UHPLC-MS/MS测定罗非鱼中硝基呋喃类代谢物残留量的不确定度评定

为判断罗非鱼中硝基呋喃类代谢物残留量测定中不确定度的主要来源,本研究参照JJF 1059.1—2012《测量不确定度的评定与表示》等相关理论,采用农业部783号公告-1-2006的前处理方法进行样品处理,并根据公告中的结果计算公式建立相应的数学模型,对罗非鱼中硝基呋喃类代谢物残留量的测定结果中产生的各不确定度来源进行分析和计算。当硝基呋喃类代谢物的添加水平为1.00μg/kg时,4种硝基呋喃类代谢物结果可表示为:呋喃西林代谢物C_(SEM)为(0.989±0.168)μg/kg,k=2;呋喃妥因代谢物C_(AHD)为(1.009±0.165)μg/kg,k=2;呋喃它酮代谢物C_(AMOZ)为(0.991±0.169)μg/kg,k=2;呋喃唑酮代谢物C_(AOZ)为(0.986±0.180)μg/kg,k=2。研究表明,在确定的实验条件下,本方法的不确定度主要来自于标准溶液和内标溶液配制、标准曲线拟合和加标回收率。研究结果对实际操作中减少不确定度,提高检测结果的准确性和可靠性具有重要意义。     

高效液相色谱—串联质谱法测定鲍鱼中硝基呋喃类代谢物残留量

本文用高效液相色谱-串联质谱法测定鲍鱼中3-氨基-2-噁唑烷基酮(AOZ)、5-甲基吗啉-3-氨基-2-噁唑烷基酮(AMOZ)、氨基脲(SEM)、1-氨基-2-内酰脲(AHD)4种硝基呋喃类代谢物残留量的方法。0.2mol/L盐酸溶液水解鲍鱼组织中与蛋白结合的硝基呋喃类代谢物,用0.05mol/L的2-硝基苯甲醛溶液(2-NBA)37℃衍生16小时。用1.0mol/L磷酸氢二钾溶液调节pH至7.0~7.5,乙酸乙酯萃取。采用电喷雾电离,正离子扫描,选择反应监测模式(SRM)监测,内标法定量。本方法对4种硝基呋喃类代谢物标准曲线的线性回归系数均在0.99以上,线性范围为0.5μg/kg~20μg/kg。方法定量限为0.5μg/kg。在添加浓度0.5μg/kg~5μg/kg,回收率在75.2%~102.1%之间,相对标准偏差为3.56%~12.6%。说明本方法简单、灵敏,结果可靠,可满足实验室大量、快速分析的需求。     

天津流通领域鲆鲽类水产品硝基呋喃类代谢物残留现状

为初步掌握天津市流通领域鲆鲽类水产品硝基呋喃类代谢物残留情况,按照代表性、适时性和随机性原则在全市范围内采集样品6批次共计120个,按照农业部783号公告-1-2006进行检测。结果表明,除了大菱鲆鱼皮中呋喃唑酮代谢物以外,大菱鲆中的硝基呋喃类代谢物类均高于半滑舌鳎,T检验结果为差异不显著。超市采集的鲆鲽类水产品中的鱼皮、肌肉、内脏中的硝基呋喃类代谢物均低于市场所采集的样品,T检验结果为差异显著。分析不同检测部位鲆鲽类水产品中的硝基呋喃类代谢物含量,由低到高排列分别为鱼皮肌肉内脏,对其进行方差分析、q检验以及SNK检验,结果为差异性显著。     

利用LC-MS/MS辅助优化GICA对硝基呋喃类代谢物的快速检测

针对硝基呋喃类代谢物的胶体金免疫层析法(GICA)检测方法存在的缺陷,实验以硝基呋喃类代谢物实际阳性样本和模拟阳性样本为研究对象,选择液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)辅助优化GICA代谢物的水解和衍生条件前处理步骤,建立了一种快速检测水产品中硝基呋喃类代谢物的方法。结果显示最佳实验条件为:盐酸浓度0.35 mol/L,0.05 mol/L 2-硝基苯甲醛0.35 mL,水浴温度90℃,水浴时间120 min。此条件下,胶体金免疫层析法的前处理时间缩短至120 min,检测时间为5 min, 4种硝基呋喃类代谢物的检出限均为0.05μg/kg且重现性好。本方法对140批次不同基质样品进行分析,检测得出12批次阳性样品,假阳性和假阴性率均为0。结果表明本方法在降低实验前处理时间同时,适用于不同的样品基质,可应用于大批量实际样品的测定。[中国渔业质量与标准,2021,11(4):31-38]     

超高效液相色谱-同位素稀释串联质谱法测定水产品中硝基呋喃类代谢物残留

建立了采用Oasia PRiME HLB固相萃取柱净化-超高效液相色谱-同位素稀释串联质谱法(UPLC-MS/MS)快速测定水产品中硝基呋喃类代谢物残留的方法。样品加入同位素内标,超声衍生化后用乙酸乙酯超声提取,经Oasia PRiME HLB固相萃取柱一次性净化后上机检测,电喷雾-正离子多反应监测模式,内标法定量。该方法将测试时间缩短至4小时。结果显示,4种硝基呋喃类代谢物的检测限为0.01μg/kg,定量限为0.03μg/kg,在0.05~10ng/mL质量浓度范围内线性良好,4种硝基呋喃类代谢物相关系数r均大于0.999,5个添加浓度水平的平均回收率为88.5%~115.2%,相对标准偏差均小于8,说明该方法快速、准确并且重复性好。     

淡水养殖用水中硝基呋喃代谢物残留量的UPLC/MS/MS检测方法

研究了淡水养殖用水中4种硝基呋喃代谢物:呋喃唑酮代谢物(AOZ)、呋喃它酮代谢物(AMOZ)、呋喃妥因代谢物(AHD)、呋喃西林代谢物(SEM)的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC/MS/MS)分析方法。以邻硝基苯甲醛作为衍生化试剂,D4-AOZ、D5-AMOZ、13C15N-SEM、13C-AHD作内标,用水解衍生的方法对样品进行处理。以乙腈和0.1%甲酸(含有0.5 mmol/mL乙酸铵)水溶液为流动相,采用梯度洗脱,4.5 min可将4种代谢物完全分离,进行定性和定量分析。加标回收率为75.1%～102%;本方法的检出限(LOD)为0.50μg/L。     

应用Thermo LC—MS／MS检测水产苗种中的硝基呋嘀类代谢物

应用Thermo LC-MS／MS检测140个水产苗种中呋哺唑酮（AOZ）、呋喃它酮（AMOZ）、呋喃西林（SEM）和呋喃妥因（AHD）等硝基呋喃类代谢物。结果表明，方法的检出限为0．25μg／kg，工作曲线的线性范围为0．25～20．0μg／L。在添加浓度为0．25—10．0μg/kg的范围内，AMOZ、SEM、AHD和AOZ的回收率分别在90．5％-102％、95．3％-99．6％、92．6％-98．6％、82．0％-105．6％之间，相对标准偏差均小于10％。苗种样品检出率AOZ：15％，SEM：4％。AMOZ及AHD均未检出。在网箱养殖中的苗种检出比率要大于鱼池苗种检出比率。     

4种硝基呋喃类代谢物在青石斑鱼肌肉中的富集与消除规律

实验通过连续7 d投喂各含有100 mg·kg~(-1)呋喃西林、呋喃唑酮、呋喃它酮和呋喃妥因的饲料,研究4种硝基呋喃药物在青石斑鱼(Epinephelus awoara)肌肉中的消除规律。采用超高效液相色谱串联质谱(UPLCMS/MS)检测青石斑鱼肌肉中的氨基脲(SEM)、3-氨基-2-恶唑基酮(AOZ)、5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)和1-氨基-2-内酰脲(AHD)的质量分数,并用内标法定量。结果表明,SEM、AOZ、AMOZ和AHD在石斑鱼背肌的峰浓度最大值依次为1 104.10μg·kg~(-1)、781.09μg·kg~(-1)、679.75μg·kg~(-1)和437.18μg·kg~(-1)。4种硝基呋喃代谢物在石斑鱼肌肉组织中的消除规律大致相似。SEM、AHD、AOZ和AMOZ半衰期时间的长短顺序为23.90 d、23.10 d、22.35 d和21.00 d。SEM在肌肉中消除最慢。消除到第163天时,SEM、AOZ、AMOZ和AHD在肌肉中的质量分数仍然高于液质检出限(0.5μg·kg~(-1))。建议硝基呋喃药物应禁止用于石斑鱼疾病的预防或治疗中。     

液相色谱串联电喷雾质谱检测中溶剂对硝基呋喃类代谢物响应的影响

通过对比不同溶剂对液相色谱串联电喷雾质谱检测硝基呋喃类代谢物灵敏度的影响,以筛选最佳的流动相和上机溶液。Q1扫描时,AHD在负离子模式下有最高的响应强度。正离子模式检测时,甲醇中添加0.1%的氨水,4种化合物均能获得令人满意的灵敏度。用液相色谱串联正电离电喷雾质谱检测时,以甲醇和0.1%的氨水作为流动相,上机溶液中也添加0.1%的氨水,灵敏度高,杂质干扰少,准确度好,能够较好地满足鱼、虾、蟹等复杂样品基质中痕量硝基呋喃类代谢物残留检测的需要。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定凡纳滨对虾中的硝基呋喃代谢物残留

采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）法,测定了凡纳滨对虾（Litopenaeus vannam ei）中氨基脲（SEM）、1-氨基-2-内酰脲（AHD）、3-氨基-2-唑烷基酮（AOZ）和5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮（AMOZ）4种硝基呋喃类代谢物。采用2-硝基苯甲醛作为衍生化试剂,氘、碳-13、氮-15同位素标记的SEM1-3C1-5N2、AHD1-3C3、AOZ-D4和AMOZ-D5为内标物,样品经衍生、乙酸乙酯提取、正己烷净化,以甲醇0.5 mmol.L-1乙酸铵水溶液（含0.1%甲酸）为流动相进行梯度洗脱,8 m in可将4种目标化合物完全分离并测定。结果表明,4种待测物在0.4～20.0 ng.mL-1范围内线性关系良好（R〉0.999）,检出限为0.03～0.15μg.kg-1。在0.5μg.kg-1、1.0μg.kg-1和2.0μg.kg-13个水平上进行加标回收试验,平均回收率为92.0%～107.3%,RSD为3.1%～8.7%。采用该法参加FAPAS国际水平测试,获得了满意的结果。     

液质质串联质谱法测定淡水及沉积物中硝基呋喃类代谢物

改进了淡水水体和沉积物中4种硝基呋喃代谢物呋喃唑酮代谢物(AOZ)、呋喃它酮代谢物(AMOZ)、呋喃妥因代谢物(AHD)、呋喃西林代谢物(SEM)的高效液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测方法。方法采用内标法定量,提高了定量的准确性。水及沉积物样品直接进行衍生化后乙酸乙酯提取,化合物采用Thermo C18(5.0μm,100mm×2.1mm)色谱柱进行分离,以0.1%甲酸/甲醇-5mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸)为流动相梯度洗脱。方法的线性范围为0.1~200ng/mL,r2≥0.999。空白水体在0.02、1.0、10.0ng/L 3个加标水平下的平均回收率为75.4%~82.7%,相对标准偏差(RSD)为3.2%~8.7%,检出限(LOD)和定量下限(LOQ)分别为0.01ng/mL和0.02ng/mL。沉积物样品在0.3、1.0、10μg/kg 3个加标水平下,平均回收率为77.9%~93.6%,RSD为2.5%~7.8%,检出限(LOD)和定量下限(LOQ)分别为0.1μg/kg和0.3μg/kg。该方法灵敏度高、选择性好,适用于实际淡水养殖环境水体和底泥中4种硝基呋喃代谢物呋喃唑酮代谢物的残留测定。     

超高压液相色谱-串联质谱测定渔业养殖环境中硝基呋喃代谢物

采用超高压液相色谱-三重串联四级杆质谱仪优化了渔业养殖水和底泥中4种硝基呋喃代谢物残留检测的方法。确定以2-硝基苯甲醛为衍生剂,样品经60℃高温振荡衍生4 h,再经乙酸乙酯提取,C_(18)色谱柱分离,在正离子反应模式下以大气压电喷雾源电离,采用多反应监测,内标法定量。方法中4种硝基呋喃代谢物的检出限为0.1 ng/mL(g),定量限为0.25 ng/mL(g),在0.25~10 ng/mL(g)线性范围良好,0.5、2.0、5.0 ng/mL(g)3个添加水平回收率范围为91.3%~102.2%,相对标准偏差均小于10%。本方法具有重复性好、灵敏度高、简便、准确以及快速的优点,可以满足渔业养殖环境中硝基呋喃类药物残留的监控要求。     

加标回收实验及质控图在初级水产品药残检测中的应用

介绍了加标回收实验和质控图作为质量控制的方法,并根据2012年实验室液相色谱-质谱联用法检测初级水产品中孔雀石绿和硝基呋喃类代谢物的加标回收率进行统计分析,其中质控图用Origin软件进行绘制,数据关联性用SPSS软件进行分析.结果显示,加标回收率质控图能够有效地对实验结果进行监控,并且有效地保证数据质量；引起本实验室孔雀石绿和硝基呋喃类代谢物加标回收率变化的主要因素是随机误差；隐色孔雀石绿与显色孔雀石绿加标回收率之间具有较弱的相关性,另外隐色孔雀石绿的平均回收率略高于显色孔雀石绿；4种硝基呋喃类代谢物中,AOZ和AMOZ、SEM的加标回收率之间有良好的相关性,其他代谢物之间相关性较差,另外AOZ的平均加标回收率最高,SEM的最低.     

微波辅助蛋白质水解-反相高效液相色谱法测定罗非鱼皮中的羟脯氨酸

为测定罗非鱼(Oreochromis niloticus)皮中羟脯氨酸含量,建立了微波辅助蛋白质水解-反相高效液相色谱法。实验采用9-芴基甲氧基羰酰氯(FMOC-Cl)为衍生试剂,应用ZORBAX SB-C18色谱柱,以0.05 mol/L的醋酸钠溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱,DAD检测器在262 nm处进行检测,外标法定量。结果显示,羟脯氨酸线性关系良好,相关系数为0.999 9,回收率92.00%~103.25%,相对标准偏差2.53%~3.61%,检出限为0.2mg/g。     

北京六角体科技发展有限公司

北京六角体科技发展有限公司集科研、生产、销售为一体。公司目前所拥有的系列产品有：硝基呋喃类代谢物、孔雀石绿,结晶紫,四环素,沙星类。磺胺类、β-激动剂类,糖皮质激素类,类固醇类等快速检测前处理试剂盒和氯霉素,沙丁胺醇,盐酸克伦特罗,肉类生熟度,三聚氰胺,重金属和苏丹红等现场快速检测试剂盒。     

柱前衍生液相色谱法测定贝类中氨基酸含量

采用柱前衍生液相色谱法,测定了3种贝类中天冬氨酸、赖氨酸、亮氨酸等17种氨基酸含量。衍生试剂为6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯(AQC),流动相为醋酸盐-磷酸盐缓冲溶液、乙睛、水,梯度洗脱。色谱柱为AccQ·Tag(Waters)氨基酸分析柱,紫外检测。结果显示,氨基酸浓度与峰面积呈良好的线性关系,线性范围10~80μmol/L,检出限为0·23μmol/L,相关系数均在0·998以上,相对标准偏差RSD在2·1%~4·8%之间,回收率在91·3%~113·2%之间。     

马来西亚输美水产品兽药超标问题严重

正中国水产门户网报道:道美国食品药品局(FDA)2016年4月18日公告,因马来西亚出口美国虾、小龙虾类水产品中硝基呋喃、氯霉素类兽药残留超标,相关产品到达美国口岸后一律实施自动扣留(DWPE)(IA16-136)。据FDA监测数据,从2014年10月1日至2015年9月30日,FDA共检测马来西亚出口虾、小龙虾138个样品,其中45个样品兽药残留超标,不合格比例达32%。     

超高效液相色谱串联质谱法测定水产养殖水体中49种兽药的残留量

建立了超高效液相色谱串联质谱测定水产养殖水体中硝基呋喃类、磺胺类、氟喹诺酮类、大环内酯类等11类、49种药物的分析方法。样品分别采用固相萃取法和冷冻干燥法浓缩后,经Kinetex C18色谱柱分离,乙腈和0.1%甲酸水作为流动相梯度洗脱,正负离子同时扫描,多时段-多反应监测模式下测定,外标法定量。各种药物在相应的浓度范围内线性关系良好,相关系数大于0.998。冷冻干燥法各种药物的方法检出限为5~30 ng/L,加标回收率为63.1%~120%,相对标准偏差15.2%。固相萃取法各种药物的方法检出限为1~5 ng/L,除孔雀石绿类外,加标回收率为67.1%~119%,相对标准偏差13.6%。方法灵敏度高、重现性好,适用于测定水产养殖场池塘水样中残留的多种类药物。     

海参呋喃唑酮代谢物胶体金免疫层析检测中的基质效应及消除方法

呋喃唑酮等硝基呋喃类药物残留是海参重要的安全危害之一,研究其胶体金免疫层析快速筛选检测技术具有重要的现实意义,但是关于海参基质对检测的干扰及消除方法目前尚未见报道。本研究发现海参基质中蛋白、多糖等组分的存在,会使呋喃唑酮代谢物(AOZ)在胶体金免疫层析过程中C线和T线的显色程度、均匀性和稳定性均明显降低,甚至出现色带断裂的情况,导致检测结果无法准确判断。针对这一问题具体研究了不同的样本前处理方法,发现将海参样本在衍生化前经80℃加热5 min,并结合0.10~0.15 mol/L盐酸处理后,可将样本中的蛋白质浓度降低到0.06 mg/m L以下,海参岩藻糖几乎消除,检测卡的主要性能基本恢复正常,对阴性海参添加0.5、1μg/kg的AOZ标准液的样本能够实现有效检测;同时省略了有机溶剂萃取、氮吹、净化等步骤,前处理操作步骤较目前AOZ检测的同类技术更为简便、快速。本研究可以为下一步研究建立海参中硝基呋喃等药残的胶体金免疫层析现场快速检测技术提供基础和依据。     

Nafion/MWCNTs/GC纳米电化学传感器法快速检测水产养殖中的孔雀石绿

本实验通过将5μL MWCNTs-COOH修饰液、Nafion修饰液及其二者的混合修饰液于干净的玻碳电极表面,在红外灯下烤干制得MWCNTs-COOH/GCE修饰电极、Nafion/GCE修饰电极及Nafion/MWCNTs-COOH/GCE修饰电极,采用三电极系统(玻碳电极或修饰电极为工作电极、Ag/Ag Cl为参比电极、铂丝为辅助电极)和快速循环伏安法测定富集在0.2mol/L Li Cl中的孔雀石绿(Malachite Green,MG)浓度,建立快速灵敏检测养殖水中MG含量的方法。MG在Nafion/MWCNTs/GC的循环伏安图表明,在0.57V电位处有良好的氧化峰,未出现还原峰,说明其电化学反应是不可逆氧化还原过程。MG氧化峰电流与其浓度在3×10~(-7)～9×10~(-6)mol/L之间具有良好的线性关系(Ip(μA)=0.207CMG(μmol/L)+3.158,R~2=0.985)的优化条件是:修饰材料Nafion与MWC-NTs-COOH之比为1∶1、修饰液用量为5μL、电解质为0.2mol/L Li Cl溶液、表面活性剂CPB的浓度为7×10~(-5)mol/L、MG富集10 min,在此条件下,检测限为6×10~(-8 )mol/L(S/N=3),加标回收率在95.9%～98.7%。使用该方法测定养殖水中MG含量,具有速度快、灵敏度高、稳定性和重复性好的优点。