胞内劳森菌巢式PCR检测方法的建立及初步临床应用

为了掌握胞内劳森菌在湖北省5个疑似猪增生性肠炎暴发规模化猪场中的流行情况,我们建立了一种从粪便中检测胞内劳森菌的巢式PCR方法,并利用该方法对采集于这5个规模化猪场不同生产阶段不同临床表现猪群的1 003份粪便样品进行监测。结果显示:5个猪场的胞内劳森菌检出率在11.5%~19.4%之间,平均阳性率为15.5%;就临床表现而言,腹泻猪粪便样品中胞内劳森菌的检出率高于非腹泻猪;就生产阶段而言,保育及育肥猪中胞内劳森菌的检出率高于断奶仔猪、母猪和公猪。我们还利用粪便检测胞内劳森菌呈阳性、疑似临床症状明显的猪的肠道制备的感染溶液进行了病例复制,试验猪在灌服感染溶液后出现了与胞内劳森菌感染相似的临床症状及病理变化,并且从感染猪的肠道组织和粪便中检测到了胞内劳森菌的存在。本试验对于进一步了解胞内劳森菌在我国猪群中的流行情况及致病性具有一定的意义。     

海南部分地区猪场胞内劳森氏菌流行情况调查

为了解胞内劳森氏菌在海南省各猪场中的流行情况,应用普通PCR技术检测了来自该省不同地区14家猪场的348份猪粪便样品中的胞内劳森氏菌。结果表明,送检的猪场全部存在胞内劳森氏菌流行情况,场阳性率达到100%;348份猪粪便样品中有133份检测为阳性,阳性率达38.22%,其中母猪粪便的阳性率为40.74%,4～9周龄猪的粪便阳性率为35.42%,11～20周龄猪的粪便阳性率为37.5%,20周龄之后的猪粪便阳性率为52%。可见海南省部分地区猪场都存在胞内劳森氏菌的感染情况。     

胞内劳森菌LsaA蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立胞内劳森菌特异性抗体检测方法,将密码子优化合成的胞内劳森菌表面蛋白LsaA的编码基因克隆于pET32a(+)载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。用纯化的重组LsaA蛋白作为包被抗原,通过一系列条件优化,建立了检测胞内劳森菌抗体的间接ELISA方法。结果显示:该方法可以特异地检测抗胞内劳森菌抗体,与大肠杆菌、猪霍乱沙门菌、猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒等常见猪腹泻病原的抗血清均无交叉反应。来自PCR检测粪便呈胞内劳森菌阳性猪的血清,用所建立ELISA检测均为胞内劳森菌抗体阳性。该方法具有较好的敏感性和重复性,阳性血清经过1∶800稀释检测结果仍为阳性,批内和批间重复试验的变异系数分别为0.352%~2.752%和0.877%~3.000%。应用建立的ELISA方法对河南省部分地区猪场胞内劳森菌的感染情况进行了血清流行病学调查,结果显示被检地区猪场均存在不同程度的胞内劳森菌抗体阳性,阳性率在13.3%~57.1%,平均阳性率为30.6%。结果表明,本研究所建立的ELISA方法可以用于胞内劳森菌抗体的检测,为胞内劳森菌感染的监测和流行病学调查提供了方法。     

2022—2023年全国主要养猪地区猪回肠炎感染情况调查

为了解全国主要养猪地区猪回肠炎感染情况,本调查使用荧光定量PCR技术对来自全国主要养猪地区169家猪场的1667份粪便样本进行胞内劳森菌的检测。结果显示,在所有参试的猪场和送检的粪便样本中,胞内劳森菌的阳性率分别达到了96.4%和86.0%;不同季节、不同区域、不同规模的猪场,胞内劳森菌检出率都超过80%;在各个生产阶段,母猪的总体阳性率也普遍偏高;在13周龄和19周龄前后,保育-育肥猪的回肠炎感染压稍高;不同粪便类型对应的CT值也存在差异,血便中胞内劳森菌的CT值最低。由此可见,胞内劳森菌引起的回肠炎广泛存在我国主要养猪地区。     

安徽省部分地区生猪PCV2感染情况及疫苗免疫效果调查

为摸清当前安徽省猪群中PCV2感染情况及疫苗的免疫效果,本试验采集了12个猪场的289份猪扁桃体和289份猪血清样品,采用荧光定量PCR方法检测扁桃体中的PCV2,采用ELISA方法检测血清中PCV2抗体。试验结果显示:猪群PCV2感染率为11.8%,其中大型猪场、中型猪场、小型猪场感染率分别为8%、0%、26%,生产母猪、后备母猪、保育猪及育肥猪感染率分别为12%、16%、0%、17%;猪群PCV2抗体阳性率92.4%,其中大型猪场、中型猪场、小型猪场阳性率分别为96%、82%、98%,生产母猪、后备母猪、保育猪、育肥猪阳性率分别为100%、91%、82%、98%。安徽省猪群存在PCV2隐性感染,其中小型猪场及育肥猪群感染率较高;不同养殖规模、不同生长阶段猪群猪圆环病毒疫苗免疫效果良好。     

闽西地区猪增生性肠炎的调查

为调查闽西地区猪增生性肠炎发病情况,应用PCR技术对2008年龙岩学院动物医学研究所接诊的6周龄~20周龄腹泻病例进行了胞内劳森氏菌检测。结果表明,被检测的8个猪场均存在胞内劳森菌感染,61份粪便样品中21份(44.2%)呈阳性,其中6周龄~8周龄猪阳性率为46.7%,9周龄~13周龄生长猪阳性率为47.8%,14周龄~20周龄阳性率为42.9%。由此说明闽西地区猪场普遍存在猪增生性肠炎的感染。     

猪乙型脑炎血清学调查

为了解本地猪场乙型脑炎病毒感染实际情况,2014年1月作者应用ELISA方法对本市工业园区6个规模猪场共计126份血清样品进行抽检监测,结果表明:经免疫的母猪,血清抗体阳性率66.67%;未经免疫猪群,其血清阳性率为20.37%;免疫猪群与未免疫猪群的血清阳性率平均值差异极显著(P0.01)。各猪场由于种猪来源、饲养环境、管理水平等的不同,猪群乙脑感染率也不同,所有被检样品平均阳性率为31.48%。     

猪增生性肠炎的诊断及其在猪群中感染的调查

针对江西某猪场肥猪出现血便症状,取病变肠组织提取DNA,采用猪胞内劳森菌荧光定量PCR试剂盒检测,并对PCR扩增产物进行序列测定和分析,结果表明,其与胞内劳森菌参考序列(AM180252.1和CP004029.1)同源性为100％.同时采集7个猪场的正常猪群粪便通过猪胞内劳森菌的荧光定量PCR检测方法进行检测,结果显示...     

规模化猪场猪圆环病毒2型的血清流行病学调查

为了解规模化猪场猪圆环病毒2型(PCV2)血清学流行情况,采用ELISA进行PCV2抗体检测。结果表明,运城地区规模化猪场广泛存在PCV2感染,未免疫接种猪圆环病毒疫苗的外观健康猪血清样品中PCV2抗体平均阳性率为49.66%,其中种猪感染率达67%,哺乳仔猪感染率4.55%,保育猪感染率43%,育肥猪感染率64.71%;外观健康猪群检测结果提示,随着年龄的增长PCV2感染有升高趋势。为了进一步研究猪圆环病毒感染各症候群在规模化场发病特点及流行规律,采集临床疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、仔猪先天性震颤(Congenital tremors,CT)、猪肾炎皮炎综合征(PDNS)、猪的繁殖障碍(Reproductive failure)、PCV2相关性肺炎等症状猪血清400份进行PCV2抗体检测。检测结果显示,疑似PMWS症状PCV2抗体阳性率最高,达86.25%,然后依次是疑似PCV2相关性肺炎阳性率56.25%,疑似PDNS阳性率46.25%,疑似繁殖障碍阳性率26.25%,最低的是疑似CT阳性率11.25%。研究结果表明,运城地区规模化猪场PCV2感染以PMWS和PCV2相关性肺炎为主,其次是PDNS和繁殖障碍,仔猪先天性震颤感染率最低。     

江西省泰和县规模化猪场结肠小袋纤毛虫感染情况调查

为了解江西省泰和县规模化猪场结肠小袋纤毛虫的感染情况,于2018年3～5月随机选取泰和县周边5个规模化猪场,并采集5个猪场中不同年龄段腹泻猪共计100份粪便样本,采用直接涂片法检测观察。检测结果显示,34份样品为小袋纤毛虫阳性,阳性率为34%;在25份哺乳仔猪样本中,检测出小袋纤毛虫的有2份,阳性率为8%;在25份保育猪样本中,检测出小袋纤毛虫的有9份,阳性率为36%;在50份育成猪样本中,检测出小袋纤毛虫的有23份,阳性率为46%。5个猪场检测结果均为小袋纤毛虫阳性,猪场阳性率高达100%,各猪场感染率为20%～50%。本次调查结果表明,江西省泰和县规模化猪场均有小袋纤毛虫感染,且各阶段猪均有感染,感染率从高到低为:育肥猪、保育猪、哺乳仔猪。     

粤北地区规模化猪场猪瘟抗体水平监测与免疫效果分析

为了解粤北地区规模化猪场猪瘟抗体水平和免疫效果,采用ELISA法对来自粤北地区的13个规模化猪场的1 290份血清样品进行了猪瘟抗体检测。结果表明:公猪猪瘟抗体合格率为66.67%~100%,经产母猪抗体合格率为58.06%~100%,后备母猪抗体合格率为50.98%~96.00%,保育猪抗体合格率为14.23%~50.00%,生长育肥猪抗体合格率为40.00%~93.00%。说明粤北地区不同猪场间猪瘟抗体水平和变异系数差异较大,同一猪场不同阶段猪群抗体水平也有一定差异,但总体表现为种猪群疫苗免疫效果比商品猪群理想,种猪群中公猪比母猪免疫效果好,商品猪群中生长育肥猪抗体水平比保育猪理想。     

华东地区规模化猪场的回肠炎流行病学调查

为调查回肠炎在华东地区三省一市规模化猪场的感染状态,本研究利用商品化的胞内劳森氏菌快速检测试剂盒Lawsonia FirsttestTM对来自21个规模化猪场采集的321份粪便样品进行胞内劳森氏菌检测.经检测21个规模化猪场100％存在回肠炎感染,而且感染率随着猪只日龄增长而逐渐升高.4周龄仔猪即存在感染,感染率为9.1％,8周龄(41.5％)～10周龄(67.9％)为主要感染开始期,12周龄(94.3％)～14周龄(87.9％)为感染高峰期,所检测样品的总体阳性率为59.81％,强阳性率为31.2％,结果表明,华东地区规模化猪场普遍存在亚临床型回肠炎感染.     

河南省某地区猪伪狂犬病流行学病调查与分析

为了解河南省某地区规模化猪场伪狂犬病病毒(PRV)流行情况及特点,应用PRV-gE抗体ELISA检测试剂盒于2015年9月~2016年8月对河南省某地区25个猪场共1532份血液样品进行PRV-gE抗体检测.结果表明,检测为阳性的样品中共有569份,阳性率为37.14%,其中大、中型规模化猪场与散养户的阳性率分别为26.42%、36.06%和51.30%;且不同生长发育阶段的猪群PRV-gE抗体阳性率也存在差异,以种母猪阳性率居高,为68.99%,种公猪和育肥猪次之,分别为39.68%和44.07%,保育猪和仔猪最低,分别为27.60%和27.60%.     

南充地区部分规模化猪场猪伪狂犬抗体血清学监测

为了解南充地区规模化猪场中猪伪狂犬免疫抗体及野毒株感染抗体情况,应用伪狂犬病病毒抗体检测试剂盒对4家不同规模化猪场内随机的800份血清样品进行了PRV gB和PRV g E抗体水平检测。结果显示:4家不同规模猪场的800份血清样品中,gB阳性样品数量为624份,阳性率为78%;gE阳性样品数量为136份,阳性率为17%;在所抽检的不同猪群中,种猪和产房仔猪gB阳性率高于保育猪和育肥猪;保育猪和育肥猪gE阳性率高于种猪和产房仔猪,说明所选猪场猪群中保育猪和育肥猪猪伪狂犬病病毒感染状况仍然比较严重,猪伪狂犬病的控制和净化形势依然严峻,猪伪狂犬病会造成巨大的经济损失,严重影响生猪产业的健康快速发展。     

淅川县猪伪狂犬病流行学病调查与分析

本实验旨在了解淅川县规模化猪场伪狂犬病病毒(PRV)流行情况及特点,应用PRV-gE抗体ELISA检测试剂盒于2015年9月~2016年8月对淅川县25个猪场共1532份血液样品进行PRV-gE抗体检测.结果表明,检测为阳性的样品中共有569份,阳性率为37.14%,其中大、中型规模化猪场与散养户的阳性率分别为26.42%、36.06%和51.30%;且不同生长发育阶段的猪群PRV-gE抗体阳性率也存在差异,以种母猪阳性率居高,为68.99%,种公猪和育肥猪次之,分别为39.68%和44.07%,保育猪和仔猪最低,分别为27.60%和27.60%.     

临沧部分地区猪细小病毒感染的血清学调查

为了解临沧地区猪细小病毒(PPV)的感染情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA),对临沧部分地区规模化猪场和散养户饲养猪的190份血清样品进行了猪细小病毒抗体检测。结果表明,临沧地区规模化猪场和散养户的猪细小病毒抗体总阳性率为66.32%,其中规模化猪场为71.52%,散养户猪群为32.00%,不同年龄段的种公猪、种母猪、育肥猪、仔猪抗体阳性率分别为50.00%、82.52%、43.59%、50.00%。从检测结果说明临沧地区存在猪细小病毒的感染。     

云南省临沧地区猪伪狂犬病血清流行病学调查

为了解云南省临沧地区猪伪狂犬病病毒(PRV)的感染情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA),对临沧部分地区规模化猪场和散养户饲养猪的190份血清样品进行了猪伪狂犬病病毒gB抗体检测。结果显示,临沧地区规模化猪场和散养户的猪伪狂犬病毒gB抗体阳性率为73.16%,其中规模化猪场为81.82%,散养户猪群为16%。从检测结果来看,临沧地区存在猪伪狂犬病毒感染,应加大免疫力度。     

安徽省部分地区规模化猪场猪等孢球虫病流行病学调查

为了解安徽省不同地区规模化猪场猪等孢球虫感染情况,采用镜检法和套式PCR法对500份分离的猪粪便样品进行检测,并对获得的阳性PCR产物进行测序和分析,确定猪等孢球虫的流行情况。PCR扩增及序列分析显示有66份阳性产物为猪等孢球虫。安徽省猪等孢球虫阳性率分别为4.20%(镜检法)和13.20%(套式PCR法)。猪场阳性率分别为71.43%(镜检法)和100.00%(套式PCR法)。断奶仔猪阳性率(29.76%)极显著高于保育猪(9.90%)和育肥猪(2.60%)(p0.01),保育猪阳性率也显著高于育肥猪(p0.05)。该调查结果显示猪等孢球虫在安徽省规模化猪场普遍存在。     

河南省平顶山地区猪细小病毒血清学检测与分析

为查明平顶山地区猪细小病毒(PPV)疫苗免疫效果,研究采用间接ELISA法对平顶山地区6个乡镇的15个不同规模猪场共1 040份血清样品进行细小病毒IgG抗体检测与分析。结果显示,平顶山地区不同规模猪场细小病毒血清抗体平均阳性率为71.15%,其中大型规模化猪场、小型规模化猪场和散养场阳性率分别为82.67%、72.4%和54.17%。不同类别猪群血清阳性率存在较大差异,其中以经产母猪的阳性率最高,为81.0%,仔猪和保育猪阳性率稍高,分别为79.55%和67.5%,种公猪和后备母猪阳性率最低,分别为47.22%和47.30%。研究表明平顶山地区猪群存在感染猪细小病毒的风险,需要加强相关免疫与防控。     

洛阳地区猪弓形虫病血清流行病学调查和PCR检测

为了解洛阳地区规模化养猪场和散养户猪弓形虫感染的情况,采集洛阳地区规模化养殖场和散养户母猪、育肥猪、保育猪血清样品410份,应用ELISA方法检测抗弓形虫IgG抗体。采集河南科技大学动物医院接诊的病死猪54头及洛阳某食品公司屠宰猪105头的肺门淋巴结,用PCR方法扩增弓形虫特异性遗传标记529 bp基因序列进行检测。结果发现,洛阳地区猪弓形虫血清抗体阳性率达35.4%,母猪、育肥猪和保育猪的分别是50.4%、34.5%、22.2%。病死猪PCR检测阳性率18.5%,屠宰猪阳性率6.7%。说明洛阳地区猪弓形虫的感染较为普遍。