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细胞冻存保护剂二甲基亚砜的细胞毒作用 总被引:1,自引:0,他引:1
二甲基亚砜(DMSO)是目前最好的细胞冻存保护剂,但也是一种以细胞毒性很大的化学试验剂。本研究结果表明,培养液中DMSO浓度为10%时,细胞生长抑制率近100%;1‰浓度时抑制率为35%,即使是0.04‰的浓度,DMSO对细胞的生长也有不利的影响。我们认为,培养液中残存的DMSO是冻存细胞复苏后出现的细胞毒现象的主要原因。因此我们提出,冻存细胞时操作过程要迅速;细胞融化务必洗涤,尽量去除DMSO, 相似文献
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试验旨在探究奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)最佳的冻存液以改善乳腺上皮细胞的冻存质量.BMECs传至第5代后分别加入以下10种不同配方的冻存液.A组:85% DMEM+10%胎牛血清+5% DMSO;B组:80% DMEM+ 10%胎牛血清+10% DMSO;C组:75% DMEM+10%胎牛血清+15% DMSO;D组:70% DMEM+10%胎牛血清+20% DMSO;E组:85% DMEM+5%胎牛血清+10% DMSO;F组:75% DMEM+15%胎牛血清+10% DMSO;G组:70%DMEM+20%胎牛血清+10%DMSO;H组:80%DMEM+10%胎牛血清+10%甘油;I组:70% DMEM+10%胎牛血清+20%甘油;J组:60% DMEM+10%胎牛血清+30%甘油,冻存前统一调整细胞密度到1×106个/mL冻存.分别对复苏后的细胞进行台盼蓝染色计算存活率和PI/Hoechst 33258双染计算凋亡率.结果表明,BMECs经不同冻存剂冻存复苏后,细胞活力、形态学及凋亡率表现有所不同,其中B组和G组的活力和24h贴壁率较其他组高,二者的凋亡率较低,二者之间差异无显著性(P>0.05);传代后B组细胞的生长状况最好. 相似文献
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试验旨在探究奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)最佳的冻存液以改善乳腺上皮细胞的冻存质量。BMECs传至第5代后分别加入以下10种不同配方的冻存液。A组:85%DMEM+10%胎牛血清+5%DMSO;B组:80%DMEM+10%胎牛血清+10%DMSO;C组:75%DMEM+10%胎牛血清+15%DMSO;D组:70%DMEM+10%胎牛血清+20%DMSO;E组:85%DMEM+5%胎牛血清+10%DMSO;F组:75%DMEM+15%胎牛血清+10%DMSO;G组:70%DMEM+20%胎牛血清+10%DMSO;H组:80%DMEM+10%胎牛血清+10%甘油;I组:70%DMEM+10%胎牛血清+20%甘油;J组:60%DMEM+10%胎牛血清+30%甘油,冻存前统一调整细胞密度到1×106个/mL冻存。分别对复苏后的细胞进行台盼蓝染色计算存活率和PI/Hoechst33258双染计算凋亡率。结果表明,BMECs经不同冻存剂冻存复苏后,细胞活力、形态学及凋亡率表现有所不同,其中B组和G组的活力和24h贴壁率较其他组高,二者的凋亡率较低,二者之间差异无显著性(P〉0.05);传代后B组细胞的生长状况最好。 相似文献
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试验旨在探究奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)最佳的冻存液以改善乳腺上皮细胞的冻存质量。BMECs传至第5代后分别加入以下10种不同配方的冻存液。A组:85%DMEM+10%胎牛血清+5%DMSO;B组:80%DMEM+10%胎牛血清+10%DMSO;C组:75%DMEM+10%胎牛血清+15%DMSO;D组:70%DMEM+10%胎牛血清+20%DMSO;E组:85%DMEM+5%胎牛血清+10%DMSO;F组:75%DMEM+15%胎牛血清+10%DMSO;G组:70%DMEM+20%胎牛血清+10%DMSO;H组:80%DMEM+10%胎牛血清+10%甘油;I组:70%DMEM+10%胎牛血清+20%甘油;J组:60%DMEM+10%胎牛血清+30%甘油,冻存前统一调整细胞密度到1×106个/mL冻存。分别对复苏后的细胞进行台盼蓝染色计算存活率和PI/Hoechst33258双染计算凋亡率。结果表明,BMECs经不同冻存剂冻存复苏后,细胞活力、形态学及凋亡率表现有所不同,其中B组和G组的活力和24h贴壁率较其他组高,二者的凋亡率较低,二者之间差异无显著性(P>0.05);传代后B组细胞的生长状况最好。 相似文献
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试验研究了北方地区黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。采用内蒙古地区健康黑白花奶牛的新鲜乳腺组织,将组织进行Ⅱ型胶原酶消化后原代培养,培养的细胞经5代纯化后将密度调整为1×106个/mL。采用6种处理方法进行冻存,各设3个重复。液氮冻存1个月后,分别将6种不同方法冻存的细胞复苏后测定细胞活性,包括冻存死亡率、贴壁细胞占活细胞的比率、凋亡率等,同时进行形态学观察。结果显示,处理1组与2、3、5组间冻存死亡率存在极显著差异(P<0.01),处理1、4、6组间冻存死亡率无显著差异(P>0.05),处理2、6组间冻存死亡率存在极显著差异(P<0.01);处理4组的贴壁率高于处理2、5、6组,存在极显著差异(P<0.01)。形态学观察结果发现,处理1、4组细胞较其他组生长状态良好。因此,处理4可作为黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。 相似文献
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试验研究了北方地区黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。采用内蒙古地区健康黑白花奶牛的新鲜乳腺组织,将组织进行Ⅱ型胶原酶消化后原代培养,培养的细胞经5代纯化后将密度调整为1×106个/mL。采用6种处理方法进行冻存,各设3个重复。液氮冻存1个月后,分别将6种不同方法冻存的细胞复苏后测定细胞活性,包括冻存死亡率、贴壁细胞占活细胞的比率、凋亡率等,同时进行形态学观察。结果显示,处理1组与2、3、5组间冻存死亡率存在极显著差异(P〈0.01),处理1、4、6组间冻存死亡率无显著差异(P〉0.05),处理2、6组间冻存死亡率存在极显著差异(P〈0.01);处理4组的贴壁率高于处理2、5、6组,存在极显著差异(P〈0.01)。形态学观察结果发现,处理1、4组细胞较其他组生长状态良好。因此,处理4可作为黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。 相似文献
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试验研究了北方地区黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法.采用内蒙古地区健康黑白花奶牛的新鲜乳腺组织,将组织进行Ⅱ型胶原酶消化后原代培养,培养的细胞经5代纯化后将密度调整为l×106个/mL.采用6种处理方法进行冻存,各设3个重复.液氮冻存1个月后,分别将6种不同方法冻存的细胞复苏后测定细胞活性,包括冻存死亡率、贴壁细胞占活细胞的比率、凋亡率等,同时进行形态学观察.结果显示,处理1组与2、3、5组间冻存死亡率存在极显著差异(P<0.01),处理1、4、6组间冻存死亡率无显著差异(P>0.05),处理2、6组间冻存死亡率存在极显著差异(P<0.01);处理4组的贴壁率高于处理2、5、6组,存在极显著差异(P<0.01).形态学观察结果发现,处理1、4组细胞较其他组生长状态良好.因此,处理4可作为黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法. 相似文献
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本试验研究了北方地区黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。采用内蒙古地区健康黑白花奶牛的新鲜乳腺组织,将组织进行Ⅱ型胶原酶消化后原代培养,培养的细胞经5代纯化后将密度调整为1×106个/mL。采用6种处理方法进行冻存,各设3个重复。液氮冻存1个月后,分别将6种不同方法冻存的细胞复苏后测定细胞活性,包括冻存死亡率、贴壁细胞占活细胞的比率、凋亡率等,同时进行形态学观察。结果显示,处理1组与2、3、5组间冻存死亡率存在极显著差异(P0.01),处理1、4、6组间冻存死亡率无显著差异(P0.05),处理2、6组间冻存死亡率存在极显著差异(P0.01);处理4组的贴比率高于处理2、5、6组,存在极显著差异(P0.01)。形态学观察结果发现,处理1、4组细胞较其它组生长状态良好。因此,处理4可作为黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。 相似文献
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猪成纤维细胞冻存方法的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
试验以猪的成纤维细胞为研究对象,认为在-70℃情况下冻存至少7d不会影响其存活率(可达80%以上),且生长形态正常。同时利用血清饥饿法使成纤维细胞周期同步化,在-70℃冻存2d、4d和7d,细胞存涪率可达92.3%、87.2%和83.6%,甚至在该务件下冻存15d,细胞也能恢复正常的生长。 相似文献
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本试验对PRRSV-ShB6(P60)株进行了不同冻存时间和冻融次数对其毒价影响的评估。将病毒在-20℃冻存时间为90天,每隔15天进行毒价测定,结果发现其毒价下降趋势不明显,但病毒连续反复冻融12次,每次取样进行了病毒含量分析,结果发现其毒价整体呈波动性下降,前后变化较明显。结果表明,该毒株在科学合理的条件下保存,避免反复冻融,病毒活力相对稳定。 相似文献
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用匀浆和离心的方法从阳性荒川库蠓体内分离出卡氏住白细胞虫子孢子,以直接冻存和间接冻存2种方法分别对该子孢子进行保存;再分别以3种剂量将不同方法冻存的子孢子和新鲜的子孢子分别给32日龄的健康鸡接种。结果表明,经间接冻存的子孢子和新鲜的子孢子对鸡均具有感染力,而直接冻存的子孢子无感染力。 相似文献
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试验旨在探究肉碱对冻融猪精子质量、抗氧化、抗凋亡及精卵结合能力的影响。试验分鲜精组和冻融组,冻融组的肉碱浓度分别为0、0.025、0.05、0.075 mg/mL,对冻融后的精子质量、总抗氧化能力、抗氧化酶相关基因及凋亡相关基因mRNA表达、精卵结合能力进行检测。结果显示,在冻融组中,经过肉碱处理的精子存活率、质膜完整率和顶体膜完整率均显著高于0 mg/mL处理组(P < 0.05),其中肉碱浓度为0.05 mg/mL时改善效果最好;经过冻融处理的精子中丙二醛(MDA)浓度与鲜精组相比显著升高(P < 0.05),其中肉碱浓度为0.05 mg/mL时显著低于其他肉碱处理组(P < 0.05);与鲜精组相比,各冻融组精子总抗氧化能力均显著降低(P < 0.05),肉碱浓度为0.05 mg/mL时总抗氧化能力最高。此外,与鲜精组相比,0 mg/mL肉碱处理组中凋亡相关基因Caspase-3与Bax的相对表达量显著升高(P < 0.05),抗凋亡基因Bcl-2的相对表达量显著降低(P < 0.05),抗氧化酶相关基因SOD2、CAT与GPx的相对表达量显著降低(P < 0.05);冻融组精卵结合能力均下降,但肉碱浓度为0.05 mg/mL时可得到显著改善(P < 0.05)。结果表明,添加肉碱可以改善冻融猪精子的质量、抗氧化能力、抗凋亡能力及精卵结合能力。 相似文献
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两种方法保存嗜酸乳杆菌效果的比较研究 总被引:1,自引:0,他引:1
在相同的温度和时间条件下,比较滤纸片法和甘油生理盐水冻存法保存嗜酸乳杆菌的效果。用滤纸片法和甘油生理盐水冻存法,分别进行不同温度的嗜酸乳杆菌保存试验;并于预定时间内,对各处理组分别进行复苏及预定检测。在室温和4℃条件下,用滤纸片法保存的嗜酸乳杆菌出现了生化特性和形态的异常状况。随着保存时间的延长,滤纸片保存法比甘油生理盐水冻存法的嗜酸乳杆菌存活量明显减少。两种方法保存的菌种,均表现为-80℃组的嗜酸乳杆菌存活量明显大于-20℃组。说明在-80℃温度条件下,甘油生理盐水冻存法比滤纸片法具有较大的嗜酸乳杆菌存活量。 相似文献