应用反向间接血凝法(IHA)检测冻兔肉产品中兔出血症病毒的研究

兔出血症病毒的常规检测方法是血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验,此法所用新鲜人红细胞均需用前洗涤,较为不便,为此,我们选用双醛化绵羊红细胞做成抗体致敏红细胞以代替新鲜的人红细胞,以利测毒技术的推广应用。一、材料和方法(一)材料1.兔的肌肉及骨髓检测材料由邳县肉联厂提供。2.双醛化绵羊红细胞由南京农业大学兽医微生物教研组或江苏省农科院兽医所提     

兔出血症的免疫诊断及防治

兔病毒性出血症又称兔瘟。自1984年在我国江苏南部地区首次暴发后,短期内迅速蔓延至全国20几个省(市),严重地威胁着养兔生产。为了有效地控制此病,不少院所进行研究并取得了较好效果。本文就我国对此病免疫诊断及防治方面的研究概况综述如下:兔出血症的免疫诊断一、血凝(HA)及血凝抑制(HI)试验HA 和 HI 是目前诊断兔出血症最基本方法。刘胜江等(1984)使用高速离心的病兔肝悬液为待检物,以1%人○型红血球在96孔 U 型微量反应板上进行了 HA 和 HI 试验,对江苏南部地区暴发的病兔进行检测,证实本病在我国首次流行。张再清等(1989)用戍二醛处理人红细胞代替新鲜人红细胞     

醛化人“O”型红细胞的制备及其在兔出血症HA／HI试验中的应用

在兔出血症的检测和免疫监测中,血凝／血凝抑制试验（HA／HI）是常规有效的检测方法。针对人“O”型新鲜红细胞存在质脆易碎、保存期短的缺点,从醛化人的“O”型红细胞制备方法的优化、工作浓度、保存时间三个方面进行研究,并用于兔出血症的HA／HI试验,同时以新鲜的人“O”型红细胞作为对照。结果表明：经戊二醛-甲醛二次醛化的红细胞的醛化效果与只用戊二醛醛化的红细胞效果差异不显著,均优于甲醛醛化效果,且经戊二醛-甲醛二次醛化或戊二醛醛化后的红细胞不溶血,性质不变,易保存;在兔出血症HA/HI试验中,经戊二醛醛化人“O”型红细胞的试验效果与新鲜红细胞差异不大,结果稳定性好。     

用于“兔瘟”HA试验的冻干醛化红细胞的研制

冻干醛化红细胞与新鲜人O型红细胞对“兔瘟”的诊断效果一致,两者呈显著正相关(r=0.9506)。冻干醛化红细胞4℃保存10个月,比在相同条件下保存的醛化红细胞悬液的HA效价高3个滴度。     

不同醛化方法制备的鸡红细胞对新城疫病毒的血凝对比试验

在血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验中,由于新鲜红细胞容易破碎,保存时间短,每次试验需临时准备,使用很不方便。本文采用醛化红细胞进行新城疫的HA试验,并与新鲜红细胞进行对照。结果表明两种红细胞在新城疫的HA试验中的结果基本一致,效果良好。     

兔出血症病毒对人类红细胞的血凝谱研究

应用兔出血症病毒标准毒株与人类各型红细胞进行血球凝集反应(HA)。结果表明,兔出血症病毒能凝集人类各型红细胞,且对“O”型、“B”型和“AB”型红细胞的凝集反应快而强烈,HA效价很高(5×213 ～5×215);而对“A”型红细胞的凝集反应慢而弱,HA效价很低(5×21)。据此认为,除“A”型红细胞外,其它3 种血型的红细胞均可用于兔出血症的实验室诊断。     

醛化红细胞在“兔瘟”快速诊断中的应用

使用醛化人 O 型红细胞与新鲜人 O 型红细胞进行“兔瘟”瓷板 HA 和 HI 定性试验证明,两者检测效果基本相同。为了使试验更快速和方便,在该试验中可以使用醛化红细胞。在用“快速二次醛化法”和改良 Csimas 法醛化的红细胞比较结果表明,前者优于后者,方法简易,醛化时间缩短近20倍。笔者推荐使用“快速二次醛化法”醛化的人 O 型红细胞。     

4株猪流行性腹泻病毒的HA和HI试验

为观察猪流行性腹泻病毒(PDEV)的血凝特性,进而为建立PEDVHA和HI试验,评估疫苗免疫抗体水平奠定基础,将CV777、DR13、YN13和YN144共4株PEDV毒株,在37℃下,分别用0、5、10、50、100μg/mL胰蛋白酶处理30min,然后用鸡、兔和猪红细胞进行血凝(HA)试验;用已经鉴定为PEDV抗体阳性的血清和乳清分别进行血凝抑制(HI)试验。结果显示:4株PEDV毒株只与兔红细胞发生凝集反应;CV777、DR13毒株的HA现象需要用5μg/mL的胰蛋白酶进行预处理,但是YN13和YN144毒株的HA现象不需要胰蛋白酶作用;该凝集现象能够被PEDV抗体特异性抑制。结果表明,PEDV能够凝集兔的红细胞,不能凝集鸡和猪的红细胞,因而可以用兔红细胞建立PEDV的HA和HI试验方法。     

在鸡新城疫HA和HI试验中使用醛化红细胞的试验观察

长期以来,在鸡新城疫(ND)血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验中均使用新鲜鸡红细胞,由于这种新鲜红细胞保存时间短,使用之前临时采血洗涤,费时又不方便;同时因不同批次或不同鸡只个体红细胞的差异而影响检测结果。而醛化红细胞具有保存时间长(一年左右)、不溶血、不易破碎和使用方便等优点。笔者在鸡新城疫 HA 和 HI 试验中使用醛化红细胞替代新鲜红细胞进行了试验观察,获得满意的效果,现报告如下。     

人红细胞的固定及在兔病毒性出血症诊断上的初步应用

<正> 早已证实,兔病毒性出血症病毒具有能凝集人红细胞的特性,并由此而建立了血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验。这种简易、快速的诊断方法已经得到了广泛的应用。但是,鉴于新鲜红细胞保存期短,因此难于做到标准化,而且购买不便,每次试验须经繁琐的洗涤过程,不利于在基层推广。为了克服上述弊端,使方法更加简便、实用,我们以人O型红细胞为实验材料,探索出用高锰酸钾固定红细胞的方法。固定后的红细胞可保存很长时间,而且仍能被病毒凝集,产生清晰而稳定的凝集图象。材料和方法一、固定程序1.用0.85%生理盐水将人红细胞(南京市中心输血站提供)洗涤2次,每次以200Orpm     

冻干红细胞检验鸡新城疫血清抗体的试验

冻干(醛化)红细胞和新鲜红细胞与同一份鸡血清分别做鸡新城疫(ND)的血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验,二者血凝抑制价基本符合率达98.72%,相关系数为0.9288.冻干红细胞完全可以代替新鲜红细胞做血凝抑制试验检测鸡新城疫抗体效价.     

“兔瘟”红细胞诊断液的研制

诊断“兔瘟”的醛化人“O”型红细胞可长期保存;提出了病料处理方法,消除了非特异性反应;醛化的与新鲜的人“O”型红细胞诊断液效果相当。“兔瘟”病毒具有凝集人“O 型”红细胞的特性,但使用新鲜的红细胞多为不便。为此,本文就醛化红细胞的使用效果及病料处理方法进行了研究,现报告如下。     

猪红细胞醛化及其在犬细小病毒血凝试验中的应用

为了克服犬细小病毒血凝检测因随时需要新鲜猪红细胞而不能在临床广泛应用的缺点,试验用戊二醛醛化猪红细胞进行犬细小病毒血凝试验(HA)。结果表明:醛化后的红细胞不变形,结构完整,细胞膜的硬度增加,细胞不易破碎。1%醛化猪红细胞比1%新鲜猪红细胞检测结果低1~2个效价,结果容易判读,且具有检测的特异性,准确性。说明醛化的猪红细胞可以代替新鲜猪红细胞进行血凝检测。     

醛化鸡红细胞在EDS-76病毒HA和HI试验中的应用

用醛化鸡红细胞进行 EDS-76病毒的血凝(HA)及血凝抑制(HI)试验结果与用新鲜鸡红细胞检测的结果相同或低一个滴度,图象清晰、稳定、结果易于判定。醛化鸡红细胞具有保存期长、使用方便、无自凝性等优点.     

兔病毒性出血症病毒血凝作用的研究

选用十种动物(鸡、鸭、鹅、鸽、大鼠、小鼠、豚鼠、兔、绵羊、公牛,每种5个个体)和人(“O”型)的血液,用氰化高铁血红蛋白法监测红细胞悬液的配制,分别在4℃、22℃、37℃条件下,对兔病毒性出血症病毒进行微量HA试验,并对人工感     

鸡醛化红细胞在血凝和血凝抑制试验中的应用

应用鸡醛化红细胞 (FoRBC)代替新鲜配制红细胞 (FrRBC) ,进行血凝试验 (HA)和血凝抑制试验 (HI) ,以检测病毒滴度及其对应抗体效价。结果 :0 75 %FoRBC与 1 %FrRBC所测病毒HA和相应抗体HI效价一致。表明 0 75 %FoRBC可以替代 1 %FrRBC ,且具有不易破裂 ,保存期长 ,使用方便 ,无自凝 ,图象清晰、稳定 ,结果易判定等优点     

一株兔瘟病毒野毒株的分离与鉴定

为了对南部县某兔场疑似兔出血症病毒(RHDV)NB毒株进行鉴定,试验采用血凝(HA)及血凝抑制(HI)试验、家兔接种试验、家兔免疫攻毒试验、VP60基因的同源性比对。结果显示:NB毒株能凝集人"O"型红细胞,HA效价为12 log2,其血凝性能被RHDV疫苗毒株AV33株的抗血清抑制;NB毒株注射健康非免家兔,家兔在48h内死亡,具有典型的兔病毒性出血症(RHD)的临床症状和病理变化;RHDV(AV33)组织灭活疫苗免疫家兔后,家兔能抵抗NB毒株的攻击;NB毒株与AV33毒株的VP60基因同源性为96.12%,氨基酸序列同源性为97.59%。     

应用免疫酶组化染色法快速诊断“兔瘟”的研究

免疫酶组化染色法诊断“兔瘟”具有特异性强、重复性好、方便快速的优点,与血凝试验的阳性符合率为100%,是便于基层推广应用的有效方法.目前用于诊断“兔瘟”的方法较多,临床上都利用兔瘟病毒具有凝集人红细胞的特性而应用血凝(HA)、血凝抑制(HI)试验及平板凝集试验。尽管这些方法简便、快速,但人红细胞购买不便、保存期短.难以做到标淮化,不利于在基层推广。为此,我们利用免疫酶组化染色法来诊断兔瘟.试验表明,该法简便、准确、稳定,是适用于基层的有效方法.     

醛化鸡红细胞在新城疫病毒检测中的应用

鸡红细胞可以被多种病毒所凝集,因此可用以检测多种病毒,尤其在新城疫病毒(NDV)的检测中更为常用。过去,检测NDV的HA和HI试验皆使用新鲜的鸡红细胞,常因红细胞表面吸附的免疫球蛋白等物质洗涤不彻底而影响试验结果。醛化红细胞不易破碎,保存时间长,并可消除不同个体间红细胞的差异对试验的影响。水文就应用醛化鸡红细胞代替新鲜鸡红细胞在NDV检测中的效果进行了研究。     

醛化非免疫公鸡红细胞在鸡新城疫HA试验中的应用

使用非免疫公鸡的经醛化后的红细胞和新鲜红细胞进行NDV微量HA对比试验证明,符合率达到92.4%,保存9个月时仍然有效,应用醛化红细胞将使HA试验更加简便,易行,由于醛化红细胞保存期可达一年而使该诊断液商品化成为可能。