鸡新城疫,传染性支气管炎,传染性法氏囊病三联油乳剂灭活疫 …

用新城疫病毒（ＮＤＶ）ＬａＳｏｔａ株,鸡传染性支气为病毒（ＩＢＶ）Ｍ４１株接种鸡胚,收获含毒鸡胚尿液。用传染性法氏囊病病毒地方强毒ＨＢ９０９株接种３０－４０日龄用鸡,发病后取囊组织制备成含毒组织悬液。将三种病毒液按一定比例混合,制备成三联油乳剂灭活苗。     

鸡新城疫／传染性支气管炎二联油乳剂灭活疫苗试验研究报告（Ⅲ）

用同胚培养的含ＮＤＶ、ＩＢＶ胚液制备的二联油乳剂灭活苗，经免疫效力试验表明，用５０倍稀释的鸡二联灭活苗，０．５ｍｌ／只剂量免疫１８日龄鸡，４周后试验免疫鸡分别进行ＮＤＶ、ＩＢＶ强毒攻击，攻毒保护率在５０％以上，证明０．５ｍｌ剂量含有５０个半数保护量（５０个ＰＤ５０），ＮＤＨＩ抗体≥１：１６，ＩＢＶＮ抗体≥１：８便可保护。三批疫苗免疫１８日龄鸡，０．５ｍｌ／只组免疫鸡体现人有效抗体可维持１６周以上，     

鸡新城疫、减蛋综合征、传染性支气管炎三联油佐剂灭活苗的研究Ⅰ、三联灭活苗对鸡免疫试验

用新城疫病毒克隆７９株，减蛋综合征病毒ＮＥ＿４株和传染性支气管炎病毒Ｍ＿（４１）株分别接种于鸡胚和鸭胚，并收取其鸡、鸭胚尿囊液毒，经甲醛灭活，按一定比例配比，以矿物油为佐剂制成三联油佐剂灭活苗。本苗接种于产蛋后备鸡，免疫后７天产生免疫应答，免疫后３０天保护率达９０％～１００％，免疫后六个月攻毒，ＮＤ和ＩＢ保护宰为１００％，ＥＤＳ＿（７６）为９５％。１９９２～１９９４上半年，本苗在江苏、安徽、山东等省的一些鸡场免疫十万余只鸡，均获得满意效果。     

新城疫与传染性法氏囊病疫苗对雏鸡联合免疫的研究

将１１４只１１日龄海赛克斯褐公鸡随机分成５组：Ⅰ组为空白对照，Ⅱ组用新城疫（ＮＤ）弱毒苗和ＮＤ油佐剂灭活苗同时免疫，Ⅲ组用传染性法氏囊病（ＩＢＤ）地方毒株油佐剂灭活苗免疫，Ⅳ组用ＮＤ弱毒苗、ＮＤ油佐剂灭活苗、ＩＢＤ地方毒株油佐剂灭活苗同时免疫，Ⅴ组在Ⅳ组的基础上增加ＩＢＤ弱毒苗免疫。５组鸡分别隔离饲养，定期测定血清ＮＤＨＩ效价与ＩＢＤ琼扩效价。选择时机用强毒攻击，观察各组鸡的保护情况。结果：（１）Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ组鸡均能很好地抵抗ＮＤＶ强毒的攻击，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组鸡无论对ＩＢＤＶ人工感染，还是自然感染，均有坚强的保护力；（２）ＩＢＤ地方毒株油佐剂灭活疫苗不干扰ＮＤ疫苗的免疫应答；（３）ＩＢＤ弱毒苗对ＮＤ疫苗的免疫应答有一定影响，在免疫初期能促进机体尽快对ＮＤ疫苗产生应答，但后期ＮＤ疫苗的ＨＩ抗体降低较快；（４）ＮＤ疫苗对ＩＢＤ疫苗的免疫效果无显著影响。作者提出，对雏鸡首免（无论有、无母源抗体）可采用ＮＤ弱毒苗＋ＮＤ油佐剂灭活苗＋ＩＢＤ（地方毒株）油佐剂灭活苗同时进行免疫，至少可以保护到上笼后或开产前免受ＮＤＶ和ＩＢＤＶ的感染，既简化了免疫程序，又可减少对鸡群的应激，值得推广应用。     

同胚增殖鸡新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的效果观察及免疫应答反应

鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）和鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）混合在同一鸡胚中增殖,当ＮＤＶ和ＩＢＶ接种浓度控制在一定范围时,最佳收毒时间选择使ＮＤＶ有足够时间增殖到最佳滴度,且在这一时间内不至于因孵育时间过长而致ＩＢＶ毒力减弱。结果表明ＮＤＶＬａｓｏｔａ株经１０倍稀释分别与４株ＩＢＶ１０００倍稀释液等体积混合后接种,能在同一鸡胚中正常增殖,即９６ｈ收毒,血凝（ＨＡ）方法测定两种病毒的血凝价均能达到最佳滴度,其血凝价不低于各自单独增殖的滴度。４种ＩＢＶ株与ＮＤＶ同胚增殖的ＨＡ滴度进一步证实,在合适的条件下,ＩＢＶ均不对ＮＤＶ的复制产生干扰作用,４种ＩＢＶ的血凝价无明显差异。免疫试验中用同胚增殖两种病毒二联苗接种,鸡体血清中可产生抗两种病毒的ＨＩ抗体,与各自单独接种时的ＨＩ抗体水平几乎一致。本试验中制备的ＩＢ血凝抗原在４℃保存一个月,其血凝活性保持不变。ＩＢＶ微量血凝抑制（ＨＩ）试验特异性测定结果证实,用自制ＩＢＶ血凝抗原进行ＨＩ试验检测鸡ＩＢ阳性血清均能产生稳定的特异性反应,并且无交叉反应。说明ＨＩ试验是检测ＩＢＶ抗体水平的有效可行的方法。     

鸡新城疫／传染性支气管炎二联油乳剂灭活疫苗试验研究报告（Ⅱ）：疫苗…

根据ＮＤＶ、ＩＢＶ二各病毒混合毒种的最适稀释比例，将混合毒种接种９－１０龄鸡胚尿囊腔内（简称同胚培养），使接种鸡胚９６ｈ二种病毒毒价同时达到高峰，０．０１ｍｌ尿囊液含：ＮＤＶ≥１０＾８ＥＩＤ５０、ＩＢＶ≥１０＾７ＥＩＤ５０。收获同胚培养的胚毒，制备同胚培养的胚毒，制备油乳剂灭活疫苗。用三批疫苗分别免疫１８日龄雏鸡，免疫后４周二联疫苗的有效抗体分别为：ＮＤ血凝抑制抗体（ＨＩ）≥１：１６、ＩＢ中和抗体     

鸡新城疫——传染性支气管炎二价油乳剂苗的研制及免疫试验

用新城疫（ＮＤ）ＬａＳｔｏｔａ株、呼吸道型传染性支气管炎（ＲＩＢ）Ｈ１２０株和肾型传染性支气管炎（ＫＩＢ）ＳＮ９３０１株为制苗毒株，分别经鸡胚繁殖后甲醛灭活。灭活毒液依毒价按比例混合加入油佐剂中，乳化制成亲城疫－－传染性支气管炎二价油乳剂苗，对所研制疫苗的安全性、稳定性和保存期等进行测定，同时进行了免疫试验。结果表明，疫苗安全稳定，易于保存，物理性状良好；将该苗与相应弱毒苗配合用于雏鸡首兔，免后１     

用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究

用传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、ＡＲＫ、澳大利亚Ｔ株、野外分离株ＲＳ、ＲＹ及鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ），鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）、减蛋综合症病毒（ＥＤＳＶ）等分别接种９日龄ＳＰＦ鸡胚，３７℃孵育４８小时后，将其尿囊液离心，沉淀用ＰＢＳ悬浮，涂片，用抗ＩＢＶ单抗ＭＣ作一抗、进行间接荧光抗体检测。结果：Ｈ１２Ｏ、Ｈ５２、Ｍ４１“ＡＲＫ、Ｔ株及ＲＳ、ＲＹ均显阳性，而ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＩＬＴＶ、ＥＤＳＶ均为阴性。结果表明、用此法检测鸡胚尿囊液中ＩＢＶ．具有快速、敏感、特异的优点。     

以传染性支气管炎疫苗株和比利时致肾病变异株免疫的鸡…

以传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）疫苗株和ＩＢＶ致肾病变（ＮＩＢＶ）分离株免疫鸡后，进行静脉和气雾攻毒以评价气管和肾脏的交叉保护力。以４株比利时ＮＩＢＶ分离株和意大利ＮＩＢＶ ＡＺ２３．７４株作静脉攻毒。由经比利时参考株Ｂ１６４８攻毒后于不同时间采集的气管样品表明，经血清学紧密相关的比利时ＮＩＢＶ野毒免疫的鸡的气管有较强的保护力，而经Ｈ１２０、Ｈ５２和Ｄ２７４三个疫苗株以及异源ＡＺ２３．７４株免疫的鸡     

鸡新城疫-传染性支气管炎-减蛋综合征三联油乳剂苗的研制及应用

用新城疫病毒（克隆H88株。）、传染性支气管炎病毒（JP株和H52株）和减蛋综合征病毒（H91株）分别接种于鸡胚和鸭胚,并收取其含毒鸡、鸭胚尿囊液,用一定浓度甲醛溶液灭活,按一定比例混匀,以7号白油为佐剂制成鸡新城疫（ND）－传染性支气管炎（IB）－减蛋综合征（EDS76）三联油乳剂灭活苗（三联苗）。三联苗免疫30日龄雏鸡,免疫后7天产生免疫应答,免疫后21天保护率达100％。疫苗在4℃～8℃保存期为12个月,10℃～25℃保存期为6月,该疫苗在全省不同地区鸡群应用400余万羽份,取得满意效果。     

新型传染性法氏囊病疫苗研究进展

传染性法氏囊病（IBD ）病毒变异株及超强毒株的频频出现使IBD 常规疫苗的免疫失败不断发生。因此,发展更为有效、安全的新型疫苗己成为迫切需要。本文就近年来新型传染性法氏囊病疫苗研究进展作以综述。     

鸡传染性法氏囊病快速诊断方法的研究

本文报道了一种既可以检测ＩＢＤ囊毒抗原，又可以检测ＩＢＤ抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）双抗体夹心法。用本方法检测ＩＢＤ阳性法氏囊样品１２２份，结果检出阳性１２０份，符合率为９８．４％。检测阴性法氏羹样品８８份，均为阴性。本方法与琼脂扩散试验方法比较，共检测人工感染发病的病死鸡法氏囊９７份，结果琼脂扩散检出阳性法氏囊４９份（５０．５１％），阴性４８份（４９．４８％），而用本方法检测结果，全为阳性，检出阳性率为１００％，比ＡＧＰ法检出率高４９．４８％。检测高免蛋黄液的抗体。１６个样品（以２倍递增进行稀释），结果本方法比琼脂扩散试验高１～２个滴度。试验证明该方法特异、敏感，并且快速简便，试验在室温条件下进行，不需要任何仪器设备，用肉眼观察颜色的变化就可判断试验结果，试验反应时间仅需１０分钟左右。     

鸡传染性腺胃病病原T95株的分离与鉴定

自某疫区的鸡腺胃病鸡群中分离到Ｔ９５毒株,在ＳＰＦ鸡胚稳定传代至８代,具有规律性死亡和典型胚胎病变特征,Ｔ９５株感染鸡胚尿囊液提纯的病毒液经负染后电镜观察：病毒粒子大小为８０￣１６０ｎｍ,有囊膜,表面具纤突,呈典型冠状病毒形态。病毒对热和氯仿敏感,耐酸,能抵抗１％胰酶,无直接血凝性,但经卵磷脂酶Ｃ处理后能凝结鸡红细胞。经单抗介导的ＥＬＩＳＡ检测,Ｔ９５株与ＩＢＶ有密切的血清学关系。     

抗传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的特性研究

应用杂交瘤技术获得了１３ 株抗传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ） 的单克隆抗体（ ＭｃＡｂ） ,经过检测其中有９ 株ＭｃＡｂｓ 为ＩｇＧ 类, ４ 株为Ｉｇ Ｍ , 这些ＭｃＡｂｓ 与新城疫病毒（ＮＤＶ） 、传染性支气管炎病毒 （ＩＢＶ） 和马立克氏病病毒（ ＭＤＶ） 均无交叉反应, 病毒中和试验表明, 有５株ＭｃＡｂｓ 具有中和活性,Ｗｅｓｔｅｒｎ － ｂｌｏｔｔｉｎｇ 试验表明, 这５ 株有中和活性的ＭｃＡｂｓ 识别的抗原位点在ＶＰ２ 。传染性法氏囊病最早于１９５７ 年发现于美国东部特拉华州的甘博罗（Ｇｕ ｍ ｂｏｒｏ） 地区,１９６２ 年由Ｃｏｓｇｒｏｖｅ 首次报道, 此后该病相继在全世界许多国家和地区广泛流行。本试验对通过淋巴细胞杂交瘤获得的１３ 株单克隆抗体进行了生物学特性鉴定, 以期应用于对ＩＢＤ 的研究, 现将试验情况报告如下。     

抗传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

应用杂交瘤技术获得了１３株抗传染性法氏囊病病毒的单克隆抗体,其中有９株ＭｃＡｂｓ为ＩｇＧ类,４株为ＩｇＭ类,这些ＭｃＡｂｓ与新城疫病毒,传染性支气管炎病毒和马立克氏病病均无交驻反应病毒中和试验表明,有５株ＭｃＡｂｓ具有中和活性,Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｉｏｔｔｉｎｇ试验表明,这５株有中和性的ＭｃＡｂｓ识别的抗原位在ＶＰ２上。     

猪重大疫病免疫程序比较试验

本研究选择梧州市2个乡镇的21～35日龄未免疫、健康的仔猪各30头,设计两套重大猪病联合免疫程序。结果表明,疫苗之间没有明显干扰作用,猪瘟、口蹄疫、高致病性猪蓝耳病免疫抗体合格率均达到73.3%以上。两套免疫程序根据特点分别适用于不同类型的猪场。     

传染性法氏囊病病毒变异株弱毒的培育

传染性法氏囊病病毒３个变异野毒株ＪＤ１、ＪＤ２、ＨＢ）和２个经验血清型１毒株、ＳＣ）直接在鸡胚成纤维细胞上传代,均能不同程度地产生细胞病毒效应（ＣＰＥ）。将５个毒株２１代细胞毒连续回归鸡体５代,除ＪＤ１外,其余毒株均能不同程度导致法氏囊病谱。ＨＺ１４１、ＪＤ１３６、ＳＣ３８、ＪＤ２３７、ＮＢ３８代细胞毒在鸡体内回归５代,均未见法氏囊的眼观病变和组织学变化,囊指数保持稳定,说明ＨＺ１、ＳＣ、ＪＤ１、     

鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病三联弱毒疫苗的试制

用同胚培养的鸡新城疫Lasota株和传染性支气管炎H120（或H52）株以及用鸡胚成纤维细胞增殖的传染性法氏囊弱毒株以适当比例混合为抗原,用蔗糖脱脂乳作保护剂,经真空冷冻干燥制成三联弱毒疫苗。通过三批疫苗室内外各项指标的测试,表明该三联疫苗安全性能可靠,免疫效果确实,使用方法简便。在实验室进行的物理性状检验、无茵检验、支原体检验、剩余水分检验、真空度检查均符合国家标准;用10倍大剂量接种15日龄雏鸡无不良反应;以常规量颈部皮下接种免疫后,7d产生免疫力,免疫后14d抗鸡新城疫、鸡传染性支气管炎、鸡传染性法氏囊病三株强毒攻击的保护率均为,100％。对15日龄雏鸡首免,其免疫期至少为30d,在-25℃保存期为1年。     

鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体的间接ELISA检测方法,应用原核表达的IBDV VP2蛋白作为包被抗原,经方阵试验确定间接ELISA试验的最佳反应条件：包被抗原的浓度为8 μg/mL,标准阴、阳性血清的稀释度为1:400,封闭液选用10 %马血清,酶标抗体最佳稀释倍数为1:15000,最佳抗原稀释液为0.01 M PBS(PH 7.2);抗原最佳包被条件为4 ℃过夜,待检血清和酶标二抗反应条件为37 ℃ 60 min,底物作用时间为15 min。待检血清的OD450nm≥0.288判为阳性,反之判为阴性。特异性试验、敏感性试验和重复性试验结果显示,该方法的特异性好、敏感高、重复性好。用建立的间接ELISA方法与商品化IDEXX-ELISA试剂盒对临床血清样品进行检测,符合率为93.5 %。该方法的建立为检测IBDV抗体提供了一种安全、特异、敏感、方便经济的检测方法,为鸡传染性法氏囊病免疫监测和预防控制提供了科学的技术手段。     

鸡传染性法氏囊病细胞弱毒苗的研制

采用ＩＢＤＶ－Ｄ＿（７８）株种毒，由细胞培养研制的ＩＢＤ弱毒疫苗，经安全试验和免疫试验，证明适合本地流行毒株，试验免疫保护率１００％，对照鸡均发病。