鱿鱼肌肉组织细菌基因组DNA提取方法的优化

采用十二烷基苯磺酸钠（SDS）法结合十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法、SDS法结合溶菌酶法和CTAB法结合溶菌酶法对鱿鱼肌肉组织中细菌基因组DNA的提取效果进行比较。结果表明,SDS法结合CTAB法和SDS法结合溶菌酶法提取细菌总DNA的效果相近,CTAB法结合溶菌酶法提取细菌总DNA的效果相对较差,3种方法所提取的细菌总DNA纯度均较高,无需纯化即可进行进一步PCR扩增试验。变性梯度凝胶电泳结果说明,SDS法结合CTAB法较另两种方法能更真实地揭示待测样本中微生物的实际组成。     

不同裂解方式对微生物DNA提取的影响

分子生物学试验中的细胞裂解及DNA提取是试验的第1步,但是由于细胞种类多样、细胞壁成分复杂,DNA提取的效果容易受到提取方法的影响。针对以上问题,主要研究溶菌酶、蛋白酶K、十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate,简称SDS)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide,简称CTAB)等4种化学方法对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌以及大肠杆菌3种代表性细菌细胞的裂解效果。结果表明:溶菌酶+SDS法对3种微生物的裂解效果都不错,但可能造成蛋白质污染且DNA碎片较多;溶菌酶+热冻法对于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的裂解效果较好且蛋白质污染较少;蛋白酶K+CTAB法仅对金黄色葡萄球菌的裂解提取效果较好;溶菌酶+蛋白酶K法的提取效果最差。在试验中可以根据需要选择不同的裂解方式,从而达到操作性、重现性及经济性的统一。     

中药材附子基因组DNA提取方法研究

[目的]为研究附子的遗传多样性、种质鉴定和指纹图谱的构建提供基本保证。[方法]以中药材附子药源植物的幼嫩叶片和块根为试材,分别采用SDS法、CTAB法和改良CTAB法从中药材附子药源植物中提取基因组DNA,比较不同方法的提取效果。[结果]对于新鲜叶子,采用SDS法提取DNA的A260/A280值最接近1.80,其次为改良CTAB。采用改良CTAB法从新鲜附子提取DNA的A260/A280值最接近1.80,表明改良CTAB法的除杂效果优于SDS法。SDS法适于杂质含量较低的试材。采用SDS法提取的DNA浓度最高,改良CTAB法次之,CTAB法最低;从鲜材料提取基因组DNA浓度比干材料高。[结论]3种方法均能提取到中药材附子药源植物的基因组DNA,SDS法对新鲜叶子提取的基因组DNA效果最佳,改良CTAB法对新鲜附子进行DNA提取的效果最好。     

中药材贝母DNA不同提取方法的比较

目的探讨中药材贝母DNA的不同提取方法,为中药贝母的分子生物学鉴定提供参考.方法利用苯酚法、CTAB法、SDS法从中药贝母中提取DNA,通过紫外分光光度和琼脂糖凝胶电泳对所得DNA样品含量及纯度进行检测.结果利用3种不同的方法提取,药材贝母DNA的A260/A280在1.80±0.23左右.结论利用3种不同DNA提取方法,均可从贝母样本中提取得到DNA,且CTAB法提取贝母的DNA含量高、纯度好.     

滇山茶基因组DNA不同提取方法效果比较

选取3个滇山茶品种("早桃红"、"柳叶银红"及"菊瓣")采用4种方法(CTAB法、改良的CTAB法、SDS法及改良的SDS法)进行基因组DNA提取,并对提取效果进行了比较分析.结果表明,CTAB法提取效果最佳,其次为改良的CTAB法,而SDS法不能有效地提取DNA.同时发现,不同品种之间DNA提取效果也存在差异,柳叶银红DNA提取浓度及纯度最高(D260 nm/D280 nm=1.976 2),其次为菊瓣,最差为早桃红.本研究为下一步进行滇山茶分子标记研究与应用奠定了基础.     

小麦条锈菌DNA提取方法的比较研究

以小麦条锈菌夏孢子为实验材料,分析比较了CTAB法、SDS法、尿素法和CTAB/SDS法4种方法对小麦条锈菌基因组DNA的提取效果。结果表明,利用4种方法提取的小麦条锈菌夏孢子DNA的纯度和得率存在一定差异,单位重量夏孢子分离的DNA量依次为:CTAB法>尿素法>CTAB/SDS法>SDS法,而所获得的DNA纯度依次为:CTAB/SDS法>CTAB法>SDS法>尿素法。以不同分离方法获得的小麦条锈菌DNA为模版,利用特异性微卫星引物RJ17进行PCR扩增和电泳分析,4种方法均能满足SSR反应,但CTAB法更适于SSR反应。     

光皮桦基因组DNA提取方法比较

为从富含次生代谢物的光皮桦Betula luminifera嫩叶中获得高质量DNA,设计了5种先提核再提DNA的CTAB法Ⅰ,CTAB法Ⅱ,CTAB法Ⅲ,CTAB法Ⅳ及改进的SDS法,并以常规CTAB法为对照。用不同的方法就光皮桦基因组DNA进行了提取,采用琼脂糖凝胶电泳检测、A260/A280值测定、限制性内切酶处理和PCR扩增等方法对所提的DNA进行了比较分析。结果表明:实验设计的5种改进方法提取的DNA质量要比常规法的好,但提取的效果差异较大。其中改进的CTAB法Ⅰ是提取光皮桦基因组DNA的最佳方法;PCR扩增结果表明,不同的DNA提取方法会影响PCR带型的变化。图3表1参13     

甜菜总DNA不同提取方法的研究

采用CTAB法、SDS法、改进CTAB法和改进SDS法提取甜菜总DNA,并对提取得到的DNA进行质量鉴定和PCR扩增效果检测.结果表明：用改进的CTAB法提取的甜菜总DNA OD260/OD280在1.8左右,DNA纯度好,产率高,CTAB法和改进的SDS法产率次之,SDS法最低.同时对改进的CTAB法的提取条件进行优化,即用5.0 mL细胞提取液,0.8 mL无水乙醇, 0.6倍体积的异丙醇,可从1.0 g甜菜叶片中提取到高质量高纯度的DNA 764 μg/g.     

光皮桦基因组DNA 提取方法比较

为从富含次生代谢物的光皮桦Betula luminifera 嫩叶中获得高质量DNA , 设计了5 种先提核再提DNA 的CTAB 法Ⅰ , CTAB 法Ⅱ , CTAB 法Ⅲ , CTAB 法Ⅳ及改进的SDS 法, 并以常规CTAB 法为对照。用不同的方法就光皮桦基因组DNA 进行了提取, 采用琼脂糖凝胶电泳检测、A260/ A280值测定、限制性内切酶处理和PCR 扩增等方法对所提的DNA 进行了比较分析。结果表明:实验设计的5 种改进方法提取的DNA 质量要比常规法的好, 但提取的效果差异较大。其中改进的CTAB 法Ⅰ是提取光皮桦基因组DNA 的最佳方法;PCR 扩增结果表明, 不同的DNA 提取方法会影响PCR 带型的变化。图3 表1 参13     

野牛草基因组DNA提取方法的筛选

采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、十二烷基磺酸钠(SDS)法以及高盐法3种方法对野牛草叶片的基因组DNA进行提取,并利用分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测比较3种方法提取DNA的纯度与浓度。结果表明,3种方法提取到的野牛草叶片DNA的纯度、完整性都较好,质量从高到低依次为CTAB法高盐法SDS法,产率依次为SDS法CTAB法高盐法,综合来看CTAB法是提取野牛草基因组DNA的最佳方法。     

蓖麻水提物和醇提物对韭菜迟眼蕈蚊的杀虫活性

为了明确蓖麻不同部位水提物和醇提物对韭菜迟眼蕈蚊的杀虫活性,采用浸虫法测定了蓖麻茎、叶、籽壳、籽粕水提物和醇提物对韭菜迟眼蕈蚊3龄幼虫的室内毒力,为采用蓖麻提取物防治韭菜迟眼蕈蚊提供理论依据。结果显示,蓖麻不同部位水提物和醇提物对韭菜迟眼蕈蚊3龄幼虫均有较高毒力,校正死亡率与提取物质量浓度和作用时间呈正相关;用质量浓度为1 g/m L的蓖麻茎、叶、籽壳、籽粕水提物和醇提物处理72 h,3龄幼虫的校正死亡率分别为59.88%、52.84%、88.51%、68.77%和56.67%、53.33%、83.33%、65.56%。提取物毒力大小顺序为籽壳水提物籽粕水提物籽壳醇提物茎水提物籽粕醇提物茎醇提物叶水提物叶醇提物。     

马尾藻提取物的制备工艺研究

[目的]研究优化从马尾藻中提取马尾藻粉的工艺。[方法]以马尾藻为原料,通过单因素试验和正交试验选择合适的酶制剂、脱色树脂,降解马尾藻中各类大分子物质,提高水溶性成分含量,然后对终产品中的有效成分进行分析和含量测定。[结果]试验表明,复合酶(纤维素酶28.57%、果胶酶42.86%、木瓜蛋白酶28.57%)添加量为5‰,在pH 5.0,50℃下酶解4.0 h,此时酶解液中多糖含量达到23.38%,且通过对6种大孔树脂的脱色试验,选择大孔树脂AB-8为生产用脱色剂,产品脱色效果好,气味愉悦,多糖含量稳定在20%以上。[结论]制成的马尾藻粉不仅改善原海藻的不愉悦气味,同时能做到完全水溶,可结合先进食品加工技术,应用到各类营养保健食品中。     

生姜提取物中化学成分研究

[目的]分析生姜提取物的化学成分.[方法]采用硅胶柱色谱、制备液相色谱、Sephadex LH-20柱色谱等多种方法进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构.[结果]试验从生姜提取物中分离鉴定了7个化合物,经波谱解析分别鉴定为6-姜烯酚(6-shogaol,1)、5-去氧-6-姜辣醇(6-paradol,2)、8-姜烯酚(8-shogaol,3)、10-姜烯酚(10-shogaol,4)、6-姜酚(6-gingerol,5)、8-姜酚(8-gingerol,6)、10-姜酚(10-gingerol,7).[结论]试验分离鉴定的化合物2,即5-去氧-6-姜辣醇为在国内首次从生姜中分离得到.     

大蒜浸提液的抑菌效应

为选用合适的浓度大蒜浸提液进行生物抑菌时,将大蒜浸提液添加到细菌培养基中,配制成不同浓度(0、3%、6%、9%、12%、15%和18%)的液体和固体培养基,用这些培养基分别培养3种细菌(大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和变形杆菌),观察大蒜浸提液对不同细菌的抑菌效应。结果表明:随着大蒜浸提液在培养基中浓度升高,其抑菌效果逐渐增强,并且当大蒜浸提液的浓度超过12%后,细菌的菌落直径和繁殖速率下降最明显。     

低分子质量提取物的研究进展

大分子蛋白质必须分解为氨基酸和小肽等小分子类才能被机体吸收,而这同时又降低了蛋白质的利用率,且大分子蛋白质有种族特异性,易引起过敏反应。因此,低分子质量活性物质的提取及其生物学效应的研究成为当今的热点课题。1低分子质量提取物的理化性质低分子质量提取物是指从生物     

鱼类废弃物低温自溶回收液的脱苦及其在鱼糜制品中的增鲜作用

为了有效利用海产加工废弃物中的有益成分，将富含氨基酸、肽类及其他鲜味成分的双鳍舵鲣鱼废弃物的低温自溶回收浪开发成一种金天然的增鲜剂，本文对回收浪的脱苦方法和应用前景进行了研究。结果表明，回收液通过低浓度的活性炭(0．25％—1．0％)处理即能达到很好的脱苦、脱腥及脱色效果；而采用高岭土时，即使处理浓度达到10％其脱苦效果仍不明显。进一步研究显示，经0．25％活性炭处理后的回收液含氮类有效成分的吸附损失率小(低于10％)，具有较强的鲜味，几乎没有苦味和腥味等不愉快味道。将此回收液添加到漂洗过的鱼糜中试制鱼丸，同添加味精的鱼丸相比较，无论在外观、色泽、气味和口味等感官品质方面都没有明显的差异。可见，经0．25％活性炭脱苦处理后的鱼类废弃物低温自溶回收液可以作为味精(化学增鲜剂)的替代物用于鱼糜制品中，起到同味精等效的增鲜作用。     

嗜水气单胞菌细胞提取物特性的分析

对六株嗜水气单胞菌的全细胞和外膜成份在不同的培养条件下进行SDS-PAGE、免疫转印分析.在同一培养条件下6个供试菌株全细胞的蛋白质电泳图谱不同.同一菌株在五种不同的培养条件下,其蛋白质电泳图谱相似但有差异.6株菌株的细菌外膜提取物的蛋白质电泳图谱不同,同一菌株在5种不同的培养条件下,其蛋白质电泳图谱相似但有差异,但所有的图谱均具有34 kDa和30 kDa的条带.用Schiff's试剂,银染及生物素标记(BS-1,ConA,UEA-1)法测定及分析提取物中糖或碳水化合物的特征.生物素标记及经蛋白酶K处理后的所有菌株的提取物均显示不同分子量碳水化合物的条带,但具有相同分子量的条带,其中32 kDa条带被三种生物素及银染所显示,而34 kDa仅被生物素BS-1和UEA-1所识别.经Schiff's试剂染色后,仅出现少量的条带.用免疫转印法测定菌体提取物的抗原性,结果显示,提取物有多条不同的条带被两种血清所识别,且用活菌制备的血清比死菌的要强得多.所有菌株在不同培养条件下的提取物均具35 kDa条带被鱼血清所识别.所以,35 kDa条带可能是嗜水气单胞菌的共同抗原.同时,用ELISA法测定,证明鱼血清与其它菌株间有较强的交叉反应.     

紫锥菊根乙醇提取物的抗炎作用研究

目的:观察紫锥菊根乙醇提取物的抗炎作用.方法:采用二甲苯致小白鼠耳肿胀试验、蛋清致小鼠足跖肿胀试验、小鼠腹腔毛细血管通透性试验、小鼠棉球肉芽肿试验.结果:紫锥菊根乙醇提取物10,5 g/kg可显著减轻二甲苯所致小鼠耳肿胀程度、抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增加、抑制小鼠棉球肉芽肿的形成(p<0.01,p<0.05);紫锥菊根乙醇提取物10 g/kg能减轻蛋清所致小鼠足跖肿胀度(p<0.05).结论:紫锥菊根乙醇提取物具有较好的抗炎作用.

Abstract：

To examine the anti-inflammatory effect of the echinacea (Echinacea) root extract.Methods: Experiments of ear edema induced by xylene, hind paw edema induced by fresh egg white, capil-lary permeability of abdominal cavity induced by acetic acid and granuloma induced by cotton ball in mice were performed. Results: Having been treated with echinacea root extract at 10 or 5 g·kg~(-1), the mice showed that the ear edema was reduced, capillary permeability of abdominal cavity and the formation of granuloma were inhibited (p<0.01,p<0.05); and the edema of hind paw was reduced when the mice were treated with echinacea root extract at 10 g·kg~(-1)(p<0.05). Conclusion: Echinacea root extract has satisfactory anti-inflammatory effect.     

茶叶中天然抗氧化剂的提取

提出一种利用茶厂下脚料提取茶多酚的新工艺.该工艺采用对人体无害的沉淀剂与溶解剂,不用或少用有机溶剂进行提取,有显著的社会效益与经济效益.