猪精子体外获能的研究概况

精子获能现象的发现大大促进了体外受精技术的发展。近年来，在精子体外获能的研究过程中不断加深了人们对精子获能机理的认识，同时也不断提高了精子体外获能的效果．进一步推动了体外受精技术的发展。就当前猪精子体外获能研究概况进行综述，希望能对进一步深入研究有所启示。     

波尔山羊精子体外获能及穿卵效果的研究

通过不同培养液对精子获能效果、获能后穿卵效果的比较,确定培养液的适宜配方及获能液中肝素的适宜添加浓度。精子用含有肝素的3种培养液进行获能处理,每个处理4个重复。试验设计了5个不同的肝素水平,即0、5、10、15、20μg/mL。于获能处理后4 h检查精子的顶体反应率、活力和活精子率。结果表明,添加15μg/mL和20μg/mL肝素能促进精子的获能效果和获能精子的穿卵效果。     

哺乳动物精子获能信号通路及检测方法研究进展

哺乳动物精子与卵细胞结合完成受精前,获能是关键环节之一。精子获能伴随着许多生理生化过程的改变,包括离子含量的改变、质膜重组、胆固醇外排和蛋白质的酪氨酸磷酸化等,此外,去能因子能使精子顺利完成受精。通过这些变化可以检测精子的获能状态,常用的检测方法主要有s ACcAMP-PKA通路检测、质膜流动性变化检测、胆固醇再次分布检测、酪氨酸磷酸化检测和顶体反应检测等。对哺乳动物精子获能过程中涉及的信号通路、信号分子、调节因子、离子通道以及精子获能检测方法的研究进展进行综述,并对未来主要研究方向进行展望,以期为精子体外培养及辅助生殖技术的应用等提供参考。     

酪氨酸磷酸化蛋白在体外获能猪精子上的分布

为研究猪精子获能过程中蛋白酪氨酸磷酸化的变化规律,将猪精子悬浮于改良的Tris缓冲液(mTBM)获能培养基中,在5%CO2孵箱37℃培养,以考马斯亮蓝染液染色为指标评价精子获能状态,用免疫荧光技术检测酪氨酸磷酸化的蛋白在精子上的分布。结果显示,随着获能的进行,发生蛋白酪氨酸磷酸化的精子占总精子的百分比增加,由未获能前35%增至获能1.5 h时的88%,酪氨酸磷酸化的蛋白分布变广,由精子头部扩增至精子头部、鞭毛主段和中段。     

17℃保存对猪精子亚组分蛋白酪氨酸磷酸化的影响及中药保护作用

实验旨在分析17℃保存对获能精子蛋白酪氨酸磷酸化的影响,通过精子蛋白亚组分分离及酪氨酸磷酸化鉴定,研究精浆以及中药水提液对保存精子获能相关蛋白酪氨酸磷酸化的影响。选择获能指标-酪氨酸磷酸化分析新鲜猪精子和17℃保存猪精子,提取精子全蛋白、膜蛋白、核蛋白以及骨架蛋白,利用WB分离及鉴定酪氨酸磷酸化差异。结果显示:17℃保存条件下,获能精子在40～45、46～50 ku分子量膜蛋白酪氨酸磷酸化程度减弱;未获能精子在30～35 ku分子量胞浆蛋白磷酸化程度增强,出现似"获能"现象;精浆在保存中起到提供营养的作用但易导致细菌滋生;中药水提液对精子保存过程中的保护效果体现在精子获能培养后,鞭毛中段、主段酪氨酸磷酸化和新鲜精子无明显差异。     

动物繁殖生物技术中体外受精的操作及其影响因素

20世纪60年代初，人们以家兔、小鼠等为实验材料，进行大量基础研究，在精子由最初在同种或异种雌性生殖道孵育获能，发展到用溶液、卵泡液，子宫内膜提取液或血清在体外培育获能，最后用化学成分明确的溶液培养获能。同时通过射出精子和附睾精获能效果的比较研究，人们发现射出精液中含获能因子，并认识到获能的实质是去除精子表面的去能因子。这些理论和方法上的成功推动了体外受精技术发展。     

精子获能过程中蛋白酪氨酸磷酸化的研究进展

精子获能是精子发生顶体反应以及精卵结合受精前重要的生理过程,许多因素参与调节精子获能,其中精子蛋白酪氨酸磷酸化是精子运动力、精子超激活运动、精子获能等多种生理生化过程的重要调控因素。本文就目前有关精子蛋白酪氨酸磷酸化与精子获能之间的研究进展进行综述。     

精子成熟和体外受精

无论在体内或体外,精子和卵子的成熟对于受精的成功都是必需的。精子的成熟不仅包括在雄性动物体内所发生的过程,亦包括在雌性动物所发生的获能过程。牛精子是在输卵管中获能。在体内,获能活性存在于发情时的输卵管液中,而不存在于黄化输卵管液中。实验证明,发情输卵管液的获能活性是因其中含有氨基多糖(Glycosaminoglycan):肝素或硫酸肝素。在体外,肝素可使牛精子获能,使鲜精或冻精的受精率超过70％。用肝素获能的精子作体外受精,已能使胚胎发育,并已出生犊牛。肝素使精子获能的机理尚不清楚。肝素可     

哺乳动物精子获能的分子机制

精子获能是精子能够与卵母细胞发生顶体反应和受精的一个重要生理前提。精子获能的分子机制相当复杂,许多报道表明精子获能受到多种细胞信号途径的调控。尽管目前尚未完全明确,但是许多研究表明获能精子发生许多结构和生化变化,包括蛋白酪氨酸磷酸化、精子膜胆固醇外流、活性氧的产生及精子膜超极化,这些变化都有助于精子获能的发生。Ca2 和HCO3-通过对cAMP的调控有助于获能完成,葡萄糖、孕酮和肝素作为获能液的重要添加物,通过不同途径促发精子获能。文章从这些方面对获能做一综述,在此基础上提出以后的研究方向。     

获能液及精子密度对牛性控精子体外受精成功率的影响

本实验探讨了不同的精子获能添加物、精子密度、精子获能液对牛性别分离精子体外受精（IVF）的影响。结果表明：受精液中同时添加10μg/mL的肝素与5mmol／L的咖啡因,能促进牛性控精子体外获能与受精。精子密度在1．0×10^6个/mL时其囊胚发育率最高。用BO液和mTyrode’s液对牛性控精子进行获能和受精处理．其受精效果差异不显著（P〉0．05）,但BO液作用时间短对早期胚胎的发育影响较小,比较适合牛性控精子IVF。     

使用荧光染色和流式细胞术检测山羊精子

分别使用PI(碘化丙碇),FITC-PSA(异硫氰酸荧光素络合豌豆凝集素)和RH123(罗丹明)对山羊冷冻精子进行染色,再使用流式细胞仪进行检测、分析。试验发现,对于山羊的冷冻精子,PI染色阴性的为质膜完整的精子;FITC-PSA染色阴性的可能为顶体完整的精子,染色FITC-PSA+和FITC-PSA++,可能分别为顶体反应中的精子和顶体破损精子;RH123+应为线粒体无活性精子,有绿色荧光可能是因为染料残留在细胞膜上导致,而RH123++可能应为线粒体有活性的活精子。不同个体羊的精子对于低温敏感度不一样。不同个体羊之间的冻精顶体完整率、质膜完整率、线粒体有活性的精子比率之间差异显著,据此应选择合适的山羊个体进行精液冷冻。     

对牦牛和普通牛种间杂种公牛精子生成水平的研究

本文对牦牛和普通牛种间杂种公牛睾丸组织及电刺激所采精液进行了观测。结果表明,种间杂种公牛随代数增加,睾丸逐渐恢复产生精子的机能。种间杂种3代公牛有的可产生形态正常的精子。种间杂种3代是可育或不育(不能产生精子)的临界代。     

Course of spermiogenesis in the ram]

Reference is made to transformation of spermatids into sperms. The various phases in the development of ram sperm and transformation of spermatids into sperms are demonstrated by microphotographs. Reference is also made to abnormal forms and types of sperms due to defective development.     

不同稀释液对公猪精液常温保存效果的研究

 为提高猪精液的保存效果,设计了3种常温保存稀释液配方,并对保存后的精子进行了顶体染色,为猪精液常温保存技术及稀释液配方的研究提供参考依据。结果表明：当精子活率为50％与30％时,配方Ⅱ的精子保存时间均显著高于（P<0.05）配方Ⅰ与配方Ⅲ,且配方Ⅱ所保存精子的总存活时间也显著高于（P<0.05）配方Ⅰ与配方Ⅲ;在精液保存24h后,3种配方保存的精子顶体完整率均在95％以上,且差异不显著（P>0.05）,配方Ⅱ对精子的常温保存效果要优于配方Ⅰ与配方Ⅲ。     

Relationship between the number of sperms and the rate of implantation in bitches inseminated into unilateral uterine horn

Studies were made on the number of sperms required for fertilization of ova ovulated from the bilateral ovaries in bitches. The experiment was carried out with 44 female beagles, which were divided into four groups of seven to eleven bitches each. The four groups were inseminated with 40 X 10(6) sperms/0.2 ml, 20 X 10(6) sperms/0.1 ml, 10 X 10(6) sperms/0.1 ml, and 3-5 X 10(6) sperms/0.1 ml, respectively. All the bitches were laparotomized at an optimum time for mating and inseminated at the tip of the horn of an unilateral uterus. In the four groups conception took place at a rate of 7/7, 8/8, 10/11, and 2/7, respectively. The number of puppies exceeded the number of ova ovulated on the inseminated side at a rate of 5/7, 6/8, 0/10, and 0/2 in the four groups, respectively. Therefore, it was clarified that when more than 20 X 10(6) sperms/0.1 ml were inseminated in the ipsilateral uterine horn, ova ovulated on the contralateral side were fertilized also. Then a unilateral ovary was ovariectomized in 11 bitches, which were inseminated with 10 X 10(6) sperms/0.1 ml in the ipsilateral uterine horn. As a result, only one bitch became conceptive and gave birth to only one puppy. From these results, it was considered that 10 X 10(6) sperms/0.1 ml may be most adequate for the ova on the side of insemination alone to be fertilized.     

Comparing accuracy of fish sperm motility measurements obtained from two computational extremes in tracking approaches: Nearest neighbor and multiple hypothesis tracking

We conducted a study to assess the accuracy of nearest neighbour (NN) and multiple hypothesis tracking (MHT) methods—which are opposite extremes in computational complexity—in determining the percentage of motile sperms and the number of sperms tracked in simulated data of fish sperm movements, and to evaluate the resulting number of tracking errors and analysis duration. Sperm tracking and swimming path assembly were assessed in 36 video clips (1 s length at 100 fps) of emulated Rhamdia quelen sperm kinetics at different densities (50, 100, 200 or 300 spermatozoa in the field of view) and motility rates (30, 60 or 90%). The MHT method accurately estimated the percentage of motile sperms, whereas NN underestimated it by up to 6.59%. Increase in sperm density reduced the number of sperms tracked from both trackers. With more than 50 sperms in the field of view, NN and MHT tracked 73% and 92% of the ground-truth sperm count, respectively. Both trackers showed a quadratic increase in tracking errors with increasing sperm density. The maximum percentage of errors at 90% motility was 12% for NN and 4.7% for MHT. The MHT tracker required up to 150 s to track 300 sperms, whereas NN completed the tracking procedure in less than 0.5 s. On maintaining a density of up to 100 sperms in the field of view, it was possible to obtain high accuracy, low number of tracking errors and an acceptable analysis duration with both tracking methods.     

精浆对猪精子冷冻效果影响的研究

为优化猪精子冷冻技术,提高解冻后精子的活力和受精能力,本试验分别以含精浆浓度为10%、20%和30%的冷冻保护剂处理精子,以冷冻前、解冻后精子活力和质膜完整性,解冻后精子进行体外受精(IVF)的卵裂率和囊胚率等作为检测指标,同时以含有卵黄的Tris-柠檬酸－葡萄糖(Tris-citric acid-glucose,TCG)冷冻基础液作为对照研究精浆对猪冷冻精子的保护作用。结果显示,在含有10%精浆浓度的稀释液中,冷冻前质膜完整性,解冻后精子活率、质膜完整性、IVF囊胚率相对于对照组均显著提高(P<0.05);当含有10%精浆的冷冻精液解冻后用于人工授精时,与配母猪妊娠率、窝产仔数、窝产活仔数等仍显著低于鲜精授精组(P<0.05)。上述结果表明,含10%精浆的冷冻保护剂能提高精子的冷冻后活力和IVF胚胎发育率,但用于人工授精配种与鲜精相比还有一定差距。     

电穿孔导入法在家兔精子基因转移中的应用

用假阴道法采集青紫蓝家兔精液,经电击缓冲液清洗、适当稀释后,加入质粒ＤＮＡ,利用ＢＡＥＲＯＮ６０００型基因转移仪,选择９组不同的电击条件对其进行电击处理,电击后的精子经ＤＮＡ Ｉ酶消化后作地高辛标记探针的原位杂交检测。结果显示：（１）电穿孔导入法确实能使精子细胞携带上外源基因;（２）最佳的电击条件为,脉冲时间５００ｍｓ,电压６ｋＶ。     

不同药物配方对公猪精液常温保存效果研究

为提高猪精液的保存效果,为猪精液常温保存技术及稀释液配方的研究提供参考依据,设计了3种常温保存希释液配方,并对保存后的精子进行了顶体染色。结果表明：当精子活率为50%与30%时,配方Ⅱ的精子保存时间均显著高于配方Ⅰ与配方Ⅲ（P〈0.05）,且配方Ⅱ所保存精子的总存活时间也显著高于配方Ⅰ与配方Ⅲ（P〈0.05）。上述结果表明,配方Ⅱ对猪精液的常温保存效果要优于配方Ⅰ与配方Ⅲ。