Nesfatin-1在雌性大鼠生殖轴上的表达及对其初情期的影响

[目的]本研究旨在探究Nesfatin-1在雌性大鼠生殖轴上的表达及其对初情期启动的影响。[方法]以雌性SD大鼠为研究对象,采用免疫组化技术对成年雌性大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴(HPOA)上的Nesfatin-1/Nucb2蛋白进行定位;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法分析Nesfatin-1/Nucb2、Tac2、Gnrh mRNA在雌性大鼠的不同发育阶段(幼年期、初情期前、初情期和成年期)下丘脑转录水平的变化;对初情期前(25日龄)的雌性大鼠进行侧脑室注射Nesfatin-1,在阴门开启时取下丘脑、垂体、卵巢和血清,用RT-qPCR分析下丘脑中Gnrh、ERα,垂体中GnrhR、FSHβ、LHβ及卵巢中FSHR、LHR mRNA的转录水平变化,用ELISA检测血清E_2的水平。[结果]Nesfatin-1主要分布于弓状核(ARC)、室旁核(PVN)、下丘脑外侧区(LHA)、视上核(SON)、腺垂体、卵母细胞、黄体细胞、间质细胞、颗粒细胞。Nesfatin-1/Nucb2、Tac2、Gnrh mRNA在不同发育阶段大鼠下丘脑中表达水平均呈先上升后下降的趋势,且Nesfatin-1/Nucb2与Tac2 mRNA表达变化的趋势大体一致,呈正相关(r=0.940,P0.001),在初情期前表达水平最高(P0.01)。对25日龄雌性大鼠侧脑室注射Nesfatin-1可使初情期启动提前10 d左右,并显著增加卵巢重(P0.05)和血清中E_2浓度及生殖轴Gnrh、GnrhR、LHβ、LHR、FSHβ、ERα mRNA表达水平(P0.05),但不影响FSHR mRNA的表达。[结论]Nesfatin-1在HPOA轴均有表达,Nesfatin-1通过上调Gnrh及其受体等生殖相关基因的表达而促进大鼠初情期的启动。     

神经激肽B在大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴上的表达

【目的】探究初情期启动前、启动中、启动后大鼠下丘脑、垂体和卵巢中神经激肽B(Neurokinin B,NKB)的表达变化。【方法】以SD雌性大鼠为研究对象,分别取大鼠的下丘脑、垂体和卵巢组织制作冰冻切片,运用免疫荧光染色法检测SD大鼠下丘脑、垂体和卵巢上NKB的分布。【结果】NKB主要分布于各时期大鼠下丘脑的弓状核、腹内侧核、室旁核、腺垂体以及卵巢的黄体细胞、间质细胞。但NKB在不同时期表达水平不同,在初情期启动前(出生后25d)和启动后(出生后60d)表达最强,在初情期启动中最弱(P0.05)。同一时期不同核团之间NKB表达水平也不同,初情期启动前和启动中室旁核最强,弓状核次之,腹内侧核最弱(P0.05);在初情期启动后,弓状核和腹内侧核中NKB的表达显著高于室旁核(P0.05)。腺垂体中NKB在初情期启动时表达最强,初情期启动前次之,初情期启动后最弱(P0.05)。卵巢间质细胞中NKB在初情期启动中的表达显著低于初情期启动前、后(P0.05)。卵巢黄体细胞中NKB在初情期启动后表达最强,初情期启动时最弱。【结论】NKB可能与初情期启动的调控密切相关。     

外源性神经激肽B对雌性大鼠生殖轴GnRH和Kisspeptin表达的影响

为研究外源性神经激肽B(NKB)对雌性大鼠下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)和下丘脑-垂体-卵巢轴(HPOA)GnRH和Kisspeptin表达的影响,将40只60d的Sprague-Dawley(SD)雌性大鼠随机分为试验组和对照组,侧脑室分别注射NKB溶液和等体积生理盐水,20min后处死采集样品。采用免疫荧光技术分析各组织的GnRH和Kisspeptin蛋白表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析GnRH和Kiss1mRNA的表达量变化。结果显示,与对照组相比,试验组下丘脑GnRH mRNA显著增加(P0.05),Kiss1 mRNA表达量显著降低(P0.05);试验组下丘脑视前区(POA)中GnRH阳性细胞数量显著增加(P0.05),弓状核(ARC)和正中隆起(ME)中GnRH阳性细胞数量增加(P0.05),但下丘脑ARC,POA,室旁核(PVN)和前腹侧室旁核(AVPV)中Kisspeptin阳性细胞数显著减少(P0.05);且NKB抑制腺垂体中Kisspeptin的表达(P0.05),但不影响卵巢中Kisspeptin的表达。综上,NKB通过调节HPOA Kisspeptin和下丘脑GnRH的表达来调控雌性大鼠的生殖。     

IFN-γ对妊娠早期大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中IGF-1表达的影响

【目的】确定干扰素γ(IFN-γ)对妊娠早期大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中IGF-1表达的影响。【方法】将妊娠9 d的SD大鼠随机分为对照组、试验1组和试验2组,采用生殖道肌肉注射的方法,对照组大鼠生殖道肌肉注射生理盐水,试验组大鼠注射IFN-γ,其中1组剂量为2.5×104U/只,2组剂量为7.5×104U/只。各试验组均在注射48h后灌注取材、免疫组化SP法染色,光镜下观察。【结果】注射2.5×104U/只和7.5×104U/只的IFN-γ均能下调妊娠大鼠下丘脑室周核、视上核、视前大细胞核、视前内侧核、视前外侧核、视前交叉上核、弓状核,腺垂体,卵巢黄体及子宫蜕膜基质细胞和子宫腺中IGF-1的表达。【结论】IFN-γ对妊娠早期大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中IGF-1的表达具有下调作用,高剂量IFN-γ的下调作用更显著。     

外源性神经激肽B对大鼠初情期的影响

【目的】研究神经激肽B(NKB)中枢给药对大鼠初情期启动、下丘脑Kisspeptin和促性腺激素释放激素(GnRH)基因及蛋白质的表达水平,以及血清中性腺激素含量的影响,以了解NKB在调节初情期方面的作用。【方法】将初情期前SD雌性大鼠分为NKB组、NKB拮抗剂组和对照组,分别侧脑室注射60 pmol/μL NKB溶液、0.3 nmol/μL NKB拮抗剂和生理盐水,注射剂量为10μL/只,每日观察阴门开启情况,统计阴门开启时间。所有大鼠均在阴门开启时采集血样,分离血清,并采集下丘脑、卵巢、子宫,称卵巢、子宫质量。分别采用免疫荧光共定位和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术,分析下丘脑中GnRH和Kisspeptin蛋白和基因的表达情况,并分别通过酶联免疫吸附法(ELISA)和放射性免疫法(RIA)检测血清中NKB和性腺激素(雌二醇、孕酮)水平。【结果】NKB使大鼠阴门开启时间显著提前(P0.05),卵巢质量显著降低(P0.05),对子宫质量无明显影响(P0.05);NKB拮抗剂使阴门开启时间显著推迟(P0.05),对卵巢和子宫质量无显著影响(P0.05)。与对照组相比,NKB组SD大鼠下丘脑Kiss1和GnRH mRNA的表达显著提高(P0.05);GnRH~+细胞数量在室旁核(PVN)和正中隆起(ME)显著增加(P0.05),而在下丘脑弓状核(ARC)中显著减少(P0.05),Kisspeptin~+细胞数量在ARC和室周核(PeN)中显著增加(P0.05),在PVN中无显著差异(P0.05);血清中E_2和P_4水平均显著增加(P0.05)。但在NKB拮抗剂组中,SD大鼠下丘脑Kiss1和GnRH mRNA的表达低于对照组,但无显著差异(P0.05), GnRH~+细胞数量在ARC中显著增加(P0.05),在室旁核PVN和ME则显著降低(P0.05),ARC和PeN中Kisspeptin~+细胞的数量显著减少(P0.05),且血清中E_2和P_4水平均显著降低(P0.05)。【结论】NKB通过调节下丘脑Kisspeptin和GnRH的表达以及提高血清中E_2和P_4水平来促进大鼠初情期启动。     

Nesfatin-1对初情期雌性大鼠促性腺激素及其mRNA表达的影响

为探究侧脑室注射Nesfatin-1对雌性大鼠促性腺激素水平及其mRNA表达的影响,对初情期前雌性大鼠的侧脑室注射Nesfatin-1,采用实时荧光定量PCR法检测促黄体素(Luteinizing hormone,LH)和促卵泡素(Folliclestimulating hormone,FSH)mRNA在垂体中的变化,采用酶联免疫分析法检测血清LH和FSH的浓度。结果表明:在初情期前的雌性大鼠中,Nesfatin-1可促进初情期启动、增加卵巢重量、血清LH水平、垂体LH mRNA和FSH mRNA的表达增加(P0.05);但Nesfatin-1对FSH水平的影响不突出,注射后15min时增加(P0.05),60min不产生影响(P0.05)。侧脑室注射Nesfatin-1后15和60min均能提高血清LH水平,15min时提高更明显(P0.05),但对FSH水平的影响不尽相同。在成年的雌性大鼠中,Nesfatin-1对LH和FSH的分泌不产生影响(P0.05)。Nesfatin-1可通过下丘脑诱导和增强初情期过渡阶段雌性大鼠LH和FSH的释放及LH、FSH mRNA的表达。     

GHS-R1a在大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴上的定位及其mRNA的周期性表达

取成年SD大鼠的下丘脑、垂体、卵巢组织制成石蜡切片,采用PV-9000两步法免疫组织化学检测GHS-R1a在下丘脑-垂体-卵巢轴上的定位.实时荧光定量PCR检测GHS-Rla mRNA在不同发情周期大鼠F丘脑-垂体-卵巢轴上的表达.结果表明:GHS-R1a主要分布在下丘脑的弓状核、腹内侧核、正中隆起等,腺垂体的嗜色细胞...     

去势对公猪生殖轴上Ghrelin和功能性Ghrelin受体mRNA的影响

【目的】探讨手术去势(阉割)、免疫去势对公猪下丘脑-垂体-睾丸轴上Ghrelin mRNA和功能性Ghrelin受体1a mRNA表达的影响。【方法】将21头公猪随机均分为免疫去势组、未去势组和手术去势组,免疫去势组于9周龄初次接种免疫去势疫苗,17周龄加强免疫;手术去势组在仔猪出生7d内进行阉割去势;未去势组不作任何处理。25周龄时屠宰所有公猪,取下丘脑、垂体和睾丸组织,以β-actin为内参基因,采用实时荧光定量PCR法检测公猪下丘脑-垂体-睾丸轴Ghrelin及其受体mRNA基因的相对表达量。【结果】手术去势、免疫去势和未去势公猪下丘脑Ghrelin及其功能性受体mRNA基因相对表达量的差异不显著(P0.05),未去势公猪垂体Ghrelin mRNA的相对表达量显著低于手术阉割去势公猪(P0.05),免疫去势公猪睾丸中Ghrelin受体mRNA的相对表达量显著高于未去势公猪(P0.05)。【结论】公猪生殖轴存在Ghrelin mRNA和功能性Ghrelin受体mRNA,且手术阉割去势导致垂体中Ghrelin mRNA的相对表达量增加,免疫去势增加了睾丸Ghrelin受体mRNA的相对表达量,提示Ghrelin可能对生殖轴有调节功能。     

血管活性肠肽在皖西白鹅下丘脑与垂体中的分布

【目的】对青春期和休产期皖西白鹅下丘脑和垂体中血管活性肠肽的分布与表达进行研究。【方法】采集青春期和休产期皖西白鹅的下丘脑和垂体,应用免疫组织化学PV-9000二步法并结合DAB显色技术,对血管活性肠肽的免疫反应阳性分布进行定位,并用Image-Pro Plus 6.0软件分析阳性区域的累积光密度值。【结果】血管活性肠肽免疫反应阳性细胞主要分布于青春期和休产期皖西白鹅下丘脑的弓状核、室旁核、内侧核、视上核、乳头体内侧核等处及腺垂体中;休产期皖西白鹅下丘脑和垂体中的血管活性肠肽的累积光密度值显著高于青春期。【结论】血管活性肠肽可能对皖西白鹅的休产状态有一定的调控作用。     

生态旅游潜在客源市场特征的调查研究--以湖南永州金洞森林旅游开发为例

为探明客源市场生态旅游消费的潜在特征,采用问卷调查的形式,就长沙市居民对湖南金洞生态旅游开发的意向等问题进行抽样调查．结果显示,生态旅游符合人们“回归自然”的旅游新时尚,有着极大的开发空间,指出生态旅游的开发要注重环境保护和可持续发展．开发的产品要以休闲度假类的大众产品为主,开发生态旅游都市客源市场还要多种渠道并用,尤其是要注重媒体的宣传．     

《河北农业大学学报》创刊年代考

清光绪二十八年(1902)河北农业大学前身—直隶农务学堂诞生,经几易其名,于1958年更名为河北农业大学至今。清光绪三十一年(1905)直隶高等农业学堂时期创办了《北直农话报》,清光绪三十四年(1908)更名为《直隶农务官报》,中华民国七年(1918)改出《农学月刊》,中华民国十七年(1928)易名为《河大农刊》,中华民国二十三年(1934)更名为《河北通俗农刊》,中华民国二十四年(1935)易名为《河北农林学刊》,1948年更名为《河北农学院研究专刊》,1959年更名为《河北农业大学学报》至今。《河北农业大学学报》前身诸刊都与现时的《河北农业大学学报》有着一脉相承的历史渊源,各刊之间联系紧密,连续性、继承性强。因此,《河北农业大学学报》的创刊时间应追溯至1905年创办的《北直农话报》。     

浅谈饲料中有效能的测定技术

饲料中有效能是供动物生长发育的基础.不同动物所用的有效能体系不同,目前大多数动物采用消化能、代谢能体系,但随着研究的发展与深入,发现最能反映饲料有效能的是净能体系.无论哪种体系,采用合理的测定技术准确测定饲料中的有效能值显得尤其重要,通过对饲料有效能值的准确测定可以实现动物所需能量的精确供给,减少养殖成本,使经济效益最大化.文章综述了几种有效能评价体系的测定技术.     

山茱萸多糖提取工艺优化及马钱苷含量测定

采用L（934）正交设计试验,对山茱萸浸提液中山茱萸多糖的酶水解法提取工艺进行了优化研究,并对浸提液的中有效成分马钱苷含量进行了HPLC法分析。结果表明,山茱萸多糖浸提的最佳工艺为：液料比1∶5,浸提时间4 h,浸提温度80℃,果胶酶添加量0.55 g/L。用HPLC法测定出的山茱萸浸提液中马钱苷平均含量为0.512 ...     

水牛梭形住肉孢子虫包囊抗原的纯化技术

应用萄聚糖凝胶柱层析对水牛梭形住肉孢子虫包囊包溶性抗原进行了纯化。结果表明：纯化水牛梭形住肉孢子虫包囊抗原的最适条件为：选用萄聚糖凝胶Ｇ—１００柱层析系统；洗脱液为０３ＭＰＢＳ（ｐＨ７２），床体积为１０ｃｍ×１６５ｃｍ，上样体积为５００ＨＬ；流速为１２ｍＬ／ｈ。纯化抗原可使琼脂凝胶双扩散试验的阳性检出率提高３０％。     

黑豆不同部分馏油的体外抗氧化性比较

[目的]通过体外抗氧化体系比较黑豆不同部分馏油抗氧化性活性。[方法]通过正交试验优化索氏提取黑豆馏油的最佳工艺,提取黑豆不同部分馏油;研究黑豆不同部分馏油对羟基自由基(·OH)、DPPH自由基(DPPH·)的清除能力。[结果]在样品浓度为1.0 mg/mL时,黑豆不同部分馏油对·OH的清除率分别为全豆馏油83.9%、豆黄(黑豆去皮部分)馏油64.8%、豆皮馏油17.3%,对DPPH·的清除率分别为全豆馏油41.3%、豆黄馏油33.2%、豆皮馏油77.9%。[结论]黑豆不同部分馏油均具有较好的抗氧化性,是良好的天然抗氧化剂。黑豆不同部分馏油对·OH的清除能力从大到小依次为全豆馏油、豆黄馏油、豆皮馏油,对DPPH·的清除能力从大到小依次为豆皮馏油、全豆馏油、豆黄馏油。     

切花菊耐热性鉴定方法研究

以8个切花菊品种为材料,通过对离体叶片进行50℃高温胁迫后,采用电导法、电阻抗图谱法测定电导率、电阻,并对大田栽培植株进行田间高温胁迫试验,比较品种间的耐热性。结果表明:电导法测得的50℃直接相对电导率、修正相对电导率和电阻抗图谱法测得的胞外电阻在品种间有明显差异,但与田间高温胁迫法测定的热害指数不完全一致。电导法和电阻抗图谱法都可以作为测定切花菊耐热性的方法,但需要结合田间耐热性观察。     

探究板栗的科学贮藏方法

板栗属壳斗科栗属(Castanea mollisima Blume),其种子属于顽拗型种子,不耐贮藏。基于近年来板栗贮藏保鲜技术研究成果,从合理采收、贮前处理、贮藏方法等方面进行论述。     

干旱对合丰42不同部位叶片发育的影响

在垄作、密植两种栽培方式的条件下,研究干旱对大豆不同部位叶片发育的影响。结果表明：无论垄作还是密植,干旱严重影响大豆叶片不同部位叶绿素含量、叶面积及周长的大小、不同部位叶长、叶宽及比值、叶片形状因子等。影响整个植株的生长发育,进而影响作物产量。     

参与式农业基地建设行动方案设计

为了编制实用性强的基地建设行动方案,首先,确定参与式发展的主体,搭建一个“决策框架”;其次,针对行动目标,提出不同参与主体,如管理者、农民、消费者等团队与个人的目标及行动内容;最后,工作应向重塑伙伴式合作关系,挖掘农民自我发展潜力,完成三大角色的转换,打造农业基地文化等方向推进。