甘蓝型油菜花茎高效再生体系研究

研究了甘蓝型油菜花茎外植体高效诱导不定芽的再生体系,结果表明：以含有2,4-D（0.5~1.0mg/L）的培养基对外植体进行预培养,以及在分化培养基中加入AgNO3（2~6mg/L）,可显著降低外植体褐化坏死的频率,提高了不定芽的发生频率及其再生能力;6BA（2.5 mg/L）与NAA（0.1mg/L）配合使用有利于提高不定芽发生频率;再生的不定芽90%可长根     

花生不定芽分化及植株再生的研究

为进一步探索和完善高频植株再生体系并扩大基因型的研究,以8个花生品种为材料,对幼叶不同部位（叶片顶端、中间切段、叶片基部）的切段、子叶、上胚轴和下胚轴外植体,接种到添加1 mg/L NAA和6 mg/L BAP的MSB5培养基上,10天后将形成的愈伤组织转移至添加10 mg/L BAP或添加3 mg/L BAP和1 mg/L ABA的再分化培养基上进行培养,诱导不定芽分化。结果表明,6天叶龄叶片中间切段不定芽分化频率达到了91.4%,上胚轴26.7%,下胚轴12.5%和子叶0%;花生品种8823幼叶外植体获得了的91.4%不定芽分化率,生根植株经驯化后移至砂土中,正常开花结果。因此,幼叶外植体分化不定芽频率明显高于子叶、上胚轴和下胚轴;6天叶龄的叶片中间切段为最佳;不同基因型不定芽分化率存在明显差异。     

羊踯躅离体叶片再生体系的建立

为了建立羊踯躅规模化无性繁殖和高效遗传转化体系,以羊踯躅试管苗叶片为外植体,探讨了基本培养基类型、叶片切割方式、叶位、暗培养时间及不同激素组合等因素对叶片再生不定芽的影响。结果表明：WPM培养基为最适基本培养基。垂直于主脉切割一刀并去除叶柄和叶稍的叶片再生不定芽的频率最高。羊踯躅试管苗中、上部叶片的再生能力较强,其中第5和第6位叶的不定芽诱导效果最佳。初始暗培养有利于叶片再生,暗培养10~15天的效果最佳。诱导羊踯躅试管苗叶片再生不定芽的适宜培养基为WPM+TDZ 1.0 mg/L+IAA 1.0 mg/L,其不定芽分化率和平均分化芽数分别达到82.3%和7.2个。     

杜梨子叶离体再生体系的建立

为梨树品种改良、遗传转化及功能验证奠定基础,以杜梨(Pyrus betulaefolia)子叶外植体为试验材料,研究了基本培养基、植物生长调节剂、暗培养时间、碳源、外植体等因素对其再生能力的影响,筛选出适合杜梨不定芽分化的培养及生根培养条件,建立杜梨子叶的再生体系。结果表明,子叶诱导不定芽生长最佳培养基为NN69+6-BA5mg/L+IBA0.05mg/L+蔗糖35g/L,再生频率为100%;出芽后最佳继代培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,平均再生芽数4.84;诱导不定芽生根最佳培养基为1/2MS+IBA1.0mg/L+蔗糖30g/L,生根率为80%。通过上述条件的优化,建立了杜梨子叶高效的再生体系。     

百脉根离体再生体系的优化

本研究以百脉根叶片、叶柄、茎段、花柄和根组织为外植体,比较了它们在不同激素配比培养基中的愈伤组织、不定芽及不定根的分化情况,优化并建立百脉根组织培养再生体系。研究结果显示:除根外,其它组织均可通过组织培养获得再生植株;外植体类型是影响愈伤组织、不定芽及不定根诱导的主要因素,叶片外植体的诱导效果最好。优化的百脉根组织培养再生体系为:使用叶片外植体,愈伤组织诱导培养基为MS+3.0 mg/L 6BA+0.1 mg/L NAA、芽分化培养基为MS+0.3 mg/L KT、生根培养基为1/2 MS+0.4 mg/L IBA。通过该体系60~75 d可获得百脉根再生植株,约为无性繁殖周期的1/3~1/2。     

红花檵木叶片再生不定芽的研究

为了建立红花檵木叶片高效的离体再生体系,解决其基因工程育种的问题,以红花檵木叶片为外植体,探讨了品种、光照条件、激素等因素对叶片离体再生的影响。结果表明：不同品种叶片再生不定芽能力不同,‘玫红细叶青’再生能力最强,其次是‘长叶玫红’,‘花叶2号’叶片再生最难。白光和红光有利于叶片再生,70天后都有不定芽出现。其中白光下的诱导率达50%,红光下诱导率达25%。叶片近轴面接触培养基,再生效率高。适合诱导‘玫红细叶青’再生不定芽适宜培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+ NAA 0.5 mg/L其不定芽分化率为41.6%,适合‘长叶玫红’不定芽分化的组合是MS+6-BA 1.0 mg/L+ NAA 1.0 mg/L其不定芽分化率为33.3%。     

杨树叶片高效离体再生系统的构建

利用速生杨树（Populus.tomentosa Car）叶片为外植体建立离体培养体系,结果表明,叶脉处和叶柄处,极易发生不定芽;芽大多是从叶片上直接产生;培养基中BA浓度是影响不定芽形成的关键;BA浓度在05~2.0mg/L范围内均有不定芽发生,BA 1.0mg/L与NAA 0.05mg/L搭配有利于不定芽的形成,培养基中添加GA3 0.1~0.2mg/L可以提高不定芽的发生频率,增殖培养基采用MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.05mg/L+GA3 0.05mg/L,不仅能够快速增殖,而且芽苗粗壮,玻化率降低。生根过程采用过渡培养效果较好,ABT3生根粉的加入,使试管苗质量大为提高,在此基础上建立起杨树叶片离体再生系统,利用该体系能够获得高的芽苗再生频率,但是不同品种间略有差异。     

窄冠白杨组培快繁与再生体系的建立

以窄冠白杨为试材,对其组培快繁与再生体系的建立进行了初步的研究。研究表明,抗氧化剂聚乙烯吡咯烷酮（PVP）和抗坏血酸（Vc）能有效降低外植体的褐化;该品种外植体增殖的最适培养基为1/2MS+BA0.3mg/L+NAA0.05mg/L,平均分化率为87%,增殖系数达7.5倍,与其它处理组合均呈极显著差异。硝普钠（SNP）12mg/L极显著地促进叶片不定芽分化,其再生频率与再生芽个数分别达到96.5%与8.2。窄冠白杨适宜的生根培养基为1/2MS+IBA0.3mg/L。     

胡麻品种内亚7号下胚轴组织培养再生体系的建立

以胡麻品种内亚7号下胚轴为外植体,探索其下胚轴进行组织培养的培养基条件。结果表明,用75%的乙醇和1g/L的HgCl2溶液各处理种子3min是最佳的消毒方法。用MS+3.0mg/L 6-BA+0.25mg/L IAA培养基诱导外植体的出愈率最高,为98.48%,生长速率最大,是愈伤组织生长的最佳培养基。用MS+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L IAA培养基诱导不定芽的分化率最高,为95%,不定芽增殖系数最大,为7.67,是不定芽分化及增殖的最佳培养基;用MS+0.01 mg/L6-BA+0.75mg/L IAA培养基诱导不定芽的生根率最高,为52.26%,是不定芽生根的最佳培养基。由此建立的组织培养再生体系,其出愈率、愈伤组织的生长速率及不定芽的诱导率、增殖率高,生根情况良好,可作为胡麻品种内亚7号的适宜组织培养再生体系。     

白花芥蓝离体再生植株的研究

以白花芥蓝品种"明丰香菇"为试验材料,系统研究了不同消毒组合处理对种子发芽的影响,不同激素配比与外植体类型对不定芽分化及再生的影响。分析可得:酒精15 s+5%NaClO 6 min消毒处理效果最好;带柄子叶的愈伤发生率和不定芽分化频率均高于下胚轴,其中带柄子叶的最优激素组合为0.03 mg/L NAA+0.75 mg/L 6-BA,愈伤发生率为98.3%,不定芽分化率达80%,再生系数为3.03;分化的不定芽在添加0.03 mg/L NAA的MS培养基上生根效果最好,生根率达100%,形成的不定根多且粗壮。试管苗移栽成活率高达93%。试验结果为芥蓝遗传转化研究提供了依据和参考。     

白皮松组织培养研究

为建立高效的再生体系,以白皮松成熟胚,子叶为外植体,经过初代培养和继代增殖培养,研究了不同植物生长调节剂种类及浓度、活性炭、GA3在组培各阶段的作用。结果表明：适合子叶诱导芽的培养基为MS+6-BA 3 mg/L+NAA 0.1 mg/L+TDZ 0.01 mg/L,适合胚诱导芽的培养基为MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.1 mg/L;适宜的继代培养基为MS+NAA 0.05 mg/L;以预处理胚（切除下胚轴）为外植体适宜生根培养基为1/2MS+IBA 0.3 mg/L;活性炭对芽增殖无显著作用,随活性炭浓度提高增殖系数有下降趋势;适量的活性炭和GA3可有效促进芽伸长。     

安祖花愈伤组织再生体系的建立及染色体检变

试验以安祖花幼嫩叶片和无菌苗叶柄为外植体,通过愈伤组织诱导途径,建立快速高效的安祖花再生体系。结果表明：最适宜的诱导叶片和叶柄愈伤组织的培养基分别为1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D和1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D;诱导出愈伤组织在1/2MS+2.0 mg/L KT+0.1 mg/L NAA培养基上能很好的分化不定芽苗;1/2MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基可对再生芽实现增殖与复壮;最适宜的生根培养基为1/2MS+0.05 mg/L NAA。试验通过观察安祖花继代过程中愈伤组织细胞染色体变异的情况,发现随着继代次数的增多染色体变异细胞的频率也随之上升,并且染色体变异多为非整倍体变异。     

大白菜‘津育60’遗传转化前后组织培养条件的优化

为大白菜的遗传转化研究建立较高频率的组织再生体系,选择白菜子叶-子叶柄作为外植体,通过正交试验优化了农杆菌侵染前后的组织培养条件。结果显示：侵染前的最佳分化培养基组合为MS培养基+3 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+4 mg/L AgNO3+2%蔗糖+0.8%琼脂,侵染后的最佳分化培养基组合为MS培养基+3 mg/L 6-BA+0.01 mg/L NAA+4 mg/L AgNO3+2%蔗糖+0.8%琼脂。6-BA与NAA的浓度比由侵染前的3:0.3调整为3:0.01。     

沙田柚遗传转化再生体系的建立

以沙田柚的实生苗不同外植体为对象,进行了沙田柚遗传转化再生体系建立研究。研究结果表明：以实生苗上胚轴作为外植体,以MS无机盐＋100 mg/L肌醇＋0.2 mg/L维生素B1+1 mg/L维生素B6+1 mg/L烟酸+3％蔗糖＋0.8％琼脂（pH5.8）＋5 mg/L 6-BA为不定芽诱导培养基,暗培养7 d后,转移至光/暗周期16/8 h的条件下培养,不定芽的分化率高达91.1%;不定芽在1/2MS基本培养基＋3％蔗糖＋0.7％琼脂＋1.5 mg/L IBA＋0.2%活性炭的生根培养基,生根率高达80％;以卡那霉素作选择剂时,选择浓度为50mg/L。     

番茄‘黄樱桃-2号’再生体系研究

以番茄‘黄樱桃-2号’的子叶切段为外植体,研究不同激素组合对愈伤组织产生以及再生芽诱导的影响。结果表明,不同种类和浓度的激素诱导形成的‘黄樱桃-2号’愈伤组织和再生芽数目存在差异,最适培养基为：MS+ 6-BA 2.5 mg/L+ IAA 0.2 mg/L,出愈率可达到95.08%,每个外植体再生芽数约为5。最适生根培养基为：1/2MS+ IAA 0.2 mg/L。通过观察头孢霉素和羧苄青霉素2种抗生素对子叶愈伤组织和再生芽诱导情况的影响,确定‘黄樱桃-2号’子叶的除菌培养基为：MS+ 6-BA 2.5 mg/L+ IAA 0.2 mg/L+ 头孢霉素 200 mg/L+ 羧苄青霉素 200 mg/L。同时还对作为筛选剂的卡那霉素进行了浓度筛选,确定了卡那霉素对‘黄樱桃-2号’子叶的筛选浓度为50 mg/L。     

甘蓝型黄籽油菜子叶离体培养初报

以甘蓝型油菜黄籽双单倍体品系04K91为供试材料,以无菌苗子叶为离体培养外植体,考察了苗龄（7d、10d、13d）与外植体部位及大小（带柄子叶、1/4子叶片、1/8子叶片和子叶柄切段）对芽再生频率的影响。方差分析结果表明,苗龄对芽再生频率有显著影响,外植体对芽再生频率有极显著影响,而苗龄×外植体对芽再生频率影响不显著。多重比较结果表明,以7d苗龄无菌苗的带柄子叶或1/4子叶片为外植体较好,出芽率较高,达90%以上。     

不同植物生长调节剂处理对陆地棉子叶节再生的影响

为了建立高效的棉花子叶节再生体系用于遗传转化,以3个陆地棉品种的子叶节为材料,对棉花子叶节再生体系进行了优化,特别对子叶节诱导生根进行了探讨。结果表明：在子叶节丛生芽诱导中,不同材料的最佳诱导培养基存在差异,‘百棉1号’适宜的培养基为MSB+1.0 mg/L 6-BA +0.5 mg/L IBA;‘百棉2号’适宜的培养基为MSB +2.5 mg/L 6-BA +2.5 mg/L KT;‘珂字312’适宜的培养基为MSB +2.0 mg/L 6-BA,每个外植体可以得到3~4个芽,且大部分芽都可以伸长。生根培养基为MSB+0.5 mg/L NAA。     

芝麻子叶基因转化受体系统的建立

试验以芝麻栽培种豫芝11号为材料,对子叶丛生芽诱导及植株再生体系以及子叶受体材料对卡那霉素、潮霉素和头孢霉素的天然耐性进行了研究,建立了芝麻子叶基因高频转化受体系统.结果表明,适宜的诱芽培养基为MS+5.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L IAA+5.0 mg/L AgNO3 +1.0 mg/L ABA+3％蔗糖...     

不同激素浓度对橡胶草不同器官直接分化再生苗的影响研究

分别以橡胶草(Taraxacum kok-saghyz Rodin)叶片、叶柄、根段为外植体,以MS为基本培养基,比较不同激素浓度对橡胶草不同器官直接分化再生苗的影响。结果表明：橡胶草不同器官直接分化再生苗所需最佳激素浓度不同。(1)最适合诱导叶片和叶柄直接芽分化再生苗的激素浓度均为NAA 0.2 mg/L 6-BA 0.5 mg/L,其芽分化率和每外植体平均芽数分别为36.44%、38.83个和95.83%、10.56个;(2)最适合诱导根段直接芽分化再生苗的激素浓度为NAA 1.0 mg/L 6-BA 0.1 mg/L,其芽分化率和每外植体平均芽数分别为92.25%和21.49个。该研究为橡胶草高频再生体系的建立及进一步利用基因工程进行品种改良奠定了基础。     

无病毒百合组培种球快速繁殖体系的建立立

本研究以铁炮百合(Lilium Longiflorum)感病种球为材料,对热处理后的种球进行了培养基附加物和移栽基质的优化,建立了无病毒组培种球快速繁殖体系。结果表明：以MS为基本培养基,当附加植物激素NAA和KT时能促进子球再生,再生率达86%以上, 在0.2mg?L-1NAA和 0.4mg?L-1 KT的培养基中平均再生子球数显著增多;附加5mg?L-1多效唑培养基能促进子球增大,3mg?L-1多效唑有利于子球再分化;活性炭对子球增大无明显影响,但适当浓度的活性炭能提高培养子球的品质;高浓度蔗糖能促进子球增大,但对子球再分化有抑制影响。蛭石:土、珍珠岩以及珍珠岩：土作为基质时,均能达到较高的成活率和株高,但在珍珠岩：土为3：1作为基质移栽组培球,其成活率和生长状况最佳。37℃热处理随着处理天数的增加,处理后培养鳞片的成活率和子球再生率显著下降,但处理20天子球再生率只能达40%左右,但LSV检出率明显低于未处理的种球,脱毒率达95%以上。