杨树叶片高效离体再生系统的构建

利用速生杨树（Populus.tomentosa Car）叶片为外植体建立离体培养体系,结果表明,叶脉处和叶柄处,极易发生不定芽;芽大多是从叶片上直接产生;培养基中BA浓度是影响不定芽形成的关键;BA浓度在05~2.0mg/L范围内均有不定芽发生,BA 1.0mg/L与NAA 0.05mg/L搭配有利于不定芽的形成,培养基中添加GA3 0.1~0.2mg/L可以提高不定芽的发生频率,增殖培养基采用MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.05mg/L+GA3 0.05mg/L,不仅能够快速增殖,而且芽苗粗壮,玻化率降低。生根过程采用过渡培养效果较好,ABT3生根粉的加入,使试管苗质量大为提高,在此基础上建立起杨树叶片离体再生系统,利用该体系能够获得高的芽苗再生频率,但是不同品种间略有差异。     

杜梨子叶离体再生体系的建立

为梨树品种改良、遗传转化及功能验证奠定基础,以杜梨(Pyrus betulaefolia)子叶外植体为试验材料,研究了基本培养基、植物生长调节剂、暗培养时间、碳源、外植体等因素对其再生能力的影响,筛选出适合杜梨不定芽分化的培养及生根培养条件,建立杜梨子叶的再生体系。结果表明,子叶诱导不定芽生长最佳培养基为NN69+6-BA5mg/L+IBA0.05mg/L+蔗糖35g/L,再生频率为100%;出芽后最佳继代培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,平均再生芽数4.84;诱导不定芽生根最佳培养基为1/2MS+IBA1.0mg/L+蔗糖30g/L,生根率为80%。通过上述条件的优化,建立了杜梨子叶高效的再生体系。     

不结球白菜亮白叶再生体系的优化

摘 要：本文以不结球白菜品种亮白叶为实验材料,研究不同外植体类型和不同生长调节剂配比等因素对其不定芽分化频率的影响。结果表明,对不结球白菜品种中再生比较困难的品种亮白叶来说,以下胚轴、子叶及子叶柄为外植体的诱导频率存在明显差异。以生长5-6天无菌苗的子叶柄为外植体,在培养基为MS+6-BA（5 mg/L）+NAA（0.1 mg/L）+ AgNO3（4mg/L）的培养条件下,亮白叶分化不定芽的再生频率最高,可达59.5%;这为将来该不结球白菜转化体系的建立奠定了坚实基础。     

百脉根离体再生体系的优化

本研究以百脉根叶片、叶柄、茎段、花柄和根组织为外植体,比较了它们在不同激素配比培养基中的愈伤组织、不定芽及不定根的分化情况,优化并建立百脉根组织培养再生体系。研究结果显示:除根外,其它组织均可通过组织培养获得再生植株;外植体类型是影响愈伤组织、不定芽及不定根诱导的主要因素,叶片外植体的诱导效果最好。优化的百脉根组织培养再生体系为:使用叶片外植体,愈伤组织诱导培养基为MS+3.0 mg/L 6BA+0.1 mg/L NAA、芽分化培养基为MS+0.3 mg/L KT、生根培养基为1/2 MS+0.4 mg/L IBA。通过该体系60~75 d可获得百脉根再生植株,约为无性繁殖周期的1/3~1/2。     

黄瓜离体器官再生体系的优化

优化通过器官直接再生方式的黄瓜离体再生体系,为遗传转化奠定基础。以‘长春密刺’黄瓜的子叶节为外植体,探讨在黄瓜再生过程中,适宜的无菌苗获得培养基、适宜的外植体类型、无菌苗的适宜苗态、不定芽诱导培养基和芽伸长培养基中适宜的激素组合与比例。结果表明,最适的无菌苗获得培养基为1/2MS+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂(pH=5.8);不同外植体的再生率为子叶节>下胚轴>子叶;子叶完全出壳但未展平的无菌苗比其他苗态的再生率高,子叶展平后,再生率迅速下降;当6-BA（6-苄基氨基嘌呤）和ABA（脱落酸）浓度一定时,最适的AgNO₃为2 mg/L;当AgNO₃浓度一定时,6-BA和ABA浓度的最佳组合为1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L ABA;不定芽诱导的最适培养基为MS+1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L ABA+2 mg/L AgNO₃,出芽率为90%,每外植体出芽数为3.5;芽伸长培养基中加入0.10 mg/L 6-BA,能够促进再生芽的伸长。本研究成功优化了黄瓜的再生体系,得到了健壮的黄瓜成株。     

羊踯躅离体叶片再生体系的建立

为了建立羊踯躅规模化无性繁殖和高效遗传转化体系,以羊踯躅试管苗叶片为外植体,探讨了基本培养基类型、叶片切割方式、叶位、暗培养时间及不同激素组合等因素对叶片再生不定芽的影响。结果表明：WPM培养基为最适基本培养基。垂直于主脉切割一刀并去除叶柄和叶稍的叶片再生不定芽的频率最高。羊踯躅试管苗中、上部叶片的再生能力较强,其中第5和第6位叶的不定芽诱导效果最佳。初始暗培养有利于叶片再生,暗培养10~15天的效果最佳。诱导羊踯躅试管苗叶片再生不定芽的适宜培养基为WPM+TDZ 1.0 mg/L+IAA 1.0 mg/L,其不定芽分化率和平均分化芽数分别达到82.3%和7.2个。     

黄花牛耳朵离体叶片不定芽的诱导及植株再生

以黄花牛耳朵的(Primulina lutea Yan LiuY.G.Wei)叶片为外植体,通过不定芽的诱导、增殖培养、生根培养等步骤建立其离体再生体系。结果表明,诱导黄花牛耳朵不定芽产生的最佳培养基为MS+6-BA 4.5 mg/L+NAA 0.03 mg/L,诱导率为93.67%,在此诱导培养基上获得的不定芽多;不定芽增殖的最佳培养基为MS+KT 3.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L,增殖系数为9.82,在此增殖培养基上获得的不定芽长势好、健壮;不定芽生根的最佳培养基为1/2 MS+IBA 0.3 mg/L,生根率为94.67%,生根时间最短。本研究以黄化牛耳朵的叶片为外植体,通过不定芽诱导途径成功获得了其再生植株,建立了离体培养体系。     

杉木子叶和下胚轴的器官发生与体胚发生

以杉木实生苗的子叶和下胚轴为起始外植体,研究了基本培养基、6-BA、TDZ、苗龄等因素对器官发生和体胚发生的影响.研究结果表明：基本培养基、6-BA、TDZ及苗龄对子叶和下胚轴不定芽发生和体胚发生均产生显著影响.DCR＋6-BA 1.0mg/L＋TDZ 0.003mg/L＋NAA 0.1mg/L是子叶和下胚轴诱导不定芽发生及下胚轴诱导体胚发生的最佳培养基;DCR＋6-BA 1.0mg/L＋TDZ 0.002mg/L＋NAA 0.1mg/L对子叶诱导体胚最有效;不定芽在DCR基本培养基中可有效伸长;1/4MS＋IBA 0.2mg/L＋NAA 0.1mg/L可有效诱导不定芽生根.     

沙田柚遗传转化再生体系的建立

以沙田柚的实生苗不同外植体为对象,进行了沙田柚遗传转化再生体系建立研究。研究结果表明：以实生苗上胚轴作为外植体,以MS无机盐＋100 mg/L肌醇＋0.2 mg/L维生素B1+1 mg/L维生素B6+1 mg/L烟酸+3％蔗糖＋0.8％琼脂（pH5.8）＋5 mg/L 6-BA为不定芽诱导培养基,暗培养7 d后,转移至光/暗周期16/8 h的条件下培养,不定芽的分化率高达91.1%;不定芽在1/2MS基本培养基＋3％蔗糖＋0.7％琼脂＋1.5 mg/L IBA＋0.2%活性炭的生根培养基,生根率高达80％;以卡那霉素作选择剂时,选择浓度为50mg/L。     

花椰菜高频离体再生体系的构建

以147花椰菜和庆农65天2个花椰菜品种为试材,研究了影响花椰菜不定芽再生的各个因素,建立花椰菜高效离体再生体系。结果表明:基因型、外植体类型、激素的类型和配比等是影响花椰菜再生的主要因子。品种对再生频率影响较大,庆农65天的外植体再生频率高于147花椰菜;不同外植体再生频率也存在差异,下胚轴的再生频率显著高于子叶。147花椰菜取用7 d龄无菌苗的子叶和下胚轴,培养在MS+6-BA1 mg/L+NAA 0.2 mg/L培养基上培养效果最佳,庆农65天则培养在MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L培养基上效果最佳;再生芽在MS培养基,生根率达100%。本研究为花椰菜基因遗传转化构建高效的再生体系奠定基础。     

‘黑珍珠’番茄植株再生体系的研究

为了研究‘黑珍珠’番茄植株再生,以‘黑珍珠’番茄幼嫩叶片为外植体诱导愈伤组织,通过愈伤组织诱导培养、愈伤组织分化培养、不定芽增殖培养、生根培养和试管苗移栽,建立高效快速的‘黑珍珠’番茄再生体系。结果表明：最适宜的诱导叶片愈伤组织的培养基为MS+ 1.0 mg/L 6-BA+ 0.1 mg/L NAA,叶片外植体愈伤组织诱导率最高可达98.2%;诱导出的愈伤组织在MS+ 1.5 mg/L 6-BA+ 0.2 mg/L IBA培养基上能很好的分化出不定芽;MS+4.0 mg/L KT+ 0.01 mg/L IBA 培养基可实现不定芽芽增殖;最适宜的生根培养基为1/2MS+ (0.05~0.08) mg/L NAA,试管苗移栽成活率达92%。     

长寿花叶盘离体培养及植株高效再生研究

以长寿花叶盘做为外植体进行再生体系的建立,通过一定的激素组合诱导,结果表明MS+6-BA2.0 mg/L +NAA0.5 mg/L组合愈伤组织诱导率可达86.6%,再生率达83.3%,外植体叶盘的摆放方式也对再生有显著影响,叶盘叶面向上放置,有利于其再生,反之不利于再生。加入AgNO3（4.0mg/L）溶液,对芽苗的分化有影响,再生苗开瓶练苗一周后容易生根,移苗入土后生长正常。     

匈牙利速生型刺槐遗传转化再生体系的建立

（北京林业大学生物科学与技术学院,北京 100083）     

蛇皮果的组织培养研究

建立蛇皮果的组织培养技术平台,为大规模生产蛇皮果种苗奠定理论基础。以蛇皮果的种胚为外植体,研究植物生长调节剂的种类和浓度对丛芽诱导及根系诱导的影响。结果表明,丛芽诱导需要6个月,最适丛芽诱导培养基为MS+2ip 8.0 mg/L+NAA 0.25 mg/L,丛芽诱导率可达到41.7%;最适生根培养基为1/2MS+IBA 1 mg/L+ABT 1 mg/L,生根率为46.9%。将已生根并高度大于5 cm的组培苗移植于黄心土+珍珠岩的营养袋中,成活率可达到80%以上。     

油柿叶片离体再生体系的建立

以油柿叶片为材料开展了离体培养研究,旨在建立其再生体系,为转基因操作奠定基础。结果表明,油柿叶盘在MS（1/2N）+IBA0.1mg/L+ ZT3.0mg/L培养基上,经前期暗处理3周后移至正常光照下培养的再生效果最好,其不定芽再生率和外植体平均不定芽数最高,分别为80.5%和（4.1±0.8）个。再生苗接种于添加IAA和IBA各0.5mg/L的MS(1/2N)培养基上,4周时生根率可达92%,成功地建立了油柿叶片的离体再生体系。     

Medium, Explant and Genotype Factors Influencing Shoot Regeneration in Oilseed Brassica spp.

The effects of culture media, explants and genotypes on shoot regeneration in oilseed Brassica species were examined in this study. The maximum shoot regeneration frequency was obtained in Murashige and Skoog medium supplemented with 3 mg l^?1 6‐benzylaminopurine and 0.15 mg l^?1 1‐naphthaleneacetic acid. The addition of 2.5 mg l^?1 AgNO₃ was very beneficial to shoot regeneration in B. napus and Ag₂S₂O₃ (10 mg l^?1) was even superior to AgNO₃ (2.5 mg l^?1). Explant age, explant type and carbon source also significantly affected shoot regeneration. Four‐day‐old seedlings of cotyledonary explants showed the maximum shoot regeneration frequency and number of shoots per explant. Of the four explants – peduncles, hypocotyls, cotyledons and leaf petioles – cotyledons produced the highest shoot regeneration frequency (56.67 %). Four carbon sources – glucose, maltose, starch and sucrose – were compared for their respective effects on shoot regeneration from cotyledonary explants. Sucrose appeared to be the best carbon source for shoot regeneration with the highest shoot regeneration frequency (76.00 %). Considerable variation in shoot regeneration from cotyledonary explants was observed both between and within Brassica species. The shoot regeneration frequency ranged from 10.00 % for cv. R5 (B. rapa) to 83.61 % for cv. N1 (B. napus). Two B. napus, one B. carinata and one B. juncea cultivars exhibited shoot regeneration frequency higher than 70 %. In terms of the number of shoots produced per explant, B. rapa showed the highest variation, ranging from 5.64 for cv. R3 to 1.33 for cv. R5. Normal plantlets were regenerated from all induced shoots and developed normally. The regenerated plants were fertile and identical with the source plants.     

Plant Regeneration from Callus Cultures of Brassica carinata A. Br. and its Implications to Improvement of Oil Seed Brassicas

Protocols of plant regeneration have been developed for Brassica carinata for creating somaclonal variation for plant type and adaptability, so that this species can fit into cropping systems in Indian agriculture. The response of cotyledonary and stem explants was assessed for callus induction and shoot regeneration on MS and B₅ basal media containing different combinations of auxin and cytokinin concentrations. MS medium supplemented with BA and NAA favoured callus induction. Supplementing MS with combinations of BA and IAA, as also with BA alone, regenerated shoots from the ex pi ants with a high frequency. The frequency of shoot regeneration and the mean number of shoots per explant were higher in cotyledons than in stem explants on identical growth regulator combinations. On B₅ medium, supplemented with BA (2 mg/l) and IBA (0.4 mg/l), compact callus was produced which regenerated shoots on transfer to medium containing BA (0.8 mg/l). Genotypic differences among carinata accessions for regeneration were also observed.     

三种常用抗生素对苎麻种子发芽及子叶再生的影响

本研究测试了卡拉霉素、羧苄青霉素、头孢霉素对于3个不同基因型苎麻子叶再生的影响，还测试了卡拉霉素对于苎麻种子发芽及生长的影响，结果表明：苎麻子叶对于卡拉霉素有着较高的敏感性，20-25mg／L的卡拉霉素就能完全抑制苎麻子叶再生；羧苄青霉素能显著抑制苎麻子叶再生；浓度在500mg／L以下的头孢霉素对苎麻子叶再生没有明显影响。此外，苎麻种子对于卡拉霉素也较敏感，100mg／L卡拉霉素处理30d能使苎麻种子实生苗全部黄化（白化）死亡。     

油菜不同类型外植体组织培养及再生研究

为建立高效的组织培养体系，以甘蓝型油菜杂交品种恢复系627R、621R和616R材料田间种植植株的侧芽、花托和无菌种子实生苗下胚轴为外植体，探索不同苗龄、预培养时间、预培养基、愈伤分化培养基、诱导出芽培养基以及成苗壮苗培养基中激素配比对芽再生、成苗植株生长势的影响。结果表明：无菌苗快速繁殖体系中，发芽6 天的无菌苗下胚轴或者子叶在预培养（MS+ 2.0 mg/L 2,4-D+ 1.0 mg/L 6-BA+ 30 g/L 蔗糖+ 8 g/L 琼脂，pH 5.85）3 天后转移到分化培养基MS+ 3 mg/L 6-BA+ 1.0 mg/L NAA+5 mg/L AgNO3+ 30 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂(pH 5.85)，或者MS+ 3 mg/L 6-BA+ 1.0 mg/L IAA+ 5 mg/LAgNO3+ 30 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂(pH 5.85)生长，可以获得较高的芽再生频率，对于田间生长到抽薹开花期植株取样的外植体，腋芽的出芽频率高于花托培养的出芽频率，但是这2 类外植体在分化培养基（MS+ 10 mg/L 6-BA+ 1 mg/L NAA+ 30 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂，pH 5.85）生长30 天后都有成苗的潜力，上 述外植体经过组织培养出芽后转移到添加矮壮素的培养基（MS+15 mg/L CCC+15~20 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂，pH 5.85）上继续生长30 天，能够得到根系发达、生长势强的植株。甘蓝型油菜优良恢复系建立的组织培养体系能够快速获得生长势优的油菜植株，加速油菜良种的繁殖与评价。