孵蕴春荡——访北京市海江孵化设备制造有限公司董事长王复生

伪狂犬病(Pseudorabies PR)是由疱疹病毒科的伪狂犬病病毒引起的一种家畜及野生动物的急性传染病，在世界各地广泛流行。在我国，该病对猪的危害很严重，引起仔猪的高发病率，成年猪症状微轻，常呈现隐性带毒，成为新的传染源。用血清学方法检测猪血清中伪狂犬病病毒抗体，在猪伪狂犬病的诊断、流行病学调查及疫苗免疫效果的检测上有一定的意义。     

猪伪狂犬病毒间接ELISA抗体检测方法的建立

为了满足我国现阶段猪伪狂犬病病毒(PRV)高频突变引发新疫情诊断的需求,本实验通过生物信息学分析比较,设计合成了针对PRV g B糖蛋白高度保守的抗原优势表位区肽段,命名为g B872。以此肽段为包被抗原,经条件优化建立了新型的PRV-g B间接ELISA抗体检测方法。该ELISA方法检测结果显示,其仅对PRV血清检测为阳性,而与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒(O型)、猪细小病毒、猪圆环病毒2型等主要猪源病毒阳性血清均无交叉反应,表明该方法具有较强的特异性;最低检测下限血清稀释度为1∶128,高于IDEXX PRV/ADV g B抗体检测试剂盒检测下限稀释度(1∶4),表明该方法敏感性高;批内、批间重复性试验结果显示,变异系数均低于10%,重复性良好。利用该方法与Bio Chek PRV-g B抗体检测试剂盒检测90份临床血清样品,对比结果分析显示,两者阳性符合率为100%,阴性符合率为97.67%,总体符合率为97.78%;同时,采用该方法与IDEXX-g I(gE)和IDEXX-g B试剂盒分别对野毒感染血清和疫苗免疫血清同时检测,该方法可以准确识别野毒阳性血清和疫苗免疫阳性血清,与IDEXX两种试剂盒的结果一致。本研究建立的间接ELISA检测方法对PRV疫苗免疫效果评价、流行病学调查及防控提供了可靠的方法。     

猪伪狂犬病野毒感染的临床诊断、血清学调查以及控制措施

目的为某规模化猪场猪伪狂犬病病毒野毒株感染防控工作提供科学的免疫防控方案。方法对某发病猪群（采用Bartha-K61经典毒株疫苗进行了猪伪狂犬病免疫）进行流行病学调查,并采用ELISA方法检测其猪伪狂犬病gB抗体和gE抗体水平。结果根据调查、解剖和血清抗体检测结果,初步确诊该发病猪群为猪伪狂犬病野毒感染。通过采取紧急免疫伪狂犬病HB2000毒株疫苗、调整免疫程序和配合药物治疗等措施,育肥猪死亡率从2.56%降低至0.60%;除了4周龄及12周龄猪群外,其余猪群伪狂犬病野毒抗体水平全部下降;种公猪、8周龄、10周龄、14周龄猪群伪狂犬病野毒抗体阳性率均为0。结论Bartha-K61经典毒株疫苗并不能提供完全的保护力,通过紧急免疫与流行毒株同源性较高的HB2000毒株疫苗,加强生物安全管理工作,能够有效控制猪伪狂犬病野毒感染。     

间接ELISA检测猪伪狂犬病血清抗体

用猪肾传代细胞IBRS－2增殖猪伪狂犬病病毒（PRV）鄂A株，病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、聚乙二醇（Mr20000）浓缩后作为包被抗原。用纯化的猪血清IgG免疫家兔，HRP村记撮的兔抗猪IgG，制备出高效价的酶标抗体，酶标抗体工作浓度为1：50000；经各种条件的选择，建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的间接ELISA。所建立的间接ELISA抗原包被浓度为39.2mg/L，血清最佳稀释度为1：20，与猪细小病毒、猪、O型口蹄疫、猪衣原体标准阳性血清呈阴性反应，与标准阴性血清和临床未感染PRV的猪血清呈阴性反应；与猪伪狂犬病标准阳性血清、免疫猪血清和临床发病猪血清呈明显的阳性反应；与美国进口的PRV抗体检测ELISA诊断试剂盒检测结果比较，45份猪血清的阴、阳性检出符合率均为100％。表明建立的间接ELISA具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点，可用于猪伪狂犬病血清抗体的定性和定量检测。     

猪伪狂犬病疫苗的选择和免疫时机

猪伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(PRV)所引起的猪的一种病毒性传染病。近年来,伪狂犬病流行普遍。如何提高猪群的整体免疫力水平和抗体的均匀度对于伪狂犬病的防控是至关重要的。这其中,疫苗的选择和免疫时机的确定是关键。     

猪伪狂犬病gB抗体快速检测试纸条的研制和评价

为了建立一种猪伪狂犬病gB抗体检测试纸,为养猪业基层工作人员提供一种快速简便的狂犬病免疫抗体评价方法。胶体金标记gB蛋白作为探针,SPA和猪抗伪狂犬病病毒多抗IgG分别作为检测线和质控线,建立了猪伪狂犬病gB抗体检测试纸。猪伪狂犬病质控血清和疫苗免疫猪血清用来评价其特异性,敏感性以及与IDEXX PRV gB ELISA试剂盒的符合率试验。试验结果显示,该试纸条具有较高的特异性和敏感性,与IDEXX PRV gB ELISA试剂盒的符合率为91.04%;该免疫层析试纸条具有快速(5min)、特异、敏感等优点,不需要专门的仪器设备和专业技术人员,适合于田间推广应用。     

猪伪狂犬重组抗原间接ELISA诊断方法的建立

本研究应用重组抗原,成功建立了检测猪伪狂犬病病毒血清抗体的间接ELISA诊断方法。通过方阵滴定确定了抗原最适包被量为1.45μg/孔,血清最适稀释度为1∶80,其作用时间为60 min,酶标抗体最适作用时间为60 min。其阳性临界值为OD≥0.123。此外,该抗原不与猪其他疾病的阳性血清反应,具有良好的特异性;批内重复试验,变异系数小于10%。该方法与进口诊断试剂盒的符合率为96.3%。本研究为现地免疫猪群抗体检测和进行PRV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。     

重庆某种猪场猪瘟、口蹄疫、伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征抗体的ELISA检测

利用ELISA方法,对重庆市渝北区某种猪场种公猪、保育猪、育成猪、后备种猪、基础母猪不同类型和生长阶段猪群的猪瘟病毒抗体、O型口蹄疫抗体、口蹄疫病毒非结构蛋白抗体、伪狂犬病抗体、猪伪狂犬病病毒gpI抗体、猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体进行了监测和分析,结果表明:猪瘟、口蹄疫、猪伪狂犬病免疫总体水平较高,在上半年和下半年的抗体检测合格率均达到100%;猪繁殖与呼吸综合征病毒在上半年和下半年的抗体平均阳性率分别为9.8%和62%,抗体阳性率分别在95%～100%和40%～80%,由于该种猪场未曾免疫猪繁殖与呼吸综会征疫苗,表明猪繁殖与呼吸综合征病毒的感染程度较高,且在不同猪群普遍存在,应予以充分重视。     

青岛地区猪伪狂犬病血清学调查

应用血清学方法对从青岛4个地区8个规模化猪场和10个养殖户采集血清进行猪伪狂犬病调查。结果表明,有3个规模化猪场7个养殖户出现野毒感染抗体阳性,猪伪狂犬gB-ELISA试剂盒检验阳性率为91.5%,gE-ELISA试剂盒检验抗体阳性率为15.42%,表明猪伪狂犬病在山东地区猪群中流行范围仍然很广。伪狂犬病（PR）是由伪狂犬病病毒引起家畜和多种野生动物的一种急性、热性传染病。     

猪伪狂犬病毒野毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

为建立一种敏感、特异、高通量的猪伪狂犬病毒(PRV)野毒抗体血清学检测方法,本研究利用原核表达技术表达了猪伪狂犬病毒gE蛋白,以纯化的重组gE蛋白为包被抗原建立了检测猪伪狂犬病毒野毒抗体的间接ELISA方法。参照已发表的PRV基因组gE基因序列,设计合成1对特异性引物,PCR扩增了长约606 bp的gE基因片段,将目的片段亚克隆至pET30a原核表达载体中,经IPTG诱导重组gE蛋白的表达,重组蛋白纯化后,免疫印迹检测证明具有良好的抗原性和特异性。以纯化蛋白为包被抗原,经间接ELISA反应条件的优化,建立了检测伪狂犬病毒野毒抗体的间接ELISA方法,该方法检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、PRV疫苗毒的阳性血清均为阴性;该方法批内与批间重复性试验的变异系数分别小于5%和10%;该方法与IDEXX gE-ELISA抗体检测试剂盒的符合率为96.2%。本研究建立的gE-ELISA检测方法为PRV野毒抗体检测以及野毒感染的快速诊断与流行病学调查等提供了一种简便、快速、高通量的血清学检测方法。     

清远市部分规模化猪场四种疫病的抗体检测与分析

为评价清远市部分规模化猪场猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪圆环病毒病(PCVD)和猪伪狂犬病(PR)疫苗免疫水平,从7家规模化猪场采集了322份血清样品,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测了猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病和猪伪狂犬病病毒gB抗体和gE抗体。结果表明:猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病和猪伪狂犬病病毒gB抗体阳性率分别为93.48%、89.13%、90.37%、92.24%,离散度分别为22.69%、56.61%、36.13%、31.12%。说明这7家猪场四种疫病疫苗免疫效果良好,其中有1家猪场怀疑伪狂犬野毒流行。     

江西省部分规模种猪场猪伪狂犬病血清学调查报告

为掌握江西省种猪场猪伪狂犬病病毒的感染状况,对15个已使用猪伪狂犬病毒gE基因缺失疫苗免疫的种猪场l 420份送检血清,采用猪伪狂犬病基因缺失鉴别ELISA方法进行血清学抗体监测,检测出猪伪狂犬病毒gE抗体阳性186份,阳性率为13.1%.结果表明,江西猪群中存在猪伪狂犬病病毒感染,且某些猪场猪伪狂犬病病毒的感染率较高...     

规模猪场猪伪狂犬病的净化研究

猪伪狂犬病是由伪狂犬病病毒引起的多种动物共患传染病．可引起仔猪大量发病死亡，母猪流产、死胎等繁殖障碍，育肥猪生长发育缓慢，经济损失惨重。为净化规模猪场的猪伪狂犬病，试验采用综合性的净化措施，除淘汰病猪及抗体检测阳性猪、加强饲养管理等技术措施外，采用猪伪狂犬病弱毒疫苗免疫试验，结果母猪一次免疫合格率为90．74％，仔猪二免后的免疫合格率为94．44％。     

伪狂犬病病毒感染抗体监测及伪狂犬病流行状况分析

在北京大兴和顺义区2个使用伪狂犬病病毒（porcine pseudorabies virus,PRV）Bartha株基因缺失疫苗的规模化猪场进行为期3年的猪伪狂犬病野毒感染抗体跟踪监测,并进行猪场的临床状况和组织样品的PCR检测,结果显示,北京市2011—2012年间在猪伪狂犬病基因缺失疫苗免疫猪场发生了猪伪狂犬病的流行。提示,应对该状况加以重视,对其发病原因需进行进一步的病毒分离和毒株分子遗传学分析。     

基于重组NS1蛋白猪细小病毒野毒抗体间接ELISA诊断方法的建立与应用

本研究以原核表达的重组NS1蛋白作为诊断抗原,建立了检测猪细小病毒(PPV)野毒抗体的NS1-ELISA诊断方法。该方法检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒5种常见猪病病毒的阳性血清均为阴性;检测灵敏度为1:12800;批内、批间重复性试验的变异系数分别小于5%和10%;与血凝抑制试验(HI)符合率为100%。本研究建立的PPV NS1-ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为PPV的野毒抗体检测及PPV流行病学调查等快速诊断提供了一种技术手段。     

猪伪狂犬病流行现状及防控对策

猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病病毒引起的猪的急性传染病。本文对绿春县半坡乡猪群开展流行病学调查和血清病原学及免疫效果跟踪调查,掌握了猪伪狂犬病分布、感染强度和流行规律,同时也掌握了该疫病防疫质量和免疫效果,为该病防控工作的制定提供科学依据。     

玉林市猪伪狂犬病病毒野毒株感染情况调查

为评估近年来玉林市猪伪狂犬病流行情况,于2010年—2012年分别对不同来源于散养户、规模场、种畜场的1 441份血清样品进行gE-ELISA和PCR检测,对与本实验免疫效果相关的免疫次数、疫病净化、疫苗使用等因素进行调查分析。发现玉林市猪伪狂犬病病毒野毒株感染情况:免疫三次以上的猪群,免疫效果明显,注射猪伪狂犬TK/gE—双基因缺失疫苗的猪群阳性率比注射其它品种的疫苗要低。     

长沙市对伪狂犬病野毒感染的调查

为了解长沙市规模猪场伪狂犬病流行情况,对市内47个规模猪场送检的1534猪血清样品和22个已免疫伪狂犬基因缺失苗规模场送检的1300份血清样品,用ELISA方法对猪伪狂犬病野毒感染抗体（gpI抗体,下同）和免疫抗体（gB抗体,下同）进行检测。结果表明,长沙市规模猪场猪伪狂犬病gpI抗体阳性率为20.9%,场阳性率为44.7%;22个免疫猪伪狂犬基因缺失苗规模猪场猪伪狂犬病gpI抗体阳性率下降1.8%,场阳性数下降4.6%。结果表明,通过利用猪伪狂犬病基因缺失疫苗科学免疫,同时配合伪狂犬野毒抗体检测技术可以控制和净化规模猪场猪伪狂犬病流行。     

应用猪圆环病毒2型缺失NLS的Cap蛋白建立一种ELISA检测方法

本试验通过诱导重组质粒pCold-SUMO-dCap在大肠杆菌中高效表达,获得了可溶性表达的SUMO-dCap融合蛋白,以SUMO-dCap融合蛋白作为包被抗原,建立了一种检测猪圆环病毒2型抗体的ELISA方法。用该方法与商品化试剂盒对267份猪血清进行平行检测,两种方法的符合率为90.26%,该方法的特异性和灵敏性分别为93.33%、97.16%;与猪蓝耳病病毒、猪伪狂犬病病毒、猪乙型脑炎病毒、猪口蹄疫病毒和猪瘟病毒阳性参考血清无交叉反应;批内和批间变异系数分别为1.25%⁶.37%和6.68%6.37%和6.68%¹3.58%。研究结果表明,本试验建立的ELISA方法特异性强、敏感性好、重复性高,为临床上PCV2血清抗体检测和PCV2流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法,为商品化试剂盒开发奠定了良好的基础。     

某规模化猪场血清学检测结果分析

血清学检测,是猪场最广泛使用的检测方法之一。本案例中,笔者对江苏某猪场送检的193份血清样进行了猪瘟抗体、猪伪狂犬g B/g E抗体、猪圆环病毒抗体、猪蓝耳病毒抗体的检测和分析。结果显示该场后备母猪猪瘟免疫欠佳,猪伪狂犬病免疫不合格,猪蓝耳病抗体水平偏高;母猪猪伪狂犬病毒感染程度较高,猪呼吸与繁殖综合征普遍感染且抗体偏高;公猪猪圆环病毒抗体水平偏高;商品猪猪瘟免疫效果不稳定;猪蓝耳病感染比较普遍,且部分猪群抗体水平偏高,猪圆环病毒病免疫欠佳。结合该场免疫程序,表明该场后备母猪和商品猪的猪瘟、猪伪狂犬病免疫程序需要做适当调整;同时考虑通过测序了解本场的猪蓝耳病流行毒株,以确定合适的防控方案。