牦牛隐性乳房炎主要病原菌及耐药和毒力基因分布情况

为探明牦牛隐性乳房炎(SCM)主要病原菌及其耐药和毒力基因的分布情况,本研究自甘肃省甘南州夏季牧场收集无乳房炎临床症状牦牛乳样,通过兰州乳房炎试验(LMT)筛选SCM乳样,从中分离病原菌并纯化培养,利用16S rDNA鉴定主要病原菌,通过纸片扩散法判定其药物敏感性,并采用PCR方法对相关耐药及毒力基因进行检测。结果显示,共筛选出牦牛SCM乳样324份,检出率14.43%;主要病原菌为葡萄球菌属、埃希氏菌属和肠球菌属,其中葡萄球菌分离株对青霉素和四环素耐药率最高,分别为59.57%和47.52%;大肠埃希氏菌分离株对四环素和氨苄西林耐药率最高,分别为43.40%和20.75%;粪肠球菌分离株对四环素和红霉素耐药率最高,分别为25.00%和16.67%;59株耐青霉素金黄色葡萄球菌中共检出MRSA 12株,其中7株携带mecA基因,5株含mecC基因;四环素外排泵基因tetK、tetA携带率最高(85.45%、56.36%),核糖体保护基因tetM携带率最低(34.55%);毒力基因中,clfA、clfB、fib、coa基因检出率较高(87.64%、84.27%、83.15%、82.02%)。研究表明,牦牛SCM的主要病原菌为金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌,均对青霉素类和四环素类抗生素耐药性较高,其中金黄色葡萄球菌的主要毒力因子为黏附因子和凝固酶。     

甘南藏区牦牛隐性乳房炎病原菌分离及鉴定

为调查甘肃省甘南州玛曲县、夏河县牦牛隐性乳房炎流行情况,探明引起牦牛隐性乳房炎的主要病原菌,利用兰州乳房炎诊断试剂(LMT)筛选牦牛隐性乳房炎,检出率10.25%;采集非阴性乳样,对其中的病原菌分离纯化,提取细菌DNA并测序后,通过NCBI中BLAST比对,共鉴定出236株细菌,其中包含102株金黄色葡萄球菌(43.22%)、18株艾格尼丝葡萄球菌(7.6%)、13株沃氏葡萄球菌(5.50%)和29株大肠埃希氏菌(12.29%);艾格尼丝葡萄球菌为国内首次自牦牛乳中分离得到。结果表明,葡萄球菌属和埃希氏菌属可能是引起甘南藏区牦牛隐性乳房炎的主要病原菌。     

拉萨市林周县牦牛乳样理化指标及乳房炎病原菌的分离鉴定

为研究西藏拉萨市林周县牦牛乳理化指标和乳房炎主要病原菌,采集牦牛乳样品100份,开展乳理化指标和主要病原菌检测。采用CMT法筛选隐性乳房炎病例,针对筛选出隐性乳房炎阳性乳样20份进行病原菌分离鉴定,共分离出11种52株细菌,通过鉴定,其中包含4株凝固酶阴性葡萄球菌,10株金黄色葡萄球菌,2株停乳链球菌,2株乳房链球菌,1株粪链球菌,8株无乳链球菌,6株大肠埃希菌,4株真菌。乳房炎63.5%的病例是由链球菌、葡萄球菌和大肠埃希菌引起,结果证实,链球菌、葡萄球菌和大肠埃希菌是导致林周县牦牛乳房炎的主要病原菌。     

畜禽粪污中金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌的LAMP检测及其耐药性分析

为深入了解畜禽粪污中金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌的流行及耐药状况,采用建立的畜禽粪便中金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌的环介导等温扩增技术（LAMP）检测方法对山东省内牛粪污、猪粪、鸡粪、鸭粪中的金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌进行检测,进而对检测阳性样品进行分离,并对药敏试验中多重耐药性菌株进行耐药基因预测。结果表明,LAMP方法检测畜禽粪污中金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌与国家标准方法检测结果符合率为100%,重复性好,特异性高。从80份畜禽粪污样品中分离到的3株金黄色葡萄球菌均对青霉素耐药;34株大肠埃希氏菌对氟苯尼考、利福平的耐药比例高于50%,高于25%以上的还有氨苄西林、四环素、多西环素、磺胺异噁唑、头孢噻吩和头孢噻呋;耐药基因预测结果显示,鸡粪、鸭粪、牛粪和猪粪中的4株大肠埃希氏菌分别携带10、8、20和15种耐药基因;鸡粪中的1株金黄色葡萄球菌携带11种耐药基因。说明山东地区畜禽粪污中金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌耐药状况严峻,菌株普遍多重耐药,且携带多种耐药基因。     

肉牛溶血性大肠埃希菌分离鉴定和毒力与耐药基因检测及药敏试验

为了解肉牛溶血性大肠埃希菌毒力基因和耐药基因分布情况及药物敏感性,从河北省围场县采集的健康肉牛鼻腔棉拭子中分离鉴定溶血性大肠埃希菌,采用PCR检测大肠埃希菌的4个毒力基因和12个耐药基因,并采用K-B法进行药敏试验。结果表明,从116份健康的肉牛鼻腔中分离鉴定出23株溶血性大肠埃希菌,分离率为19.8%;毒力基因检测结果显示,6株菌同时携带LEE(Ler、eaeA)毒力基因,携带率26.1%,18株同时携带高致病性毒力基因HPIirp2、fyuA,携带率78.3%,6株同时携带LEE和HPI毒力基因,携带率为26.1%;耐药基因检测结果显示,blaTEM、aadA1耐药基因的携带率最高,为100%;药敏试验结果显示,23株溶血性大肠埃希菌对头孢氨苄、复方新诺明、磺胺间甲氧嘧啶耐药。结果表明,溶血性大肠埃希菌普遍存在于健康肉牛鼻腔中,HPI毒力基因和β-内酰胺类和耐链霉素类耐药基因携带率高。对河北省围场县肉牛溶血性大肠埃希菌毒力基因和耐药基因进行了研究,并进行药物敏感性分析,结果提示溶血性大肠埃希菌对肉牛养殖存在潜在威胁。     

奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定、血清型及耐药性研究

为调查北京、河南、天津及广西等地区奶牛乳房炎病原菌的种类和乳房炎的流行情况,在这些地区采集了临床型乳房炎奶牛新鲜奶样82份,分离到13种110株细菌,其中大肠埃希菌23株,金黄色葡萄球菌16株,链球菌38株。血清型研究表明,大肠埃希菌以O13、O17和O91为优势血清型,金黄色葡萄球菌凝固酶血清型主要集中于Ⅵ型及复合型。耐药性检测结果显示,大肠埃希菌对利福平耐药严重,对其他15种测试药耐药率低;金黄色葡萄球菌对青霉素和氨苄西林的耐药率高达81.25%以上,对其他14种测试药耐药率均低于31.30%;链球菌较上述2种细菌耐药性强,对链霉素等5种药物耐药率均高于52.60%,除万古霉素外,对其他10种药物呈不同程度耐药。3种细菌对氧氟沙星、恩诺沙星、复方新诺明和甲氧苄啶较敏感,这4种药可作为这些地区治疗奶牛乳房炎的首选药物。     

内蒙古地区奶牛乳房炎链球菌毒力基因检测及耐药性研究

为了解内蒙古地区奶牛乳房炎链球菌毒力基因的分布情况及其耐药现状,通过该地区360份乳房炎奶样链球菌的分离鉴定,利用微量肉汤稀释法测定了81株链球菌对15种药物的MIC,采用PCR法检测耐药基因及毒力基因的携带情况。结果显示,分离到的81株链球菌对β-内酰胺类的耐药率最高;对红霉素和四环素的耐药率在40%~85%;对氟喹诺酮类的耐药率相对较低。多重耐药菌株达88.9%(n=72)。耐药基因pbp2b的检出率为86.4%,tetL和tetM的检出率在75%以上,红霉素耐药表型主要由ermB介导。分离菌株毒力基因中cfb的检出率最高(50.6%),其次为cyl和hylB。内蒙古地区奶牛乳房炎链球菌对β-内酰胺类、大环内酯类和四环素耐药情况严重,且发现多重耐药菌株的流行;链球菌中尤以无乳链球菌的毒力基因携带率较高。     

树鼩源大肠埃希氏菌耐药性分析与毒力因子鉴定

为了解树鼩源大肠埃希氏菌遗传进化同源性、对药物的敏感性以及所携带的毒力因子种类等,对广西南宁某大学人工驯化养殖的10只树鼩肠道内容物进行大肠埃希氏菌的分离纯化、生化分析及药敏试验等,并应用PCR技术对菌株进行16S rRNA同源性分析、毒力基因及耐药基因的检测。10份树鼩肠道内容物经分离纯化共分离出9株大肠埃希氏菌。同源性分析表明分离株与鸡源、猪源、人源大肠埃希氏菌之间的亲缘性较近,存在跨种间传播风险。药敏试验表明,分离株对苯唑西林耐药率为88.8%,对氨苄西林耐药率77.8%,对四环素、多西环素耐药率均为44.4%,对头孢哌酮、头孢他啶、卡那霉素、庆大霉素等表现为高度或中度敏感。共扩增出4种耐药基因,分别为四环素类耐药基因tetA、tetB,检出率均为100%,β-内酰胺类耐药基因TEM检出率为100%,CTX-M检出率为44.4%。毒力因子仅检测出eaeA基因,检出率为100%。表明分离株与其他动物源性大肠埃希氏菌亲缘性较近,具有一定耐药性,并携带毒力基因,存在一定的致病风险。     

盐源县养鸭场主要病原菌分离鉴定及其耐药性分析

为掌握养鸭场病原菌种类及其耐药情况,本实验采用传统细菌学方法进行病原菌分离鉴定和药敏试验,并采用PCR方法进行耐药基因检测,结果显示：养鸭场病原菌主要是大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌和鸭里默氏杆菌;主要病原菌对20种抗生素呈现多重耐药现象,在大肠埃希氏菌分离株中检出TEM和CTX-M耐药基因,在金黄色葡萄球菌分离株中检出mecA和blaZ耐药基因。这些结果为盐源县养鸭场细菌性疾病的预防与控制提供了科学依据。     

某奶牛场乳房炎病原菌的分离鉴定及耐药性分析

为监测甘肃临洮某奶牛场奶牛乳房炎主要致病菌对临床常用治疗药物的耐药情况,指导临床合理用药。从奶牛场采集了45份临床型奶牛乳房炎病样,进行培养分离,并采用16SrDNA对分离纯化的细菌进行鉴定;对主要病原菌,采用牛津杯法测定其对乳房炎常用治疗药物的耐药情况。结果表明,从45份乳房炎奶样中,共分离出以大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌为主的7种乳房炎致病菌。耐药性试验表明,金黄色葡萄球菌对无抗头孢、头孢力定、青霉素G钾、强力乳净、乳痈治、乳痈快克、炎乳康、乳肿康和硫酸庆大极其敏感;大肠埃希菌对头孢力定、青霉素G钾、强力乳净、乳痈快克、炎乳康、乳肿康和硫酸庆大极其敏感。金黄色葡萄球菌对强力乳康、无抗乳炎康、乳炎康、十味乳炎清、无抗乳肿消、获特键和强力宫康Ⅱ号耐药作用较强。大肠埃希菌对强力乳康、无抗乳肿消、乳房肿炎立消、获特键和强力宫康Ⅱ号耐药作用较强。研究结果为该奶牛场乳房炎的防治提供了参考。     

陕西地区羊源致病性大肠杆菌耐药性分析与毒力基因检测

旨在了解陕西省部分地区腹泻羊源致病性大肠杆菌(E. coli)耐药性及毒力基因携带情况,本研究从10个养殖场采集54份腹泻羊拭子样品,经分离纯化、生化鉴定及16S rRNA基因序列分析,共分离得到50株E. coli,对分离菌进行药敏试验、耐药基因及毒力基因检测。结果显示,分离菌对氨苄西林、氟苯尼考和磺胺异噁唑耐药率达90%以上,且98%(49/50)为多重耐药菌,对8~11种抗生素耐药的菌株占68%(34/50),仅对美罗培南敏感。所有菌株均携带1~6种不同的耐药基因,其中,Sul1(64%)、TetA(34%)、bla_CTX-M(32%)携带率较高,未检测到bla_SHV。有5株产ESBLs的E. coli携带mcr-1耐药基因。毒力基因检测结果显示,98%(49/50)的菌株携带毒力基因,其中,etrA检出率最高,为80%(40/50)。综上表明,陕西省羊源E. coli多重耐药情况严峻,β-内酰胺类耐药基因与耐药表型不符,提示可能存在其他耐药机制,同时,分离菌具有复杂的毒力谱。本研究为陕西省羊源致病性E. coli感染的防控提供科学依据。     

土鸡屠宰过程中大肠杆菌毒力基因检测及耐药性分析

为了解土鸡屠宰过程中大肠杆菌污染、毒力基因携带及耐药情况，2018年9月-2019年1月在重庆万州、开州、巫溪、奉节4个区县的12个土鸡屠宰地点采集了319份样品，通过菌落形态及显微镜观察、生化鉴定、PCR、药敏试验等方法鉴定分离的大肠杆菌，检测其毒力基因携带和耐药性情况。结果表明：大肠杆菌分离率为22.57%（72/319），其中餐馆、活禽宰杀铺和定点屠宰点分离率依次为29.73%（22/74）、25.00%（24/96）和17.45%（26/149），污水、地面、羽毛、用具和胴体分离率依次为75.00%（18/24）、21.62%（8/37）、20.54%（23/112）、17.65%（6/34）和15.18%（17/112）；11种毒力基因中除estA、estB、elt外均被检出，检出率为58.33%（42/72），共检出14种组合型，有4株分离株4种毒力基因同时存在；分离株对阿米卡星、头孢噻肟最敏感，多重耐药比为90.28%（65/72），以7~10重耐药居多。土鸡屠宰过程中致病性大肠杆菌污染风险高，多重耐药现象严重，应重视养殖合理用药及屠宰卫生环境。     

鸭致病性大肠杆菌分离鉴定及其相关致病性分析

为研究鸭大肠杆菌的致病性及相关生物特性,本试验从西昌市某规模化鸭场采集病料,通过传统分离培养及理化性质鉴定,分离得到27株鸭致病性大肠杆菌。对27株鸭致病性大肠杆菌进行血清型鉴定、药敏试验、相关毒力基因检测。血清型鉴定结果显示,优势血清型为O119、O86、O126、O142和O44,占分离株55.56%。血清型O119占27株鸭致病性大肠杆菌的40.74%,为该鸭场流行的致病血清型。对20种兽医临床常用药物的药敏试验结果显示,27株鸭致病性大肠杆菌均对阿米卡星、庆大霉素和多黏菌素B敏感,对头孢曲松等10种药物较敏感,对利福平等5种药物耐受。大肠杆菌相关毒力基因检测结果显示, iutA、hlyF、Iss、IroN、ompT、fyuA、irp 2、Tsh及papA基因携带率均为100.00%, fimC基因携带率59.26%, K 99基因携带率7.40%。各项研究结果为有效防控鸭大肠杆菌病提供了重要科学依据,并为大肠杆菌深入研究奠定了基础。     

Isolation,Identification and Related Pathogenicity Analysis of Duck Pathogenic E.coli

To analyze the pathogenicity and biological characteristics of duck E.coli, 27 strains of duck pathogenic E.coli were isolated from dead ducks with the typical characterize of colibacillosis by isolation and culture, physical and chemical properties identification in Xichang city.O serotype identification, drug sensitivity test and virulence associated genes were detected in 27 strains of duck pathogenic E.coli.The result showed that the predominant serotypes were O119, O86, O126, O142 and O44, which accounted for 55.56%.O119 was the epidemic and pathogenic serotype in this farm, which accounted for 40.74% in 27 strains of duck pathogenic E.coli.Through the drug sensitivity test of 20 kinds of clinical commonly used drugs, we found that all strains were sensitive to amikacin, gentamicin and polymyxin B.Besides, 10 drugs(ceftriaxone, etc) were lightly sensitive.However, these strains were resistant to 5 kinds of drugs(rifampicin, etc).The detection result of PCR about virulence associated genes indicated that the positive of iutA, hlyF, Iss, IroN, ompT, fyuA, irp 2, Tsh and papA genes were 100.00%, fimC and K 99 genes were 59.26% and 7.40%, respectively.The results provided an important reference for effective prevention and control of duck colibacillosis, and laid the foundation for further study of E.coli.     

京津冀部分地区致犊牛腹泻大肠杆菌毒力基因、耐药基因检测及药物敏感性分析

【目的】探明京津冀地区犊牛腹泻大肠杆菌毒力基因与耐药基因流行情况,筛选敏感药物。【方法】于2020年12月至2021年7月从京津冀地区部分牛场采集146份犊牛腹泻样本,通过细菌分离纯化、革兰氏染色镜检及16S rRNA测序进行大肠杆菌分离鉴定;采用PCR方法对分离菌进行毒力基因（F17、K99、F41、STa、stx1、irp2和fyuA基因）和耐药基因（aac（6'）-Ⅰb、bla_CTX-M、bla_TEM、OqxB、tetA和sul1基因）检测;采用K-B纸片法进行药物敏感性试验。【结果】分离菌在鉴别培养基上的生长形态及革兰氏染色镜检结果均符合大肠杆菌生理生化特性,分离菌16S rRNA测序结果呈单一峰值,对拼接序列在NCBI中进行BLAST比对后发现,与大肠杆菌相似性均>96%,确定分离菌为大肠杆菌。试验共分离鉴定大肠杆菌142株,其中有88株携带毒力基因,占61.97%（88/142）,毒力基因F17、K99、F41、STa、stx1、irp2、fyuA阳性率分别为24.65%、0.70%、0、2.11%、1.41%、45.07%和21.83%,其中F17、irp2、fyuA为优势毒力因子,同时携带多重毒力因子的大肠杆菌检出率较低。aac（6'）-Ⅰb、bla_CTX-M、bla_TEM、OqxB、tetA和sul1 6种耐药基因皆被检出,bla_TEM基因检出率最高,为45.77%,aac（6'）-Ⅰb和OqxB基因检出率最低,均为9.15%,分离菌株主要携带1~3种耐药基因。药物敏感性试验结果显示,142株分离菌对诺氟沙星敏感率最高,其次为环丙沙星,对青霉素敏感率为0,耐药现象严重,耐2种以上抗菌药物的菌株达86.62%。【结论】京津冀地区犊牛腹泻大肠杆菌毒力基因与耐药基因流行广泛,耐药普遍,多重耐药现象严重。本研究可为京津冀地区犊牛腹泻的防治提供理论依据。     

致病性大肠杆菌携带原噬菌体的预测及耐药性与毒力研究

【目的】 研究致病性大肠杆菌携带原噬菌体的比例、原噬菌体携带毒力基因及耐药基因的情况,了解致病性大肠杆菌中原噬菌体对菌株的耐药性与毒力的影响,保证噬菌体生产菌的生物安全性,为大肠杆菌噬菌体的基础研究与应用提供借鉴。【方法】 从NCBI中下载大肠杆菌全基因组信息,通过在线网站预测大肠杆菌中携带的原噬菌体数目,并分析原噬菌体的GC含量、基因组大小、占细菌基因组比例等基因组特征及完整型原噬菌体的类型,对原噬菌体做初步分类,统计分析完整型原噬菌体中携带耐药基因数目、耐药表型、耐药机制与毒力基因数目、毒力基因家族分布等。【结果】 112株大肠杆菌携带完整型原噬菌体1 024个,疑似型原噬菌体287个,缺陷型原噬菌体505个。1 024个完整型原噬菌体中,多数与长尾噬菌体相似,占70.21%（719/1 024）;共有63种噬菌体类型,其中BP4795（登录号：NC_004813.1）类型的占比最高,达到19.24%（197/1 024）,其次是DE3（登录号：NC_042057.1）,占比11.72%（120/1 024）。大肠杆菌携带原噬菌体的GC含量在38%~57%之间,基因组大小为3.1~152.6 kb,其中80 kb以内的原噬菌体占97.03%（1 762/1 816）。1 024个完整型原噬菌体中携带耐药基因占比为6.35%（65/1 024）,共携带耐药基因253个,分别来自11个抗生素耐药基因家族;携带一个或多个毒力基因的完整性原噬菌体占42.78%（438/1 024）,共携带毒力基因1 274个,分别来自9个不同毒力因子家族,平均每个完整型原噬菌体携带毒力基因2.9个。【结论】 大肠杆菌普遍携带原噬菌体,原噬菌体中部分携带耐药基因与毒力基因,在实际应用中应充分评估其风险,防止原噬菌体造成的耐药基因与毒力基因在菌株之间的转移。     

山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

试验旨在了解山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的污染状况及耐药情况。选择山东省3个地区的规模化奶牛场共采集227份牛奶样品，采用细菌学方法对大肠杆菌进行分离鉴定，用微量肉汤稀释法检测分离菌对11种常规抗菌药物的敏感性，采用PCR方法对常见的13种耐药基因、8种毒力基因和Ⅰ类整合子基因盒结构进行分析。结果显示，从227份牛奶样品中共分离出71株大肠杆菌；大肠杆菌对1种及1种以上抗菌药耐药的菌株达到77.5%，多重耐药率为15.5%，其中对多黏菌素耐药率为52.2%，对阿莫西林-克拉维酸耐药率为39.4%，而所有菌株均对新霉素表现为敏感。PCR检测耐药基因、毒力基因和Ⅰ类整合子结果显示，β-内酰胺类耐药基因中bla_TEM基因携带率为100%，其中全部为bla_TEM-1基因，bla_CTX-M基因携带率为32.4%，其中主要为bla_CTX-M-15基因，没有检测到bla_SHV、bla_OXA基因；多黏菌素的耐药基因mcr-1携带率为29.6%；喹诺酮类耐药基因中aac（6'）-Ⅰb-cr基因携带率为29.6%，qnrB基因携带率为20.8%，没有检测到qnrA和qnrC耐药基因；对8种毒力基因检测分析结果显示，仅Hly毒力基因没有被检出，Ecs3703、Irp2基因的检出率较高，分别为90.1%和63.4%，71株大肠杆菌中共有11株携带Ⅰ类整合子，检出率为15.5%，11株大肠杆菌携带6种耐药基因盒结构，最主要的耐药基因盒排列为dfr17-aadA5。本研究结果表明，山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的耐药现象严重，携带毒力基因Ecs3703、Irp2的大肠杆菌可能是引起奶牛乳房炎的致病菌，Ⅰ类整合子的检测在细菌耐药性与基因携带率方面发挥着关键作用，可为临床预防和治疗奶牛乳房炎大肠杆菌病提供理论依据。     

Investigation of Biofilm Formation,Virulence Genes and agr Typing of Staphylococcus aureus from Bovine Mastitis Cases

The objective of the present study was to investigate the biofilm formation, antimicrobial resistance, virulence genes, and agr genotypes of Staphylococcus aureus (S. aureus) isolated from bovine mastitis cases, and to analyze the correlations between agr genotypes and virulence genes. Biofilm formation, antimicrobial resistance, and virulence genes for 336 strains of S. aureus were detected by microtiter plate method, disk diffusion method, and PCR respectively, and the agr typing of tested strains was determined by multiplex PCR. The results showed that all 336 strains of S. aureus from bovine mastitis were biofilm producers, among which 52.1% and 47.9% of isolates tested were moderate (++) and strong (+++) biofilm producers, respectively. Antimicrobial susceptibility testing demonstrated that S. aureus strains were highly resistant to penicillin, with a resistance rate of 91.7%, followed by erythromycin (89.6%), kanamycin (72.9%), clindamycin (66.7%) and gentamicin (60.4%). However, all isolates were sensitive to nitrofurantoin and linezolid. PCR results showed that the prevalence of fnbA gene was the highest (99.7%), followed by icaD (98.2%), icaA (89.6%), clfA (86.0%), cna (56.0%), and bap (14.6%) genes. Moreover, the sea, seb, sec and tst genes were found in 26.5%, 8.3%, 6.8% and 8.3% of the isolates, respectively. The agr typing results showed that S. aureus strains belonging to agr Ⅰ was predominant in our study, accounting for 77.1% of the isolates, and the frequencies of agr Ⅱ, agr Ⅲ and agr Ⅳ genotypes were 14.0%, 4.8% and 2.1%, respectively. Statistical analysis indicated that the strains of S. aureus belonging to agr Ⅰ genotype have the potential to carry more virulence genes, while no toxin genes could be found in any of the strains belonging to agr Ⅳ. The results revealed high antimicrobial resistance to common antimicrobial agents in S. aureus isolated from bovine mastitis milk samples. Moreover, agr Ⅰ was the predominant genotype with diverse toxin genes in S. aureus from bovine mastitis, and the potential hazard should be of concern.     

牛源金黄色葡萄球菌生物被膜与毒素基因检测及agr分型

旨在对牛源金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，S.aureus）的生物被膜、耐药性、毒素基因和agr基因型进行研究，并分析agr基因型与毒素基因之间的相关性。分别用微量滴定板法、药敏纸片法和PCR对S.aureus的生物被膜、耐药性和毒素基因进行检测，用多重PCR对S.aureus进行agr分型。结果表明，336株牛源S.aureus均能形成生物被膜，其中，形成中等（++）和强（+++）生物被膜的S.aureus分别占52.1%和47.9%。药敏试验结果显示，S.aureus对青霉素耐药最为严重，耐药率达91.7%，其次是红霉素、卡那霉素、克林霉素和庆大霉素，耐药率分别为89.6%、72.9%、66.7%和60.4%，而所有S.aureus对呋喃妥因和利奈唑胺均表现为敏感。PCR检测结果显示，黏附素基因fnbA检出率最高，达99.7%，其次是icaD、icaA、clfA和cna，检出率分别为98.2%、89.6%、86.0%和56.0%，bap基因检出率最低，为14.6%。肠毒素基因sea的检出率为26.5%，其次是seb（8.3%）和sec（6.8%），毒素基因tst的检出率占8.3%。分型结果显示，agr Ⅰ型S.aureus是主要的流行菌株，占77.1%，agr Ⅱ、agr Ⅲ和agr Ⅳ型S.aureus流行率分别为14.0%、4.8%和2.1%。统计分析结果表明，agr Ⅰ型S.aureus更具有携带多种毒素基因的潜力，而agr Ⅳ型S.aureus无毒素基因携带潜力。综上表明，牛乳腺炎性S.aureus对常见的抗菌药物耐药严重，毒素基因分布多样，agr Ⅰ型是奶牛乳腺炎性S.aureus主要的基因型，且具有携带多种毒素基因的能力，其潜在威胁应引起重视。