不同佐剂新城疫疫苗对鸡体液免疫的影响

佐剂是疫苗研究的重要组成部分.选择合适的佐剂不仅可以增强疫苗的免疫效果,而且可以提高机体的抵抗力.不同佐剂对体液免疫会产生不同的作用.本研究选用白油佐剂、弗氏佐剂和蜂胶佐荆与新城疫病毒抗原混合制成疫苗,免疫雏鸡,探讨不同佐剂对鸡体液免疫的影响.结果表明,三种佐剂疫苗均有保护力,试验鸡饲养至61日龄均未发生新城疫,其中弗氏佐剂的效果最好,蜂胶佐剂的效果次之,油佐剂组检测到雏鸡61日龄时仍未出现抗体高峰值.     

细菌DNA对小鼠接种犬细小病毒灭活苗的免疫增强效果

用大肠杆菌 DNA、弗氏佐剂、铝胶、蜂胶等不同佐剂 ,与犬细小病毒灭活疫苗配合免疫小鼠 ,以血凝抑制试验检测病毒特异性血凝抑制抗体。结果表明 ,各佐剂均能增强特异性抗体的产生 ,经组间单因素相关性分析 ,细菌 DNA与弗氏佐剂的免疫增强效果明显高于铝胶与蜂胶 (P <0 .0 5或 P <0 .0 1)。细菌 DNA具有强烈免疫刺激作用、无不良反应等特性 ,可望作为疫苗佐剂应用     

适用于蛋鸡免疫的猪源ETEC菌毛蛋白佐剂的筛选

为筛选卵黄抗体的优良佐剂,以3株猪源致病性大肠杆菌(ETEC)菌毛蛋白为模式抗原,分别与6种佐剂制备多价菌毛蛋白疫苗,免疫海兰褐壳蛋鸡。结果显示,3次免疫后,所有试验组蛋鸡产蛋率均有不同程度下降,但SPA、ISCOMs、弗氏佐剂、蜂胶佐剂组的产蛋率下降程度较为轻微;对鸡体血清抗体和制备获得的卵黄抗体的效价检测结果均显示:SPA和ISCOMs组虽较SPB、SPC、弗氏佐剂组抗体水平略低,但持久度较好,且通过对蛋鸡外观形态和注射部位组织变化情况的观察显示,两者不会刺激鸡体热反应或炎症反应,无任何表观副作用。因此,更适合作为蛋鸡制备猪源ETEC卵黄抗体的优良佐剂。     

银杏叶多糖对传染性法氏囊超强毒灭活疫苗的免疫调节作用

用改进水提醇沉法提取银杏叶多糖。用灭活的传染性法氏囊超强毒(vvIBDV)GX8/99细胞适应株分别制备不同质量浓度(40,20,10 g/L)银杏叶多糖佐剂疫苗、弗氏不完全佐剂疫苗和无佐剂疫苗。360只SPF公雏鸡随机均分为6组,其中5组SPF鸡分别免疫上述5种疫苗,另外1组SPF鸡不免疫作为阴性对照。检测IL-2和IFN-γ分泌量、血清抗体、外周血淋巴细胞转化率、外周血CD4^+和CD8^+T淋巴细胞数量等用来评价疫苗的免疫效果。38日龄进行攻毒试验,评价疫苗的保护效果。结果显示,银杏叶多糖佐剂疫苗组各免疫指标均显著高于弗氏佐剂和无佐剂疫苗组(P<0.05);40 g/L银杏叶多糖佐剂疫苗组免疫效果最好,但与20 g/L银杏叶多糖佐剂疫苗组差异不明显,并且2组攻毒保护率无显著性差异。结果表明,银杏叶多糖作为vvIBDV疫苗佐剂具有良好的免疫促进作用,且20 g/L的银杏叶多糖即可达到最佳效果。     

蜂胶对猪细小病毒灭活疫苗佐剂作用的试验

68只豚鼠随机均分为4组,1³组分别免疫蜂胶、铝胶和油佐剂PPV疫苗,第4组为空白对照组,注射等量生理盐水。免疫后不同时间点采集血清分析特异性血凝抑制抗体效价评价蜂胶佐剂对免疫豚鼠体液免疫的影响,测定淋巴细胞增殖、IL-2和IL-4含量评价蜂胶佐剂对免疫豚鼠细胞免疫的影响。结果表明,蜂胶、油佐剂和铝胶3种佐剂均能提高豚鼠对PPV灭活疫苗的免疫应答能力,油佐剂提高血清HI抗体效果较好,其次为蜂胶佐剂,再次为铝胶佐剂。蜂胶佐剂促进T淋巴细胞增殖和提高IL-2、IL-4、IL-6和IFN-γ含量效果优于油佐剂和铝胶佐剂。结论:蜂胶能增强PPV灭活疫苗的免疫效果。     

不同佐剂对猪附红细胞体亚单位疫苗免疫效果的影响

为比较不同佐剂的猪附红细胞体亚单位疫苗的免疫效果,笔者通过试验提取猪附红细胞体抗原,并将其分别与白油佐剂、弗氏佐剂、明矾佐剂及铝胶佐剂混合,免疫小鼠。应用间接ELISA方法比较不同佐剂的猪附红细胞体亚单位疫苗的免疫效果。结果表明：白油佐剂组免疫效果最好,抗体水平在一周后有明显上升,其次为与弗氏佐剂组、铝胶佐剂组和明矾佐剂组。该试验为猪附红细胞体亚单位疫苗的研究提供了可靠的理论依据,为该病的防治奠定了一定的基础。     

不同佐剂对猪附红细胞体亚单位疫苗免疫效果的影响

为比较不同佐剂的猪附红细胞体亚单位疫苗的免疫效果,本试验提取猪附红细胞体抗原,并将其分别与白油佐剂、弗氏佐剂、明矾佐剂及铝胶佐剂混合,免疫小鼠。应用间接ELISA方法比较不同佐剂的猪附红细胞体亚单位疫苗的免疫效果。结果表明:白油佐剂组免疫效果最好,抗体水平在一周后有明显上升,其次为弗氏佐剂组、铝胶佐剂组和明矾佐剂组。该试验为猪附红细胞体亚单位疫苗的研究提供了可靠的理论依据,为该病的防治奠定了一定的基础。     

乳酸杆菌DNA对鸡新城疫油苗和禽流感油苗免疫增强作用的研究

本试验提取乳酸杆菌L.caseiZhang的DNA作佐剂,按每只鸡100ug剂量添加到新城疫油苗及禽流感病毒H5亚型油苗中。新城疫和禽流感试验分别设空白对照组(Ⅰ组)、无佐剂疫苗组(Ⅱ组)、细菌核酸佐剂组(Ⅲ组)、弗氏完全佐剂组(Ⅳ组)、弗氏完全佐剂核酸免疫协同组(Ⅴ组)5组进行免疫,分别于15和28日龄首免,两周后二免。二免后每周采样用血凝及血凝抑制法检测血清抗体水平,并用MTT法检测脾脏T淋巴细胞增殖反应。结果显示,添加核酸组鸡HI抗体和T淋巴细胞增殖反应均极显著高于单独免疫疫苗组(P<0.01);而免疫组均极显著高于空白对照组(P<0.01);细菌核酸组HI抗体略高于弗氏完全佐剂组,但T淋巴细胞转化率极显著高于弗氏完全佐剂组(P<0.01);同时弗氏完全佐剂核酸免疫协同组与核酸组无显著性差异。由此得出,乳酸杆菌L.caseiZhangDNA对新城疫油苗和禽流感病毒H5亚型油苗具有免疫增强作用;乳酸杆菌L.caseiZhangDNA与弗氏完全佐剂无明显的免疫协同作用。     

免疫佐剂研究进展

佐剂的主要作用是提高抗原(免疫原)的免疫原性和免疫反应的可持续性,它能引导机体的免疫系统对抗原产生体液免疫或细胞免疫反应.对佐剂的选择取决于免疫的目的,从用途上分,佐剂可分为试验用佐剂和疫苗用佐剂.前者主要用于特异性抗体的制备,而后者则作为疫苗的必要成分.文章主要介绍目前常用的几种佐剂包括铝盐佐剂、弗氏佐剂、免疫刺激复合物(ISCOM)、脂质体和CpG及其在科研和疫苗中的应用.     

不同免疫增强剂对禽戊型肝炎病毒ORF2蛋白的免疫效果分析

为研究不同免疫增强剂对禽戊型肝炎病毒（aHEV）ORF2蛋白的免疫效果影响，研究通过大肠杆菌原核表达系统表达aHEV ORF2蛋白，纯化后与弗氏佐剂按1∶1等体积混合制备亚单位疫苗。将90只1日龄SPF雏鸡随机分成6组，每组15只。ORF2蛋白组单纯免疫YT-ORF2蛋白，ORF2蛋白+弗氏佐剂组免疫YT-ORF2蛋白+弗氏佐剂，AB101组免疫YT-ORF2蛋白+弗氏佐剂+AB101,AB106组免疫YT-ORF2蛋白+弗氏佐剂+AB106,AB506组免疫YT-ORF2蛋白+弗氏佐剂+AB506，空白对照组免疫生理盐水，分别在21、28、42日龄三次免疫SPF鸡。采用ELISA和间接免疫荧光检测不同免疫组SPF鸡的aHEV抗体水平，通过流式细胞仪检测CD4+和CD8+T淋巴细胞水平，荧光定量PCR检测IL-2、IL-4、IFN-γ 3种细胞因子表达情况，并测定体重和器官发育指数。结果显示：原核表达获得分子量为72 ku的ORF2蛋白，AB106组产生的抗体水平极显著高于其他各组（P<0.01）,AB106和AB506免疫增强剂可引起CD4+和CD8+T细胞比重显著增加并上调I...     

肠毒素性大肠杆菌菌毛对产蛋鸡免疫性的研究

采用热抽提法提取4种肠毒素性大肠杆菌菌毛蛋白。K88、K99、F41和987p菌毛蛋白分别制成弗氏佐剂苗;K88还制成白油佐剂苗,氢氧化铝胶苗和蜂胶佐剂苗;另将4种菌毛等比例混合制成弗氏佐剂苗。分别对产蛋鸡进行免疫,用微量凝集反应和血凝抑制试验检测卵黄抗体效价。结果表明,K88菌毛较其他3种菌毛免疫性好,诱导抗体效价最高而且能长时间维持;987p菌毛能快速诱导抗体的产生,但整体效价低。K88不同佐剂苗中,铝胶佐剂能较快地诱导抗体的产生,蜂胶佐剂苗抗体持续时间短,弗氏佐剂能诱导高效价的抗体产生而且能长时间持续。     

鸡新城疫流行毒株与标准毒株的交叉免疫保护试验

用新城疫(ND)分离强毒油佐剂灭活苗和NDV La Sota油佐剂灭活苗分别免疫母源抗体平均为2 log2的12日龄公雏。免疫后每隔1周采集血清，用微量血凝抑制试验检测HI抗体。免疫后21 d抗体水平达到峰值，抗体水平在6log2以上，维持30 d以上。免疫40 d后，用ND分离强毒株和NDVF48E9分别进行攻毒试验，2种疫苗的保护率均为100％，攻毒结果表明，ND分离强毒株和NDVF48E9株的免疫原性差异不显著。     

Effects of Different Adjuvants on the Immunogenicity of PCV2-Cap Protein

The study was aimed to prepare vaccines with different adjuvants,and research its effects on immunogenicity.The PCV2 Cap gene with its signal peptide removed was connected to pET-28a vector,and then was induced to express,using sodium deoxycholate（DOC）and low concentration of urea to dissolve the inclusion body.Different adjuvants,such as alum-based adjuvants,liposome adjuvants,propolis adjuvants,white oil adjuvants and Freund adjuvant were prepared,together with protein purified to make up subunit vaccines,and commercial inactivated vaccine as positive control,immuning mice,and ELISA method were used to detect changes in concentrations of animal serum antibody and cytokines,evaluated the immune protective effect.Results showed that the expression product in the form of inclusion body,using the DOC could omit dissolving inclusion body protein renaturation steps,and the purification method was simple,the capsid protein obtained had high purity.ELISA assays showed that PCV2-Cap had good immunogenicity.And we found that the water system adjuvants had high immune activity,this could provide important previous experimental data for the commercialization of the subunit vaccine.     

不同佐剂对猪圆环病毒衣壳蛋白免疫原性的影响

试验旨在研究猪圆环病毒不同佐剂疫苗的制备及其对免疫原性的影响。将去除信号肽的PCV2（porcine circovirus type 2,PCV2）Cap蛋白基因连接在pET-28a载体上,进行诱导表达,用脱氧胆酸钠（DOC）和低浓度尿素对表达产物进行溶解,制备氢氧化铝胶体佐剂、脂质体佐剂、弗氏佐剂、白油佐剂、蜂胶佐剂,并与纯化的PCV2-Cap蛋白混合制成亚单位疫苗,以商品化的灭活疫苗作为阳性对照,免疫小鼠,并使用ELISA方法检测动物血清中抗体及细胞因子含量的变化,评估其免疫保护效果。结果显示,表达产物以包涵体的形式存在,使用DOC溶解包涵体可省略蛋白复性步骤,且纯化方法简单,获得纯度较高的衣壳蛋白;ELISA检测结果表明PCV2-Cap蛋白能诱导产生特异性较高的抗体;水系佐剂制备的亚单位疫苗具有较高的免疫活性,为亚单位疫苗的商品化提供重要的数据支持。     

Pathological studies on local tissue reactions in guinea pigs and rats caused by four different adjuvants.

We investigated pathological changes at the injection site in guinea pigs and rats for 16 weeks following a single intramuscular injection of one of the following oil adjuvant emulsions; oil adjuvant ISA-70, Freund's incomplete adjuvant, Freund's complete adjuvant, and aluminium phosphate gel. In the animals injected with ISA-70 emulsion prepared by manual shaking, grossly, there was partial thickening of subcutaneous tissue, discoloration of inter-muscular connective tissue, and swelling of the inguinal lymph nodes at 2 and 4 weeks post injection (PI). Histopathologically, ISA-70 injected sites revealed acute inflammatory changes at 72 hrs PI, and peak reactions consisting of macrophage accumulation around oil cysts and fibrosis were observed at 4 weeks PI. These changes were less severe and of shorter duration than those in the other three adjuvants. Guinea pigs and rats injected with materials containing inactivated Newcastle disease virus (NDV) antigen similarly showed an infiltration of plasma cells and lymphocytes in addition to the changes described above. ISA-70 containing NDV antigen induced similar hemagglutination-inhibition titer to that induced by Freund's incomplete adjuvant.     

鸭疫里默氏杆菌多价灭活苗研制的研究报告

用三个血清型的菌株,分别是JYL-1、JYL-2、JYL-7,用两种佐剂,分别是蜂胶和油乳剂共制备了两种多价菌苗,即JYL-1、JYL-2、JYL-7（1、2、7三个血清型）三个RA血清型混合多价蜂胶苗和油乳剂苗。试验结果表明。蜂胶复合佐剂多价苗具有产生免疫保护速度快,免疫持续时间长的优点,接种后第3天即产生部分免疫保护力,第120天时仍具有完全保护力;油乳剂多价苗产生保护力的速度较慢,接种后第10天时开始表现出部分免疫保护,其完全保护力也可持续到接种后第120天。免疫后13d时,免疫保护率可达90％左右。免疫后16d时保护率为100％。免疫后120d时,两种多价菌苗的免疫保护率均可达到100％,免疫后150～180d时,免疫保护率可达800左右。统计学分析证明,菌苗的安全性良好。用3个免疫剂量的菌苗所做的安全试验表明无明显不良反应,菌苗在4℃保存一年,18～22℃室温保存4个月不影响菌苗的免疫效力。田间试验表明,用菌苗免疫鸭群后,可有效地使鸭群抵抗鸭疫里默氏杆菌的感染。     

Effect of four adjuvants on immune response to F4 fimbriae in chickens

IgG antibody response in chickens immunized with F4 fimbriae extracted from local enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) strain was studied during a 98-day immunization period for comparing the efficacy of four adjuvants: Freund' adjuvant, Quil A (QA), propolis and extract from Cochinchina momordica seed (ECMS). For this purpose, chickens were immunized with F4 fimbriae alone or combined with one of the above adjuvants on days 1 and 21. IgG antibody levels in serum and egg yolk (by ELISA) were measured on days 0, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 70, 84 and 98. The egg production of each group was also determined during days 1-7 and the following four weeks. The results showed that QA could enhance antibody titre, as good or almost as good as Freund's adjuvant, whereas the titres of ECMS and propolis groups were relatively lower, with the overall order: Freund's adjuvant>QA>ECMS>propolis both in serum and egg yolk. However, the significant decrease of egg production was merely observed in the Freund's adjuvant group. It is concluded that the four adjuvants tested can stimulate immune response to F4 fimbriae in chickens, with Freund's adjuvant giving the best results, followed by QA.     

小鹅瘟蜂胶灭活疫苗的研究

以蜂胶为佐剂制备小鹅瘟蜂胶佐剂灭活苗,将病毒液灭活后按一定比例加入蜂胶佐剂制备疫苗,并进行疫苗安全性、免疫持续期、效力对比、保存期及区域应用试验,结果表明小鹅瘟蜂胶灭活疫苗安全性好,第5天即产生抗体且抗体持续时间长（90d）,免疫效果远好于油乳剂灭活苗,推广试验也取得了令人满意的结果。     

4种佐剂对绵羊肺炎支原体的免疫辅佐效力研究

不同种类的佐剂对同种抗原的免疫辅佐效力不同。为筛选绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)灭活疫苗的理想佐剂,本研究制备了4种不同佐剂的MO灭活疫苗,分别免疫成年家兔,用MO间接血凝试剂盒测定免疫后1～9周血清抗体效价。检测结果显示,4种疫苗在免疫后都能迅速产生抗体,其中用MO Buonavoglial's和ISA-760佐剂疫苗免疫家兔,产生抗体均于免疫后第3周达到高峰((5.67±0.70) log2,6.00 log2),到第9周时维持抗体高峰(6.00 log2,(6.00±1.00) log2);MO ISA-206和白油佐剂疫苗免疫抗体均于免疫后第4周达到高峰((4.33±0.57) log2,5.00 log2),至第9周下降约1个滴度。统计学分析结果显示,ISA-760、Buonavoglial's佐剂对MO的免疫增强效力显著优于ISA-206和白油佐剂(P<0.05),是MO灭活疫苗的理想候选佐剂,为高效MO灭活疫苗的研发提供了科学依据。     

鸡新城疫病毒强毒株的分离鉴定及生物学特性研究

从黑龙江省某地发病鸡群中分离出一株病毒APMV1/chicken/China/HLJ-2/02,分离毒为速发型NDV强毒株,对经典NDV La Sota株免疫的雏鸡及高抗体母鸡仍有很强的致病力.本研究对分离株进行了生物学特性研究,并对部分基因进行了序列测定,序列已经发送Gene Bank,序列号为AY208695.采用NDV分离毒株制备成多价油乳剂灭活苗,免疫鸡群有良好的保护力.