奶牛乳房炎致病型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分离鉴定

为探究引起奶牛乳房炎的耐药性致病菌,本研究针对西安地区显性乳房炎奶样中的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）进行系统研究。采用常规细菌学鉴定法对34头（次）荷斯坦牛76个乳区152份奶样的金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）进行了分离培养,共检出92株阳性菌株,检出率为60.5%;对其进行S.aureus致病基因nuc的特异性PCR检测,共检出28株含nuc基因的阳性菌株,检出率为30.4%;进一步针对MRSA耐药基因mecA进行特异性PCR扩增,共检出5株MRSA,检出率为17.9%。研究结果为MRSA耐药菌的有效检测及奶牛乳房炎的治疗提供了指导。     

新疆维吾尔自治区阿拉尔市某规模化养殖场猪乳源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及其毒力、耐药性分析

[目的]分离鉴定新疆维吾尔自治区阿拉尔市猪乳源金黄色葡萄球菌,了解其致病性和耐药性。[方法]从阿拉尔市某规模化养殖场收集6份新鲜猪乳样本,采用甘露醇高盐琼脂（MSA）培养基分离乳样中的金黄色葡萄球菌,利用表型鉴定方法及细菌16S rDNA序列分析法对分离到的菌株进行鉴定,检测分离菌株的生物被膜形成能力,利用K-B纸片扩散法进行药物敏感性试验,利用PCR法检测毒力基因和耐药基因。[结果]经分离培养及分子生物学鉴定,从6份乳样中获得2株金黄色葡萄球菌,分离率为33.33%(2/6);2株金黄色葡萄球菌均具有强生物被膜形成能力（+++）;2株金黄色葡萄球菌均对利福平敏感,均对青霉素、头孢西丁、四环素、红霉素、替米考星、克林霉素和磺胺甲噁唑耐药;在检测的5种耐药基因中,2株金黄色葡萄球菌均携带ant(4)基因和mecA基因;在检测的20种毒力基因中,共检测到6种毒力基因,其中,2株金黄色葡萄球菌均携带seg、sei、hlb、fnbA、clfA基因,有1株携带hla基因。[结论]该养殖场猪乳源金黄色葡萄球菌生物被膜形成能力强,携带多种毒力基因和耐药基因,表现为多重耐药性。     

牦牛隐性乳房炎主要病原菌及耐药和毒力基因分布情况

为探明牦牛隐性乳房炎(SCM)主要病原菌及其耐药和毒力基因的分布情况,本研究自甘肃省甘南州夏季牧场收集无乳房炎临床症状牦牛乳样,通过兰州乳房炎试验(LMT)筛选SCM乳样,从中分离病原菌并纯化培养,利用16S rDNA鉴定主要病原菌,通过纸片扩散法判定其药物敏感性,并采用PCR方法对相关耐药及毒力基因进行检测。结果显示,共筛选出牦牛SCM乳样324份,检出率14.43%;主要病原菌为葡萄球菌属、埃希氏菌属和肠球菌属,其中葡萄球菌分离株对青霉素和四环素耐药率最高,分别为59.57%和47.52%;大肠埃希氏菌分离株对四环素和氨苄西林耐药率最高,分别为43.40%和20.75%;粪肠球菌分离株对四环素和红霉素耐药率最高,分别为25.00%和16.67%;59株耐青霉素金黄色葡萄球菌中共检出MRSA 12株,其中7株携带mecA基因,5株含mecC基因;四环素外排泵基因tetK、tetA携带率最高(85.45%、56.36%),核糖体保护基因tetM携带率最低(34.55%);毒力基因中,clfA、clfB、fib、coa基因检出率较高(87.64%、84.27%、83.15%、82.02%)。研究表明,牦牛SCM的主要病原菌为金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌,均对青霉素类和四环素类抗生素耐药性较高,其中金黄色葡萄球菌的主要毒力因子为黏附因子和凝固酶。     

湖南部分地区乳源金黄色葡萄球菌耐药性及溶血性分析

为调查湖南省部分地区奶牛场生鲜乳源金黄色葡萄球菌的耐药性及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的检出情况，同时调查金黄色葡萄球菌溶血素基因型与溶血表型的分布情况及二者的关系。采用肉汤稀释法对分离自湖南省部分地区奶牛场生鲜乳的54株金黄色葡萄球菌进行18种常见抗菌药物耐药性检测，采用绵羊血琼脂平板检测细菌溶血性，并采用PCR方法扩增分离菌株mecA基因及5个溶血素基因。结果显示，54株金黄色葡萄球菌均表现不同程度的耐药，耐药谱型达21种；21株金黄色葡萄球菌表现为多重耐药，最高耐药重数为9重；对青霉素耐药最严重，耐药率达85.19%,对头孢西丁、苯唑西林、克林霉素、庆大霉素及大环内酯类药物(红霉素、替米考星)耐药率在20%～30%之间，对多西环素与万古霉素敏感；从24株分离菌中检出mecA基因，鉴定为MRSA。54株分离株在羊血琼脂平板上主要以β和γ溶血为主，α、β及γ溶血率分别为12.9%、44.4%和42.6%;各溶血素基因检出率分别为98.1%(hla)、94.4%(hlb)、96.3%(hld...     

上海地区动物源金黄色葡萄球菌分离株mecA基因的表达及耐药性分析

为了解上海地区动物源性金黄色葡萄球菌的耐药情况,采用微量肉汤稀释法对1999年、2011—2018年(2016年除外)分离鉴定保存的78株金黄色葡萄球菌进行19种药物的药敏试验,采用头孢西丁纸片法进行耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)菌株筛选,采用聚合酶链反应(PCR)进行mecA基因检测。结果:金黄色葡萄球菌除万古霉素、利奈唑胺、夫西地酸、莫匹罗星外,均产生耐药性,多重耐药现象严重,耐药谱广;MRSA检出率为51.3%,发病样品、健康畜禽的粪便样品、环境样品中均检测到MRSA;mecA基因检出率为51.3%,MRSA中mecA基因携带率显著高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(Methicillin-sensitive staphylococcus aureus,MSSA)。     

新疆部分地区生乳中金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

【目的】探明新疆部分地区生乳中金黄色葡萄球菌流行情况及耐药性,为该地区生乳中金黄色葡萄球菌的监测及保障生乳质量安全提供理论依据。【方法】试验随机从南北疆规模化奶牛场采集110份生乳样品。采用增菌培养、分离纯化、革兰氏染色、生化鉴定及PCR法对奶样中金黄色葡萄球菌进行分离鉴定,并利用微量肉汤稀释法及PCR方法对金黄色葡萄球菌进行16种抗菌药物的耐药表型及耐药基因分析。【结果】从110份奶样中分离出18株金黄色葡萄球菌,分离株呈浅黄色、光滑凸起的圆形菌落,革兰氏染色镜检呈紫色、短链状排列的革兰氏阳性菌,生化试验结果符合金黄色葡萄球菌生化特点,经16S rDNA及nuc基因PCR扩增鉴定为金黄色葡萄球菌,分离率为16.36%(18/110)。药敏试验结果显示,金黄色葡萄球菌分离株对氨苄西林、青霉素及磺胺异噁唑具有较高的耐药性,耐药率分别为100%、83.33%和77.78%,而对万古霉素、复方新诺明、苯唑西林、头孢噻吩、头孢噻呋、利福昔明及环丙沙星7种抗菌药物高度敏感,敏感率分别为100%、100%、94.44%、94.44%、94.44%、94.44%和94.44%。其中有14株金黄色葡萄球菌为多重耐药菌,多重耐药率为77.78%。耐药基因检测结果显示,大环内酯类耐药基因ermB检出率最高,为50.00%,其次为β-内酰胺类耐药基因mecA,检出率为27.28%,磺胺类耐药基因Sul1的检出率为22.22%。【结论】新疆奶牛场生乳中分离的金黄色葡萄球菌的流行及耐药情况仍较严重,且存在多重耐药现象,因此,对生乳中金黄色葡萄球菌耐药性的监测有重要意义。     

甘肃省乳房炎奶牛乳源肠球菌的分离、药敏试验及毒力基因原核表达载体的构建

为分离临床型奶牛乳房炎中的肠球菌,检测其耐药性和携带毒力基因的情况,本试验采集了甘肃省东、中和西部3个地区41头临床型乳房炎奶牛的奶样93份,并构建了肠球菌毒力基因的原核表达载体。试验使用选择性培养基分离纯化肠球菌,16S rRNA和生化试验结合的方法鉴定所分离菌株的种;选取16种抗菌药进行药敏试验;常规PCR方法检测11种毒力基因的携带情况,最后对具有免疫原性的毒力基因进行原核表达载体的构建。鉴定结果显示,93份乳样中18株为肠球菌,并分为9种。药敏结果显示,分离株多数为多重耐药菌（multiple resistant bacteria,MDR）,占88.89%,未发现耐万古霉素菌株（vancomycin-resistant enterococcus,VRE）,万古霉素敏感率94.12%,所有分离株至少对一种抗菌药耐药。PCR检测结果表明,11种毒力基因均有检出,cob基因检出率最高（44.44%）,efaA、hyl、ccf和esp基因检出率分别为33.33%、27.78%、27.78%和22.22%,Asa1、cylA、EF3314和gelE基因检出率均为16.67%,Ace和cylM基因检出最低（11.11%）;毒力基因组合因菌种不同而存在差异,选择具有免疫原性的Ace和gelE基因成功构建出原核表达载体pET32a-Ace和pET32a-gelE。本试验为后续绘制3个地区奶牛乳房炎流行病学区域谱以及制备相应抗体和亚单位疫苗提供了基础数据及生物材料。     

牦牛隐性乳房炎主要病原菌及耐药和毒力基因分布情况

为探明牦牛隐性乳房炎（SCM）主要病原菌及其耐药和毒力基因的分布情况，本研究自甘肃省甘南州夏季牧场收集无乳房炎临床症状牦牛乳样，通过兰州乳房炎试验（LMT）筛选SCM乳样，从中分离病原菌并纯化培养，利用16S rDNA鉴定主要病原菌，通过纸片扩散法判定其药物敏感性，并采用PCR方法对相关耐药及毒力基因进行检测。结果显示，共筛选出牦牛SCM乳样324份，检出率14.43%；主要病原菌为葡萄球菌属、埃希氏菌属和肠球菌属，其中葡萄球菌分离株对青霉素和四环素耐药率最高，分别为59.57%和47.52%；大肠埃希氏菌分离株对四环素和氨苄西林耐药率最高，分别为43.40%和20.75%；粪肠球菌分离株对四环素和红霉素耐药率最高，分别为25.00%和16.67%；59株耐青霉素金黄色葡萄球菌中共检出MRSA 12株，其中7株携带mecA基因，5株含mecC基因；四环素外排泵基因tetK、tetA携带率最高（85.45%、56.36%），核糖体保护基因tetM携带率最低（34.55%）；毒力基因中，clfA、clfB、fib、coa基因检出率较高（87.64%、84.27%、83.15%、82.02%）。研究表明，牦牛SCM的主要病原菌为金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌，均对青霉素类和四环素类抗生素耐药性较高，其中金黄色葡萄球菌的主要毒力因子为黏附因子和凝固酶。     

内蒙古地区致奶牛子宫内膜炎葡萄球菌超抗原基因分布及耐药性研究

为了解内蒙古地区致奶牛子宫内膜炎葡萄球菌超抗原基因分布及其耐药情况,采用PCR对分离到的葡萄球菌进行鉴定并检测超抗原基因在分离菌中的分布,应用微量肉汤稀释法开展分离菌的药敏试验和PCR检测β-内酰胺类耐药基因BlaZ和mecA的流行情况.结果表明,共分离到金黄色葡萄球菌28株(52.8％),凝固酶阴性葡萄球菌(CNS) 25株(47.2％);超抗原基因SEJ在分离菌中的携带率最高(70.0％),超抗原基因SEA、SEB及SEE携带率最低(1.9％),其他超抗原基因携带率在9.4％～43.4％之间;分离到的葡萄球菌对青霉素耐药率最高(96.2％),对万古霉素最敏感,有多重耐药菌株检出;分离菌中BlaZ携带率达98％,金黄色葡萄球菌中未检出mecA,但CNS中mecA携带率为24.5％.内蒙古地区奶牛子宫内膜炎致病葡萄球菌有12种肠毒素及eta、etb、TSST-1检出,其中SEJ基因的携带率最高;葡萄球菌对β-内酰胺类耐药率较高,并且发现了多重耐药菌株的流行.     

奶牛乳房炎葡萄球菌菌种的鉴定及其mecA基因与耐药性关系分析

从209份奶牛乳房炎阳性乳样分离葡萄球菌,用PCR扩增Tuf和16S rRNA基因片段,根据序列同源性进行种的鉴定,用PCR检测mecA基因,用标准方法进行药敏试验。结果显示,分离的104株葡萄球菌分为14个种,包括金黄色葡萄球菌和13种凝固酶阴性葡萄球菌,后者主要为阿氏葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、木糖葡萄球菌和产色葡萄球菌,不同于国外的研究报道;松鼠葡萄球菌和溶血葡萄球菌的mecA基因检出率高达66.7%,表皮葡萄球菌达42.9%,金黄色葡萄球菌达35.7%,显著高于国内外报道;大部分葡萄球菌的β-内酰胺类抗生素耐药性与mecA基因检测不相符,可能与其他mec基因有关。     

动物源金黄色葡萄球菌分离株mecA基因的表达及耐药性分析

为明确动物源金黄色葡萄球菌(SA)的耐药状况,使用微量肉汤稀释法分离45株金葡菌,并进行9种药物的药敏试验,筛选出耐耐甲氧西林金葡菌(MRSA)菌株,使用聚合酶链反应(PCR)检测mecA基因。结果表明,除了万古霉素、莫匹罗星外,金葡菌对其他药物均产生了耐药性,MRSA的检出率为51.1%;mecA基因检出率为51.1%,MRST内mecA基因携带率明显高于甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)。     

鲜牛乳生产中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性与散播

探求生鲜牛乳生产中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药情况和散播特点,采集山西某奶牛养殖区的内外环境、挤奶间环境及乳等各生产环节样本,经细菌分离、纯化培养、16S rRNA鉴定、苯唑西林和头孢西丁药敏纸片法及mecA基因扩增筛选MRSA,测定了其对14种抗生素的药物敏感性,利用mecA基因序列和ERIC-PCR指纹图谱分析鲜牛乳生产中MRSA的遗传相似性。结果显示,从721份生鲜牛乳生产样本中分离鉴定出184株金黄色葡萄球菌,其中90株为MRSA,检出率为48.9%;药敏试验显示,MRSA表现不同程度的耐药性和多重耐药性,对青霉素G的耐药率为95.6%,多重耐药种数主要集中在6～8耐;mecA基因序列分析显示,MRSA的mecA耐药基因同源性为95.22%,不同序列有程度不一的碱基位点缺失和突变;ERIC-PCR同源性分析显示,90株MRSA的DNA指纹图谱相似性为52%～100%,其中牛乳中MRSA与牛场(15株)、挤奶间(3株)、居民区空气(1株)的同源性在90%以上。提示在生鲜乳生产环节中均存在大量MRSA的污染,且呈多重耐药性,并可在牛场、挤奶间和附近环境通过直接接触和形成微生物气溶胶污染生鲜牛乳。     

新疆、内蒙古部分地区乳房炎奶样中金黄色葡萄球菌的流行性与耐药性分析

为确定患乳房炎奶牛乳中金黄色葡萄球菌的流行性和耐药性状况,试验自2018年4月至2018年5月采集了新疆地区70例和内蒙古地区50例患乳房炎奶牛生鲜乳样。通过对奶样中金黄色葡萄球菌进行增菌培养、分离纯化,KB纸片扩散法药敏试验及PCR耐药基因检测发现,新疆和内蒙古地区奶样中金黄色葡萄球菌分离率分别为28.6%和54.0%;新疆地区分离的金黄色葡萄球菌菌株对青霉素G的耐药性最高(75.0%),其次是磺胺异噁唑(60.0%)、林可霉素(55.0%);内蒙古地区的金黄色葡萄球菌菌株同样对青霉素G高度耐受,耐药率为70.4%,其次为林可霉素(63.0%)、克林霉素(51.9%);两地区所分离菌株中,88.9%以上携带多种耐药基因,呈现多重耐药性;两地区所检出的高频耐药基因分别是新疆地区的ermA(30.0%)、dfrS1(30.0%)基因和内蒙古地区的lnuA(46.2%)基因。     

新疆、内蒙古部分地区乳房炎奶样中金黄色葡萄球菌的流行性与耐药性分析

为确定患乳房炎奶牛乳中金黄色葡萄球菌的流行性和耐药性状况,试验自2018年4月至2018年5月采集了新疆地区70例和内蒙古地区50例患乳房炎奶牛生鲜乳样。通过对奶样中金黄色葡萄球菌进行增菌培养、分离纯化,KB纸片扩散法药敏试验及PCR耐药基因检测发现,新疆和内蒙古地区奶样中金黄色葡萄球菌分离率分别为28.6%和54.0%;新疆地区分离的金黄色葡萄球菌菌株对青霉素G的耐药性最高(75.0%),其次是磺胺异噁唑(60.0%)、林可霉素(55.0%);内蒙古地区的金黄色葡萄球菌菌株同样对青霉素G高度耐受,耐药率为70.4%,其次为林可霉素(63.0%)、克林霉素(51.9%);两地区所分离菌株中,88.9%以上携带多种耐药基因,呈现多重耐药性;两地区所检出的高频耐药基因分别是新疆地区的ermA(30.0%)、dfrS1(30.0%)基因和内蒙古地区的lnuA(46.2%)基因。     

湖南省奶牛源金黄色葡萄球菌分离鉴定与耐药性分析

为了掌握湖南省内奶牛源金黄色葡萄球菌的耐药情况,指导临床合理用药,抽取牛乳样品,通过对细菌的分离培养和纯化,采用基质辅助激光电离飞行时间质谱仪和全自动生化鉴定仪进行鉴定,并对分离菌株进行18种抗菌药物耐药性检测;结合耐药表型和mecA基因检测判定MRSA菌株。结果显示,2020-2021年从湖南地区257份牛乳样品中分离出金黄色葡萄球菌39株,89.74%的临床分离菌株表现为不同程度耐药,其中对青霉素耐药最为严重,耐药率达82.05%;对红霉素、克林霉素、替米考星、庆大霉素、头孢西丁耐药率在20%-35%之间;对多西环素及万古霉素绝对敏感,耐药率为0。38.46%分离菌株表现为多重耐药,以7重耐药最多。鉴定出19株MRSA,其中包含15株OS-MRSA和4株OR-MRSA。本研究可为湖南省内奶牛企业制定合理用药措施提供依据。     

海南罗非鱼源无乳链球菌的分离鉴定及生物学特性研究

为探究目前海南地区罗非鱼无乳链球菌病的流行性,了解该地区无乳链球菌耐药情况,本研究2020年8月从海南地区部分渔业养殖场的病鱼中共分离获得15株无乳链球菌,对各分离菌株的血清型、主要毒力基因及耐药性进行检测,并对多重耐药情况进行分析。血清型检测结果显示,15株分离菌株的血清型与对照菌株A909一致,均为Ⅰa型。毒力基因检测结果显示,15株分离菌株均未检出毒力基因scpB,但该毒力基因在参考菌株人源无乳链球菌2603V/R中检出,而主要毒力基因cylE、sodA、gapC的检出率均为100%。药敏试验结果表明,15株分离菌株对甲氧胺嘧啶、磺胺异噁唑、复方新诺明、链霉素、新霉素、庆大霉素的耐药率达85%以上;对头孢克洛、头孢曲松、头孢哌酮、头孢拉定、卡那霉素、红霉素、利福平、克林霉素敏感性达80%以上;未发现对甲氧胺嘧啶、氟罗沙星、链霉素、新霉素、庆大霉素敏感的菌株。多重耐药检测结果表明,15株分离菌株均至少对4种药物表现耐药,其中6重及以上耐药的菌株占总分离菌株数的86.67%,并有2株为13重耐药菌株。本研究为海南地区鱼源无乳链球菌病的用药提供参考,为华南地区罗非鱼无乳链球菌的流行病学和疾病防控提供调查依据。     

川渝地区奶牛隐性乳房炎调查和主要病原菌分离鉴定及药敏试验

用LMT法对川渝地区134头泌乳奶牛的491个乳区进行隐性乳房炎发病情况调查,并对阳性乳样进行主要病原菌的分离鉴定及药敏试验。结果显示,被检奶牛患隐性乳房炎头阳性率为70.90%,乳区阳性率为35.64%,175份阳性乳样的细菌检出率为90.86%,病原菌单独感染率为10.69%,混合感染率为89.31%;共分离到金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌3种主要病原菌134株,其中金黄色葡萄球菌93株,占分离菌株的69.40%,链球菌34株,占25.37%,大肠杆菌7株,占5.23%;主要病原菌对呋喃妥因、新生霉素、头孢菌素类和喹诺酮类药物敏感性较好,对大多数抗菌药物产生不同程度的耐药性,对青霉素和链霉素则完全不敏感,耐药程度接近100%。     

南宁某牛场奶牛乳房炎主要致病菌的分离鉴定与药敏试验

南宁某奶牛场乳房炎治疗用药已经出现低效或无效,为了解其主要致病菌的耐药性,随机采集乳样228份进行体细胞数检测,筛选出75份进行细菌分离鉴定及药敏试验,其中检出167株可疑菌株,并通过生化鉴定等确定出金黄色葡萄球菌28株(占16.8%)、无乳链球菌10株、停乳链球菌4株、乳房链球菌2株(占9.6%)、大肠杆菌35株(占21.0%)。结果表明,大肠杆菌分离株对链霉素等已100%耐药,金黄色葡萄球菌对氨苄西林等已100%耐药,链球菌对阿米卡星、红霉素等已100%耐药。其中三类菌对庆大霉素、头孢唑啉、头孢曲松和氧氟沙星都具有较高敏感性。     

吉林省猪源沙门菌毒力基因检测及耐药性分析

为了解吉林省规模化猪场猪群中沙门菌的携带、毒力基因分布及耐药性等情况,本试验于2013年间采集吉林省规模化猪场猪直肠拭子540份,经细菌分离、生化鉴定、分子生物学鉴定,共检出猪源沙门菌18株,检出率3.33%,同时对菌株进行药敏试验、毒力基因检测及致病性试验。结果显示,18株分离株对链霉素耐药率为72.22%,对四环素耐药率为72.22%,其他药物耐药率普遍高于22.2%,且多重耐药严重。此外,共检测10种毒力基因,其中sseC、spvA、spvR三种基因检出率分别为72.2%、72.2%、83.3%。小鼠致病性试验中,有11株分离株对小鼠具有较强的致病性(61.1%)。表明分离沙门菌存在多重耐药现象,且致病力的增强可能与毒力岛和毒力质粒的存在有关。     

牛源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测

本研究旨在了解甘肃地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的耐药性和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的感染情况,为奶牛乳房炎的防制提供理论依据。采用KB纸片扩散法,检测17株金黄色葡萄球菌对8种不同抗菌药物的敏感性;再用琼脂稀释法检测了苯唑西林、万古霉素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MICs);头孢西丁纸片扩散法和PCR扩增特异性mecA耐药基因对所有受试菌株进行全面的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测。结果表明,菌株对青霉素、磺胺异恶唑具有较强抗性,而对环丙沙星、头孢唑啉、万古霉素和苯唑西林全敏感;头孢西丁纸片扩散法未能检测出表型为MRSA的阳性菌株,而PCR方法却检测出8株mecA基因阳性菌株,且这些菌株的苯唑西林MIC均小于2 μg/mL。菌株的耐药情况较严重,对甲氧西林敏感而携带mecA基因的菌株高频存在于被调查地区的奶牛场中。