马丁琼脂培养基质量控制标准研究

为建立马丁琼脂培养基质量控制标准,系统评价马丁琼脂培养基适应性和促生长能力,运用多杀性巴氏杆菌、丹毒杆菌和链球菌类活疫苗活菌计数参考品,通过活菌计数统计分析,对新鲜马丁琼脂、干粉马丁琼脂或改良马丁琼脂进行适应性和促生长能力系统测试。结果显示：新鲜马丁琼脂、干粉马丁琼脂和改良马丁琼脂均对多杀性巴氏杆菌、丹毒杆菌、链球菌的适应性和促生长能力差异显著,需同时选择巴氏杆菌类、丹毒杆菌类、链球菌类活疫苗计数参考品评价马丁琼脂培养基的适应性和促生长能力,表明活菌计数参考品用于建立马丁琼脂质量控制标准是可行的。     

用弱毒布氏杆菌制造布氏杆菌水解素的应用效果

遵照毛主席“备战、备荒、为人民”的教导,为适应备战的要求,更好地作好安全生产,我们试验了用弱毒布氏菌种,接种在肝汤琼脂培养基上培养获得的菌液,制造布氏杆菌水解素。并与强毒布氏菌种培养的菌液制造的布氏杆菌水解素进行了应用效果的比较,其结果报告如下。一、材料与方法 (一)菌种:系由农林部冉医药品监察所领取的牛型布氏菌104M弱毒菌种。     

流产布氏菌培养的最近发展由各种样品增加分离率的方法

文章指出,样品的选择大大影响由怀疑的病例中分离布氏菌的比率,由混合牛奶样品培养流产布氏菌的比率是24％,由单独的乳房是51—52％,由乳房上淋巴结是75—80％,69％的分离率是由标准试管凝集试验1∶100或以上滴度的牛奶样品中得到。用半胱氨酸作为还原剂的Schaedler琼脂培养基比通常使用的布氏菌(白蛋白)琼脂有更好的效果。     

应用酶联SPA—ELISA检测猪布氏杆菌病抗体

我们应用酶联SPA-ELISA 检测了猪布氏杆菌病抗体,并与试管凝集和补体结合反应进行了比较,现将结果报道如下。材料和方法一、布氏杆菌脂多糖抗原的制备将布氏杆菌S_2菌种(本教研室保存)接种于马铃薯琼脂培养基上,37℃培养2～3     

牛羊胎盘培养基培养布氏杆菌试验

布氏菌的初代分离培养是比较困难的,就我们所知,当前土豆培养基最佳。但是,土豆培养基初代分离培养需5～10天,或更长一些时间。为了寻找出菌率高,生长快而旺盛的培养基,我们初步进行了牛羊胎盘培养基的制作和培养布氏菌的研究。现将试验情况报告如下。     

猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗抗原菌选择性显色培养基的研发和应用

为研制便于检测猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗抗原含量的选择性显色计数琼脂(以下简称猪三联显色培养基)以代替传统的马丁琼脂,对比研究了干粉马丁琼脂、新鲜马丁琼脂和猪三联显色培养基的理化特性和生长特性,并通过活菌计数方法平行对比了猪丹毒单价苗、猪肺疫单价苗和猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗的抗原含量.结果显示,猪三联显色培养基在活菌...     

羊布氏杆菌的分离与鉴定

从一患睾丸炎公山羊中分离到一株革兰氏阴性短小杆菌,该菌经柯兹洛夫斯基鉴别染色红色,在普通绵羊血琼脂、巧克力平板上生长缓慢,对该菌的16S rDNA进行PCR扩增,测序,BLAST比较,结果显示该菌与羊布氏杆菌的16S rDNA有100%的同源性,菌体与布氏杆菌标准阳性血清起强凝集反应。结果显示,该分离菌为布氏杆菌。     

一株高度黏连的枯草芽孢杆菌的活菌计数

为了对1株自中草药中分离得到的菌落高度黏连的高产细菌素枯草芽孢杆菌进行有效的活菌计数,试验采用普通平板稀释法进行活菌计数,并对生理盐水、灭菌水、各种PBS、空白培养基等各种不同的稀释液进行比较研究。结果表明:生理盐水、灭菌水、各种PBS均无法将菌团分散,难以形成有效的活菌计数梯度,只有以该菌株的空白培养基作为稀释液时,才能使菌体分散均匀,稀释梯度明显,计数结果准确,重复性好。说明在活菌计数中,空白培养基可能是某些特殊菌株(如菌落高度黏连)的理想稀释液。     

有关冻干布氏杆菌苗的一些问题的研究

引言在冻干过程和在储藏阶段中,活菌稳定与否,是衡量布氏杆菌活苗冻干质量的重要尺度。本文着重探讨有关影响冻干布氏杆菌苗活菌数的几个问题。分析了一部分生产材料,同时结合生产作了若干试验,已经明确了一些问题。兹将各项结果报告于下。     

副猪嗜血杆菌培养条件的筛选及对豚鼠的致病性试验

为筛选副猪嗜血杆菌最适培养基,将副猪嗜血杆菌血清5型标准株（Nagasaki菌株）接种固体培养基TSA、PPLO琼脂、巧克力琼脂、胰月示蛋白胨琼脂和液体培养基TSB、PPLO液体、胰月示蛋白胨和马丁肉汤,通过观察菌落大小和平板计数,筛选出副猪嗜血杆菌生长最适培养基。将Nagasaki菌株接种TSB培养基,取10h～16h不同培养阶段的培养物,腹腔接种豚鼠,确定副猪嗜血杆菌感染实验动物的最佳培养阶段。结果表明,TSA和TSB是副猪嗜血杆菌的最适培养基,副猪嗜血杆菌血清5型接种于TSB中,在37℃、200r／min培养10h～13h,菌数可达到10^9cfu／mL。     

普通肉汤等培养基的保质期试验

将新鲜原材料配制的普通肉汤、普通琼脂、马丁肉汤、马丁琼脂培养基以及含有指示剂的麦康凯琼脂培养基于室温（普通实验室环境,下同）和冷库（4℃,下同）两种条件存放54周,定期通过灵敏度试验和活菌计数试验检验其质量。通过试验观察到：普通肉汤、普通琼脂培养基于两种条件存放54周后,普通肉汤灵敏度仍能达到10-8以上,普通琼脂培养基中活菌数没有明显减少;马丁肉汤、马丁琼脂培养基于两种条件存放至26周,马丁肉汤灵敏度仍能达到10-8以上,马丁琼脂培养基中活菌数没有明显减少,但30周后CVCC428在马丁肉汤和马丁琼脂中生长繁殖能力明显下降,到46周以后无生长;麦康凯琼脂培养基于两种条件存放54周后,质控菌活菌数没有明显减少,但30周后培养基中指示剂颜色消退明显,菌落特异性显色反应不明显。通过以上各试验结果,可将普通肉汤、普通琼脂培养基保质期暂定为12个月,马丁肉汤、马丁琼脂、麦康凯琼脂培养基保质期暂定为6个月。     

一株高度黏连的枯草芽孢杆菌的活菌计数

为了对1株自中草药中分离得到的菌落高度黏连的高产细菌素枯草芽孢杆菌进行有效的活菌计数,试验采用普通平板稀释法进行活菌计数,并对生理盐水、灭菌水、各种PBS、空白培养基等各种不同的稀释液进行比较研究.结果表明:生理盐水、灭菌水、各种PBS均无法将菌团分散,难以形成有效的活菌计数梯度,只有以该菌株的空白培养基作为稀释液时,...     

利用斑点酶联免疫吸附试验检测水牛布氏杆菌蛋白—A抗体

本篇报道用连接有辣根过氧化物酶(HRPO)的蛋白—A,作斑点酶联免疫吸附试验(dot—ELISA),检测流产的和外观正常的同群接触水牛血清中布氏杆菌蛋白—A的特异性抗体。 取流产胎儿胃内容物,直接接种胰蛋白酶大豆琼脂培养基,或接种于豚鼠,作布氏杆菌分离检查。可疑分离物送到Weybridge中心兽医实验室作进一步确诊并鉴定生物     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定与培养基筛选

从陕西省关中地区患多发性浆膜炎和关节炎猪场的32个样品中分离到6株细菌,并对其进行了形态观察、菌落纯培养、生化特性鉴定、PCR检测等,最终确定分离菌株均为副猪嗜血杆菌.该结果表明,关中地区存在副猪嗜血杆菌病流行;对副猪嗜血杆菌分离株最适培养基进行了筛选,将分离菌株分别接种于LB、TSA、巧克力琼脂等固体培养基上,接种12 h后通过观察菌落大小,筛选出最适合副猪嗜血杆菌生长的固体培养基TSA(加0.1 g/L NAD和50 mL/L的犊牛血清)和固体培养基巧克力琼脂(加0.8 g/L NAD).同时,将副猪嗜血杆菌分离菌株接种于LB、TSB等液体培养基中,培养至16h后,每隔4h分别取样,通过与麦氏比浊管对比确定菌液中的菌数,筛选出最佳液体培养基为TSB(加0.1 g/L NAD和50 mL/L的犊牛血清).     

两株少孢节丛孢菌在不同培养基中的形态学差异及生长特性

为了观察捕食线虫性真菌少孢节丛孢菌不同分离株在不同培养基中的形态学特性及生长情况,将少孢节丛孢菌分离株DH 066和F 107接种于10g/L麸皮琼脂(WBA)培养基、10g/L玉米粉琼脂(CMA)培养基、20g/L葡萄糖离子琼脂(DIA)培养基和20g/L葡萄糖琼脂(DA)培养基中,置于25℃恒温箱培养,观察不同分离株在不同培养基中的形态学特性并测定其产孢量。对2个分离株在6种不同培养基中菌丝生长长度每天进行定时测量。结果表明,该菌在4种培养基中的特征为分生孢子梨形至倒卵形,1个分隔,偶见2个分隔,分生孢子梗无色,直立,分隔,偶见分枝,分生孢子在10g/L WBA产量最大。此外,对2个分离株在不同培养基中生长速度研究表明,该菌在10g/L麸皮自来水琼脂(WBWA)培养基和10g/L玉米粉自来水琼脂(CMWA)培养基中生长最快。     

两种培养基生产布氏杆菌病猪型二号活疫苗的对比试验

培养基是动物细菌性疫苗生产的重要物质基础。马丁肉汤培养基是生物制品生产领域常用的培养基,在疫苗制造、细菌培养、分离、鉴定等方面发挥着不可或缺的作用。按照《兽用生物制品规程》的要求以新鲜牛肉汤为主要原材料制作的马丁肉汤培养基含有丰富的天然营养成分,一直是常规生产布氏杆菌疫苗用的传统培养基,马丁肉汤制作工艺繁琐复杂、费时费力,批次间离散度大、浪费大,针对这些问题本试验对猪种布鲁氏菌2号弱毒株C79-2用马丁干粉培养基和自制马丁汤做对比实验,结果发现用马丁干粉培养基培养布氏杆菌,每毫升中的活菌数都比用新鲜马丁汤培养基多,其成品的安检、效检均一次通过,可用于布鲁氏菌病猪型二号活疫苗的生产。使用马丁干粉培养基可降低成本,增加效益。     

1株罗曼粉鸡源申氏不动杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解贵州省某养殖场罗曼粉鸡发病病原的特征及其耐药性,本试验从病死鸡中分离出一株革兰氏阴性菌,命名为GZ2019,并对其进行纯化培养、生化试验、16S rRNA序列分析、药敏试验及动物回归试验。分离菌在普通琼脂培养基上呈圆形凸起、表面光滑、半透明的灰白色小菌落,鲜血营养琼脂培养基上菌落形态与普通琼脂培养基上的一致,但不溶血;革兰氏染色结果镜检显示,分离菌为成双排列的阴性球杆菌,偶见单个存在或链状排列;生化试验结果显示,分离菌枸橼酸盐利用、过氧化氢酶反应为阳性,硝酸还原、氧化酶、葡萄糖发酵等反应为阴性,无运动性;16S rRNA序列分析结果显示,分离株与不动杆菌的核苷酸同源性在72.6%～99.9%之间,与申氏不动杆菌LUH 4760株(GenBank登录号:AJ275041)、SNSK 752株(GenBank登录号:MG584984)、MCDA01株(GenBank登录号:KY385627)及RP1株(GenBank登录号:MG461636)的核苷酸同源性高达99.9%;药敏试验结果显示,分离菌对头孢曲松和痢特灵敏感,对头孢哌酮、头孢呋辛、头孢他啶等5种药物中度敏感,对新霉素、环丙沙星、羧苄西林等17种药物耐药;动物回归试验结果显示,试验组小鼠隔离饲养1周仅死亡1只,死亡率为20%,表明该分离菌致病性较弱。本试验成功分离出1株低致病性申氏不动杆菌GZ2019,可为鸡源申氏不动杆菌病的预防和治疗提供一定的参考依据。     

副鸡嗜血杆菌A、B型攻毒用菌液制备方法的研究

通过对副鸡嗜血杆菌A型、B型攻毒用菌液的活菌计数及预攻毒效果的比较,得出使用A型菌液攻毒,菌液制备的较佳条件是:菌种接种于鸡肉汤琼脂板,5%二氧化碳,37℃培养48小时后,挑取典型菌落,接种鸡肉汤培养基,摇菌8小时后,按兽药典方法要求进行攻毒。使用B型菌液攻毒,菌液制备的较佳条件是:菌种接种于鸡肉汤琼脂板,5%二氧化碳,37℃培养16小时后,挑取典型菌落,接种鸡肉汤培养基,摇菌6小时后,按兽药典方法要求进行攻毒。     

布氏杆菌病活疫苗(S2)不同接种方法免疫效果观察

布氏杆菌病活疫苗(S2株)系用猪种布氏杆菌S2株(CVCC 70502)接种适宜培养基培养,收获培养物,加适宜稳定剂,经冷冻真空干燥制成.它作为活菌苗具有使用范围广和使用方便的特点.可供猪、牛、山羊和绵羊等多种动物免疫使用,可以使用皮下或肌肉注射、口服免疫多种方法接种.为了测试布氏杆菌病活疫苗(S2)不同接种方法的实际免疫效果,特以绵羊为例进行了临床试验观察,现报告如下.     

布氏菌病活疫苗活菌计数项目能力验证结果分析

为了解全国布氏菌病活疫苗生产企业活菌计数能力,2015年对该项目进行了能力验证分析,每名参比企业发放布氏菌活疫苗(S2株)样品3份,要求在规定时间内对其进行活菌计数并提交结果报告。结果显示,参比的17家企业中,15家结果"满意",2家企业结果"不满意",表明全国大部分布氏菌病活疫苗生产企业具备可信任的布氏菌病活疫苗活菌计数检测能力。