拮抗链霉菌Men—myco—93—63及其发酵液对棉花黄萎病菌生长的 …

本研究采用抑菌圈法和菌落生长法测定拮抗链霉菌Ｍｅｎ－ｍｙｃｏ－９３－６３（Ｓ２３）及其发酵液对棉花黄萎病菌（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ）Ｔ－９和河北省强致病力菌株Ｖ－ｈ菌体生长的影响。结果表明： 霉菌Ｍｅｎ－ｍｙｃｏ－９３－６３及其发酵液对棉花黄萎病菌菌体具有强烈的抑制作用,明显降低了棉花黄萎菌的生长量。同时发现,拮抗链霉菌及其发酵液对不同致病菌株表现不同的抑菌效果;Ｍｅｎ－ｍｙｃｏ     

链霉菌(Streptomyces spp·)对几种蔬菜病原菌的拮抗作用

测定了２６株链霉菌对番茄早疫病菌、番茄灰霉病菌、甘蓝黑腐病菌、白菜软腐病菌和大肠杆菌这５种病原菌的抑菌作用。结果发现：在供试的２６株链霉菌中,菌株Ｍｅｎ－ｍｙｃｏ－９３－６３、６３、Ｍｙｃｏｓｔｏｐ、ＧＳ－９３－１０、ＧＳ－９３－３和ＧＳ－９３－２３对番茄早疫病菌,菌株１５、６３、ＧＳ－９３－１０、９３和Ｍｙｃｏｓｔｏｐ对番茄灰霉病菌,菌株３２、ＧＳ－９３－２、ＧＳ－９３－３、ＧＳ－９３－２３和９３对甘蓝黑腐病菌,菌株ＧＳ－９３－３、ＧＳ－９３－２３１、ＧＳ－９３－１０和Ｍｅｎ－ｍｙｃｏ－９３－３８对大肠杆菌抑菌作用较强,它们的抑菌活性明显高于对照化学药剂,白菜软腐无抑菌活性强的菌株,只有菌株ＧＳ－９３－１０和ＧＳ－９３－２３１抑菌活性中等。     

茄黄萎病菌滤液对茄愈伤组织的毒害作用

试验用Ｃｚａｐｃｋ＇ｓ培养液振荡培养茄黄萎病菌（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｉｕｍｄａｈｌｉａｅ）,通过过滤、离心得到无菌体培养滤液,将其按不同浓度加入ＭＳ培养基,对茄愈伤组织进行诱导及培养,结果表明：该菌的培养滤液对茄子愈伤组织的诱导及生长具有一定的毒害作用。     

新疆棉花黄萎病菌营养体亲和性的量化评估及其营养体亲和？…

从１６个采自新疆不同棉共的棉花黄萎病菌（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ）菌株和３个落叶型与非落叶型对照菌株上共获得２２５个不能利用硝酸盐的营养体突变株（ｎｉｔ ｍｕｔａｎｔｓ）。经不同氮源利用的鉴定,８９．３３％属于ｎｉｔＡ．９．３３％属于ｎｉｔＢ,１．３３％属于ｎｉｔＣ,其中ｎｉｔＣ在以ＮａＮＯ２作为唯一一氮源的ＭＯ２培养基上被完全抑制致死。ｎｉｔＡ配ｎｉｔＢ的营养体亲和性测定结果,１     

1株链霉菌对几种植物病原真菌抑菌活性的初步研究

为了研究链霉菌1#所产生生物活性物质对5种植物病原真菌的抑菌活性。通过测定其次生代谢产物的抑菌活性,研究其发酵液对5种植物病原真菌的抑制效果。在链霉菌1#的同一批发酵液中,对小麦赤霉病菌的菌丝生长抑制率为60.8%,对棉花黄萎病菌和水稻稻瘟病菌的菌丝生长抑制率为20.0%和4.3%。100℃以下热处理15 min,拮抗成分仍有较强的活性,但随着温度和处理时间的增加,拮抗活性的丧失也就越明显。链霉菌1#粗发酵液活性作用在pH值3.8~9.0基本不变。在接近中性条件下,粗发酵液的拮抗活性最强。这株链霉菌的粗发酵液对几种植物病原真菌有很好的抑制效果,它具有一定的耐热性,抑菌效果在pH值3.8~9.0无明显差异。     

棉花黄萎病菌gDNA提取方法和不同单孢的RAPD分析

选用棉花黄萎病菌代表性的菌系Ｖａ（Ｖｅｔｉｃｌｌｉｕｍａｌｂｏａｔｒｕｍ的一个菌株）和Ｖｅｔｉｃｉｌｌｉｕｍｄａｈｌｉａｅ的落中型菌系ＶＤ－８,Ｔ９及非落 叶型菌系Ｊｙ,以Ｋｅ作为实验对象,研究了ＣＴＡＢ和氯化苄２种提取方法的优劣。     

稀土氯化物与咪唑配合物的合成、表征及抑菌作用

制备了３种稀土氯化物（Ｌａ,Ｎｄ,Ｓｍ）与咪唑的配合物。用化学分析、元素分析确定其组成为ＲＥ（Ｉｍ）２Ｃｌ３·０．５ＣＨ３ＯＨ·２ＨＣｌ·ｎＨ２Ｏ（Ｉｍ＝咪唑）。利用ＩＲ、ＵＶ、电导、Ｘ－射线衍射及ＴＧ－ＤＴＧ、ＭＤＳＣ对配合物进行了表征,并用题示配合物对棉花黄萎病菌（Ｖｅｒｔｉｃｉｌ－ｌｉｕｍｄａｈｌｉａｅＫｌｅｂ）和小麦赤霉病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）进行了室内抑菌试验     

不同培养条件对球孢链霉菌JK-1生长及其产生抗菌物质的影响

[目的]研究不同培养条件对球孢链霉菌JK-1生长及其产生抗菌物质的影响,明确该菌生长及其产生抗菌物质的最适培养条件.[方法]在不同培养条件下分别测量球孢链霉菌JK-1的菌体干重,并以稻瘟菌为指示菌,采用菌丝生长速率法测定不同培养条件下JK-1发酵液的抑菌活性.[结果]在供试的7种培养基中,LB培养基最有利于菌体生长,PSB培养基最有利于产生抗菌物质.JK-1在10~35℃范围内均可以生长并产生抗菌物质,25℃为菌体生长和产生抗菌物质的最适温度.JK-1在PSB中培养5d菌体干重可达最大值,培养7d抑菌活性可达到最大值.适宜于JK-1生长及其产生抗菌物质的pH值范围为6~8,最适为pH 7.JK-1能够有效利用多种碳源和氮源进行生长和产生抗菌物质,其中分别以甘油为碳源和酪氨酸为氮源时生长最好;以麦芽糖为碳源和硫酸铵为氮源时发酵液的抑菌活性最强.[结论]球孢链霉菌JK-1生长和产生抗菌物质的最佳培养条件为pH 7的PSB培养基,25℃条件下培养7d,甘油和酪氨酸最适于该菌的菌体生长,麦芽糖和硫酸铵最适于产生抗菌物质.     

拮抗放线菌LJ50和MJ52的分离与初步鉴定

采用常规方法从3种蔬菜地土壤中筛选出2株对棉花黄萎病菌具有拮抗作用的放线菌LJ50和MJ52,通过传统的形态特征和部分生理生化测定,这2株拮抗放线菌属链霉菌属的白孢类群．离体条件下这2株拈抗放线菌的发酵液对棉花黄萎病菌、苹果轮纹病菌、黄瓜炭疽病菌、棉花立枯病菌、番茄灰霉病菌、小麦赤霉病菌、黄瓜枯萎病菌、西瓜枯萎病菌等8种病原真菌均具有抑制作用。     

P（AN—co—VAc）的结构与性能研究

根据ＩＲ、ＮＭＲ计算出Ｐ（ＡＮ－ｃｏ－ＶＡｃ）共聚物单体含量，聚合温度升高，单体配比ＡＮ／ＶＡｃ减小，共聚物中ＶＡＣ量增加，Ｐ（ＡＮ－ｃｏ－ＶＡｃ）的Ｔｇ随ＶＡＣ含量增加而降低，含水Ｐ（ＡＮ－ｃｏ－ＶＡＣ）的Ｔｇ较无水共聚物稍低，水分子起增塑作用，共聚物在热水中易加工成型，成型品具有一定硬度和强工，可应用于工农业做多生材料。     

玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63 nsdA_(mgh)基因的验证

玫瑰黄链霉菌(Streptomyces roseoflavus)Men-myco-93-63是分离自马铃薯疮痂病自然衰退土壤中的一株拮抗菌。该菌株及其发酵液对棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)等多种重要的植物病原真菌都具有较强的抑制作用。nsdA(negative regulator of Streptomyces differentiation)基因是从天蓝色链霉菌中发现的与抗生素合成相关的负调控基因。根据天蓝色链霉菌A3(2)的序列设计引物,PCR扩增出Men-myco-93-63nsdAmgh基因,经斑点杂交法验证,nsdAmgh确实在该生防菌中存在。该基因的发现有助于进一步了解该生防菌产生抗生素调节的分子机制,也为抗生素高产菌株的获得提供了新的靶标。     

玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63有效成分的初步提取与纯化

为了解玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63的代谢产物和其生物活性,对该菌株进行摇瓶培养,从菌丝中提取到一种对棉花黄萎病菌有明显抑制作用的有效成分。经过XAD-1600型大孔吸附树脂,ODS C18硅胶中压柱分离得到黄白色粉末。HPLC检测后,初步断定该物质是一类非常相似的物质组成的混合物,并且极有可能具备互变异构的特性。     

玫瑰黄链霉菌抗药性标记及其定殖和促生作用研究

选用腐霉利、多菌灵、甲基托布津、利福平、青霉素、链霉素、泰乐菌素、重铬酸钾等8种常用抗生素或杀菌剂,通过抗药性标记试验,建立了玫瑰黄链霉菌(Stremptomyces roseoflavus)Men-myco-93-63的抗药性标记,确定了重铬酸钾(0.06g/L)/青霉素(0.2g/L)为适合检测该菌株的标记药剂及浓度。通过获得的抗药性标记,结合菌落形态观察和16SrDNA序列分析,研究了Men-myco-93-63在番茄根际土壤中的定殖动态和对植株生长的影响。结果表明,该生防菌在番茄根际土壤中能够定殖,接菌15d后定殖量达到最高,为5.6×105 cfu/g,之后下降,到30d后检测不到Men-myco-93-63菌株的存在。当使用Men-myco-93-63的固体发酵物与土壤以体积比1∶400混合时,对番茄苗期生长有促进作用。     

玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63中3个调控基因的检测

玫瑰黄链霉菌(Streptomyces roseoflavus)Men-myco-93-63及其发酵液对多种重要植物病原菌均表现出很强的抑制作用,在植物病害生物防治方面有很大的应用潜力。根据天蓝色链霉菌A3(2)调控基因tcrA、sarA和scrX序列设计引物,扩增Men-myco-93-63基因组DNA,分别获得705bp、1 472bp和473bp的片段,经测序和比对,上述片段与天蓝色链霉菌A3(2)的tcrA、sarA和scrX基因在核苷酸序列和氨基酸序列上同源性均为99%,因此,推测玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63中很可能含有这些调控基因。Men-myco-93-63中这3个调控基因的初步检测为玫瑰黄链霉菌功能基因的获得、菌株的遗传改良和代谢调控途径的研究提供了重要依据。     

蔬菜根结线虫生防菌的筛选

采用河北农业大学植物病害生物防治实验室已经筛选到的、对多种病原菌具有颉颃作用的120株链霉菌和50株芽孢杆菌,筛选对蔬菜根结线虫有防治作用的菌株,结果表明,Z-L-2、Z-L-17、Z-L-19、Men-myco-93-19、Men-myco-93-38、Men-myco-93-63等6株链霉菌,其发酵液稀释4倍后对根结线虫二龄幼虫的校正致死率均在90%以上。6株链霉菌发酵液用于盆栽防治黄瓜根结线虫病,菌株Z-L-2发酵液的防效为最高,达到75%,地上部和地下部鲜重与对照相比,分别增加89.4%和66.67%;0.5%阿维菌素1 000倍液的防效为8.3%,地上部和地下部鲜重分别增加了46.3%和63.9%。     

链霉菌对玉米弯孢霉菌抑制作用的初步研究

用 39株链霉菌株对玉米弯孢霉菌进行了拮抗作用的研究。结果表明 ,有 7株对玉米弯孢霉菌表现一级拮抗作用 ,15株表现二级拮抗作用 ,17株没有表现拮抗作用。其中E17-P、B17-G菌株的抑菌效果达到福美双5 μL·L-1稀释液作用的 6 0 %以上 ,并且超过了退菌特 5 μL·L-1稀释液的作用 ,是较好的具有潜力的生防菌。同时 ,所有一级拮抗菌的抑菌稳定性都好于杀菌剂对照     

抑制马铃薯干腐病菌的活性酒糟菌筛选、鉴定及抑菌活性测定

【目的】明确来源于青稞酒糟的菌株对马铃薯干腐病病原菌的抑菌活性,为马铃薯保鲜菌剂及生防制剂的开发和利用提供科学依据。【方法】采用平板对峙法对分离自青稞酒糟的40株菌株进行抑制马铃薯干腐病病原菌（青9A-7-5、青9A-8-8、青9A-5-3和青9A-6-2）活性测定,从中筛选活性菌株并进行活性菌株稳定性评价;采用牛津杯法对活性菌株发酵液萃取物进行抑制马铃薯干腐病病原菌活性测定及稳定性评价;通过形态学、生理生化特征及分子生物学方法对活性菌株进行鉴定。【结果】通过平板对峙法从40株青稞酒糟菌株中筛选出8株（菌株JZ2c24、JZ3d09、JZ3c08、JZ2b13、JZ1-4-10、JZ1-1-1、JZ1-1-9和JZ1-4-1）对马铃薯干腐病病原菌具有较高抑菌活性的菌株,其中,菌株JZ1-1-1对病原菌青9A-7-5的抑菌活性稳定,其抑菌带缩小率为25.42%,菌株JZ1-1-9对病原菌青9A-6-2的抑菌活性稳定,其抑菌带缩小率为26.20%;在浓度为50.00 mg/mL时,菌株JZ1-1-1的发酵液水相萃取物溶液对马铃薯干腐病病原菌青9A-7-5的抑菌活性较高,其抑制中浓度（EC₅₀）为19.16 mg/mL,菌株JZ1-1-9的发酵液水相萃取物溶液对马铃薯干腐病病原菌青9A-6-2的抑菌活性较高,其EC₅₀为20.80 mg/mL,且菌株JZ1-1-1的发酵液水相萃取物溶液最稳定。结合菌落形态、生理生化特征及分子生物学鉴定结果,将菌株JZ1-1-1鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）。【结论】来源于青稞酒糟的贝莱斯芽孢杆菌菌株JZ1-1-1具有作为马铃薯保鲜菌剂及生防菌剂的潜力。     

生防链霉菌Men-myco-93-63nsdBmgh基因的克隆及序列分析

为了获得生防链霉菌Men-myco-93-63中nsdB基因,根据天蓝色链霉菌A3(2)负调控基因nsdB序列设计引物,扩增Men-myco-93-63基因组DNA,获得1 121 bp的片段,经NPA-PCR对其两端进行延伸,拼接后得到2 073 bp的全长序列,命名为nsd Bmgh.经Southern杂交验证,该...     

棉花黄萎病拮抗细菌7-30菌株的筛选与鉴定

[目的]筛选大丽轮枝菌的拮抗芽孢细菌,并对其进行生理生化鉴定。[方法]以棉花黄萎病痛原菌大丽轮枝菌（Verticillium dahliag）V-190为测试菌,筛选对其具有拮抗作用的芽孢细菌。通过初筛及复筛,得到1株具有较强抑菌活性的拮抗细菌7-30菌株,并对该菌株进行了形态特征观察和生理生化鉴定。[结果]通过初筛从各地的土样中分离到84株拮抗细菌菌株,再对其中拮抗能力较好的18株进行了复筛,得到抑菌圈达18．9mm的强抑菌活性的拮抗细菌7-30菌株,结合其形态特征和生理生化特征综合考察,初步判断其为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。[结论]获得了大丽轮枝菌的拮抗芽孢细菌7-30菌株。     

大丽轮枝菌拮抗细菌8-52菌株的筛选与鉴定

为筛选对棉花黄萎病病原菌大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)具有拮抗作用的芽孢细菌,采用改良的琼脂平板扩散法,通过初筛从各地的土样中分离到83株拮抗细菌菌株,对其中的69株进行了复筛,得到一株具有较强的抑菌活性的拮抗细菌8-52菌株。对该菌株进行了形态特征的观察、生理生化试验和16S rDNA的序列分析。将该菌株的形态特征和生理生化特性鉴定的结果与相应种、属模式菌的性状相对照,认为菌株8-52与芽孢杆菌(Bacillus)的相应性状很相近。根据16S rDNA序列相似性分析,此菌株与Bacillus velezensis标准菌株AB245422的16S rDNA序列相似度达99.78%,因此鉴定拮抗菌株8-52为Bacillus velezensis。