猪瘟疫苗的种类与使用方法

1.猪瘟疫苗的种类目前市场上预防猪瘟的疫苗主要有以下三种:(1)猪瘟活疫苗(Ⅰ)——乳兔苗。(2)猪瘟活疫苗(Ⅱ)——细胞苗。(3)猪瘟活疫苗(Ⅰ)——淋脾苗。2.猪瘟疫苗的使用方法猪瘟活疫苗(Ⅰ)——乳兔苗的用法:该疫苗为肌肉或皮     

猪瘟疫苗的种类与使用方法

1.猪瘟疫苗的种类目前市场上预防猪瘟的疫苗主要有以下三种:(1)猪瘟活疫苗(Ⅰ)——乳兔苗。(2)猪瘟活疫苗(Ⅱ)——细胞苗。(3)猪瘟活疫苗(Ⅰ)——淋脾苗。2.猪瘟疫苗的使用方法猪瘟活疫苗(Ⅰ)——乳兔苗的用法:该疫苗为肌肉或皮     

猪瘟病毒检测的研究进展

猪瘟,早期在美国称为猪霍乱(Hog cholera,HC),欧洲人称为古典猪瘟(Classical Swine Fever,CSF),便于与非洲猪瘟相区别。为避免与C-型肝炎病毒(Hepatitis C Virus)的字首缩写词HCV相混淆,国际兽疫局(OIE)规定猪瘟全称为古典猪瘟,英文缩写为CSF。猪瘟(CSF)是由黄病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒感染引起猪的一种高度传染性、致死性病毒病。2006年被国际兽疫局(OIE)规定为必须通报     

猪瘟疫苗的使用及注意事项

<正>猪瘟是一种传染性非常强的传染病,常给养猪业造成毁灭性损失。预防猪瘟的最有效的方法就是接种猪瘟疫苗。对猪瘟疫苗的使用及注意事项简单分析:1猪瘟疫苗的种类1.1目前市场上预防猪瘟的疫苗主要有以下三种:1猪瘟活疫苗(I)——乳兔苗。2猪瘟活疫苗(II)——细胞苗。3猪瘟活疫苗(I)——淋脾苗。2猪瘟疫苗的使用方法2.1猪瘟活疫苗(I)——乳兔苗的用法该疫苗为肌肉或皮下注射。使用时按瓶签注明头份用无菌     

一例外购猪猪瘟暴发后的诊断与防控措施

猪瘟(CSF)是由黄病毒科(Flaviridae)瘟病毒属(Pestivirus)的猪瘟病毒(HCV)引起的以多发性出血性败血症病变为主要特征的繁殖障碍性传染病之一,美国、澳大利亚、瑞士等国家猪瘟已经净化成功,我国自2007年对猪瘟施行强制免疫,到目前为止猪瘟的防控起到了不错的防控效果,但仍然呈现流行状态,通过介绍某农场新引进仔猪后暴发猪瘟的处理过程,旨在探讨猪瘟暴发后的防控要点,供广大养殖户朋友参考借鉴。     

猪瘟的发生与防制

猪瘟是一种烈性传染病 ,至今仍是养猪业的大敌。就目前来看 ,猪瘟疫情在我国已基本被控制 ,但在部分地区仍时有发生 ,而且出现一些新的流行特点。发病原因猪瘟是由猪瘟病毒引起的 ,某些猪场引进猪时不经检疫而引进病猪或带毒猪或集市贸易等途径亦可引起传播。 ( 1 )疫苗效价低 ,某些厂家生产的猪瘟猪丹毒猪肺疫三联苗因未经浓缩 ,实际所含猪瘟疫苗的效价低。 ( 2 )疫苗失真空。 ( 3)疫苗保存不当 ,造成免疫失败。 ( 4 )接种疫苗时操作不当。( 5 )免疫程序不合理。 ( 6)母猪发生漏免。 ( 7)胎盘感染猪瘟病毒引起母猪产死胎或仔猪发病。 ( 8)…     

浅谈猪瘟病毒

<正>猪瘟(CSF)在欧洲称古典猪瘟,用以区别非洲猪瘟。猪瘟是由猪瘟病毒(HCV或CSFV)引起的一种高度接触性、出血性和致死性传染病。为避免与乙型肝炎病毒字首缩写词(HCV)混淆,多用经典猪瘟病毒字首缩写词(CSFV)代替猪瘟病毒。猪瘟病毒(CSFV)为核糖核酸(RNA)病毒。病毒粒子呈圆形球状,直径40~50nm,二十面体对称衣壳,有囊膜,存在于细胞浆内。猪瘟病毒对抗生素类药物无敏感性,对温度、湿度、日光等物理因素抵抗     

非洲猪瘟的诊治与管防措施

正非洲猪瘟(ASF)是一种高度接触传染性疾病,是OIE规定的疾病,在很多非洲国家和地中海撒丁岛呈地方性流行。非洲猪瘟病毒目前已传播至俄罗斯和格鲁吉亚,引起了东欧和西亚国家的高度关注。非洲猪瘟病毒目前属于非洲猪瘟病毒科中仅有的一员。我国是猪肉生产和进口大国,对本病应引起重视。非洲猪瘟能够产生大量与古典猪瘟极度相似的临床症状。由于非洲猪瘟(ASF)与古典猪瘟(CSF)     

非典型猪瘟的防治措施

养猪场联合使用猪瘟活苗和猪瘟灭活苗,活苗可中和母源抗体的影响,同时也可启动细胞免疫;灭活苗抗原含量高,释放慢,可长时间(3～4周)刺激机体产生整齐而高水平的抗体,进行体液免疫,可成功预防非典型猪瘟的发生。1免疫程序(1)种公猪。每年2次免疫,每年春(3—4月份)、秋(9—10月份)各1次,每次注射猪瘟冻干疫苗4～6头份,同时注射猪瘟凝胶灭活疫苗1头份。(2)母猪采取窝防的形式。即在每窝仔猪防疫的同时,进行母猪的防疫。每次给母猪注射猪瘟冻干苗4～6头份,同时注射猪瘟凝胶灭活苗1头份。(3)发生猪瘟严重的场(户),对仔猪应采取超前免疫。仔猪出生…     

肉兔体内猪瘟抗体滴度对猪瘟定型热比率的影响

以猪瘟正向间接血凝法对肉兔进行猪瘟抗体水平的检测,选用猪瘟抗体滴度≥1∶4( )的试验兔9群686只、0~1∶2( )试验兔2群328只。每只兔注射含4000个发热单位的猪瘟兔化弱毒(脾毒乳浆液)。结果表明猪瘟抗体滴度≥1∶4( )的试验兔定型热比率加权平均值为63.3%、0~1∶2( )试验兔定型热比率加权平均值96.3%,差异极显著。以4个兔场12511只肉兔作扩大试验,结果表明无猪瘟抗体试验兔(占94.8%)的平均定型热比率为88.6%;猪瘟抗体滴度≥1∶4( )试验兔(占56.7%)定型热比率为79.1%。     

表达牛流行热病毒G基因的牛传染性鼻气管炎病毒转移载体的构建

本试验将克隆到 p BLG中的牛流行热病毒 (BEFV)糖蛋白 G基因亚克隆到含有 CMV启动子和 Poly(A)信号尾的 p CR3- Uni载体上 ,获得 p CR3- G重组体 ,酶切后将含有 CMV、G基因和 Poly(A)的目的片段 (约 3.6 kb)插入通用转移载体 pd TK- CMB中 ,获得 pd TK- CMB- G重组体 ;再将含 SV4 0启动子的 L ac Z报告基因也亚克隆到该载体中获得表达 BEFV G基因的pd TK- L ac Z- G转移载体 ,为开发 BEFV/IBRV二联基因工程疫苗奠定了基础     

绵羊白细胞介素2基因的克隆与表达载体构建

从绵羊血中分离白细胞,提取绵羊白细胞RNA,利用RT-PCR、PCR扩增绵羊白细胞介素2(OvineIL-2)基因。将OvineIL-2PCR产物与TE载体定向连接,用SaLI和BamHI双酶切重组TE,利用低溶点胶回收500bp大小的片段;将其补平后与PPSD质粒连接,用EcoRI酶切鉴定,找出正向连接重组质粒。用BamHI酶切重组PPSD质粒,低熔点胶回收2500bp大小的片段;将其与经BamHI酶切去磷酸化的PME290表达质粒连接,筛选出阳性重组PME290,即为OvineIL-2基因表达载体。     

人肿瘤坏死因子α逆转录病毒表达载体的构建

应用ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔｌｌｋｓ质粒构建了含人肿瘤坏死因子－α　ｃＤＮＡ的过渡性载体ｐＢＴ１和ｐＢＴ２。用限制性内切酶ＢａｍＨＩ与ＥｃｏＲＶ消化ｐＢＴ１ＤＮＡ，分离出了ＴＮＦ－α　ｃＤＮＡ基因片段，并在其平末端加入了ＢａｍＨＩ接头。进而将带有ＢａｍＨＩ粘性末端的ＴＮＦ－αｃＤＮＡ克隆到了逆转录病毒载体ｐＺＩＰＮｅｏＳＶ（Ｘ）１５′－端长末端重复序列（ＬＴＲ）下游的ＢａｍＨＩ切点上，构建了重组质粒ｐＺＩＰＴＮＦ。该重组质粒经琼脂糖凝胶电泳，限制性内切酶消化和核酸杂交鉴定分析，证明ｐＺＩＰＮｅｏＳＶ（Ｘ）１中插入了ＴＮＦ－α　ｃＤＮＡ，并且方向正确。本研究为应用重组逆转录病毒介导ＴＮＦ－α基因转移与治疗奠定了基础。     

Construction and Expression of SLA-1 Prokaryotic Expressing Vector in Yorkshire Pig

In order to construct the prokaryotic expressing vector of SLA-1 derived form Yorkshire pig and express the interest of protein, a pair of primers was designed to amplify the extracellular domain of SLA-1 gene from Yorkshire pig (named SLA-1-DYKe) by PCR. Then the PCR product was cloned into pMD^®19-T Simple Vector and transformed into Escherichia coli TOP10. After cleaved by Nde Ⅰ and Xho Ⅰ, the positive clones were selected to be sequenced. Analyzing by biological soft, the fragment from positive clone with correct sequence was inserted into pET-28a (+) and transformed into E.coli BL21(DE3). After induction and expression, the interest of protein was detected by SDS-PAGE. The results showed that the extracellular domain of SLA-1-DYKe was successfully amplified with the fragment length of 837 bp. The interest of SLA-1 gene was successfully cloned into pMD^®19-T Simple Vector and the positive recombinant plasmids with correct sequences were obtained. The SLA-1-DYKe from positive recombinant plasmids was further inserted into pET-28a(+). After transformed into E.coli BL21(DE3) and induction, the SLA-1-DYKe was successfully expressed. The molecular weight of the protein was about 34 ku. It was concluded that the prokaryotic expressing vector of SLA-1 was constructed successfully from Yorkshire pigs and then the expressed protein was obtained, which would lay a base for studying on the structure and function of SLA-1 from Yorkshire pig in the future.     

大约克猪SLA-1原核表达载体的构建及表达

为构建大约克猪SLA-1胞外区的原核表达载体及表达目的蛋白,试验设计1对引物,经PCR扩增获得大约克猪SLA-1胞外区基因（命名为SLA-1-DYKe）,将此片段克隆至pMD^®19-T Simple Vector,转化大肠杆菌TOP10感受态细胞,经Nde Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切筛选阳性克隆菌并测序,将目的基因插入到原核表达载体pET-28a（+）中,转化至宿主菌BL21（DE3）进行诱导表达,用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况,大量诱导提取包涵体并检测。结果显示,PCR成功扩增SLA-1-DYKe的胞外区,得到大小为837 bp的目的基因,目的基因成功克隆至pMD^®19-T Simple Vector,并获得序列正确的重组质粒。以得到的重组质粒成功构建了SLA-1-DYKe/pET-28a（+）表达载体,目的蛋白大小约为34 ku。本研究成功构建了大约克猪SLA-1原核表达载体,获得了表达蛋白,为今后研究大约克猪SLA-1的空间结构和基因功能奠定了基础。     

猪A-FABP基因真核表达载体的构建及其组织表达

本实验以长白猪背最长肌为实验材料,进行组织RNA的提取及A-FABP基因的克隆,构建p EGFPN1-A-FABP真核表达载体,并通过脂质体转染成纤维细胞,48 h观察荧光表达。同时应用荧光定量PCR法检测猪7种不同组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、腿肌)中A-FABP基因的差异表达。结果表明:成功构建p EGFP-N1-A-FABP融合表达载体,并在细胞中表达绿色荧光蛋白;A-FABP基因在7种组织中均有表达,其中背最长肌和腿肌中A-FABP基因的表达量最高,与其他组织相比差异极显著(P0.01),而脾脏和肾脏中的表达量相对于心脏、肝脏和肺脏差异显著(P0.05),而A-FABP基因表达量在心脏、肝脏和肺脏中差异不显著(P0.05)。表明该基因能够在真核载体和细胞中表达,并且在猪不同组织的表达具有差异性。     

腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因的克隆与表达载体的构建

用PCR技术从腐蹄病C型节瘤拟杆菌克隆出具有免疫保护性抗原0.85kb纤毛蛋白基因（pili基因），利用该基因构建了纤毛蛋白基因表达载体。提取C型节瘤拟杆菌染色体DNA；用所设计的专一性引物进行PCR，扩增出pili基因；将pili基因克隆于TE载体，TE－pili重组质粒pili基因序列测定结果正确，用EcoRI酶切，低熔点胶回收pili基因片段，经klenow补平后，用T4DNA连接酶将其与中间载体pPLλ连接，将pili基因克隆于pPLλ载体，经BamHI、BamHI HindⅢ、Dral酶切鉴定pili基因正向插入pPLλ载体；扩增pPLλ-pili重组质粒，用BamHI酶切出2.1kb大小片段，回收后，与PME290表达质粒连接，转化宿主细胞PAK／2pfs中，对获得的重组质粒用BamHI酶切，出现2.1kb大小的带,证明含有目的基因。     

表达绿色荧光蛋白为伪狂犬病病毒转移载体的构建及转移特性

对含伪狂犬病病毒（PRV）鄂A株gG全基因，PK，gD基因部分编码序列的质粒pUSK进行改造，肖除其中的EcoRI位点，将通过PCR扩增的增强绿色 荧光蛋白基因（EGFP）融合到gG启动子下游，构建了由gG启动子控制EGFP表达的PRV转移载体pgG^-1/EGFP^ ，该转移载体单独转染或同PVR基因组DNA共转梁IBRS－2细胞，结果单独转染时EGFP不能表达，共转梁时，6h就可在荧光显微镜下观测到明显的荧光。     

番鸭细小病毒NS2原核表达载体的构建

根据已发表的番鸭细小病毒(MDPV)核苷酸序列设计并合成1对引物,对MDPV非结构蛋白NS2基因进行扩增。所获得的PCR产物与预期片段大小相符,约1.4 kb。将该片段直接与pMD18-T载体连接,转化入感受态大肠杆菌DH5α中增殖。在对所提质粒进行快速鉴定、PCR扩增及BamH I酶切线性化初步鉴定的基础上,经限制性内切酶BamH I和Sal I进行双酶切鉴定。将克隆产物pMD18-T-NS2与原核表达载体pET-32a分别用BamH I和SalI双酶切后,回收目的片段进行定向连接,并转化入感受态大肠杆菌DH5α中。对所获得的重组质粒分别经BamH I单酶切、BamH I和Sal I双酶切,证实含有目的基因,且基因插入方向正确,成功构建了含有MDPV NS2非结构蛋白基因的原核表达载体,为高效原核表达及研制更为有效的基因工程疫苗打下了基础。     

Construction of the Shuttle Vector Expressing Green Fluorescent Protein and its Application in Lactobacillus acidophilus

In order to further study the mechanism of Lactobacillus acidophilus,GFP labeling shuttle expression vector pSET4s-P1-GFP-P2 was constructed by inserting green fluorescence protein (GFP),upstream and downstream homology arm of Lactobacillus acidophilus based on temperature shuttle expression vector pSET4s.Recombinant Lactobacillus acidophilus expressing green fluorescence gene was constructed by transforming pSET4s-P1-GFP-P2 into Lactobacillus acidophilus using electrotransformation.We could obtain the recombinant Lactobacillus acidophilus by resistance screening and temperature screening,and named it as ΔMG6243(GFP) which could expressed GFP gene stably by fluorescence microscopy observation and Western blotting analysis.We could analyse the genetic stability and biological characteristics with fluorescence microscopy observation and plate count.Green fluorescent of recombinant Lactobacillus acidophilus could be observed in the blue light,and also be observed after 10 generations.There were significant differences neither growth characteristics nor pH and salt tolerance compared with the wild mushrooms.The results showed that GFP labeling recombinant Lactobacillus acidophilus was constructed successfully.Exogenous gene could be non-resistant and integrative to express in the Lactobacillus acidophilus with the vector.It established the foundation for construction of recombinant Lactobacillus acidophilus.At the same time,the role of the GFP as marker laid the foundation for distribution,adhesion of probiotic in animal gastrointestinal tract and the mechanism of Lactobacillus acidophilus.