蛹虫草固体发酵生产虫草素的条件优化

用直径6 cm,高10 cm聚乙烯培养罐固体发酵蛹虫草(Cordyceps militaris),以固体发酵产物中虫草素含量为指标,从16个蛹虫草菌株中筛选出虫草素含量最高的菌株,考察固体发酵该菌株的培养基组成、培养时间、培养基装量、料液比、培养温度、接种量和添加物对虫草素含量的影响,得到了有利于蛹虫草固体发酵产虫草素的培养条件:培养罐装20 g小麦,按小麦干重6％的量分别加入玉米粉和黄豆粉,按料液比1∶1.4(w∶v,以小麦干重为基准)加入营养液(g/L:2.0 K2HPO4·3H2O,0.5 MgSO4·7H2O,16甘氨酸),培养温度为26℃,时间46 d,接种量10％.     

蛹虫草深层发酵产虫草素培养基的优化

以蛹虫草(Cordyceps militaris(L.)Link)NS-810为菌种,通过对接种量的考察,探索不同孢子浓度对蛹虫草液体一级种制作效果的影响;通过单次单因子试验和正交实验,优化深层发酵产虫草素的最佳培养基,筛选制备蛹虫草液体一级种和液体发酵生产虫草素的最佳工艺。结果表明:孢子浓度3.0×10~8 cfu·mL~(-1)时制作的母种最适合作为蛹虫草菌种扩大培养中的一级种子液;深层发酵的最佳培养基配方为葡萄糖25g·L~(-1)、土豆100g·L~(-1)、鱼蛋白胨18g·L~(-1)、(NH_4)_2SO_40.8g·L~(-1)、KH_2PO_41.0g·L~(-1)、MgSO_4·7H_2O 0.5g·L~(-1)、蚕蛹粉5.0g·L~(-1)、维生素B118mg·L~(-1)、水1L。优化后虫草素的总产量为1 144.31mg·L~(-1),较基础培养基提高了1.46倍。分别以价格低廉葡萄糖和鱼蛋白胨作为发酵培养基的碳源和有机氮源,利于蛹虫草产业化发酵生产虫草素。     

响应面法优化蛹虫草菌液体发酵条件

以蛹虫草菌(Cordyceps militaris)为试材,用单因素试验筛选适宜温度后,利用响应面法优化培养基,最后用优化的条件和培养基进行摇床6d和摇床6d+静置培养10d的液体发酵试验,研究不同培养条件下蛹虫草菌液体发酵后菌丝体产率以及静置培养对虫草素积累量的影响。结果表明:蛹虫草菌适宜温度为25℃,优化培养基为蔗糖4.34%、酵母粉3.06%、硫酸亚铁0.027%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸铵0.04%、硫酸镁0.13%、维生素B10.08%、硫酸锌0.06%;摇床6d和摇床6d+静置10d后,发酵液中的菌丝体产率分别为2.568g/100mL和3.389g/100mL,后者菌丝体产率比初始培养基增加了1.73倍,而虫草素积累量分别达到568.329μg/mL和862.893μg/mL,后者比初始培养基中增加了1.56倍。     

拟黑虫草菌cnig-56固体发酵生产虫草素工艺

以虫草素含量为指标,采用正交实验优化了适合拟黑虫草(Cordyceps nigrella)菌株cnig-56固体发酵的培养基,并探讨了该菌株固体发酵的最佳条件。结果表明,菌龄为3d的拟黑虫草菌种按10%接种量接入优化的固体培养基上(配方为大米粉9.9%,青稞粉6.6%,玉米粉9.9%,蚕蛹粉3.3%,粗麸皮70.15%,KH2PO40.05%,MgSO40.1%)于24℃发酵培养30d,其产物的虫草素含量最高为101μg/g。     

氮源和无机盐对蛹虫草子座产量及虫草素和腺苷的影响

以小麦为主要栽培基质,通过添加不同的氮源和无机盐,选用优质蛹虫草菌株CM-16进行人工培养,探索这2个因素对蛹虫草子座产量及虫草素和腺苷的影响。结果表明:栽培过程中选用6g·L~(-1)的蛋白胨作为最佳氮源,子座干样质量、虫草素和腺苷的生成量均较高,分别为43.1g·盒~(-1)、3.95mg·g-1和2.35mg·g~(-1)。无机盐则选择1.0mg·L~(-1)的硫酸亚铁最为合适,此时子座干样质量、虫草素和腺苷的生成量分别为48.8g·盒~(-1)、4.98mg·g~(-1)和2.10mg·g~(-1)。     

巴西虫草液体培养条件的优化

以菌丝体生物量为指标,采用正交实验设计方法对巴西虫草液体培养的摇瓶生长条件进行了优化研究。结果表明:优化培养基的组成为可溶性淀粉2%、蛋白胨1%、大豆粉1%、KH2PO40.1%、MgSO4.7H2O 0.15%、VB10.01%、FeSO4.7H2O 0.002%、CaC l20.1%。该培养基下的菌丝体生物量为19.11g.L-1,比原培养基的发酵得率提高了26.01%;对巴西虫草液体培养的外部条件进行优化,确定摇瓶培养条件为:培养基初始pH 6.5、装液量75mL/250mL、接种量7.5%、菌龄4d、发酵时间4d。研究了优化后培养条件的菌体生长代谢曲线,并得到了巴西虫草的液体培养条件和生长动力学曲线,为工业化生产提供了一定的理论依据。     

蛹虫草液体发酵过程中虫草素含量的分析

以2个蛹虫草菌株2014072503-1和2014072301-1为试材,采用高效液相色谱(HPLC)法,分析蛹虫草40d液体发酵过程中其发酵液中的虫草素产量,研究了蛹虫草发酵时间对虫草素产量的影响,旨在确定虫草素开始产生、产量迅速升高、产量最高的3个关键时间点,为下一步对以上时间节点的菌丝样品进行转录组测序分析,进而挖掘与虫草素产量密切相关的候选基因奠定基础。结果表明:2个蛹虫草菌株发酵过程中产虫草素的起始时间点为发酵后3d,迅速升高的时间点是12d,虫草素产量最高的时间点2014072503-1号菌株为发酵后37d,而2014072301-1号菌株为发酵后34d。2014072301-1号菌株发酵产生的虫草素含量高(382.43μg·mL~(-1)),时间短(34d),更适于作为生产虫草素的菌株。     

固体培养基上蛹虫草菌丝体生长情况的观察

采用固体培养基对多个蛹虫草菌株的菌丝体进行培养,观察菌株差别、温度高低和培养基成分对菌丝体生长的影响。结果表明,(24±1)℃培养的菌丝长势比较好;菌株间的菌丝萌发时间和萌发后的菌丝浓密程度差别较大;菌丝萌发后的一段时间内,菌落直径增长速度呈逐步加快的趋势;培养基间、菌株间的菌丝长满培养皿所需时间差异显著;PDA培养基中添加蛋白胨等附加成分有利于菌丝的生长,其中添加配比为蛋白胨3.00g·L-1、鸡蛋15.00g·L-1、KH2PO41.00g·L-1、MgSO41.00g·L-1和复合维生素0.04g·L-1的培养效果最好。     

液体发酵培养富硒蛹虫草菌丝体优化条件的试验

以四因素三水平的正交试验设计培养条件,在24℃±1℃,180 r/min条件下,对蛹虫草菌进行液体培养,测定菌丝体干重,得到了最佳菌株是川草SC0341,而最佳液体培养基是麦芽粉培养基、最适pH 6.8、增稠剂羧甲基纤维素的最佳用量为0.45％.并且确定麸皮粒型种可作为试验使用的良好试管菌种.用试验测得的最优条件下所得液体发酵培养基,在培养液中加入6 μ.g/mL的Na2SeO3,蛹虫草菌丝体硒吸收率达39.22％,菌丝体干重(1.00±0.05) g/100 mL.试验收获的蛹虫草菌丝体营养价值高、成本低,为中小食品企业研发功能型保健品添加剂提供了一实验模型.     

分枝虫草液体培养基筛选及其菌丝成分分析

以分枝虫草(Cordyceps ramosa)菌丝生物量作为指标,研究不同碳源和氮源对分枝虫草液体培养的影响,采用正交设计试验法筛选最佳液体培养基配方,并分析菌丝主要营养成分。结果表明,分枝虫草液体培养基的最佳碳源为甘油,最佳氮源为硝酸钾,最佳配方是:甘油35 g·L-1、硝酸钾12 g·L-1、酵母浸膏12 g·L-1、麦芽浸出物10 g·L-1、H2O 1 L;其菌丝的粗蛋白、粗脂肪和总灰分含量分别为32.90%、1.20%和5.89%,其腺苷、多糖和虫草酸的含量分别为0.805%、5.89%和5.61%;含有17种氨基酸,总含量为23.97%;微量元素铁、锰、铜、锌和硒含量分别为76.70 mg·kg-1、5.10 mg·kg-1、3.70 mg·kg-1、33 mg·kg-1和0.176 mg·kg-1,重金属铅、砷、汞的含量均符合国家食用菌相关标准。分枝虫草的液体培养可作为分枝虫草开发利用的重要途径。     

杧果畸形病病菌(Fusarium mangiferae)生物学特性及杀菌剂对其室内毒力测定

为进一步了解杧果畸形病病原菌Fusarium mangiferae的生物学特性,筛选出防治效果较好的药剂应用于生产,系统研究了该菌在不同培养基、温度、光照和碳氮源条件下的生长特性,并测定了9种杀菌剂对该菌的抑制作用。结果表明,病菌在OMA培养基上生长速度最快,在液体PDA中生长量最大,最佳产孢培养基为PSA;菌丝生长和孢子萌发的最佳温度均为25～28℃;光照时间和酸碱(pH 4～10)对病菌菌丝生长速度、孢子产生及萌发的影响不明显。病原菌生长的最佳碳源和氮源分别为蔗糖和酵母提取物。室内9种杀菌剂病原的毒力测定结果表明:25%咪鲜胺乳油对病菌菌丝生长的抑制效果最好,EC50和EC95分别为1.200 4 mg·L-1和2.623 9 mg·L-1;25%嘧菌酯悬浮剂能够强烈抑制病菌分生孢子的萌发,EC50和EC95分别为0.531 2 mg·L-1和2.974 1 mg·L-1。25%咪鲜胺乳油和25%嘧菌酯悬浮剂对杧果畸形病病菌具有较好的抑制作用,可进一步进行田间药效试验。     

银丝草菇菌丝体液体培养基筛选

以银丝草菇菌丝体生物量为主要指标,采用正交设计方法对其菌丝体液体培养基进行了筛选,结果表明银丝草菇菌丝体生长的最适培养基配方为:葡萄糖20 g.L-1、蔗糖10 g.L-1、酵母粉2.5 g.L-1、蛋白胨2 g.L-1、KH2PO4 2.5 g.L-1、MgSO4.7H2O 1.5 g.L-1、VB1 8 mg.L-1,pH自然。培养温度28℃,周期168 h,其菌丝体生物量可达11.54 g.L-1。     

大丽花‘费罗加’组织培养和块根诱导

以大丽花品种‘费罗加’为试材,茎段作为外植体,探讨了不同基本培养基、激素组合、蔗糖浓度、光照时间等对诱导愈伤组织、不定芽、不定根和块根的影响,以期缩短块根生产周期。结果表明:初代培养在MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂6 g·L-1上愈伤组织诱导率为54.9%,褐化率为44.8%,污染率为26.6%,成活率达69.6%。继代增殖培养最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.01 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂6 g·L-1,增殖系数为7.8,愈伤组织诱导率22.9%。生根最佳培养基为WPM+NAA 1.0 mg·L-1+6-BA 0.1 mg·L-1+蔗糖60 g·L-1+琼脂6 g·L-1+炭粉2 g·L-1,最适宜光照时间为6 h,生根率为98.5%,根系密集健壮。块根诱导最适材料为带根瓶苗,出现初步形态的块根,形成块根率达56.8%。     

铁线莲‘Multi-Blue’不定芽及体细胞胚发生的初步研究

 用‘Multi-Blue’铁线莲的幼叶、茎尖、嫩茎作为外植体进行培养，发现外植体来源以茎尖为最优，基本培养基以低盐的1/2MS为最佳。茎尖在附加0.5 mg·L-1TDZ+0.01 mg? L-1NAA+2%蔗糖的1/2MS固体培养基上培养1个月后芽增殖率达200.8%，且幼苗长势健壮。茎尖在附加0.8 mg· L-1TDZ+0.5 mg· L-1NAA+2%蔗糖的1/2MS固体培养基上培养时可形成淡黄色块状至颗粒状愈伤，经多次继代培养后可逐渐形成胚性愈伤组织，胚状体诱导率可达60%，进而获得再生植株。     

采用L_9(3~4)正交设计方法筛选血耳菌丝体液体培养基

采用正交设计方法以血耳Tremella sanguinea菌丝体的生物量为测量指标,对血耳菌丝体液体培养基进行了筛选,结果表明血耳菌丝体液体培养的最适培养基为蔗糖7.5g·L-1、麦芽糖7.5g·L-1、麦麸7.5g·L-1、牛肉膏3.5g·L-1、MgSO4·7H2O0.5g·L-1、KH2PO41.5g·L-1、VBl4mg·L-1,pH自然。28℃培养96h,其生物量可达4.29g·L-1。     

树舌液体发酵的培养基优化

以树舌发酵液提高离体小鼠肝组织的糖耗量为指标,通过单因素试验研究不同碳源、氮源、生长因子、pH以及无机盐对树舌发酵液生长的影响,筛选出适合的碳源、氮源及无机盐,并进一步通过正交试验确定各组分之间的相互作用。试验结果表明,树舌发酵液生长的最适培养基组成为葡萄糖5 g.L-1、甘露醇5 g.L-1、蛋白胨1 g.L-1、硫酸铵1g.L-1、硫酸亚铁0.5 g.L-1、氯化锌0.5 g.L-1、氯化钾0.5 g.L-1。树舌发酵液在28℃、150 r.min-1发酵培养5 d,发酵液糖耗量可高达到88.62%,明显高于未优化的培养基。     

阿月浑子与黄连木的杂种果实发育及幼胚培养研究

 以阿月浑子与黄连木的杂种果实和杂种幼胚为试材,对果实生长发育规律及幼胚培养进行了研究,探讨了胚龄、培养基类型和6-BA浓度等对杂种胚培苗再生的影响。结果表明：（1）杂种果实的纵、横径生长呈“S”型曲线变化,果实鲜质量生长呈双“S”型曲线变化。（2）杂种胚的发育始于授粉后80 d,80 ~ 100 d是杂种胚败育的关键时期。（3）授粉后80 d的杂种幼胚难以成苗,授粉后100和120 d的杂种幼胚成苗率分别为37.04%和83.33%。（4）适宜杂种胚培苗增殖的培养基为：DKW + 2.0 mg · L^-1 6-BA + 0.05 g · L^-1 IBA + 0.3 g · L^-1 LH + 1.5 g · L^-1 PVP,增殖系数为3.47,苗高为3.32 cm。（5）适宜杂种胚培苗生根的培养基为：1/2WPM + 2.0 mg · L^-1 IBA + 0.05 mg · L^-1 NAA,生根率为80%。     

青花菜DH系带柄子叶高频再生体系的建立

以青花菜DH系3-6、3-7和3-9带柄子叶为外植体,研究其高频离体再生体系,比较了不同基因型、不同质量浓度植物生长调节剂、不同时期苗龄外植体及不同浓度AgNO3添加剂对不定芽再生频率的影响。结果筛选出3-6和3-7两个基因型：8 d苗龄外植体不定芽的再生频率分别为96.9%和97.8%（培养基：MS+0.02 mg·L-1 NAA+1.0 mg·L-1 6-BA+4 mg·L-1 AgNO3 +10 g·L-1琼脂+30 g·L-1蔗糖）,平均外植体的再生芽数分别为15、14个,生根培养诱导生根率均为100%（培养基：1/2MS+0.05 mg·L-1 NAA + 7 g·L-1琼脂+30 g·L-1蔗糖）,驯化移栽成活率均达100%。     

樱桃砧木‘大青叶’茎段离体培养与快繁技术

以引种栽培的樱桃砧木‘大青叶’茎段为试材,探讨基本培养基和植物生长调节剂对茎段腋芽萌发、生长与增殖的效应,筛选离体培养的最适培养基。结果表明：MS＋6－BA0．5mg／L＋zT 0．1mg／L＋蔗糖20g／L＋琼脂0．6mg／L、MS＋6－BA1．0mg／L＋ZT 0．1g／L＋蔗糖20g／L为丛生芽诱导及分化增殖的最适培养基;1／2MS＋IBA 0．7mg／L＋NAA 0．2mg／L＋琼脂0．6mg／L为生根诱导的最佳培养基配方。     

欧李离体叶片再生体系的建立

【目的】以欧李试管苗叶片为外植体进行不定芽再生研究,以期为核果类果树的品种改良、基因遗传转化和功能验证等生物技术育种奠定一定的基础,【方法】使用不同的基本培养基和激素组合促进其不定芽再生并建立再生体系。【结果】结果表明,欧李幼芽增殖对基本培养基类型较敏感,改良MS培养基优于MS、F14和WPM。在MS(改良)+NAA 0.1 mg.L-1+BA 0.2 mg.L-1培养基上,增殖系数为5.6,增殖效果较好。离体叶片不定芽再生的最适植物生长调节剂组合为MS(改良)+TDZ 4.0 mg.L-1+IBA 0.2 mg.L-1,再生率达到63.1%,平均每外植体再生芽数为4.9。暗培养10 d可以提高不定芽再生率。再生不定芽1/2 MS(改良)+IBA3.0 mg.L-1培养基上生根率最高,生根率达93.3%。【结论】在改良MS培养基上TDZ与IBA组合诱导不定芽再生的效果最好。