豆状带绦虫抗原的SDS-PAGE及Western-blot分析

为筛选豆状囊尾蚴的特异性抗原,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western-blot)技术对自然感染的豆状带绦虫成虫、幼虫的头节、囊壁可溶性抗原及囊液抗原进行了分析.结果表明:从豆状带绦虫不同发育阶段的虫体中分离出5~12条主要蛋白区带,分子质量为25~114ku.以第7周自然感染家兔血清对7种虫体抗原进行的Western-blot分析显示,7种虫体抗原在42、57、63ku处均能被兔抗豆状囊尾蚴血清识别.以家兔阳性血清中提取出来的IgG免疫球蛋白对7种虫体抗原进行的Western-blot分析显示,7种虫体抗原在63ku处均能被兔抗豆状囊尾蚴血清识别.说明63ku蛋白带可作为预防兔豆状囊尾蚴病的候选疫苗抗原.试验初步阐明了豆状带绦虫7种不同抗原的部分生化特性,为对该抗原的进一步深入研究奠定了基础.     

诊断兔豆状囊尾蚴病的不同血清学检查方法的对比研究

本研究用兔豆状囊尾蚴的囊液作抗原，用皮内变态应、琼脂双向扩散试验、对流兔疫电泳、炭凝集试验、胶乳凝集试验和间接血凝试验，检测了兔三状囊尾蚴病的阳性血清及阴性血清．并分析、比较了各种方法在诊断兔豆状囊尾蚴病的应用效果和价值．结果问接血凝试验的效果最好，其次是胶乳凝集试验、炭凝集试验．但三种方法检测效果差异不显著，都具有简便、早期、快速、敏感、准确等优点，均可在现地推广使用．而皮内变态反应、琼脂双向扩散试验、对流兔疫电泳的检出率低，不适合用于兔豆状囊尾蚴病的免疫学诊断．     

猪囊尾蚴病ELISA诊断抗原的研制及其应用

本文报道了在囊液理化性质及免疫性质分析的基础上,应用DEAE-Sephadex A50直接吸附法制备猪囊尾蚴囊液抗原组份,并与传统的蛋白质类抗原制备的Sephadex G200凝胶过滤法制备的囊液抗原组份进行比较。结果表明:γ~A组份作为囊尾蚴病诊断抗原,免疫比值高,非特异性吸附反应小;效价高,包被浓度为6μg/ml以下;特异性强,阳性检出率及阳性符合率均在98％以上。而且工艺简便,产品率高,便于推广应用。     

兔豆状囊尾蚴病的防治体会

山西省阳城县某兔场饲养的肉兔、獭兔，出现一种以腹胀、水泻、精神不振，后肢瘫痪为特征，并能引起死亡的疾病，经诊断的兔豆状囊尾蚴病。     

应用间接血球凝集(IHA)试验诊断猪囊尾蚴(Cysticercus cellulosae)病

本文用猪囊尾蚴的全囊虫、囊液、头节的粗提抗原(CW_1,CF_1,CS_1),和其超速离心上清液抗原(CW_2,CF_2,CS_2)以及其经葡聚糖凝胶柱(Sephadex G—150)层析提纯的抗原(CW_3,CF_3,CS_3)分别对人工感染的猪囊尾蚴、细颈囊尾蚴猪和不感染的对照组猪,以间接血球凝集试验(IHA)进行定期的检测。结果表明,CW_2,CW_3,CF_2和 CS_2抗原的敏感性较高。进而用此4种抗原对自然感染的猪囊尾蚴猪进行了扩大诊断试验。试验结果:CF_2的敏感性高于其它抗原,但特异性较差,其检出率为76.87%,假阳性率为16.07%;而 CW_3抗原的敏感性虽较 CF_2抗原差,但特并性较强,检出率为64.88%,假阳性率为2.5%。两种抗原的重复性均良好。     

猪囊尾蚴几种抗原氨基酸分析及其与抗原反应原性的相关性

 通过对猪囊尾蚴虫体 (CWag)、囊液 (CFag)、头节 (CSag)、囊壁 (CBWag)、脲溶抗原 (UCWag)和成虫抗原(TSag)的水解氨基酸以及抗原反应原性的分析 ,确定了各氨基酸与抗原反应原性的关系。试验结果表明 ,几种抗原都含有 17种氨基酸 ,通过数据处理软件SPSS对各种抗原组成差异分析显示 ,各种抗原在天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、组氨酸的组成上无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,且CSag、CBWag之间在所有氨基酸组成上均差异不显著 ;而UCWag却与其它抗原在氨基酸组成上差异显著 (P <0 .0 5 )。UCWag的敏感性和特异性均较高 ,脯氨酸与抗原反应的敏感性呈正线性相关 ,谷氨酸与抗原反应的特异性呈正线性相关     

猪带绦虫(Taenia solium)囊尾蚴发育过程的超微结构观察

系统地研究了猪囊尾蚴发育过程中超微结构的变化。5头仔猪，分别经口服感染3节猪带绦虫孕卵节片，于感染后不同时期剖杀，剥离囊尾蚴。取囊壁和头颈部，作透射电镜观察。观察结果表明，随感染时间的延长，猪囊尾蚴细胞或组织的类型未发生明显变化，只在大小或发育程度上有所增加。头节和囊壁均由皮层和实质区构成，但二者的超微结构有差别。头节肌肉较发达，皮层外表面的微毛较短，基质区线粒体较少，实质区糖原颗粒不及囊壁贮存多，并且排泄管也较少。提示二者可能执行不同的功能：囊壁与营养吸收有关，而头节可能与将来的发育有关。     

肉兔豆状囊尾蚴病的诊治

兔豆状囊尾蚴病是由豆状带绦虫的幼虫豆状囊尾蚴寄生于兔的肝脏、肠系膜和腹腔内引起的一种绦虫病。     

猪细颈囊尾蚴病的检疫及危害情况

1检疫情况台安县有关部门在对上市的白条猪中检疫中,发现有不少猪患有细颈囊尾蚴病,2012年在检疫的13250头白条猪中,检出1335头猪患有此病,检出率达10%左右,大大高于猪囊尾蚴病的检出率,应引起相关部门和养殖户的重视。猪细颈囊尾蚴病是由狗的泡状带涤虫的蚴虫——细颈囊尾蚴引起的一种常见的寄生虫病,细颈囊尾蚴又称水铃铛,呈囊内含透明液体,大小由几毫米到10cm不等,其中悬浮着相当大的头节。幼龄虫体积很小,仅数毫米大,很易与猪     

豆状囊尾蚴的头节在相对静止与运动状态时的超微结构变化(英文)

[目的]观察豆状囊尾蚴的头节在相对静止与运动时超微结构的变化.[方法]本研究用扫描电镜对位于囊泡内的头节和经人工培养后从囊泡内翻出头节的超微结构变化进行了比较观察。[结果]处于相对静止状态的头节从正面观察时,带有皮肌柱和齿钩的顶突呈伞状,覆盖于头节的前端。从侧面观察,齿钩具有鹿角样的分支,覆盖头节的齿钩仅有一排。4个吸盘呈洞穴状,位于顶突之后,均等地分布在头节的四周。当头节处于运动状态时,顶突上的皮肌柱收缩,鹿角样的齿钩向周围伸展,吸盘也发生环形和纵行收缩。[结论]豆状囊尾蚴的头节在相对静止与运动时的超微结构有明显的改变,这种变化有利于豆状囊尾蚴对宿主的侵袭。     

猪囊尾蚴头节蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用

采用抗猪囊尾蚴头节蛋白单克隆抗体包被ELISA板,以兔抗猪囊尾蚴头节蛋白多抗作为捕获抗体,建立了猪囊尾蚴头节双抗体夹心ELISA检测方法,用该方法分别检测猪囊尾蚴、棘球蚴和猪蛔虫具有良好的特异性。用ELISA和RT-PCR同时检测120份样品,ELISA的特异性和敏感性分别为98.1％和80.0％,2种方法的符合率为95.8％。        

豆状带绦虫TPO18基因的原核表达及保护性分析

【目的】明确重组蛋白 pGEX-TPO18 的免疫保护效果。【方法】提取豆状带绦虫六钩蚴 RNA,根据带科其他种属绦虫 18 kD 基因的保守区设计引物,5′端分别引入EcoR I、Xho I限制性酶切位点,RT-PCR 扩增,产物克隆于 pMD18-T中进行序列测定,并对序列进行生物信息学分析。将纯化后的 PCR 产物和质粒 pGEX-4T-1 分别用 EcoRⅠ＋XhoⅠ双酶切,回收目的片段,连接后转化至 E.coli BL21感受态细胞,挑斑摇菌,通过 PCR 方法和重组质粒测序技术进行鉴定,将鉴定正确的重组表达质粒命名为 pGEX-TPO18。用 IPTG 诱导表达重组质粒,收集菌体进行 SDS-PAGE 分析,用 GST 琼脂糖树脂纯化 TPO18 蛋白,进行 Western blottting 检测。将纯化后的重组蛋白分别乳化弗氏佐剂、206 佐剂、氢氧化铝佐剂后免疫家兔,每次 50 μg/只,共免疫 3 次,末次免疫后 34 d 每只家兔感染 1 500 个虫卵,感染 58 d 后扑杀并计算各免疫组减囊率。免疫前后每隔 7 d 采血分离血清,ELISA 法检测血清抗体水平,以 40 µg•mL-1重组蛋白包被酶标板,血清 1﹕200 稀释,检测血清样品的 OD492nm 值。【结果】TPO18 基因的 RT-PCR 扩增产物为 339 bp, 与预期大小相符;测序结果表明无碱基突变,重组质粒pGEX-TPO18构建成功。pGEX-TPO18 在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物为 38.6 kD 的可溶性蛋白,Western blotting分析结果显示兔抗豆状囊尾蚴阳性血清与重组蛋白在38.6 kD处有一条明显的反应条带,表明该重组蛋白具有反应原性。经ELISA检测,免疫后7 d 免疫组家兔抗体水平开始升高,第43 天达到峰值。经口感染虫卵后,免疫组抗体水平开始降低,但仍保持一定水平。家兔免疫保护试验表明弗氏佐剂、206 佐剂和氢氧化铝佐剂免疫组减囊率分别为 79.13%、65.66% 和 50.43%。【结论】研究表明弗氏佐剂免疫效果较好,有望研制出抗豆状囊尾蚴病的高效疫苗。     

猪囊尾蚴“四性细胞系”代射产物（可溶性抗原）的免疫原性

应用仔猪20头,以猪囊尾蚴“四性细胞系”的可溶性抗原作为免疫原,对经过第1次用不同细胞剂量疫苗免疫的猪,再次用与细胞数量相适应的细胞代射产物的不同剂量疫苗,对其中的11头进行第2次免疫以第2次还是注射细胞疫苗的3头、只注射1次细胞疫苗的2头,和空白对照猪2头作对照组,以观察代射产物抗原的免疫原性。于第1次细胞疫苗免疫后的68d,最长94d用细胞加代谢产物疫苗进行了这次免疫,14d后攻虫,每头使用人有钩绦虫卵,6000枚,3个月后屠宰检查虫体。第1次用10万细胞疫苗免疫,第2次用1千万细胞加代谢产物疫苗免疫该组动物中的2头,平衡有5个囊尾蚴,但这2头猪均发生了囊尾蚴钙化;另一组第1次用100万细胞疫苗免疫,第2次用2千万细胞加代谢产物疫苗免疫该组全部3头动物,平均有3.6个囊尾蚴,这3头猪也都有囊尾蚴钙化。2个实验组出现免疫猪的100%的钙化现象,是免疫治疗作用,是猪囊尾蚴四性细胞系代谢产物的特殊免疫作用。     

几种牛副结核琼扩抗原的比较

利用免疫学方法制备了牛副结核细胞浆抗原、细胞壁声波粉碎抗原、Sephadex-G200层析抗原和草柱亲和抗原，分别与牛副结核阳性、弱阳性及阴性血清进行琼扩散试验。结果表明：细胞浆抗原、细胞壁超声波粉碎抗原与阳性、弱阳性血清之间，以及层析抗原和草柱亲和抗原与阳性血清之间有沉淀线出现，而其它的均无沉淀线出现。12个月后，重复该试验，结果细胞浆抗原、细胞壁超声波粉碎抗原阳性血清之间有沉淀线出现，而与弱阳性血清之间以及层析抗原和草柱亲和抗原与阳性血清之间均推动了沉淀线。结果显示：细胞浆抗原和细胞壁声波粉碎抗原在用作牛副结核琼护抗原时，优化层析抗原和草柱亲和抗原。     

酶联免疫吸附试验检测姜片虫感染者血清抗体

超声粉碎制备姜片吸虫成虫冷浸抗原,以1:3500工作浓度包被酶标板;采用Kato—Katz氏定透法普查姜片吸虫病,对虫卵阳性者用ELISA法测定血清抗体,同时测定健康居民的血清和其他吸虫病患者血清,以评价ELISA法检测姜片虫病血清抗体的敏感性、特异性和交叉反应性。按常规ELISA方法操作,目视与酶标仪判断结果。普查2 189人中姜片吸虫卵阳性者168例;168例中165例ELISA阳性,ELISA与Kato—Katz氏定透法的阳性符合率98.21％;健康居民血清147份,阳性6份,阳性率4.08％;与血吸虫病交叉阳性为9.38％,肺吸虫病交叉阳性为5.36％。应用此法检测姜片虫感染者血清抗体具有敏感性高、特异性强和交叉反应率低等特点,可代替粪检法广泛用于姜片吸虫感染的检测。     

Adjuvant Effects of Recombinant Plasmids of Porcine IL-4 and IFN-γ to Cysticercosis cellulosae Vaccines in Mice and Pigs

To investigate the adjuvant potential of porcine IL-4 and IFN-γ in mice and pigs, the genes of porcine IL-4 and IFN-γ were cloned and the recombinant mammalian expression plasmids were constructed for in vivo expression of the cytokines. Adjuvant effects of recombinant expression plasmids of IL-4 and IFN-γ （pcDNA-IL-4, pcDNA-IFN-γ） co-administrated with Cysticercus cellulosae crude antigen or TSOL18 recombinant protein antigen have been carried out in mice and pigs, respectively. We have demonstrated that recombinant plasmids of the cytokines as an adjuvant could induce stronger immune response in mice and pigs. With the C. cellulosae parasite antigen, porcine pcDNA-IL-4 induced higher specific antibody of immunized mice than pcDNA-IFN-γ. But pcDNA-IFN-γ is significantly stronger than that of no adjuvant or empty plasmids with the antigen control group. For the TSOL18 recombinant protein antigen vaccine, pcDNA-IL-4 still had a stronger ability to enhance specific antibody in swine than pcDNA-IFN-γ （P 〈 0.01）, but the immune protective rate was lower in challenged pigs （only 68.7%）. Although pcDNA-IFN-γ showed lower specific antibody, the protection rate was very high （91%） than other group （P 〈 0.01）. This study indicated that the recombinant expression plasmids of porcine IL-4 and IFN-γ display stronger adjuvant effects to C. cellulosae vaccine, further research should be carried out for understanding of the interaction mechanism.     

仔猪大肠杆菌纤毛抗原反向间接血凝检测方法的建立与应用

为建立大肠杆菌K88、K99、987P纤毛抗原的快速鉴别诊断和定量检测方法,用纯化的大肠杆菌K88、K99、987P纤毛抗原免疫家兔制备阳性血清,其琼扩效价分别达到1∶32、1∶32、1∶128;利用该阳性血清IgG致敏醛化的绵羊红细胞,确定了最适K88、K99、987P阳性血清IgG的质量浓度分别为40、160、80μg/mL。用该方法对同一批次的K88、K99和987P纤毛抗原进行3次检测,K88、K99和987P纤毛样品的RIHA效价均为1∶1 600、1∶1 600和1∶800。结果表明,该检测方法具有较好的特异性和可重复性,可用于大肠杆菌K88、K99、987P纤毛抗原的快速鉴别诊断。     

猪囊尾蚴(Cvsticercus cellulosae)抗原制剂的PAGE圆盘电泳分析

用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳法对猪囊尾蚴的全囊虫、囊液、头节的粗提原(CW_1,CF_1,CS_1),超速离心上清抗原(CW_2,CF_2,CS_2),及葡聚糖凝胶柱(Sephadex G—150)层析提纯抗原(CW_3,CF_3,CS_3)进行了分析。结果表明,CW_1,CF_1和CS_1抗原分别显示12,5和9条氨基酸染色区带;CW_2,CF_2和CS_2抗原分别显示10,3和5条区带;而CW_3和CF_3抗原分别显示2和3条区带。由此可见,提纯后的抗原组分较纯。通过脂蛋白染色预电泳法和阿尔新兰染色法证明,囊液抗原含有丰富的蛋白质,同时含有糖蛋白和脂蛋白成分,而头节抗原则未出现糖蛋白和脂蛋白染色区带。