SSR标记及形态性状鉴定红刺玫和月季杂交F1后代

运用传统杂交方法,以红刺玫为父本、现代月季"锦寒1号"为母本进行远缘杂交,获得6株杂交F1后代.本文利用形态学观察与SSR分子标记相结合对5个单株进行杂种鉴定,结果确定为红刺玫和锦寒1号的杂交后代,其中杂5-2和杂5-4与父本聚为一组,杂5-1、杂5-3和杂5-6与母本聚为一组.     

SSR标记与形态学方法鉴定杂交油菜纯度的比较研究

为了探讨SSR标记技术在油菜杂交种纯度鉴定中应用的可行性,本文采用SSR标记技术和形态学方法鉴定油菜杂交种纯度以比较两者的差异,用406对微卫星引物分别对杂交油菜品种"蜀杂六号"核不育系156AB的可育株及不育株、恢复系86Y17和杂种1代各自的形态学正常植株及杂株,进行了鉴定.首先从406对SSR引物中筛选出了多态性强且易识别的14对SSR引物.采用选出的14对引物能稳定扩增出蜀杂六号父母本的多态性,能够鉴定油菜杂种中的杂株,但结果表明SSR标记鉴定的杂株与形态学方法鉴定的杂株存在较大差异.     

花生F_1代真伪杂种鉴定方法分析

为了探索更加方便快捷的鉴定花生杂种子代的方法,本研究以花优7号和花优4号为亲本,根据其SNP位点的突变碱基G-T和SSR多态性位点,同时利用籽仁表型性状的观察、SSR多态性标记分析、四引物扩增突变体系PCR和Sanger测序基因峰值图分析等四种方法,进行F1代真伪杂种鉴定。结果表明,根据籽仁的表型性状来鉴别杂种F1的真伪,只能鉴别出部分杂种,有一定局限性;SSR多态性分子标记法需要多对引物并进行多次筛选,该方法比较简单,成熟,适用于大群体;ARMS-PCR方法则仅需2对引物;PCR扩增产物的鉴定只需要普通的琼脂糖凝胶电泳即可,省时省力,简便,但其对引物设计要求比较高;基因序列峰值图分析较耗时耗力耗财,适用于小群体。因此,运用后三种生物技术方法均能鉴别F1代真伪杂种,F1代真杂种的准确鉴定可以减少F2群体的规模,有助于进一步的遗传群体构建和新品种的培育。     

RAPD方法在节瓜种子纯度鉴定中的应用初探

本文以节瓜种子为材料,用８种随机引物对节瓜种子父本,母本及杂种一代的染色体组ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ扩增,发现有３条随机引物扩增出ＤＮＡ片段,其中２条随机引物属于“偏父型”;１条随机引物属于“特异型”随机引物,另外５条随机引物没有扩增出ＤＮＡ片段。由于随机引物扩增片段多态性的存在,因此可以使用该方法进行种子纯度鉴定。     

蔗茅(Erianthus fulvus)的特异性状及其与甘蔗杂交F1代的染色体和RAPD鉴定研究

本文以我们的前期研究为基础,综述蔗茅(Erianthus fulvus)野生种的一些特异性状及其在甘蔗育种中的利用价值.对蔗茅花粉进行低温贮存,克服其与甘蔗花期不遇的障碍,获得两个杂交组合共310株实生苗.采用染色体计数和RAPD分子标记的方法鉴定杂种F1代真实性.结果表明,供试材料杂种01/47、01/85、01/120的2n＝79-82,染色体遗传方式为"n+2n";用110个随机引物进行RAPD扩增,63个引物可获得双亲的RAPD多态性,其中3个引物(OPC-19、OPE-2、OPF-4)可在杂种01/64和01/120的 RAPD扩增标记中显示出双亲的特征谱带,分别为父本3500bp和母本1300bp、父本1350bp和母本900bp、父本550bp和母本900bp.本研究探索杂种实生苗早期鉴定的可行之法,为分子标记辅助选择(MAS)、缩短甘蔗育种年限奠定工作基础.     

核桃早实性相关的SCAR标记在母本和F_1代上的分析

本文研究目的是对与新疆核桃早实性相关的SCAR标记在母本和F1代上进行分析。通过对与核桃早实性相关的SCAR标记片段的扩增并测序,获得与早实性相关的SCAR标记片段,大小为762bp。用该特异性引物对新疆五个核桃实生品种母本和F1代进行扩增,在母本和F1代上得到了以下的结果:四个母本材料出现了该标记片段,各品种实生F1代单株出现该标记的比率分别为92.68%,97.92%,96.43%,93.10%和97.73%,分析表明核桃早实性是遗传力较高的性状。本研究可为进一步研究新疆核桃早实性相关基因的克隆及功能提供一定的研究基础。     

蔗茅(Erianthus fulvus)的特异性状及其与甘蔗杂交F1代的染色体和RAPD鉴定研究

本文以我们的前期研究为基础,综述蔗茅(Erianthus fulvus)野生种的一些特异性状及其在甘蔗育种中的利用价值.对蔗茅花粉进行低温贮存,克服其与甘蔗花期不遇的障碍,获得两个杂交组合共310株实生苗.采用染色体计数和RAPD分子标记的方法鉴定杂种F1代真实性.结果表明,供试材料杂种01/47、01/85、01/120的2n＝79-82,染色体遗传方式为“n 2n“;用110个随机引物进行RAPD扩增,63个引物可获得双亲的RAPD多态性,其中3个引物(OPC-19、OPE-2、OPF-4)可在杂种01/64和01/120的 RAPD扩增标记中显示出双亲的特征谱带,分别为父本3500bp和母本1300bp、父本1350bp和母本900bp、父本550bp和母本900bp.本研究探索杂种实生苗早期鉴定的可行之法,为分子标记辅助选择(MAS)、缩短甘蔗育种年限奠定工作基础.     

陆地棉品种SSR标记的多态性及用于杂交种纯度检测的研究

:用 48对 SSR引物对 30个棉花栽培品种和4个高优势杂交种的亲本进行了多态性筛选 ,结果只有 2 7对引物检测到了多态性。应用SSR3442、SSR2 4 95、SSR3347和 SSR1 2 31标记 ,区分了湘杂 2号、皖杂 40、中棉所 2 8、南抗 3号的F1杂种和它们的亲本以及其它栽培品种 ;这些标记可分别用于这些杂交种的分子鉴定和种子纯度的检测     

对贵农21×Neepawa回交F1代的分子标记辅助选择研究

利用RAPD技术,对白粉病免疫的贵农21号与加拿大小麦Neepawa的BC1F1代100个抗感单株进行了分子标记辅助选择。利用随机引物S 2018进行RAPD分析结果表明,在抗病亲本贵农21号和回交F1代抗病单株中均扩增出特异的DNA片段,感病对照不能扩增出此带,该特异片段的分子长度约900 bp,且重复性好,稳定性好,说明该标记与贵农21的抗白粉病基因相连锁,平均选择符合率达91.86%,在其杂交后代中进行早代选择是有效的,为选育抗病小麦种质提供了有效的手段。     

与黄瓜抗黑星病相关基因紧密连锁的SSR标记

本研究以黄瓜抗黑星病母本Q6和感黑星病父本F51及其F2代分离群体为试材,采用BSA法和SSR技术建立了对黑星病的抗病组和感病组,SSR引物CSWCTT02D在抗感组间表现多态性,且呈共显性.经162个F2单株验证,在高抗单株和高感单株中分别仅扩增出246 bp和256 bp的特异片段,而在中间类型个体中同时扩增出了两个特异片段.连锁分析结果表明,该标记与黄瓜黑星病抗病相关基因紧密连锁,距离为3.1 cM.测序结果显示,两个片段的差异在于10个碱基的插入或缺失.     

杂交油葵A15种子纯度的RAPD鉴定

从杂交油葵A15及其亲本中提取基因组DNA,用180个RAPD随机引物进行扩增,从中筛选出3个可将亲本和子代区分开的引物OPD09、OPD12和OPK12。OPD09产生亲本互补的特征带OPD09-1470bp、OPD09-870bp;OPD12产生母本特征带OPD12-1230bp,OPK12产生父本特征带OPK12-1540bp、OPK12-940bp,上述谱带均在子代中出现。以单引物(OPD09)和双     

水稻早世代稳定特异性的研究

利用9个具有早世代稳定遗传特性的水稻品系和7个栽培稻作为主体亲本杂交配组，在130个组合F2群体963个株系中，发现28个组合中出现73个稳定株系。遗传分析表明水稻早世代稳定既不是质量性状遗传也不是数量性状遗传，是按株群分离的遗传方式，出现稳定株系的组合F1群体发生了分离，F2群体中既有性状不分离的稳定株系又有孟德尔     

工业大麻雄性相关RAPD和SCAR标记的筛选与鉴定

利用42条RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA）随机扩增引物分析工业大麻品种“火麻一号”组成的雄性或雌性DNA池（DNA pools）,结果显示,引物OPV-08扩增得到一条大小为869bp与工业大麻雄性相关的特异条带。根据测序结果,合成了两条SCAR（Sequence Characterized Amplified Region）标记引物,该SCAR标记不仅可以对工业大麻雌雄异株材料花期已知性别的雌雄植株进行准确鉴定,还可以对幼苗期未知性别的大麻雌雄植株进行鉴定;也可对雌雄同株材料可能出现的雄化进行早期鉴定。这不仅为工业大麻早期性别鉴定提供基础,且为减少雌雄同株材料的雄化提供支撑。     

“薄皮”ד垂枝”板栗RAPD遗传连锁图构建

使用20组共400条RAPD随机引物,在"薄皮"和"垂枝"两个板栗亲本无性系及其5个杂交后代进行筛选,共有187条引物获得了清晰、重复性好的多态性条带,占供试引物的46.75%.应用筛选出的多态性引物在两亲本及其60个杂交后代中进行扩增,获得的多态性条带在后代中的分离比用卡方测验(α=0.05)分析,结果共有143个标记符合1:1测交分离比,其中来源于母本"薄皮"板栗的有88个,来源于父本"垂枝"的有55个.采用作图软件Mapmaker和回交群体模型分别对符合测交分离比的标记进行亲本特异的标记分群和连锁分析,设定LOD值为3和最大重组值0为0.50作为可信统计度与最大连锁标记数量之间的最佳组合,其中母本的标记定位了10个连锁组,父本的标记定位了7个连锁组.母本"薄皮'板栗遗传连锁图共包含88个标记,覆盖了板栗基因组总长约823.1 cM(Kosambi,以下同),占基因组的66.7%;父本"垂枝"板栗遗传连锁图共包含55个标记,覆盖了板栗基因组总长约720.8 cM,占基因组的41.7%.母本"薄皮"板栗遗传连锁图上标记间的遗传距离为1.6～26.5 cM,平均9.4 cM,连锁组的大小从15.5 cM到166.3 cM,平均为82.3 cM;父本"垂枝"板栗遗传连锁图上标记间的遗传距离为2.1～39.9 cM,平均13.1 cM,连锁组的大小从53.5 cM到139.6 cM,平均为103.0 cM.     

陆两优996种子纯度的SRAP指纹图谱鉴定

利用270对SRAP引物对陆两优996和2个亲本的DNA指纹图谱，获得能在父、母本间表现出多态性的特异SRAP标记引物有54对，其中差异性条带136个。利用Me3Em8引物，条带在杂交种完全互补，对200株样本进行了纯度鉴定，结果鉴定纯度为97.50%，与田间种植鉴结果97.50%(海南鉴定)一致，表明SRAP标记技术适用于种子纯度鉴定。     

甘蓝型油菜中油杂8号种子纯度的SSR鉴定

（中国农业科学院油料作物研究所/国家油料作物改良中心/农业部油料作物遗传改良重点实验室,湖北武汉 430062）     

与黄瓜抗枯萎病基因连锁的RAPD标记

以黄瓜抗枯萎病亲本WIS2757和感枯萎病亲本津研2号及其F2分离群体为试材,采用分离群体分组分析法(BSA)进行了与黄瓜抗枯萎病基因连锁的分子标记研究。运用RAPD技术,利用780条RAPD引物对抗、感亲本进行筛选,其中有113条引物在两亲本之间表现多态性,但仅有引物S49在两组间多态性标记与亲本的多态性标记相同。经F2单株分析,引物S49扩增出的特异DNA片段与WIS2757抗黄瓜枯萎病基因连锁,遗传距离为14 cM。DNA标记条带大约为300 bp,定名为S49-300。     

甜椒胞质雄性不育恢复系SRAP及SCAR标记

以甜椒胞质雄性不育恢复系5-2R1和相应的保持系5-2为试材,利用SRAP分子标记技术筛选与甜椒恢复基因相关的分子标记。128对SRAP引物共扩增获得了3796条从100bp至800bp大小不同的条带,平均每对引物组合可扩增出30条清晰的条带,检测到4个多态性位点,其中恢复系材料仅有1个。对该特异片段进行回收、克隆和测序,结果表明该片段全长为259bp。经数据库比对分析表明,该片段与线粒体中的NADH脱氢酶第5亚基(GenBank:EF151914.1)具有81%的同源性;同时,该片段与辣椒BAC克隆PEPBAC 158K24(GenBank:FJ597540.1)的部分序列高度同源。根据序列特点设计特异SCAR引物,对恢复系和保持系进行扩增验证,仅在恢复系中扩增出目的条带,表明已成功地将此SRAP标记转化为简单、稳定的SCAR标记。我们推测本研究获得的SCAR标记可能与胞质雄性不育恢复性状连锁。     

Development and application of SCAR markers for sex identification in the dioecious species <Emphasis Type="Italic">Ginkgo biloba</Emphasis> L.

There is an urgent need for early sex identification to support field planting in Ginkgo biloba L., due to the different economic and medicinal values between male and female trees. An easy, rapid and reliable molecular method for sex type determination of G. biloba was reported in the paper. Random amplification of polymorphic DNA (RAPD) and sequence-characterized amplified region (SCAR) were used to search for specific molecular markers linked to the sex locus. A total of 48 primers were used for screening of specific RAPD markers in six male and three female samples. Only one primer, S10, showed different amplification band patterns associated with sex types. Then the sex-specific bands, S10-BandA and S10-BandB, were cloned and sequenced. Based on the sequences two pairs of SCAR primers, GBA and GBB, were designed. The GBA primers amplify a single 571 bp band in male samples but not in female samples, and DNA amplification using GBB primers could generate a 688 bp band only in the female individuals. Finally, the SCAR primers were used to test 16 sex-unknown samples. SCAR primers developed in this paper can be used as effective, convenient and reliable molecular markers for sex identification in G. biloba.     

黑麦重复序列在检测小麦品种中外源染色体的应用

本研究根据RAPD引物OPH20在黑麦中扩增出的特异序列pSc20H.2设计一对PCR引物pSc20ht-23/24,以来源于黑麦的小麦抗叶锈近等基因系材料TcLr45及感病对照Thatcher为亲本进行PCR扩增。并对42个小麦抗叶锈近等基因系及103个小麦品种材料进行检测。引物pSc20ht23/24在TcLr45中扩增出一条约750bp的条带,而在Thatcher中无扩增条带。对该特异片段回收、克隆测序为734bp。42个小麦抗叶锈近等基因系检测在TcLr26中扩增出与TcLr45相同的条带,而在同样来源于黑麦的小麦抗叶锈近等基因系TcLr25中未扩增出该条带;中国春-Imperial黑麦附加系1R-7R中除5R外均扩增出该条带;13个1B/1R易位系小麦品种也扩增出该条带;90个地方小麦品种中有16个扩增出该条带,6个品种经系谱分析具有黑麦遗传背景,表明该标记可用于检测小麦中含有的除黑麦5R染色体之外的外源染色质。