诱导子对雷公藤悬浮细胞中雷公藤甲素积累的影响

[目的]雷公藤甲素是雷公藤主要药用活性成分之一,具有抗肿瘤、免疫抑制和抗炎等多种作用.应用植物细胞培养技术生产雷公藤甲素具有重要意义,而诱导子是提高植物细胞培养中次生代谢产物积累的有效途径之一.研究通过探究非生物和生物诱导子对雷公藤悬浮细胞中雷公藤甲素积累的影响,以期提高雷公藤甲素产量,为雷公藤悬浮细胞规模化生产雷公藤甲素等药用活性物质提供基础.[方法]以水杨酸(SA)、LaCl3以及雷公藤内生真菌NS-5、NS-17作为诱导子,研究不同类型及不同浓度诱导子添加对雷公藤悬浮细胞中雷公藤甲素积累及细胞活力、细胞生长、总糖消耗、PAL活性的影响.[结果]SA、LaCl3和内生真菌NS-5、NS-17诱导子均可促进雷公藤悬浮细胞培养物中雷公藤甲素的积累.非生物诱导子的效应大小受其浓度的影响,0.1 mg/L的SA诱导作用最好,可提高细胞活力,促进细胞生长,总糖消耗增加,升高PAL活性,雷公藤甲素产量最高是对照的3.5倍.随着浓度的降低,LaCl3对雷公藤甲素的诱导作用增强,20 mg/L LaCl3诱导下的最高含量是对照的2.0倍,同时20 mg/L LaCl3也提高了PAL活性和总糖消耗,但对细胞活力和细胞生长影响不大.内生真菌诱导子的效应大小即与诱导子种类和添加时间有关.细胞培养第4天添加NS-5、NS-17菌丝体提取物,第8天添加任一内生真菌诱导子均提高了雷公藤甲素的积累,其中NS-5菌丝体提取物的诱导效果相对最强,细胞培养第8天添加时雷公藤甲素产量最高,是对照的2.4倍,但雷公藤甲素的积累与细胞生长及PAL活性无明显的关联.[结论]诱导子的添加能够提高雷公藤悬浮细胞中雷公藤甲素的积累,诱导效应的大小与诱导子种类、添加浓度及添加时间有关.本研究中的0.1 mg/L SA、20 mg/L LaCl3及内生真菌NS-5菌丝体提取物显示了良好的诱导效果,在利用细胞培养技术进行雷公藤甲素生产中具有较好的应用前景.     

茄子愈伤组织诱导及悬浮细胞培养（英文）

[目的]建立茄子愈伤组织悬浮细胞培养体系。[方法]以三月茄为试验材料,利用正交设计筛选适合茄子愈伤组织诱导、继代保存以及悬浮培养的培养基并测定悬浮培养过程中细胞生长状况。[结果]适宜茄子愈伤组织诱导的培养基为MS＋6-BA（0.2 mg/L）＋NAA（0.2 mg/L）;适宜继代保存的培养基为MS＋6-BA（0.2 mg/L）＋NAA（0.2 mg/L）＋KT（0.1 mg/L）;适宜悬浮细胞培养的培养基为MS＋NAA（0.4mg/L）＋6-BA（0.2 mg/L）液体培养基。茄子悬浮培养细胞生长呈S形曲线,其中前3 d为起始期,3~7 d处于对数生长期,7~8 d为静止期;8~11 d为衰退期。悬浮细胞密度随着培养时间的延长增长,在培养第7天达到最高值,约3.8×105个/ml.随后细胞数量迅速减少。起始期细胞活力最高。茄子悬浮细胞在MS＋NAA（0.4 mg/L）＋6-BA（0.2 mg/L）液体培养基上生长良好,其分裂指数最大达4.1%。[结论]茄子悬浮细胞培养体系为茄子生物技术研究提供了一条途径,可应用该体系进行遗传转化等方面的研究。     

山东丹参细胞悬浮培养体系及生长模型的建立

【目的】建立和了解山东丹参疏松愈伤组织和悬浮细胞生长规律。【方法】以叶片为外植体研究疏松愈伤组织诱导增重以及细胞悬浮培养体系,并对疏松愈伤组织和悬浮细胞进行生长模型的拟合。【结果】疏松愈伤组织最佳诱导和增殖培养基为MS+2,4-D 0.5mg/L+KT 1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+酸水解酪蛋白1g/L,细胞悬浮培养基为MS+2,4-D 0.5mg/L+KT 1.5mg/L+6-BA 3.0mg/L+NAA 1.0mg/L+蔗糖30g/L+酸水解酪蛋白1g/L。【结论】山东丹参疏松愈伤组织和悬浮细胞生长曲线为"S"型,Richards方程模型能够很好地描述疏松愈伤组织和悬浮细胞生长曲线变化。     

雷公藤愈伤组织诱导及杀虫活性研究

【目的】建立雷公藤愈伤组织诱导培养体系,为雷公藤通过组织培养生产次生代谢产物奠定基础。【方法】以雷公藤枝条扦插苗的根、幼茎、叶为外植体,研究基本培养基、激素、外植体类型对愈伤组织诱导的影响,并检测了不同外植体愈伤组织乙酸乙酯提取物的杀虫活性。【结果】MS培养基有利于雷公藤愈伤组织的诱导;雷公藤的根、茎、叶3种外植体均可用来诱导愈伤组织;供试激素中,2,4-D的诱导效果较NAA好,KT的效果优于6-BA,低质量浓度的KT与2,4-D组合能促进愈伤组织的诱导和生长;根、茎、叶3种愈伤组织提取物对粘虫幼虫均有明显的拒食活性,对粘虫幼虫的生长发育有明显的抑制作用,48 h拒食中质量浓度(AFC50)分别为27.8,53.1和76.1mg/mL。【结论】雷公藤愈伤组织诱导的最佳培养基及激素组合为:MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5~1.0 mg/L KT;根愈伤组织提取物对粘虫幼虫的拒食活性最强。     

不同培养基对杜仲愈伤组织诱导和生长的影响

以MS、LS、B5、N6、H、Nitsch、White、WPM为基本培养基,分别添加1.0 mg/L NAA+0.3 mg/L BA,进行不同培养基对杜仲嫩茎及幼叶愈伤组织诱导的研究;以MS、LS、B5、N6、H、Nitsch、White、1/2 MS为基本培养基,分别添加0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L BA,进行不同培养基对杜仲嫩茎及幼叶愈伤组织继代培养的研究.结果表明,MS培养基有利于杜仲幼茎愈伤组织的诱导,而B5培养基不仅对叶的愈伤组织诱导有利,对茎和叶愈伤组织的继代培养也是最理想的.     

药用植物草麻黄细胞的悬浮培养

[目的]对草麻黄的子叶诱导出的愈伤组织,进行悬浮培养。[方法]采用组织培养的方法进行了愈伤组织诱导、愈伤组织继代和悬浮培养研究。[结果]MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA为诱导子叶形成愈伤组织的理想培养基;MS+1.5 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L6-BA是愈伤组织的适宜继代培养基;2.0 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA+300 mg/L水解酪蛋白(CH)是愈伤组织悬浮培养的适宜培养基,愈伤组织干重增加量为0.80 g。[结论]初步选择出草麻黄愈伤组织细胞的悬浮培养条件,为麻黄细胞扩大培养及有效成分提取奠定基础。     

鸡骨草悬浮细胞系建立与植株再生研究

以鸡骨草（Abrus cantoniensis Hance）茎段为试材,进行了细胞悬浮培养及植株再生诱导的研究。结果表明：MS＋2.0mg/L 2,4-D＋1.5mg/L 6-BA培养基适合从茎段诱导生长迅速、质地疏松的愈伤组织;将获得的愈伤组织置于MS＋2.0mg/L 2,4-D＋0.1mg/L NAA＋1.5mg/L 6-BA液体培养基中振荡培养,建立细胞悬浮培养体系,随后继代4次,分化出芽;分化芽诱导生根后形成小植株。     

CD20片段抗体在红花悬浮细胞中的表达研究

【目的】研究用红花愈伤组织建立红花悬浮细胞培养体系的条件,并利用红花悬浮细胞通过农杆菌介导转化法表达CD20复合片段抗体。【方法】以红花子叶为外植体,研究不同种类激素组合对愈伤诱导率的影响,筛选优质愈伤组织进行悬浮培养,探索不同初始接种量、蔗糖质量分数、水解酪蛋白质量浓度对红花悬浮细胞生长的影响。将CD20复合片段抗体基因两端引入XmaⅠ/EcoRⅠ酶切位点,并将其与pEASY-T1和pBasta载体相连,构建pEASY-T1-CD20克隆载体和pBasta-CD20表达载体,再将构建的pBasta-CD20表达载体转入根瘤农杆菌,利用根瘤农杆菌介导红花悬浮细胞转化法表达CD20复合片段抗体。【结果】红花子叶愈伤诱导最佳条件为MS+NAA 2mg/L+6-BA 0.5mg/L、温度(25±0.1)℃、光照70μmol/(m2·s)连续光照,继代培养条件为MS+NAA 1mg/L+6-BA 0.5mg/L、30μmol/(m2·s)连续光照、温度(25±0.1)℃。悬浮细胞体系培养最佳条件为不加琼脂粉的MS+NAA 1mg/L+6-BA 0.5mg/L、接种量2.5g(50mL培养基)、蔗糖质量分数2%、水解酪蛋白800mg/L。pBastaCD20表达载体构建成功,且目的蛋白在红花悬浮细胞中成功表达。【结论】成功构建了红花悬浮细胞培养体系,并用该体系成功表达了CD20复合片段抗体。     

国庆菊继代增殖培养技术初探

为国庆菊的工厂化快繁提供理论依据,选取初代培养完成的国庆菊截取茎段作为外植体,分别以 MS、N6和 White 为基本成分,附加不同浓度细胞分裂素（6-BA）组成12种继代增殖培养基,研究了国庆菊继代增殖培养技术。结果表明：不同培养基培养,第11天开始长新叶,第15天开始长丛生芽,30 d 后增殖情况差异明显,MS 培养基的丛生芽最多,且旺盛;N6培养基的丛生芽较 MS 少但比 White 多且旺盛, White 培养基的丛生芽最少且最弱。细胞分裂素浓度为1．5 mg/L 的 MS 培养基的国庆菊丛生芽增殖倍数最大,达17．5;其次是浓度为0．5 mg/L 的 N6培养基,为11．5;浓度为0．5 mg/L 的 White 培养基的丛生芽增殖倍数最小,仅1．7。MS 是继代增殖培养的最适培养基,1．5 mg/L 是最适细胞分裂素浓度。     

叶用芥菜细胞悬浮培养的初步研究

以叶用芥菜的子叶为外植体,对愈伤组织诱导和细胞悬浮培养的技术体系进行了研究。结果表明愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.3mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L2,4-D,愈伤组织最佳增殖培养基为MS+3.0mg/L6-BA+1.0mg/L2,4-D。悬浮培养过程中细胞生长曲线呈S型,培养2-10d达对数生长期。将小细胞团接种于MS+1.0mg/LNAA+3.0mg/L6-BA分化培养基上,继代两次后,分化出芽,分化芽在培养基MS+0.1mg/LNAA上诱导生根,形成小植株。     

莫氏兰的组织培养

以花芽为外植体进行莫氏兰的组织培养研究.结果表明:莫氏兰化芽接种在MS+6- BA 5.0 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1的培养基中,40 d后可分化成原球茎或丛生芽;原球茎在MS +6-BA3.0 mg·L-1+NAA 0.3mg· L-1+φ =10％的椰子水的培养基上,增殖效果最好;小芽在1/3MS+花...     

玉米自交系愈伤组织诱导及植株再生体系的建立

玉米的组织培养比较困难,其再生体系还不完善,建立骨干自交系稳定、高效的遗传转化体系是玉米转基因技术的必要前提。以玉米常用自交系齐319、478、502、黄C和7922不同大小（1.0、1.5和2.0 mm）的幼胚为外植体,探讨不同基因型、胚大小和植物生长调节剂浓度对幼胚再生的影响,从而建立玉米高频再生体系。结果表明：以1.5 mm大小的齐319幼胚为外植体,愈伤诱导率最高,达到了86.2%;1.5 mg/L的24-D有利于胚性愈伤的形成和胚性的保持;两步法分化培养可以提高愈伤组织分化、再生成苗。确定了玉米自交系齐319较适合的培养程序为：将1.5 mm大小的幼胚盾片向上接于诱导培养基（N6＋24-D 1.5 mg/L＋L-脯氨酸0.7 g/L＋蔗糖30 g/L＋琼脂粉8 g/L＋硝酸银5μmol/L）,在25℃下暗培养20 d;挑选胚性愈伤组织在温度25℃、暗培养条件下进行继代培养,继代培养基与诱导培养基相同,每14 d继代1次;将愈伤组织继代42 d后转移至分化培养基1（MS＋肌醇100 mg/L＋蔗糖60 g/L＋gelrite 3 g/L）,继续暗培养10 d左右,待愈伤组织形成象牙白色的块状物且有绿点出现时,将其转移到分化培养基2（MS＋肌醇100 mg/L＋蔗糖30 g/L＋gelrite3 g/L）进行光培养,2～3 d即可分化出苗;待幼苗长到4～5 cm高时,移至生根培养基（1/2 MS＋IBA0.8 mg/L＋蔗糖30 g/L）,14～21 d幼苗长出大量的根系,形成完整的植株。     

几种理化因子对青钱柳悬浮细胞生长的影响

为了利用细胞悬浮培养技术生产青钱柳细胞及其代谢物质以解决青钱柳资源稀缺问题,采用单因素和正交试验优化青钱柳细胞悬浮培养条件。结果表明,在供试的WPM、MS、1/2MS、B5、N6、DKW、White7种培养基中,WPM、MS、B5均有利于悬浮细胞的生长;有利于悬浮细胞生长的碳源是果糖和蔗糖;2,4-D是影响青钱柳悬浮细胞生长的关键因子,对细胞生长影响极显著,最佳激素组合为0.4mg/L 2,4-D+0.4mg/LNAA+0.4mg/L KT+0.4mg/L 6-BA;通过L9(34)正交试验得出几种物理因子对悬浮细胞生长的影响效应排序为接种量>装液量>转速>pH,最佳条件组合为接种量80g/L、装液量40%、摇床转速115r/min、pH 5.0。     

金枝柳组织培养快速繁殖技术

在MS培养基中分别加入不同质量浓度的6-苄基氨基腺嘌呤（6-BA）和吲哚丁酸（IBA）进行金枝柳组织培养试验,探讨快速繁殖技术.结果表明：随着培养基中激素含量的增高,形成愈伤组织的量也增多;在MS＋1.0 mg/L 6-BA＋0.1 mg/L IBA培养基中的不定芽增殖数量最多（18.8）,无根苗在1/2 MS＋IBA 1.0 mg/L培养基上生根率最高（96%）;金枝柳试管苗移栽到腐殖土中成活率最高（97%）,河沙中成活率次之（76%）,旱田土上成活率最低（58%）.     

铁皮石斛茎段丛生芽的增殖培养研究

[目的]研究铁皮石斛茎段丛生芽的最适增殖培养方式。[方法]以铁皮石斛茎段为外植体,研究不同基本培养基、植物生长调节剂种类和浓度、有机添加物及培养时间对铁皮石斛丛生芽增殖的影响。[结果]MS培养基优于1/2MS、B5和N6;香蕉对丛生芽的分化有明显的促进作用;培养60 d时丛生芽的增殖倍数最高,生长势好。[结论]丛生芽的最佳增殖培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5mg/L+香蕉100 g/L+活性炭0.5 g/L,培养时间以60 d为宜。     

杉木茎段不定芽诱导及植株再生条件筛选

【目的】探索广西杉木快繁技术,为杉木组织培养和种苗供应提供参考依据。【方法】以杉木优良树种基部枝条为试验材料,进行茎段外植体消毒、不定芽诱导及植株再生研究。【结果】以75％酒精处理30s＋0．1％升汞消毒6min的效果较理想,污染率为30％;初代培养基为1／2MS＋NAA0．2mg／L＋6-BA0．6mg／L,第8d即有芽萌动,诱导率可达47％;继代培养基I／2MS＋IBA0．3nlg／L＋6-BA0．4mg,L中加入蔗糖30g／L,25d腋芽增殖倍数可达3．4倍;1／4MS＋IBAO．15mg／L＋NAA0．075mg／L对杉木生根诱导效果较好,生根率为52％。【结论】,杉木外植体用75％酒精和0．1％升汞消毒6min效果较理想,适当减少培养基中矿质元素有利于杉木外殖体芽的诱导和试管苗的增殖生长,NAA可促进试管苗生根。     

冬凤兰组织培养与快繁技术研究

通过探索冬凤兰的组培技术,为冬凤兰的保护和工厂化生产提供技术支撑。以冬凤兰蒴果为原材料,通过不同激素对比,筛选适宜萌芽培养基,并开展了冬凤兰增殖扩繁、生根壮苗、移栽驯化等一系列研究。结果表明:在培养基MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+CM 15%上,萌发时间最早,萌芽率较高;在改良VW培养基上芽分化效果较MS培养基好,芽分化率高,生长势好;在生根培养基VW+IBA 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L+卡拉胶10 g/L+活性炭0.4 g/L上,生根率达100%;冬凤兰后期需要采用630或650 m L的组培瓶。     

三褶虾脊兰无菌播种快繁技术研究

【目的】建立三褶虾脊兰（Calanthe triplicata）无菌播种快繁技术体系。【方法】以三褶虾脊兰种子为外植体,采用种子→原球茎→完整植株途径,探讨不同组合（0.5 mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA 和 1.0 g/L AC）、附加物［椰汁（CM）、土豆泥、香蕉泥］及基本培养基（花宝1号、1/2花宝1号、MS和1/2MS）对三褶虾脊兰种子萌发、原球茎诱导、增殖、分化、生根的效果,筛选适宜的培养基。【结果】成熟种子在1/2花宝1号+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+200 mL/L CM+1.0 g/L AC+20.0 g/L蔗糖培养基中培养150 d左右可形成原球茎,萌发率超过80%以上;诱导原球茎在1/2MS+100 mL/L CM+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1.0 g/L AC+20.0 g/L蔗糖培养基上的增殖效果最好,增殖率为4.5;原球茎接种于花宝1号+0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+100.0 g/L土豆泥+1.0 g/L AC+20.0 g/L蔗糖培养基上分化培养40 d后,再转入花宝1号+0.1 mg/L NAA+100.0 g/L土豆泥+2.0 g/L AC+20.0 g/L蔗糖培养基上培养40 d,可诱导形成完整植株。在花宝1号培养基中添加NAA和土豆泥或香蕉泥,原球茎生根率均达100.0%,但土豆泥的成本最低。【结论】建立了比较完善的三褶虾脊兰无菌播种和快繁技术体系,为其种质资源保护、种苗繁育以及产业开发提供技术支持。     

野生乳头百合组织培养及快速繁殖研究

[目的]筛选野生乳头百合组织培养最适宜的培养基。[方法]以野生乳头百合的鳞片、株芽、茎段和叶片为外植体进行组织培养。采用的基本培养基为：MS、B5和White,各培养基均附加0.03 mg/L NAA。分化培养基设置4种配方：MS＋2.00 mg/L6-BA＋0.20mg/LNAA、MS＋0.20 mg/L6-BA＋1.00 mg/LIAA、MS＋0.10 mg/LKT＋0.10 mg/LNAA、MS＋0.03 mg/L NAA。继代增殖培养基设6种配方：MS＋0.03 mg/LNAA、MS＋2.00 mg/L6-BA＋0.20 mg/LNAA、MS＋0.20 mg/L6-BA＋1.00 mg/L IAA、MS＋0.10 mg/L KT、MS＋0.20 mg/LKT＋0.20 mg/LNAA、MS＋0.10 mg/LKT＋0.15 mg/LNAA。生根培养基设置4种配方：MS＋1.00 mg/L IBA、MS＋1.00mg/LIBA＋0.20 mg/L6-BA、1/2MS＋1.00 mg/LIBA＋0.20 mg/L6-BA、White＋1.00 mg/LIBA＋0.20 mg/L6-BA。[结果]MS为最适基本培养基;鳞片在MS＋0.03 mg/LNAA上分化效果最好;株芽和叶片在MS＋2.00 mg/L6-BA＋0.20 mg/LNAA中分化效果最好;茎段在MS＋0.20 mg/LIAA中培养效果最好;最适的继代增殖培养基为MS＋0.10 mg/LKT＋0.15 mg/LNAA;无根子球和小苗在1/2MS＋0.20mg/L6-BA＋1.00 mg/LIBA上易生根。在大田栽培中,以鳞片和株芽为外植体的组培苗生长状况较好,生长能力强。[结论]该研究筛选出野生乳头百合最佳的快速繁殖培养基,为野生乳头百合的快速繁殖奠定了基础。