鸡新城疫琼脂扩散试验方法的研究

用新城疫病毒(NDV)La Sota株接种的鸡胚含毒尿囊液,经灭活、透析和浓缩后,研制出琼脂扩散(AGP)抗原。应用AGP和HI试验同步检测不同免疫状态的鸡血清样品977份。试验表明,HI抗体效价≥16的被检血清,AGP阳性率为98.5％(268/272);HI抗体效价=8的,AGP阳性率为79.3％(142/179);HI抗体效价≤4的526份血清,AGP试验均为阴性。抗原经2次冻融,或在4℃和-3℃保存10个月以上,其效价未见降低。AGP抗原可用于ND的免疫监测和流行病学调查。     

抗独特型抗体检测H9亚型禽流感血清抗体

为了探讨用抗独特型抗体替代病毒或病毒亚单位检测H9亚型禽流感血清抗体的可行性,本试验分别用全病毒抗原和抗独特型抗体(Ab2)作检测原,通过琼脂免疫扩散试验(AGP)和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了鸡的血清样品。在AGP试验中,分别用Ab2和禽流感病毒(AIV)对10份血清样品检测的符合率为70%。在间接ELISA试验中,Ab2和AIV抗原对10份血清样品检测的符合率为90%。用Ab2间接ELISA试验检测出的血清阳性率(8/10)高于血凝抑制试验(6/10)和AGP试验(5/10)。结果表明,在一定的情况下Ab2可以用来代替具有污染环境风险的病毒抗原来检测抗病毒抗体。     

对流免疫电流法诊断传染法氏囊病的研究

应用对流免疫电流技术（CIET）和琼脂扩散试验（AGP）对具有典型临床症状传染性法氏囊病鸡血清50份和法氏囊材料50份进行标准抗原检测被检血清，标准阳性因清检测被检抗原。AGP法标准抗原检测被检血清阳性40份，阳性率80％（40／50），标准阳性血清检测被检抗原，阳性36份，阳性率72％（36／50）；CIET法标准阳性血清检测被检抗原，阳性47份（47／50），阳性率为94％，标准抗原检测被检血清，阳性48份，阳性率为96％（48／50）。经x^2检验均P＞0.05，差异不显著。CIET法与AGP法，标准抗原检测被检血清，AGP法阳性率80％（40／50），CIET法阳性率96％（48／50）；标准阳性血清检测被检抗原，AGP法阳性率72％（36／50），CIET法阳性率94％（47／50）。经x^2检验均P＜0.05，差异显著。结果表明，CIET法比AGP法敏感、快速、且检出率高。     

琼脂扩散试验检测鸡新城疫抗体的研究

本文报告了用NDV—Lasota株经鸡胚增殖病毒,收集含毒的鸡胚尿囊液,用乙醚脱脂、透析浓缩制成琼扩(AGP)抗原,应用本抗原和HI试验同步检测435份待检血清,结果AGP与HI试验的阳性符合率为91.6％(241/202),阴性复合率为100％(114/114),     

应用对流免疫电泳检测鸡传染性法氏囊病病毒抗原和抗体

应用鸡传染性法氏囊病(IBD)血清抗体检测病毒抗原,对流免疫电泳试验(CIET)法比琼脂扩散(AGP)法检出率高50％;而用IBD抗原检测其血清抗体,CIET比AGP有60％血样抗体效价高1～2个滴度。CIET法比AGP法的检测速度快23～37个小时。CIET是一种简易、快速、敏感度较高的检测方法,可用于IBD的检测与诊断。     

应用对流免疫电泳检测鸡传染性法氏囊病病毒抗原和抗体

应用鸡传染性法氏囊病（IBD）血清抗体检测病毒抗原，对流免疫电泳试验（CIET）法比琼脂扩散（AGP）法检出率高50％；而和IBD抗原检测其血清抗体，CIET比AGP有60％血样抗体效价高1－2个滴度，CIET法比AGP法的检测速度快23－37个小时，CIET是一种简易、快速、敏感度较高的检测方法，可用于IBD的检测与诊断。     

传染性法氏囊病病毒检测系统的建立

为了建立传染性法氏囊病病毒(IBDV)检测系统,本试验在同一个试验技术平台上对9种IBDV检测方法进行了比较分析.IBDV野毒株盲传4～5代可适应于鸡胚和鸡胚成纤维细胞,死亡胚体水肿、出血,病变细胞圆缩、脱落.4个血清Ⅰ型1BDV毒株,用交叉中和试验可进一步分为3个血清亚型.用RT-PCR/SSCP技术分析4个毒株,扩增产物的电泳迁移率有差异.AGP、间接ELISA、夹心抑制ELISA以及中和试验等4种方法同时检测不同来源血清样品中的IBDV抗体,其他3种方法比AGP具有更高的敏感性,敏感度相差104倍.用AGP检测法氏囊组织样品,抗原效价可达到1:10,而细胞培养物和病鸡粪便则没有出现沉淀线;3种样品用夹心ELISA、RT-PCR、cDNA探针斑点杂交、RT-PCR/SSCP检测以及病毒分离等5种方法检测,均为阳性.     

猪瘟免疫抗体检测：琼脂扩散和间接血凝试验

应用琼脂扩散试验和间接血凝试验检测猪瘟免疫抗体,1990年在我州黄平、锦屏两县进行,现将试验结果报告如下: 材料和方法一、材料: (一)抗原:IHA反应抗原由成都药械厂提供;AGP反应抗原由河北省兽医防检站提供。 (二)血清:被检血清经免疫注射猪瘟疫苗的猪群中采取(均由黄平和锦屏两县提供)。     

传染性法氏囊炎病毒(IBDV)血清Ⅰ型和血清Ⅱ型抗体的鉴别检测

利用血清中和试验(VN),酶联免疫吸附实验(ELISA)和琼脂扩散沉淀试验(AGP)对IBDV血清Ⅰ型和血清Ⅱ型抗体进行鉴别检测。被检血清来自用活毒攻毒鸡和用灭活油佐剂疫苗免疫鸡,血清Ⅰ型和血清Ⅱ型两者之间抗体的差异用VN试验很容易鉴别检出,但用ELISA方法却不能区分两者之间的差异。AGP试验更不能令人满意。目前用于检测IBDV抗体水平的方法主要有VN、AGP和ELISA等。VN试验不仅可鉴别检测血清Ⅰ型和血清Ⅱ型IBDV抗体,而且可鉴别检测同一血清型内不同毒株的抗体。ELISA也同样用于检测鸡的IBDV抗原和抗体,并被广泛应用于测定大型鸡场IBDV的免疫状态。此报道的主要目的是对比ELISA,AGP试验和VN试验检测IBDV血清Ⅰ型和血清Ⅱ型特异性抗体之间差异的敏感性。     

鸡传染性法氏囊病血清学诊断的研究

应用琼脂扩散试验（AGP）法对具有典型临床症状并经病理学诊断确诊的鸡血清50份和法氏囊材料50份进行了标准抗原检测被检血清；标准阳性血清检测被检疫抗原的研究。标准抗原检测被检血清阳性40份，阳性率为80％（40／50）；标准阳性血清检测被检抗原阳性36份，阳性率为72％（36／50）。经x^2检验（P＞0．05）差异不显著。结果表明两者均适应于IBD的诊断。     

检测禽流感病毒抗体的重组核蛋白间接ELISA方法的建立

以大肠杆菌系统表达的H9N2亚型禽流感病毒（AIV）核蛋白（NP）为抗原，建立了禽流感间接酶联免疫吸附试验抗体检测技术（NP—ELISA）。对263份待检血清（包括临床收集的243份血清和20份H9N2亚型AIV免疫鸡阳性血清）进行检测，NP—ELISA与琼脂免疫扩散试验（AGP）的总符合率为83．3％，与血凝抑制试验（HI）的总符合率为92％。特异性试验表明，NP—ELISA方法可以检测H5、H7和H9亚型AIV特异性抗体，检测为阳性的血清样品能够被阳性鸡胚尿囊液阻断。敏感性试验证实，NP—ELISA最早可以检测鸡感染后7d的血清样品，并于感染后10d确定100％血清阳性，而AGP检测直到首免后21～28d才出现部分血清阳性，HI检测直到10～14d才出现部分血清阳性，并且NP-ELISA要比HI敏感4～40倍。试验证明，NP—ELISA是检测AIV血清型特异性抗体的一种特异、敏感、快速、经济的血清学检测技术。     

雏白痢沙门氏菌琼扩沉淀试验抗原的研制(初报)

用四种不同方法制备的四种雏白痢沙门氏菌琼扩沉淀(AGP)试验抗原,经沉淀抗体效价为64倍的雏白痢沙门氏菌阳性血清滴定后找出,以每毫升含菌量为300亿的菌悬液,经3次反复冻溶、裂解后离心制得的AGP—UTSA抗原的效价最高,可达32倍。其每毫升蛋白质含量为22.5毫克。在4℃保存14个月效价不降。根据最高反应稀释度出现的沉淀线位置应居于抗原孔和抗体孔中间的标准进行试验的结果,确定AGP—UTSA抗原的实际应用单位为8个抗原单位。     

纸膜免疫金银染色诊断鸡马立克氏病的研究

本研究建立了纸膜兔疫金银染色法(P—IGSS)诊断鸡马立克氏病(MD)。以定量滤纸为载体,既可检测抗原,又可检测抗体。检测抗原的灵敏度为0.39μg/点,检测抗体的灵敏度为1.4μg/点。450份鸡血清P—IGSS和琼脂扩散试验(AGP)检出率分别为42.44%和37.78%,30份接种MD病鸡羽髓抗原检出率分别为96.67%和90%。3次重复试验重复率达100%。2批金标抗体检测结果一致。与9种鸡传染病阳性血清和3种鸡传染病抗原不发生交叉反应。用本法3小时内可报告结果,而AGP需24—72小时,试验结果表明该方法用于MD诊断是可靠的。     

鸡传染性法氏囊病感染日龄与最佳检测方法的选择

鸡传染性法氏囊病(IBD)近年来在我国发生极为普遍,对养鸡业带来严重影响。本病的检测方法,生产上主要应用琼脂扩散试验(AGP),可检测抗原或抗体。为探讨感染鸡体内 IBD 病毒抗原、血清抗体的消长规律,以便根据不同的感染时期选择合适     

蛋清样品的反应时间和加入量对禽白血病抗原检测结果的影响

目前,控制禽白血病的主要方法是通过病原的检测,淘汰阳性鸡,净化种群。虽然已建立了检测ALV的多种方法,如琼脂扩散试验(AGP)、补体结合试验(COFAL)、间接免疫荧光试验(IFA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和聚合酶链式反应(PCR)等,其中最为理想的检测方法是ELISA法,它具有敏感性高、简便快捷、适用于大规模检测的特点。IDEXX FlockChek禽白血病抗原检测试剂盒能高效的检测到蛋清中的ALV抗原,在种群净化中得到了广泛应用。与其他常规血清学检测方法所用的样品不同,IDEXX禽白血病抗原检测试剂盒使用的样品是蛋清和泄殖腔拭子,而且…     

鹿副结核病抗体间接ELISA检测方法的建立

本研究以副结核杆菌亲和层析抗原为检测抗原,检测以草分枝杆菌抗原吸收的待检鹿血清,建立检测鹿副结核病血清抗体的间接酶联免疫吸附试验,确定其抗原最佳包被浓度为40μg/mL,血清样品稀释度为1:80,兔抗鹿IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1:8000。经特异性试验和重复性试验证明该方法特异性高、重复性好。对不同地区4个鹿场的760头份鹿血清进行副结核病抗体检测,其中阳性61头份,阳性率为8%,获得副结核病在我国鹿群中的血清流行病学资料,从而为防制鹿副结核病提供一定的依据。     

鸡产蛋下降综合征血凝抑制试验抗原符合率比较

用哈尔滨维科生物技术开发公司生产的批号为200901的鸡减蛋综合征京911株油乳剂灭活疫苗,以0.5mL/只剂量接种120日龄SPF鸡10只,7d后采血分离血清,以后每隔一定时间进行采血、分离血清。同时又采集了发病鸡场的15份发病鸡血清。分别用血凝抑制试验和琼脂扩散(AGP)试验对自制的阳性血清和发病鸡血清样品进行血清学检查。结果表明:当血清HI效价等于或大于28时,两种方法的符合率可达100%;当血清的HI效价为26~27时,AGP与HI的符合率为73.33%~86.67%;当血清的HI效价为24~25时AGP的检出率很低或完全呈阴性。从两种方法的符合率比较还可得出HI试验检测的灵敏度要高于AGP,而且HI法简单、特异、快速、实用、方便,不但能定性还可以定量。     

纸膜免疫金银染色诊断马立克氏病的研究

本研究建立的纸膜免疫金银染色法(P-IGSS)诊断马立克氏病(MD),既可检测抗原,又可检测抗体.检测抗原的灵敏度为0.39μg/点,检测抗体的灵敏度为1.4μg/点.P-IGSS 和琼脂扩散试验(AGP)对抗体检出率分别为42.44%和37.78%,对羽髓抗原检出率分别为96.67%和90%.与9种鸡传染病阳性血清和3种鸡传染病抗原不发生交叉反应.     

吉林某牛场牛病毒性腹泻流行病学调查及分析

为全面了解吉林省某规模化牛场牛病毒性腹泻(BVD)的流行情况,试验采集临床血清样品157份,粪便样品18份,肝脏、精液等组织样品17份,应用BVDV抗体检测试剂盒进行血清抗体检测,利用BVDV1型引物,采用纳米PCR方法对血清及临床样品进行BVDV抗原检测,对抗原阳性样品进行测序分析;将抗原阳性样品经研磨、稀释后用0.22μm滤膜过滤除菌,接入牛肾细胞(MDBK)进行病毒分离培养,盲传3代后再次进行抗原检测;采用免疫荧光技术检测病毒对MDBK细胞的侵染作用;利用Mega软件绘制系统进化树并进行同源性比对分析。结果显示,该牛场临床血清BVDV抗体阳性率为77.1%,血清抗原阳性率为12.1%,临床粪便等样品抗原阳性率为74.3%;病料接入细胞未观察到细胞病变,分离毒株PCR产物测序分析结果与样品抗原检测结果一致;免疫荧光检测结果显示,分离株毒液正常吸附于MDBK细胞中,有明显荧光反应;抗原测序分析显示,该牛场BVD主要流行毒株与BVDV JL-1株同源性高达99.0%,且均为BVDV 1型毒株。本研究对该牛场BVDV流行情况进行了全面调查,为开展净化工作奠定了基础。     

胶体金法检测猪旋毛虫病的敏感性研究

将3组试验仔猪分别人工感染旋毛虫幼虫1000条／头、5000条／头和25000条／头,感染后每7d抽血1次,采集全血和血清;感染后46d,将试验猪全部剖杀,取全血、血清和膈肌肉待检。所有样品均用胶体金试纸检测猪旋毛虫抗体和抗原,膈肌肉样品并需用显微镜检查有无旋毛虫包囊。结果表明,最早可于感染后21d,在低感染量试验组的1头仔猪的血清中检出阳性抗体;血清样品的抗体检出率高于全血样品;在血液和血清中未检出虫体抗原;抗体试纸条的检测结果较为准确可靠,而且敏感性明显强于抗原试纸条。建议在检疫检验工作中使用抗体试纸条检测血清或肌肉样品。