利用Asia1型口蹄疫病毒VP1蛋白的单克隆抗体建立单抗竞争ELISA方法

1材料与方法1．1材料新生牛血清购自GIBICO生物公司;青霉素、链霉素购自哈尔滨制药六厂;降脂烷购自sigma公司;过碘酸钠购自上海生物试剂公司;脱脂乳购自飞鹤乳业公司;Babl／c小鼠购自兰州生物制品研究所。     

野桑蚕不同组织细胞色素P450CYP30581V1基因的诱导表达特征研究

1材料与方法 1．1材料与试剂野桑蚕采自苏州大学独墅湖校区桑园;宿主菌E．coli TOP10为苏州大学基础医学及生物科学学院生物资源与功能基因组学研究室保存;植物次生性物质芸香苷和内源性物质蜕皮激素均购自SIGMA公司;氯氰菊酯购自拜耳杭州作物科学有限公司;外源性化合物NaF（分析纯）购自西安化学试剂厂;RNAiso reagent试剂盒购自TakaRa公司;其他常用试剂购自TaKaRa公司或上海生工生物工程技术服务有限公司：     

雄性育性基因RNA干扰载体的构建与鉴定

1材料与方法1．1材料酶和试剂：各种限制性内切酶购自Roche公司,T4DNA连接酶购自上海生工公司,Taq聚合酶、dNTP、凝胶回收试剂盒均购自Promega公司,引物由上海生工公司合成,其他试剂均为进口或国产分析纯。植物材料和质粒：棉花洞A雄性可育株由西南大学棉花教研室提供,表达载体P^BП21质粒和大肠杆菌菌株XL1-Blue由西南大学生物技术中心实验室保存。pUCm-T克隆载体购自上海生工公司。     

鲤鱼HSP70基因组织表达差异研究

1材料与方法 1．1材料 供试鲤鱼购自成都市洗面桥市场。主要试剂：TR—Iaol总RNA提取试剂盒购自Invitrogen公司,反转录试剂盒、pMD-18T载体、D12000DNA和如DNA聚合酶购自大连宝生物工程有限公司;琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒购自Axygen公司;DEPC原液（Sigma分装）、JM-109感受态细胞购自大连宝生物工程有限公司,其他试剂均为国产分析纯。     

外源蛋白定位马铃薯淀粉粒表达载体的构建

1材料与方法 1．1材料马铃薯品系：郑1011。受体菌：大肠杆菌BL21。载体质粒pCambia1305—1购自TaKaRa公司;反转录试剂、TaqDNA聚合酶、T4DNA连接酶、限制性内切酶购自TaKaRa公司;DNA回收试剂盒Wizard PCR preps DNA Purification System购自Promega公司。     

水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的分离·培养和生物学特性研究

1材料与方法1．1材料1．1．1取材。孕早期成年水牛子宫由南宁某屠宰场提供。1．1．2试剂。一次性细胞培养皿地幻自美同BD公司;新生牛血清购A杭州四季青公司;雌二醇购自宁波市激素制品有限公司;离糖型DMEM细胞培养液粉剂、DPBS粉剂和胶原酶I购自美因GIBCO公司;细胞角蛋白单抗和：二抗购白广州深达生物制品公司。另外,青霉素、链霉素、胰蛋门酶、表皮生氐因子（EGF）、     

五指山小型猪生长激素释放激素受体基因的cDNA克隆及序列分析

1材料与方法 1．1材料随机采集五指山猪品种耳组织样共30份,将其迅速放入液氮带回实验室,-70℃保存备用。 1．2试剂RT—PCRKit、PCR产物纯化回收试剂盒、重组质粒抽提试剂盒,均购自天根生物工程有限公司;SalⅠ、BamHⅠ、pMD18-TVector试剂盒、Ecoli DH5α均购自TaKaRa公司。     

猪繁殖与呼吸综合症GP5蛋白的纯化与免疫活性分析

1材料与方法1．1表达菌及试剂猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）6P-1-GP5表达质粒由该实验室保存。Novagen蛋白纯化试剂盒、硝酸纤维素膜（NC膜）均购自华美公司;弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂购自Sigma公司;辣根酶标记兔抗猪IgG购自北京中杉金桥生物技术有限公司;其他常规试剂均由国内生产。试验用豚鼠由中国农业科学院兰州兽医研究所实验动物厂提供,体重400-500g,共8只。     

鹅副粘病毒GX1株的HN和F蛋白基因的克隆和序列分析

1材料与方法 1．1病毒来源鹅副粘病毒分离株GX1株由广西壮族自治区动物疫病预防控制中心实验室分离保存。 1．2试剂及仪器各种PCR反应试剂、PMD-18T载体、胶回收试剂盒、限制性内切酶等均购自宝生物工程（大连）公司。仪器：恒温孵化箱、PCR反应仪、超速离心机、移液器等。     

靶向PRRSV核衣壳蛋白N基因的siRNA表达载体的构建及鉴定

1材料与方法 1．1材料限制性核酸内切酶HindIII、BamHI、PvuII、SspI、质粒抽提试剂盒、EcoT14 DNAMarker购自TakaRa公司。T4DNA连接酶购于promega公司。大肠杆菌DH5α菌株由该实验室保存。siRNA表达载体pSilencer 4．1-CMV Nero质粒购自Ambion公司。     

一种高效提取棉花细胞核的技术

[目的]研究一种高效提取棉花细胞核的技术,为棉花大片段基因组文库的构建和全基因组测序提供技术。支持。[方法]采用“刀切法”,在含有Triton X-100和PVP40的冰冷细胞核提取缓冲液中,用锋利刀片切割发育1周的棉花黄化子叶以释放细胞核,并经过100、50、和30μm的膜过滤后离心收集细胞核,同时选取棉花幼嫩叶片和黄化处理时间不同的子叶分别用研磨法和刀切法作对照。[结果]刀切法所得细胞核干净完整杂质少,不需要研磨和巯基乙醇等处理,方便快捷无毒害,成功率达100％。[结论]建立了一种简单、高效快捷、无毒害的棉花细胞核提取技术。     

一种高效提取棉花细胞核的技术(英文)

[Objective] The experiment aimed to study an efficient method of Nuclei extraction of cotton and provided technical support for constructing large-insert genomic library and sequencing complete genome. [Method] The cotton cotyledons germinated in dark moisture chamber for one week were chopped with a sharp sterile scalpel in a Petri dish which contained ice-cold nucleus isolation buffer (10 mmol/L MgSO4, 5 mmol/L KCl, 0.5 mmol/L HEPES, 1 mg/ml DTT, 0.25% Triton X-100 and 2% PVP40), then the nuclei were collected after selected through 100, 50 and 30 μm nylon meshes and centrifugation. Meanwhile, the tender leaves and cotyledons with different germination time in dark were treated by grinding method and sharp scalpel method. [Result] The chopping with a sharp scalpel method was very simple and rapid, which did not need grind and mercaptoethanol treatment and the successful extraction rate was 100%.[Conclusion] An efficient method of nuclei extraction of cotton with simple, high efficiency, rapid reaction and poison free were established.     

一种检测乳过氧化物酶方法的建立

【目的】建立一种简便、快速、精确的乳过氧化物酶（LP）检测方法。【方法】以ABTS为底物，利用动力学方法，建立了检测LP含量的ABTS法，并以优化后的体系检验ABTS法的精确度。【结果】以ABTS法检测LP含量的最佳反应条件为：吸收波长416nm，作用时间100s，pH5．5，ABTS浓度2mmol／L，H2O2浓度5mmol／L，工作温度25℃（室温）。经检验，该法的批内变异系数为2．39％，批间变异系数为3．42％，相关系数（R2）为0．9953，准确误差均未超过5．00％。【结论】以ABTS法检测LP精密度和准确度均较好，且操作步骤比较简便、快速，实现了对LP的简便、快速、精确检测。     

反相离子对液相色谱-二极管阵列检测器测定红薯粉条中溴酸钾

[目的]建立反相离子对液相色谱-二极管阵列检测器测定红薯粉条中溴酸钾的分析方法。[方法]样品以超纯水超声波提取,加入甲醇混合后离心,取上清液微孔滤膜过滤作为供试品液。使用Waters Symmetry shield~(TM)RP18色谱柱,以甲醇∶水(含4.0 mmol/L柠檬酸与0.5 mmol/L十六烷基三甲基溴化铵溶液,pH为4.5)40∶60(V/V)为流动相,二极管阵列检测器扫描检测,以保留时间和190~400 nm光谱定性,210 nm波长下溴酸钾峰面积定量。[结果]溴酸钾在5.135~513.500μg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数大于0.999,方法回收率在83.5%~88.5%,检出限为0.9 mg/kg,定量限为2.5 mg/kg。[结论]该方法简单、快速、可靠、灵敏、高效,可用于红薯粉条中溴酸钾的分析检测。     

在线凝胶渗透色谱-气相色谱/质谱法测定棉花中44种农药残留研究

[目的]建立棉花中多种农药残留同时检测的分析方法.[方法]样品中残留农药采用乙腈提取,使用PSA粉净化,再经在线凝胶渗透色谱-气相色谱/质谱（GPC-GC/MS）分析,进一步除去样液中脂肪等大分子干扰物质.[结果]加标水平为0.008～0.064 mg/kg时,回收率为65％～120％,相对标准偏差小于15％;44种农药的检出限为0.000 5～0.020 0 mg/kg.[结论]试验证明,该方法操作简单快速、准确度高,能够满足棉花中多种农药残留限量标准的检测要求.     

酸提法提取乌骨鸡黑色素的研究

[目的]为乌骨鸡黑色素的提取提供科学依据。[方法]用改良酸提法对乌骨鸡鸡皮和鸡肉中黑色素的提取方法进行优化,探索制定出详细、可靠的提取方法。[结果]新鲜肌肉、鸡皮均用剁碎的方法,剁得的鸡肉和鸡皮比较细(不能用绞肉机绞);浸泡时间缩短:用浓度6 mol/L盐酸按40 ml/g比例浸泡,时间8.0 h(原12.0 h);回流时间增加:水浴100℃回流1.5 h(原1.0 h);在加热回流后进行快速冷冻,用小匙除去其油块,缩短时间,效果较好。利用该方法提取乌骨鸡黑色素平均提取百分含量为0.347%。[结论]建立了乌骨鸡黑色素改良的提取方法。该方法具有可靠、简单、易操作、重复性好、收得率高的优点。     

复合酶在叶下珠有效成分提取中的应用

[目的]探索复合酶辅助提取叶下珠有效成分的工艺条件,为叶下珠的高效利用提供依据。[方法]以水为提取溶剂,以总黄酮提取得率为考察指标,选择料液比、提取温度、提取时间、纤维素酶浓度和果胶酶浓度等5因素4水平,用正交试验优选其最佳工艺条件。[结果]复合酶法提取叶下珠有效成分的最佳提取工艺为：提取时间2 h,料液比1∶25（g∶ml）,提取温度40℃,纤维素酶浓度1.4 g/L,果胶酶2.0 g/L。在此条件下,黄酮的提取率为1.589%。试验所考察的5个因素中,对提取率影响的主次顺序为：提取温度〉果胶酶浓度〉料液比〉提取时间〉纤维酶浓度。[结论]复合酶法提取省时、高效、低碳耗且提取率高,是一种对环境友好的方法。     

超声-微波协同萃取桑叶总黄酮的工艺研究

[目的]探讨超声-微波协同萃取法提取桑叶中总黄酮的工艺,以期优化超声-微波协同萃取法提取桑叶中总黄酮的最佳条件。[方法]通过单因素试验确定影响总黄酮提取的主要因素及最佳水平范围后,再通过正交试验确定影响总黄酮提取的主要因素的最佳水平。[结果]总黄酮提取的最佳条件为：超声-微波提取功率为400 W,提取液为体积分数为65%的乙醇溶液,料液比为1∶10（W/V）,提取时间为12 min,在此条件下桑叶总黄酮的提取率可达3.07%。[结论]该试验筛选出了超声-微波协同萃取法提取桑叶中总黄酮的最佳条件,该法具有工艺简单、快速、高效、环保等特点。     

基于微波提取法的茼蒿中黄酮类物质提取工艺优化

[目的]优化茼蒿中黄酮类物质的提取工艺。[方法]采用单因素试验考察乙醇体积分数、料液比、微波功率、提取时间等因素对茼蒿中黄酮类物质提取率的影响,并用正交试验对其提取工艺进行优化。[结果]微波提取茼蒿中黄酮类物质的最佳工艺条件为：乙醇体积分数60%,料液比1∶20（g∶ml）,微波功率为解冻档,提取时间为120 s。在此条件下提取茼蒿中黄酮类物质的提取率为0.319%。[结论]利用微波法提取茼蒿中总黄酮类物质,具有简单实用的特点,可大大缩短提取时间,达到省时、节能和高效的目的。     

涂层毛细管胶束电动色谱法快速测定三聚氰胺

[目的]初步建立了涂层毛细管胶束电动色谱快速测定三聚氰胺含量的简便方法.[方法]以40 mmol/L磷酸二氢钠和20mmol/L十二烷基硫酸钠（SDS）为分离缓冲溶液,以石英毛细管为分离柱,于234 nm波长处检测,采用峰高外标法定量.通过对分离缓冲液的组分、石英毛细管涂层、pH及电压对三聚氰胺分析的影响进行研究.[结果]该方法检出限0.48 mg/L,线性范围为10 ～ 500mg/L,线性相关系数0.998 5,三聚氰胺出峰时间小于0.8 min.[结论]通过改进样品处理和试验操作方法,提高回收率,可望满足乳制品中三聚氰胺的定性、定量测定.