民和县“出户入园”奶牛“两病”检测研究

本文采用虎红平板凝集试验、试管凝集试验和结核菌素皮内变态反应、牛结核r-干扰素ELISA试验分别对奶牛布病和结核病进行了检测,结果为:奶牛布病阳性率为3.26%;奶牛结核病阳性率为0.72%;结核菌素变态反应与牛结核r-干扰素ELISA试验阳性符合率为100%。     

四种方法检测广西奶水牛结核病的比较

应用牛结核菌素对奶水牛进行牛结核病皮内变态反应的检测,然后对皮内变态反应阳性牛采样进行分离培养、γ-干扰素ELISA和聚合酶链反应检测,比较这四种检测方法的符合率。结果共对1850头奶水牛进行皮内变态反应检测,皮内变态反应阳性的奶水牛有78头,从78头反应阳性的奶水牛中分离鉴定为牛分枝杆菌的有2份,γ-干扰素ELISA方法检测为牛分枝杆菌阳性的有5份,PCR方法鉴定阳性的有4份;阳性检出率以变态反应为最高78/1850(4.21%),γ-干扰素ELISA方法为5/78(0.27%),PCR检测方法为4/78(0.21%),而分离培养为最低2/78(0.105%)。变态反应与分离鉴定的符合率最低,为0.105%;γ-干扰素ELISA方法、PCR方法与分离鉴定的符合率较接近,分别为40%和50%。γ-干扰素ELISA检测方法和PCR检测方法具有较好的特异性,可以作为变态反应检测的补充。     

新疆阿勒泰地区牛结核病流行病学调查

本试验采集2015-2019年阿勒泰地区8个乡镇的牛只进行牛结核病的监测,通过抽样(N=156)对比γ-干扰素ELISA试验及PCR方法与牛型结核菌素皮内变态反应(PPD)进行对比,PCR检测阳性率为17.31%;γ-干扰素ELISA检测为16.67%,PPD检测为16.03%,综合分析,最终决定用PCR方法进行流行病学调查。2015-2019年牛结核病试验结果显示:5年内共监测64 442头牛,阳性114头,平均阳性率为0.18%,从2015年的0.22%降至2019年的0.09%;其中,2015年阳性检出率最高,达到0.22%(27/12 155)。对2015-2019年阿勒泰地区不同乡镇牛结核病监测结果进行统计得知,C乡镇的阳性率为0.02%(1/6 531);其余乡镇阳性率分别为0.16%～0.25%不等。此次结果可为今后牛结核病的有效控制和逐步净化提供部分参考依据。     

牛γ-干扰素EIA与TST检测牛结核病的比较

采用牛γ-干扰素EIA（酶免疫分析）与结核菌素皮内试验（TST）两种方法对某奶牛场中182头奶牛进行牛结核病的检测,并对牛γ-干扰素EIA与TST两种检测方法进行比较。结果：TST检出阳性123份、可疑20份、阴性39份,牛γ-干扰素EIA检出阳性58份、阴性124份,TST的阳性率大于牛γ-干扰素EIA,EIA与TST相比,敏感性为30.30%、特异性为82.05%、符合率为39.56%。     

不同监测方法在奶牛结核病检疫中的应用

为了解牛型提纯结核菌素PPD皮内变态反应试验和牛结核γ-干扰素ELISA试验的相关性,对规模牛场先进行牛型PPD皮内变态反应试验,采集检疫阳性牛和部分阴性牛抗凝血进行牛结核γ-干扰素ELISA试验,通过试验结果找出两者之间的相关性,研究牛结核γ-干扰素ELISA试验在牛结核病检疫中的可行性。     

新疆边境地区奶牛结核病流行病学调查研究

首先用国标(PPD)进行检测,对阳性牛开展进口牛型、禽型结核菌素(PPD)试验,同时进行γ-干扰素试验等验证及流行病学调查,收集各地相应流行菌株,有条件地开展血清学试验及分子流行病学研究工作。每年在定点4个牛场检测样品数为700份,三年项目执行期间去检测奶牛5406头。国产PPD进行检测,检出阳性牛59头,阳性率为1.09%,欧盟PPD比较试验检出阳性牛47头,γ-干扰素试验检出阳性牛24头,国产(PPD)试验与γ-干扰素试验的比较符合率为41%。实验结果显示,国内产结核菌素敏感性较高,进口结核菌素敏感性适中,可以看出PPD试验特异性较低,会出现一定比列的假阳性,造成误判,而γ-干扰素试验有较强的特异性。通过这三年对定点地区定点牛群奶牛结核病的连续检测,无害化处理阳性牛,使定点牛群的阳性感染率同比下降显著。     

牛结核γ-干扰素ELISA检测方法在检疫工作中的应用

为评价牛γ-干扰素ELISA检测方法检测牛结核的效果及国产试剂盒的检测效果,本试验首先将国产试剂盒与Prionics试剂盒对42份相对阳性的样品和105份相对阴性的样品进行对比研究。然后对5个规模化牛场的3000头奶牛首先进行国产单纯结核菌素颈部皮内变态反应试验,3天后选取皮内变态反应阳性和可疑及部分阴性牛共418头,进行牛γ-干扰素试验。结果国产试剂盒对阳性和阴性样品的检测敏感性和特异性分别为95.2%和100%,与Priobics试剂盒的符合率为99.3%。表明国产试剂盒与进口试剂盒的检测能力一致,牛γ-干扰素检测方法准确可靠。5个牛场的3000头奶牛单纯结核菌素颈部皮内变态反应试验阳性为138头,可疑105头。γ-干扰素试验对418头奶牛的检测,其中阳性74头,与颈部皮内变态反应（可疑牛暂时视为阴性）的符合率为60.5%。     

γ-干扰素ELISA检测方法在牛结核病流行病学调查中的应用

[目的 ]了解宁夏贺兰县奶牛结核病的流行情况,为制定宁夏地区牛结核病净化方案提供参考。[方法 ]2015年采用皮内变态反应和γ-干扰素ELISA检测方法,对宁夏贺兰县2个规模化奶牛场开展牛结核病流行病学调查,共检测奶牛2 230头。[结果 ]在2个规模化奶牛场累计检测出皮内变态反应阳性奶牛79头,皮内变态反应和γ-干扰素ELISA双阳性奶牛72头,双阳性率为3.23%(72/2 230)。[结论 ]γ-干扰素ELISA检测方法准确度较高;在对牛群进行结核病检测时,先以皮内变态反应方法筛测,再结合γ-干扰素ELISA检测结果确诊,更有利于牛结核病的检测与净化。     

变态反应检测水牛结核病标准的探索

通过比较水牛与黄牛、黑白花牛的皮厚,探索出水牛皮厚与结核菌素(PPD)敏感性的关系,进而说明应用现行牛结核检测标准检疫水牛阳性率过高,需建立水牛PPD检测标准。本试验对广西不同地区牛场不同年龄段的水牛、相同年龄段的水牛与黄牛、黑白花奶牛的皮厚及注射结核菌素前后皮厚差进行比较,水牛PPD不同用量单位的对比,并将PPD检测判为可疑或阳性的水牛样品应用γ-干扰素方法及PCR法进行对比检测。结果对1～2岁、3～4岁和5～7岁组的水牛共1 240头、黄牛487头、黑白花牛1 284头进行测试比较,水牛的皮厚及注射结核菌素后的皮厚差远远大于黄牛和黑白花牛的皮厚差,差异显著(P0.05);对不同年龄段的水牛共1 467头的皮厚及注射结核菌素后的皮厚差进行测试,不同年龄段的水牛的皮厚及注射结核菌素后的皮厚差差异不显著(P0.05);对注射不同用量的PPD进行比较检测,水牛最佳PPD用量为2 000 U;对经PPD变态反应检测判为可疑或阳性的水牛共148头,采用γ-干扰素ELISA和PCR方法进行检测,结果只有1份皮厚差超过11.0 mm的样品应用γ-干扰素ELISA检测为阳性,其余应用这两种方法检测都为阴性,进一步证明现行牛结核检测标准不适用于水牛,急需针对水牛的结核检测标准的出台。     

牛结核病刺激上清液在布病检疫中的应用

牛结核病和布病的检疫常称之为"两病"检疫。近年来牛结核病γ-干扰素酶联免疫吸附试验(ELISA)的应用日益增加,为了简化"两病"检疫,笔者尝试将牛结核病检测样品即牛型结核菌素(PPD)刺激上清液用于布病检测,用虎红平板凝集试验(RBT)、间接ELISA(i ELISA)试验和试纸条试验同时检测90头牛的血清样品和刺激上清液样品。结果表明:在RBT中,牛型PPD刺激上清液样品均呈非特异性阳性反应;在i ELISA试验中,血清样品的S/P值(样品OD值/阳性对照OD值×100%)平均值(194.84%)显著高于刺激上清液样品的平均值(183.57%,P0.05),调整刺激上清液样品的判定标准后进行卡方检验,两种样品的结果差异不显著(P0.05);在试纸条试验中,刺激上清液样品的阳性率(43.33%)显著大于血清样品的阳性率(28.89%,P0.05)。说明牛结核病γ-干扰素ELISA检测样品不能作为布病RBT和试纸条试验的样品,但可以作为布病i ELISA试验的样品。     

牛型结核菌素皮内变态反应试验和γ-干扰素ELISA试验检测奶牛结核病的比较研究

本研究采用PPD皮内变态反应试验和γ-干扰素ELISA试验,对甘肃省3个地区的1585头奶牛进行结核病检测.结果表明,PPD皮内变态反应共检出7份阳性样品;经γ-干扰素ELISA检测2份为阳性、其余5份为假阳性或禽型阳性,假阳性或禽型阳性样品再经细菌分离鉴定表现为阴性;PPD皮内变态反应检出的21份疑似样品再经γ-干扰素ELISA检测,表现为禽型阳性、假阳性或阴性;PPD皮内变态反应阴性样品经γ-干扰素ELISA试验检测,结果为阴性或禽型阳性.在检测奶牛结核病时,PPD皮内变态反应试验特异性较差,γ-干扰素ELISA试验结果与牛结核分枝杆菌细菌分离鉴定结果一致,而且该技术敏感性、特异性和鉴别假阳性均优于PPD皮内变态反应试验.     

双抗体夹心ELISA检测水牛γ-干扰素方法的建立及初步应用

纯化2株针对水牛γ-干扰素的单克隆抗体,其中1株进行HRP标记作为检测抗体,另1株单抗作为捕获抗体,建立检测水牛γ-干扰素的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)。通过对封闭液、抗体稀释液等条件进行优化,经过方阵滴定试验确定捕获抗体的最佳浓度为625 ng/mL,检测抗体的工作效价为1∶100;所建立的DAS-ELISA方法检测灵敏度25 ng/mL,批内变异系数为0.52%～6.86%,批间变异系数为5.6%～7.07%。采集60头单次皮内注射结核菌素的水牛肝素钠抗凝全血,利用牛结核杆菌特异性抗原rHIS-CFP10/ESAT-6融合蛋白体外刺激外周血淋巴细胞释放IFN-γ,用所建立的夹心ELISA检测所有样本,与皮内变态反应试验比较,结果显示,自制夹心ELISA方法检测水牛结核病的敏感性为62%,特异性为87%,符合率为75%,表明可应用于水牛结核病的检测。     

皮试法与ELISA法在奶牛结核病检测中的对比试验

通过单纯颈部皮内变态反应(SICT)、比较变态反应(SICCT)检测方法、γ-干扰素ELISA和ELISA 4种方法,同时检测上海2个奶牛场的222头奶牛。结果发现:阳性检出率以颈部皮内变态反应为最高(67.6%)、ELISA(44.1%)和γ-干扰素ELISA居中(31.1%),比较变态反应最低(13.1%);单纯的颈部皮内变态反应与2种ELISA的符合率较差,而比较变态反应与2种ELISA具有较好的符合率;在变态反应阴性牛中,仍然检出了部分ELISA阳性牛。由此认为,先以变态反应检疫牛群,再随之实施抗体检测,会更有利于结核病牛场的净化与防制。     

夹心ELISA检测牛γ-干扰素方法的建立及应用

为建立检测牛γ-干扰素(Bo IFN-γ)的双夹心ELISA方法,将前期获得的针对Bo IFN-γ的单克隆抗体作为捕捉抗体进行夹心ELISA检测天然Bo IFN-γ,结果表明单克隆抗体Bo IFN-γ-6E5、Bo IFN-γ-3E1、Bo IFN-γ-3C2三株能捕捉到天然的牛γ干扰素。经过条件摸索和优化,最终建立了以3E1/HRP-6E5为最佳组合的检测Bo IFN-γ的夹心ELISA方法。用建立的双夹心ELISA检测方法和进口试剂盒同时对66份血样进行检测,结果表明双夹心ELISA方法和进口试剂盒检测结果的符合率达95.45%,说明该方法能有效地对牛结核病γ-干扰素进行检测。     

γ-干扰素法检测奶牛结核病的试验报告

本试验对26头经结核菌素皮内变态反应检测出6头阳性的牛群进行γ-干扰素检测,结果只有2头是阳性。进一步验证使用γ-干扰素释放试验对结核菌素皮内变态反应阳性的牛群进行筛查和确诊可以排除假阳性牛。省去3次牛型结核菌素皮内变态反应检测的繁琐,既减少养殖场户经济损失,又节省人力、物力。     

两种奶牛结核病检测方法的比较研究

牛结核病是由牛分枝杆菌引起的一种人兽共患的慢性消耗性传染病,严重威胁着人类的健康。因此,对该病的定期检疫对公共卫生和食品安全具有重大意义。本研究采用提纯结核菌素(PPD)皮内变态反应试验和γ-干扰素(IFN-γ)ELISA试验,对扬州市的892头奶牛进行结核病检测。结果表明,PPD皮内变态反应检出的31头牛型结核阳性牛和可疑牛中,经IFN-γELISA试验检测仅检出9头禽型结核可疑牛。PPD皮内变态反应试验特异性较差,出现了较高的假阳性率,其原因可能与禽结核分枝杆菌感染或其他非特异性因素的干扰有关。     

不同ELISA试剂盒检测牛结核病效果比较

本研究对自行研制的检测牛γ干扰素的双夹心ELISA试剂盒与商品化试剂盒进行了比较。用自行研制的双夹心ELISA试剂盒对1255份经牛PPD刺激的牛全血培养上清样品进行了检测,结果发现94份阳性样品,检测阳性率为7.5%。同时用进口的ELISA试剂盒对其中的472份样品进行了对比检测,两者阳性符合率为97.6%,阴性符合率为96.4%,总符合率为96.6%。比较检测结果证明,自行研制的检测牛γ干扰素的双夹心ELISA试剂盒有很好的应用前景。     

应用ELISA方法检测牛结核分枝杆菌γ-干扰素

为了验证ELISA方法检测牛结核分枝杆菌γ-干扰素的可行性,应用建立的ELISA方法检测30份牛全血,结果为阴性和阳性对照均成立,30份全血的牛结核分枝杆菌γ-干扰素均为阴性,结果表明应用ELISA方法检测牛结核分枝杆菌γ-干扰素诊断牛结核分枝杆菌可行,可以适用于牛结核分枝杆菌的大规模监测。     

重庆三峡库区肉牛结核病布鲁菌病的调查

采用牛提纯结核菌素皮内变态反应结合γ-干扰素试验、虎红平板凝集试验、试管凝结试验及ELISA法分别对重庆三峡库区肉牛结核病、布鲁菌病进行了抽样检测。结果显示,该区域肉牛结核病阳性检出率为1.2%,布鲁菌病阳性检出率为1.04%。其中,库区东北部区县肉牛结核病、布鲁菌病的阳性检出率均为最高,分别为1.83%、1.14%;3种肉牛养殖规模条件下,个体散养农户牛群结核病、布鲁菌病的阳性检出率均为最高,分别为2.21%、2.94%;所调查的3个年龄段牛群中,19月龄以上牛群结核病、布鲁菌病的阳性检出率最高,分别为2.91%、4.85%。     

两种牛结核病检测方法对经济效益影响的比较

从试剂成本、人工成本、奶牛产奶量等方面,对采用皮内变态反应和γ-干扰素ELISA检测方法检测奶牛场牛结核病对经济效益的影响进行对比。结果表明:在测试期(11d)内,采用牛结核病γ-干扰素ELISA方法较运用皮内变态反应方法,每头奶牛产生的经济效益高374.0元(按广西当前鲜奶收购价计算)。对奶牛场进行牛结核病检测时,选择γ-干扰素ELISA方法更利于保障经济效益的最大化。