-ks等抗性基因已不适合在江苏省水稻抗病育种中推广使用。     

PWL基因家族在稻瘟病菌中的分布及变异初探

PWL寄主特异性无毒基因家族是稻瘟病菌无毒基因中一个重要的类群,了解PWL家族成员在稻瘟病菌中的分布和变异对稻瘟病菌群体遗传多样性的研究具有重要价值。研究通过设计23对引物对PWL家族成员进行分布和变异分析,结果筛选到12对引物有特异性扩增结果。扩增结果表明PWL家族基因的主要变异为缺失,试验结果表明,PWL1基因仅存在于牛筋草来源的稻瘟菌菌株中存在,而在分离于水稻的稻瘟病菌中表现为完全缺失;与此相反,PWL2基因则仅在水稻来源的菌株中存在。而插入变异仅存在于部分菌株PWL4基因的上游区域。结果还表明PWL家族成员在稻瘟病菌中具有丰富的的扩增多态性,对稻瘟病菌群体遗传多样性的研究具有重要价值。     

立枯丝核菌菌丝融合群培养性状的比较

本文采用立枯丝核菌菌丝融合群的标准菌株和中国西南地区融合群的部分菌株,在25℃,PDA和查氏培养基上培养,比较了各融合群的菌丝生长速度和培养性状,试验结果表明:除AG—4与AG—5,以及AG—8,AG—9和AG—BI外,菌丝融合群互相间的菌丝生长速度差异显著;菌丝融合群内分离菌的培养性状是比较一致的,而融合群间分离菌的培养性状差异较明显。     

放线菌ECO 00008发酵液提取物抗稻瘟病的活性筛选研究

从云南土壤中筛选分离到一株抗水稻稻瘟病菌的放线菌ECO 00008,对该菌株进行摇瓶发酵后采用乙酸乙酯萃取发酵液,测定其提取物(FR、FE、MR、ME)对水稻稻瘟病的抗菌活性.结果表明,萃取物FE和ME对水稻稻瘟病菌孢子萌发和菌丝生长具有较强的抑制活性,对孢子萌发抑制率分别为99.00 %和95.60 %,盆栽保护效果分别为97.61 %和75.07 %.     

稻瘟病菌致病性遗传研究初报——云南省稻瘟病菌有性世代研究之五

 本文报道龙爪稷分离菌G10-1马水稻分离菌后代菌性2145-R-57-1交配产生的同一子囊中分离出的子囊孢子致病性及交配型分离情况.交配型分离比1:1;但致病性分离情况比较复杂.很多子囊孢子菌株失去亲本菌株对供试水稻和龙爪稷的致病性,少数菌株获得亲本菌株所没有的致病性.对稻瘟病菌致病性的遗传尚需作大量分析工作.     

云南省稻瘟病菌的交配型分布

 对在云南省43个县采集到的1311个稻瘟病菌菌株的有性世代的研究结果表明：（1）在云南省MAT1-2的菌株数量较多，占能形成有性世代菌株数的62.8%；普文县等11个县市MAT1-1和MAT1-2两种交配型的菌株都有分布：而大理等3个县市只分离到MAT1-1交配型，昆明市等13个县市只分离到MAT1-2交配型。（2）云南陆稻上分离的稻瘟病菌中，能形成有性世代的菌株比例较高；有性世代能形成较高的两性菌株也较多。（3）在部分陆稻地块，两种交配型的菌株同时存在，甚至从同一病斑上都可分离到能互相交配的两种交配型的菌株。这些结果预示出云南陆稻植株上产生有性世代的极大可能性。     

稻瘟菌菌体可溶性蛋白和同工酶的凝胶电泳分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了来至水稻和马唐寄主的23个致病性不同的稻瘟菌菌株的可溶性蛋白、酯酶和酸性磷酸酯酶的图谱。结果表明，二类寄主菌株的可溶蛋白和酯酶图谱有明显不同，而酸性磷酸酯酶图谱的差异，不显著。同一寄主内的菌株，彼此在电泳图型上非常相似，只是在少数带的染色强弱上有一定差异．但未发现这些话带的变比同病菌致病性直接相关的依据。     

稻瘟病菌在中国鉴别品种及CO39近等基因系上的致病型分析

稻瘟病是影响水稻高产、稳产的主要病害之一,在中国的大多数稻区都有发生.崇阳、远安是湖北省稻瘟病常发区,在两地采集稻瘟病穗颈瘟标本,从中分离得到60个稻瘟病菌单孢菌株(崇阳、远安两地的菌株各30个),分别在中国鉴别品种和CO39近等基因系上进行致病型鏊定,发现60个单孢菌株接种于CO39近等基因系6个品种上,在可能的26个致病类型中出现了20种,小种丰富度为2.54,优势类型为I 37.1.相同的60个单孢菌株在中国鉴别品种上出现4群13个小种,小种丰富度1.22,优势种群与前几年的一致,均为ZA群.     

我国稻瘟病菌有性态的研究

 用我国24个省、市（区）水稻和马唐上分离的1235个单孢菌株与国际水稻研究所提供的4个标准菌株进行杂交，多数菌株在培养基上形成了有性态的子囊壳。我国不同地区的稻瘟病菌和菌株之间有性态的能育性有很大差异，而子囊壳的产生和数量与配对标准菌株的交配型有关。供试菌株中存在着两种交配型（A和a），交配型A广泛分布于全国各水稻栽培区，交配型a仅来自云南和浙江两省的4个菌株。电泳分析9个稻瘟病菌代表菌株的可溶性蛋白和乳酸脱氢酶同工酶谱带的结果，未发现其多态性。本研究结果将为稻瘟病菌的遗传学和病害生态学研究奠定了基础。     

灰梨孢菌产孢培养基筛选

【目的】筛选操作方法简便、产孢效果好、适宜于大多数灰梨孢菌的产孢培养基,为灰梨孢菌研究提供一定的技术支持。【方法】从水稻、香蕉和杂草马唐上分离获得6个灰梨孢菌菌株,接种于紫花鸭趾草、高粱粒和大麦粒等9种培养基上,测定不同培养基对灰梨孢菌产孢量的影响,并比较分析紫花鸭趾草培养基对病菌致病力的影响。【结果】高粱粒、大麦粒和紫花鸭趾草培养基对6个菌株孢子形成均有明显的促进作用,以紫花鸭趾草培养基的促进作用最明显。与常用的高粱粒培养基相比,6个菌株在紫花鸭趾草培养基上形成的病菌分生孢子对香蕉和水稻的致病力没有明显差异。在4℃冰箱中,用紫花鸭趾草培养基保存蕉瘟病和稻瘟病菌菌种,两年后病菌仍具有生活力。【结论】紫花鸭趾草培养基是适宜于灰梨孢菌分生孢子形成的理想培养基,紫花鸭趾草培养基也适合于保存灰梨孢菌。     

中国部分水稻主栽品种对稻瘟病的抗性分析和利用评价

用来自于浙江、四川、广东、湖北等7个省（市）的92个稻瘟病菌菌株测定了我国部分水稻主要栽培品种对稻瘟病的抗性,分析了稻瘟病菌的致病力和品种的抗病性。结果表明,不同稻区的稻瘟病菌的致病力存在明显差异,同时筛选出一批毒力频率在30%以下,抗性相对较好的籼、粳稻品种和杂交稻组合,并且联合致病性系数（PAC）和联合抗病性系数（RAC）分析了它们的利用价值。     

Vegetative Compatibility and Asexual Recombination in Magnaporthe grisea from Jiangsu Province, China

Vegetative compatibility among isolates of different races in Magnaporthe grisea collectedfrom Jiangsu Province and asexual recombination among compatible isolates by anastomosis were tested.Twenty isolates involving seven races from diseased rice plants were paired on polished rice rose bengal mediumand incubated at 25℃ in darkness for 18 days. Among 173 pairings tested, solid hyphai fusion lines formed byanastomosis between 124 pairings, indicated that these isolates were vegetative compatible with each other.The result showed that most M. grisea isolates were vegetative compatible. Furthermore, 17 vegetative com-patible pairings between monoconidial isolates with MBCsIPTr marker and isolates with MBCrIPTs markerwere selected to detect the asexual recombination between the compatible isolates of different races. The asexu-al recombinants with MBCrIPTr marker were detected in single hyphal fragment progenies in thirteen of theseventeen pairings. The percentage of recombinants was about 0.6 - 11.3%. Results showed that vegetative com-patibility was prevailing among isolates of M. grisea in Jiangsu Province in vitro. These results also suggested thatasexual recombination may be an important mechanism for M. grisea to maintain genetic diversity in nature.     

稻瘟病菌拮抗微生物的筛选及鉴定

将稻叶和种子浸在NB培养液中，并研碎成浆浆液，用接种环挑少量匀浆液在NB琼脂平板上划线分离，获得356个菌株，分别将它们接种于NB培养液中，振荡培养3d，并利用它们的培养液对稻瘟菌分布孢子进行萌发抑制试验，最终获得具显抑制作用（分生孢子萌发抑制率分别为82．5％和100％）的2个拮抗菌株，按照伯杰手册进行严格的鉴定，初步确定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis) 和短小芽孢杆菌（B.pumillus)。