7种鸭源细菌的分离与16S rDNA测序鉴定

从病死鸭的脏器中无菌分离细菌.根据培养特性、菌落形态、革兰染色和生化特性,鉴定出7种细菌分离株.以分离株的基因组DNA为模板,用16S rDNA试剂盒扩增其DNA片段,测序后NCBI网站进行BLAST搜索比对,鉴定出细菌种类,分别为鼠伤寒沙门菌、大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、铜绿假单胞杆菌、施氏假单胞菌、浅绿气球菌和麦氏棒杆菌.前3种为鸭的常见分离菌,其余的较为少见.因此在鸭病控制过程中应注意可能存在一些不常见细菌的混合感染.     

噬菌体在动物细菌病防治中的应用研究进展

综述了毒性噬菌体在防治大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、弯曲杆菌所致畜禽或实验动物传染病及副溶血弧菌、鳗弧菌、铜绿假单胞菌等所致水产动物传染病中的应用进展,以期为相关领域研究提供参考。     

益生菌枯草芽孢杆菌PB6菌株对动物肠道病原菌的抑菌谱研究

试验为验证益生菌枯草芽孢杆菌PB6菌株的抑菌谱,采用管碟法将PB6对产气荚膜梭菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌等9种病原菌的抑菌作用进行研究。结果表明,PB6菌株的培养液具有较广的抑菌谱,对同为革兰阳性菌的产气荚膜梭菌抑菌效果尤为明显,对大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌等常见肠道致病菌亦有不同程度的抑菌作用。另外,PB6菌株对引起鸭传染性浆膜炎的鸭疫里氏杆菌和引起海洋水产动物疾病的弧菌也表现出明显的抑菌性能。     

水环境中噬菌蛭弧菌的分离鉴定

噬菌蛭弧菌为一类杆形、弧形或螺旋形的革兰阴性菌,可以寄生并裂解其他细菌。本试验以禽源大肠杆菌、沙门菌以及环境水体中分离的1株大肠杆菌为宿主菌,采用双层琼脂培养法成功地从环境水体中分离到3株噬菌蛭弧菌,分别命名为BDD、BDE、BDH。电镜观察证明菌体大小约0.33μm×0.78μm,单个弧形,一端有一根长鞭毛。基因序列分析表明,分离株与已发表的噬菌蛭弧菌属其他菌株16S rRNA基因序列的同源范围分别为96.0%~99.9%。通过对不同细菌的裂解试验证明,3个分离株对大肠杆菌、沙门菌、摩根摩根氏菌、变形杆菌和阴沟肠杆菌等均具有裂解作用,但对铜绿假单胞菌、鸭疫里默氏菌和金黄色葡萄球菌不敏感。     

甘草内生真菌分离及其抑菌活性初探

为了解药用植物甘草(Glycyrrhiza uralensis)内生真菌资源多样性及其抑菌活性特征,通过组织块法对内生真菌进行分离,并选择小麦全蚀病菌（Gaeumannomyces graminis var.tritici）、枸杞黑果病菌（Colletotrichum gloeosporioides）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporium f.sp.cucumeris）、黄瓜立枯病菌（Rhizoctonia solani）5种植物病原真菌和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）4种细菌作为供试指示菌,采用对峙法和改进的菌块法测定抑菌活性。试验结果显示,从甘草根、茎、叶中分离出20株内生真菌,其中根部最多,占分离菌株总数的65.0%,其次为茎部,叶部最少;经形态学初步分类鉴定归于2目2科5属,梭孢霉属为优势菌属,占分离菌株总数的70.0%;在分离的内生真菌中有15株菌对1种或1种以上供试植物病原真菌有不同程度的抑制作用,为分离内生真菌总数的75.0%,19株菌对1种或1种以上供试细菌有不同程度的抑制作用,为分离内生真菌总数的95.0%;有7株内生真菌对枯草芽孢杆菌拮抗活性差异显著（P＜0.05）,有 8株内生真菌对金黄色葡萄球菌拮抗活性差异显著,有3株内生真菌对大肠杆菌拮抗活性差异显著,有1株内生真菌对革兰氏阴性铜绿假单胞菌拮抗活性差异显著,其中菌株RLEFR015对番茄灰霉病菌、金黄色葡萄球菌拮抗活性差异显著,菌株RLEFR010对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌拮抗活性差异显著,菌株RLEFR002对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌供试细菌拮抗活性差异显著;菌株RLEFR015、RLEFR002、RLEFR010均为梭孢霉属,为高活性菌株。甘草内生真菌具有多样性和抑菌活性,多数菌株对供试病原真菌和病原细菌具有拮抗活性,对革兰氏阳性金黄色葡萄球菌和革兰氏阳性枯草芽孢杆菌拮抗活性较强,预示着甘草内生真菌具有重要的资源价值。     

自然发酵酸菜汁中乳酸菌的分离鉴定及抑菌活性的分析

为了检测乳酸菌的抑菌活性,试验从自然发酵酸菜汁中分离、纯化出10株乳酸菌,通过体外试验筛选出4株产酸力较强的乳酸菌,经生理和生化鉴定分别为植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌和短乳杆菌。牛津杯抑菌试验结果表明:4株乳酸菌对大肠杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌均有明显的抑菌作用,而对肺炎克雷伯菌和白色念珠菌无效;产酸量大的菌株抑菌作用也强,推测其抑菌作用与低酸环境有关。说明研究和开发乳酸菌抑菌产品具有广阔前景。     

藏鸡源产酶芽胞杆菌的分离、鉴定与筛选

为筛选具有潜在开发价值的畜禽饲料添加剂益生菌,采用传统方法从藏鸡消化道分离芽胞杆菌并对其进行初步鉴定;检测分离菌株的产纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和植酸酶活性,测定分离菌株对常见致病菌的抑菌性能;对筛选到的具有优良胞外酶分泌活性和抑菌活性的菌株进行分子生物学鉴定。结果表明,从藏鸡消化道中共分离到72株芽胞杆菌;不同菌株的产酶活性差异较大,部分菌株都具有产纤维素酶、蛋白酶和淀粉酶活性,有8株菌能够同时产生5种胞外酶;菌株CB-11不仅具有较强的产酶活性,而且可以同时抑制大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌,抑菌谱较广;结合表型特征和16S r DNA序列分析结果,将CB-11确定为枯草芽胞杆菌。研究结果为天然益生菌资源的发掘利用及畜禽微生态饲料添加剂的开发应用提供了参考。     

来源于马奶酒中一株乳酸菌的抑菌特性研究

从牧民自制马奶酒中分离得到一株能产生抑菌物质的乳酸菌菌株。依据形态学判断、生理生化、糖发酵试验和16S r DNA序列分析,结果表明该菌为一株植物乳杆菌。抑菌试验结果表明该菌株的培养液可抑制藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门菌等致病菌,具有较广的抑菌谱。该乳酸菌分泌的抑菌物质经不同高温处理后仍有85%抑菌活性,经蛋白酶处理后抑菌活性依然存在,说明该菌株产生的抑菌物质具有良好的热稳定性和抗蛋白酶活性,这些特性也为其作为益生素在食品和饲料行业中应用奠定基础。     

枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌对鲫鱼免疫机能的影响及其代谢产物的抑菌活性研究

为了检测枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌对鲫鱼免疫机能的影响及其代谢产物对小肠耶尔森氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性,试验将鲫鱼分成3组,分别为沼泽红假单胞菌组、等比例沼泽红假单胞菌和枯草芽孢杆菌的复合菌组和未加菌处理的对照组,在养殖水体中分别加入不同的微生物,在第30天静脉采血,测定血浆中碱性磷酸酶(ALP)、总超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LZM)的活性以及丙二醛(MDA)的浓度;利用超声波破碎细胞,旋蒸浓缩得到枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌胞内外代谢产物,采用牛津杯法以小肠耶尔森氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为指示菌株,测定代谢产物的抑菌圈直径。结果表明:沼泽红假单胞菌组与复合菌组的鲫鱼血浆中ALP的活性显著高于对照组(P0.05),LZM活性高于对照组,MDA的浓度低于对照组,SOD的活性与对照组的差异不显著(P0.05);两种菌的胞外代谢产物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性较强,沼泽红假单胞菌胞内代谢产物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性较强,枯草芽孢杆菌胞内代谢产物对小肠耶尔森氏菌抑菌活性较强。说明沼泽红假单胞菌和复合菌对鲫鱼的免疫机能有一定的增强作用,两种益生菌胞内外代谢产物对小肠耶尔森氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有抑制作用。     

眼镜蛇腐皮病病原菌分离鉴定与药敏试验

为了研究眼镜蛇腐皮病的致病菌,试验采用细菌分离培养的方法,在无菌条件下,从患腐皮病眼镜蛇皮肤溃烂处挑取少许内容物划线接种于普通琼脂平板、兔血平板、SS琼脂平板及真菌培养基上,继而选取优势菌落进行分离、纯培养。结果表明:得到9种细菌,没有发现真菌。根据细菌形态、菌落生长特征和生化特性得出,这9种细菌分别为:黏质沙雷菌1株、奇异变形杆菌3株、铜绿假单胞菌3株、克氏耶尔森菌1株、肺炎克雷伯菌1株、雷极普鲁威登斯菌1株、嗜麦芽假单胞菌1株、金黄色葡萄球菌1株和腐生葡萄球菌3株。经致病性试验证实,奇异变形杆菌、铜绿假单胞菌、克氏耶尔森菌、雷极普鲁威登斯菌、嗜麦芽假单胞菌和金黄色葡萄球菌具有致病性,黏质沙雷菌、肺炎克雷伯菌和腐生葡萄球菌无致病性。药物敏感性试验证实:在15株致病菌中,除克氏耶尔森菌外,均对妥布霉素和庆大霉素高度敏感;嗜麦芽假单胞菌对妥布霉素不敏感,对庆大霉素高度敏感;除金黄色葡萄球菌外,均对阿米卡星高度敏感;15株致病菌均对头孢类抗生素不同程度敏感;哌拉西林、氨曲南和卡那霉素对大部分菌有抑制作用。说明眼镜蛇腐皮病主要由致病性细菌引起,敏感药物治疗后有良好效果。     

番鸭肠道乳酸菌的分离鉴定及抑菌性能

通过革兰染色、菌落形态观察、生化分析鉴定、牛津杯抑菌试验、Caco-2细胞黏附试验对分离到的6株乳酸产生菌进行研究。结果显示:经16SrDNA序列测定,比对分析6株乳酸产生菌与鼠李糖乳杆菌、乳酸乳球菌乳亚种、唾液乳杆菌、乳链球菌、哥伦比亚肠球菌和鼠乳杆菌高度同源。6株乳酸菌抑菌试验检测显示:对大肠杆菌、沙门菌、蜡样芽胞杆菌和金黄色葡萄球菌具有很强的抑菌效应,以CM3菌株的抑菌效果最强。同时,这6株乳酸菌对Caco-2细胞均有一定的黏附能力。结果表明:6株番鸭肠道乳酸产生菌能够黏附于肠道模型Caco-2细胞上并具有较强的抑菌活性,但其黏附性能及保护机制还有待进一步研究。     

沙枣水提物体外抗菌作用研究

目的:探讨新疆沙枣水提取物在体外抗菌作用。方法:采用纸片琼脂扩散法(KB法)和试管连续(对倍)稀释法对新疆沙枣水提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌、铜绿假单胞菌等菌株的抑菌圈直径,抗菌活性,最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC)进行实验研究。结果:新疆沙枣水提取物在体外对对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌、铜绿假单胞菌等其他菌种都没有抑菌效果,只对褔氏痢疾杆菌有轻微的抑菌作用。结论:新疆沙枣水提取物对褔氏痢疾杆菌有一定的抑制作用。     

药用植物柽柳内生真菌分离及其抑菌活性初步研究

为探明药用植物柽柳内生真菌资源的多样性及其抑菌活性特征,通过组织块法对内生真菌进行了分离,并选择小麦全蚀病菌、枸杞黑果病菌、番茄灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌、黄瓜立枯病菌5种植物病原真菌和枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌4种细菌作为指示菌,采用对峙法和改进的菌块法测定其抑菌活性。结果显示,从柽柳不同组织器官中分离出18株内生真菌,茎部最多,根部次之,叶部最少;经形态学初步分类鉴定归于2个目,3个科,7个属;有11株菌对2种或多种植物病原真菌有不同程度的抑制作用,占菌株总数的61.1%,有8株内生真菌只对金黄色葡萄球菌具有明显抑制作用,占分离菌株总数的44.4%;活性内生真菌菌株TCEFL001分别对枸杞黑果病菌、小麦全蚀病菌以及金黄色葡萄球菌具有明显抑制作用,属于组丝核菌属。药用植物柽柳具有较为丰富的内生真菌资源,其开发和利用值得进一步探究。     

1株产细菌素粪肠球菌的分离鉴定

为丰富益生菌剂的菌种来源,研究从鸡盲肠中分离获得7株疑似乳酸菌,并对其分别编号。通过对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门菌的抑菌试验获得1株抑菌活性最高的菌株HEW-A131,通过传统方法和16S rDNA分子鉴定,确定HEW-A131为粪肠球菌。     

高山芽胞杆菌B901分离鉴定及安全性研究

在细菌分离鉴定的研究过程中,发现了 1株具有抑菌活性的芽胞杆菌,命名为B901.经16SrRNA测序以及同源性比较,鉴定其为高山芽胞杆菌(Bacillus altitudinis).对该菌进行生物学特性分析、抑菌试验和安全性试验.结果表明:B901菌株对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抑菌活性,B901抑菌产物产生较快,培...     

金银花提取物对常见致病菌的体内外抑菌活性测定

为了观察金银花提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门杆菌等致病菌的抑菌活性,试验采用试管二倍稀释法测定金银花提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门杆菌的体外抑菌活性;采用相同浓度致病菌灌注小鼠,然后再用金银花提取物灌注治疗,测定小鼠十二指肠、空肠、回肠和盲肠中肠道菌群数量。结果表明:无论是体外还是体内,金银花提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门杆菌均具有抑制作用,且对金黄色葡萄球菌和沙门杆菌的抑制作用最强,对大肠杆菌的抑制作用最弱;灌注金银花提取物后,可显著降低各致病菌致病后小鼠的死亡率。说明金银花提取物对常见的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门杆菌等致病菌具有较明显的体内外抑菌作用。     

复合溶菌酶制剂对奶牛乳房炎病原菌的抑菌试验

从有不同程度乳房炎临床症状的8头奶牛中采集奶样12个,经病原菌分离共分离出7个菌株.对其进行菌落形态观察、培养特性、生化特性等认定葡萄球菌5株（其中金黄色葡萄球菌4株,表皮葡萄球菌1株）,大肠杆菌2株.本试验的致病菌为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌.用复合溶菌酶制剂和抗生素对病原菌进行抑菌试验.结果表明,复合溶菌酶制剂与抗生素比较表现出理想的抑菌效果.     

北京鸭关节炎病例的细菌分离与鉴定

从表现为关节炎症状的北京鸭体内分离到23株细菌,通过16S rDNA测序鉴定,确定分离株分别属于葡萄球菌、棒状杆菌和大肠杆菌,另有一株球菌尚不明分类地位。药物敏感试验结果显示,阿莫西林、阿米卡星等对分离菌具有较好的抑菌作用,而氟苯尼考、阿奇霉素等抑菌效果较差。选取12个代表菌株进行动物试验,结果表明分离菌单独对肉鸭没有明显致病作用,说明这些细菌可能仅作为条件性致病菌存在于鸭场环境中。     

即墨区鸡源大肠杆菌及沙门氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为了了解青岛市即墨区某鸡场送检的14日龄病雏鸡的病原感染情况及分离病原菌的耐药性情况,试验采用革兰氏染色、16S rDNA测序及同源性分析、动物回归试验的方法进行鉴定,并对分离菌进行药敏试验。结果表明:共分离到两株病原菌,均为革兰氏阴性杆菌;经16S rDNA测序及同源性分析,确定两株分离菌分别为沙门氏杆菌和大肠杆菌。两株分离菌均能引起小鼠死亡,具有较强的致病力,接种沙门氏杆菌的小鼠出现肝脏和肺脏不同程度的出血、充血症状;接种大肠杆菌小鼠的肺脏和脾脏有不同程度的出血、充血症状。沙门氏杆菌分离株对链霉素、亚胺培南、氧氟沙星等8种药物敏感,对氨曲南表现中介,对氨苄西林、恩诺沙星、环丙沙星和复方新诺明耐药;大肠杆菌分离株仅对亚胺培南敏感,对其他药物均存在严重的耐药情况。说明本试验分离到的沙门氏杆菌和大肠杆菌均有较强的致病力,且大肠杆菌分离株存在严重的耐药情况,应引起重视。     

健康奶牛阴道乳酸菌的分离与鉴定

采集10份健康奶牛阴道临床样品,利用MRS琼脂培养基进行细菌分离培养与纯化,通过形态特征观察、生化试验、16S r RNA基因序列对分离菌株进行鉴定,并通过抑菌试验检测分离菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌等致病菌的抑菌能力。结果显示,分离筛选到3株乳酸菌,其菌落特征、形态特征、生化特性均符合乳酸杆菌的特性,均具有较好的生长性能和较强的产酸能力,与Gen Bank中乳酸杆菌的同源性均在99%以上,对病原菌的抑菌环直径均在11.41 mm以上。研究表明分离鉴定的3株乳酸杆菌是有潜质的有益菌株,可作为奶牛子宫内膜炎防治的候选益生菌。