盾叶薯蓣组织培养及四倍体诱导技术的初步研究

以盾叶薯蓣的茎段、叶柄、叶作为外植体进行离体组织培养,其效果以茎段和叶柄最好。诱导愈伤组织的培养基以MS+2,4-D 2.0mg/L+BA 0.5mg/L为佳;在培养过程中,可用MS+BA 3.0mg/L+NAA 0.2mg/L作为分化培养基,后逐步转为MS+BA 1.Omg/L+NAA 0.2mg/L作为继代培养基;生根培养可使用MS+NAA 1.0mg/L的培养基。在组织培养条件下,对盾叶薯蓣进行了多倍体诱导的研究。结果表明,用0.15%的秋水仙素处理24小时后,诱导率可达50%,效果较好。经秋水仙素诱导的变异株,与正常的二倍体植株相比,植株粗壮,叶片变大变厚,叶色浓绿,部分还出现畸形叶。叶片表皮气孔检测发现,多倍体植株叶片表皮气孔变大,且单位面积下的气孔数目减少;进行细胞学研究发现,正常植株的染色体的数目为2n=2x=20,变异植株染色体数目为,变异植株染色体数目为2n=4x=40,为四倍体。     

盾叶薯蓣良种离体快繁关键技术研究

以盾叶薯蓣的单节茎段为外植体,培养基 MS 2.0mg/L BA 0.6mg/L NAA对腋芽诱导效果最好,诱导率达 77.4%; MS 0.5mg/L BA 0.5～ 1.0mg/L 2,4- D为诱导愈伤组织的培养基;在 MS 1.0mg/L BA 0.2mg/L NAA或 MS 2.0mg/L BA 0.5mg/L IBA培养基上能有效地诱导多芽; BA与 NAA的组合较 BA与 IBA组合更有利于多芽的诱导; MS 2.5mg/L BA 0.5mg/L NAA可作为愈伤组织及多芽组织的继代培养.     

鸡冠花离体快繁及多倍体诱导

以鸡冠花顶芽为外植体,研究其离体快繁程序并在无菌体繁殖条件下探索了秋水仙素溶液不同浓度和时间处理对鸡冠花的诱变效应.快繁研究结果显示:最适初代培养基为MS 6-BA 1.0 mg/L NAA 0.2 mg/L;以芽和茎段为培养对象诱导产生不定芽的最适培养基分别是MS 6-BA 1.0 mg/L NAA 0.1 mg/L,MS 6-BA1.0 mg/L NAA 0.02 mg/L,最佳生根培养基是1/2 MS IBA 0.4 mg/L.采用浸泡法将鸡冠花营养芽在0.05%、0.1%、0.15%和0.2%不同秋水仙溶液浓度下分别处理12 h、24 h、36 h和48 h,并对诱导处理后获得的再生植株进行鉴定,得出以0.15%秋水仙素溶液浸泡36 h为诱导多倍体的最佳处理组合,诱导率达23.3%.     

山新杨组织培养快繁技术研究

山新杨冬季枝条经FC处理,选择萌发新枝的茎段和叶片为接种外植体;诱导茎段产生腋芽的培养基为1/2MS 6-BA0.2~0.5mg/L NAA0~0.5mg/L,诱导叶片产生不定芽的培养基为1/2MS或MS 6-BA0.5mg/L NAA0.5mg/L;丛生芽快繁培养基MS 6-BA0.3mg/L NAA0.3mg/L,每20天继代一次,繁殖倍数20左右;生根培养基为1/2MS或MS,附加0.1~0.5mg/L的多效唑,对生根有促进作用。     

山新杨组织培养快繁技术研究

山新杨冬季枝条经FC处理,选择萌发新枝的茎段和叶片为接种外植体;诱导茎段产生腋芽的培养基为1/2MS+6-BA0.2~0.5mg/L+NAA0~0.5mg/L,诱导叶片产生不定芽的培养基为1/2MS或MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L;丛生芽快繁培养基MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.3mg/L,每20天继代一次,繁殖倍数20左右;生根培养基为1/2MS或MS,附加0.1~0.5mg/L的多效唑,对生根有促进作用。     

涪陵胭脂萝卜多倍体诱导研究

以不同浓度秋水仙素溶液处理胭脂萝卜幼苗茎尖生长点,通过苗期和成株期对诱变植株和正常二倍体植株进行形态学和细胞学鉴定,探讨四倍体胭脂萝卜的诱导方法与途径.结果表明,5种浓度秋水仙素都能诱变出四倍体胭脂萝卜,其中2 g/L秋水仙素诱变率最大,为33.3％.四倍体胭脂萝卜平均叶片厚度、叶长、株高、叶宽和开展度较二倍体分别增加32.4％、39.6％、39.8％、24％和31.7％,四倍体胭脂萝卜叶片单位视野内的气孔数目少于二倍体72.2％,但气孔的横径和纵径分别较二倍体大40.8％和30.7％.说明叶片厚度、叶长、株高、叶宽、开展度、气孔数目、气孔的横径和纵径等性状可以作为四倍体鉴定的重要特征,特别是气孔数目、气孔的横径和纵径可以作为快速鉴定四倍体与二倍体胭脂萝卜的重要指标.利用秋水仙素诱导是获得四倍体胭脂萝卜的有效途径之一.     

红凉伞愈伤组织诱导及快繁技术体系建立

为解决药用观赏植物红凉伞野生资源匮乏、自然繁殖率低等问题，以红凉伞种子为材料，探讨取材时间、培养基、外植体类型、植物生长调节剂等因素对无菌苗萌发、愈伤组织诱导、丛生芽诱导增殖和生根培养的影响，建立红凉伞快繁技术体系。结果表明，取材时间是红凉伞种子无菌培养的重要影响因素，3月取材的种子培养效果最佳，启动时间7 d,萌发率达93.68%;愈伤组织诱导的最佳外植体是茎段，显著高于根和叶，最适培养基为MS+2,4-D 0.2 mg/L+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.2 mg/L,诱导率为93.33%。愈伤组织呈颗粒状、冰沙状、致密状3种形态；丛生芽诱导的最佳培养基是MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,诱导率为91.11%,增殖系数3.47,芽苗生长健壮；最佳生根培养基为1/2 MS+IBA 0.5 mg/L,生根率为90.74%,平均根数4.6条，移栽成活率为75.4%。     

胡杨离体快繁技术研究

研究了影响胡杨离体快繁若干因素。选出最适合胡杨离体快繁的外植体为春季解除休眠的冬芽；启动培养基为MS 6-BA0.1mg/L NAA0.05mg/L，萌动率达75.4%；继代增殖培养基为MS 6-BA0.1mg/L KT0.5mg/L NAA0.5mg/L，此配比浓度产生胡杨有效苗最多；而以1/2MS为基本培养基，添加1.5-2.0mg/LIBA有利于胡杨组培苗生根。     

东方百合Siberia多倍体诱导及其细胞学鉴定

本文以东方百合Siberia的试管苗为试验材料,研究了预培养时间、秋水仙素处理方法及浓度等因素对诱导试管苗多倍体的影响.研究结果表明:秋水仙素溶液直接浸泡较共培养法好,且以0.05%的浓度和浸泡48 h为最佳组合,最终获得了18株四倍体试管苗.通过根尖染色体计数确定其为稳定的同源四倍体.显微观测气孔特征后发现:二倍体与四倍体植株的叶下表皮气孔密度及气孔保卫细胞长、宽差异均达到了极显著水平.     

黄精多倍体诱导初报

通过人工诱变,使多花黄精染色体加倍,提高生物产量与品质,为大面积人工种植提供优良品种.种子经过人工打破休眠后,在MS+6-BA 1.0mg/L+2,4-D 0.5mg/L离体培养形成愈伤组织,再转入MS+TDZ 1.5mg/L+2,4-D1.0mg/L培养15～20d,用脱脂棉球浸泡于添加2%二甲基亚砜的0.05%～0.15%秋水仙素溶液中,在无菌条件下覆盖在愈伤组织上,进行染色体加倍诱导处理,再转移到MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 2.0mg/L的分化培养基上,将分化出叶片的小苗转移到1/2MS+NAA1.0mg/L生根培养基上.结果表明:0.05%质量浓度的秋水仙素处理48h变异株诱导率最高达18.7%.0.1%和0.15%浓度处理24h的诱导率次之,为16.7%,0.1%浓度处理48h变异率虽然只有16.2%,但其变异株倍性稳定性较好,整倍率较高.     

务川几种野生百合的组织培养

采用正交试验的方法,在MS固体培养基上研究不同浓度蔗糖、6-BA及NAA对淡黄花百合、文山百合及野百合等3种务川野生百合芽增殖的影响,结果表明:淡黄花百合芽增殖的最佳培养基应为:MS +0.5 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA+4％蔗糖,文山百合的最佳培养基应为:MS +0.5～1.0 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA +3％蔗糖;野百合芽增殖的最佳培养基应为:MS+ 0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+(2％ ～3％)蔗糖.     

金线莲外植体的筛选及不定芽诱导的研究

以金线莲(Anoectochilus roxburghii)试管苗的叶、茎段和茎片(厚约2mm)为外植体,对金线莲组织培养快繁技术进行研究.结果表明,茎片是其快繁的最佳外植体,诱导其产生愈伤组织的适宜培养基是:MS(大量元素减半,微量元素加倍)+6-BA4.0mg/L+ZT0.2mg/L+NAA0.5mg/L+0.7%琼脂+3%蔗糖;适合不定芽分化的培养基是:MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.3 mg/L+0.7%Agar+3%蔗糖.     

腊花组培快繁体系研究

为探讨最适初代诱导、增殖继代生根的培养基配方,建立腊花的组织培养技术体系,以腊花嫩茎尖为实验材料,采用MS培养基,向培养基中添加不同配比组合的KT和NAA,对腊花进行初代诱导培养;设置6-BA和NAA不同激素浓度组合进行增殖培养;选用1/2MS培养基为腊花生根培养的基础培养基,添加IBA不同浓度配比培养实验。最佳初代诱芽培养基为MS+ KT 3.0 mg/L+ NAA 0.2 mg/L+琼脂6.2 g/L+蔗糖30 g/L,pH 5.8,诱导率达88.8%。最佳增殖培养基为MS+ 6-BA 1.0 mg/L+ NAA 0.1 mg/L+ 琼脂6.2 g/L+蔗糖30 g/L,pH 5.8,增殖系数为3.6。最佳生根培养基为1/2MS+ IBA 0.6 mg/L+琼脂6.2 g/L+蔗糖30 g/L+0.1 g/L活性炭,pH 5.8,生根率100%。     

观赏羽衣甘蓝的离体繁殖

以花蕾为外植体，离体繁殖羽衣甘蓝８个杂各一代材料。培养基为（ｍｇ／Ｌ）：ＭＳ＋ＢＡ１－２＋ＮＡＡ０．１－０．２＋ＩＡＡ０．５＋（或不加）ＧＡ３０．３＋３％蔗糖。平均１８％－６７％的接咎花蕾产生不定芽；药有３０％的不定芽发育成完整植物。培养物的严重褐化和再生植物的普遍玻璃质化是影响植株成活的主要因素。培养基中加入活性炭和青霉素，并给以强光照射，可提高植株成活率。     

4个新品种玉簪愈伤组织的诱导及组培扩繁研究

为建立4个玉簪新品种的组培再生体系,以MS为基本培养基,添加不同质量浓度6-BA和2,4-D,研究其外植体组培苗的愈伤组织诱导以及继代扩繁的最适生长培养基。愈伤组织的诱导中,高浓度的6-BA(≥3.0mg/L)与低浓度的2,4-D(≤0.1mg/L)配比有利于愈伤组织的生成。MS+1.0mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+35g/L蔗糖+12g/L琼脂的培养基可以使HostaBigDaddy（编号H1）和‘金鹰’（编号H2）的增殖倍数分别达2.54和2.78,而MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+11g/L琼脂可以使‘小黄金叶’（编号H6）的增殖倍数达3.01,而最适宜H15增殖的培养基则是MS+3.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+30g/L蔗糖+12g/L琼脂。研究结果为4个新品种玉簪愈伤组织的诱导及组培扩繁研究提供了有利数据依据,在此方法下愈伤组织诱导率最大,并且扩繁增殖倍数最大。     

高羊茅高效组织培养再生体系的建立

植物分子育种与基因功能鉴定是建立在高效的组织培养再生体系基础上的。本研究以高羊茅(Festuca arundinacea Schreb)为材料,探讨了不同外植体状态、基本培养基类型、外源激素组合与固化剂种类与浓度对愈伤组织诱导的影响,并进行了愈伤组织分化长芽与生根研究。结果表明:愈伤组织诱导过程中,离体成熟胚比完整种子作外植体愈伤组织出现早、质量优、诱导率高;基本培养基的选择上以N6诱导率最高,MS最低;激素组合研究中高羊茅三个品种(SAFari, FirewarⅡ, Barleduc)在无6-BA培养基中,生长激素选择上都是2,4-D优于IAA,2~2.5 mg/L 2,4-D在三个品种中诱导率都在50%以上,而在添加0.5 mg/L 6-BA时诱导率都偏低;固化剂选择上则以Phytagel与Agarose二都最优,Phytagel固化剂最佳诱导浓度为2~4 g/L。分化长芽最佳培养基为MS+0.1 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+20 mg/L AgNO3+2%蔗糖+0.6%琼脂,生根壮苗最佳培养基为1/2MS+0.5 mg/L NAA+3%蔗糖+0.3%Phytagel。本研究为高羊茅的高效转基因体系建立与CRISPR基因功能研究提供准备。     

荚用菜豆松散型胚性愈伤组织保持体系的诱导方法

本研究旨在为诱导再生成苗提供基础材料,为进一步开展荚用菜豆育种相关研究奠定基础。以荚用菜豆无性细胞（茎、叶、子叶等器官）为试验材料,通过筛选植物激素及其最佳组合,获得了以细胞质浓密的圆球形细胞为主体的松散型愈伤组织细胞团。最终筛选出诱导无性细胞产生普通愈伤组织的“诱导培养基Ⅰ号”：MS +2,4-D 1 mg/L+蔗糖30 g/L。进一步研究获得了“诱导培养基Ⅱ号”：MS + 6-BA 0.25 mg/L + 2,4-D 0.5 mg/L+ AgNO₃ 10 mg/L。此培养基可以诱导和保持松散型胚性愈伤组织。本研究筛选出可以将无性细胞诱导为松散型胚性细胞团,并且维持胚性细胞继续增殖的系列培养基,解决了诱导过程中愈伤组织褐化问题,创建了一套诱导荚用菜豆松散型胚性愈伤组织的新方法。     

中国柽柳组培快繁技术研究

为更好地对中国柽柳种质进行保存,以中国柽柳茎段为外植体进行组培快繁研究。结果表明：采取75%酒精浸泡30 s、2%次氯酸钠浸泡3~5 min和升汞浸泡5 min为最适宜的灭菌方案。MS+蔗糖20 g/L+琼脂6.5 g/L为中国柽柳最适初代培养基,MS+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L为其最适增殖培养基,1/2MS培养基为最适生根培养基。     

中国水仙花药培养及植株再生体系建立

本研究以中国水仙花药为外植体,通过器官发生途径建立其植株再生体系,并通过染色体计数鉴定筛选变异个体。结果显示:在4℃下预处理3d有利于花药愈伤组织的形成;愈伤组织诱导培养基最适配比为:MS+2,4-D1.0mg/L+BA0.5mg/L+CH500mg/L+AC500mg/L;愈伤组织分化小鳞茎的最适培养基为:MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+CH500mg/L+AC1000mg/L。通过染色体计数对38个再生植株进行倍性鉴定,结果显示其中30个为三倍体(2n=30),8个为非整倍体(2n=10,11,12,14,17,26)。以这些再生苗为外植体,经器官发生途径,建立了不同倍性的再生体系。     

东方百合试管鳞茎形成条件优化

试管鳞茎培养是百合种球培育的关键技术环节。为探讨不同种类植物生长调节剂和不同浓度蔗糖对东方百合试管鳞茎形成的影响,试验采用正交设计,筛选出最优诱导培养基为MS+0.2 mg/L KT+1 mg/L NAA+40 g/L蔗糖;最优膨大培养基为1/2 MS+0.2 mg/L KT+1 mg/L NAA+15 mg/L PP333,此条件下膨大率可达到80%以上;最优生根培养基为1/2 MS+0.05 mg/L NAA。