一株拮抗香蕉枯萎病菌内生细菌的抑菌机制研究

采用生物化学方法,分析了一株香蕉内生细菌BEB99发酵液的乙酸乙酯粗提物对香蕉枯萎病菌4号小种(FOC4)的抑菌机制,结果表明,其对香蕉枯萎病菌菌丝脂质过氧化、麦角甾醇含量、蛋白质含量及果胶酶活性均有一定的影响,但不能产生几丁质酶。     

银杏酸对6种蔬菜病原菌物的抑制作用

室内测定了银杏酸对5种蔬菜病原菌物菌丝生长的活性,结果表明:在70mg/mL浓度下,银杏酸对茄子立枯病菌、茄子白绢病菌24h的菌丝生长抑制率分别为65.2%、65.3%,对甘蓝黑斑病菌、白菜炭疽病菌、黄瓜枯萎病菌48h的菌丝生长抑制率在63.6%～77.3%之间;加药后,稀薄菌丝沿培养基表面生长,气生菌丝少,有的菌丝变色;对黄瓜枯萎病菌、甘蓝黑斑病菌、苦瓜枯萎病菌、白菜炭疽病菌等孢子萌发抑制率均在86%以上,其中对黄瓜枯萎病菌的抑制率最好;显微观察说明:银杏酸处理后,菌丝细胞出现不规则膨大、凋亡、黄化、扭曲、液泡变多、节间缩短等异常现象;毒力测定显示:银杏酸对甘蓝黑斑病菌抑制作用较强,EC50为24.80mg/mL。     

香蕉内在拮抗细菌研究Ⅰ——菌株B215的分离及分子鉴定

在香蕉枯萎病(Fusarium oxysporum f.sp.cubense,FOC)重病园区,从生长正常的香蕉假茎内分离获得1株细菌,编号为B215.经对峙培养和孢子萌发抑制测定,B215对FOC和香焦其他几种主要病原菌的菌丝生长和孢子萌发具有良好抑制效果.对峙培养明显抑制香蕉枯萎病菌菌丝生长,抑菌带宽度0.5-0.6 cm.菌株B215培养液滤液使香蕉枯萎病菌孢子和菌丝生长点膨大成球状畸形,原生质外泄,细胞崩溃十瘪,其EC50为4.12%.形态学、生理生化试验显示B215为芽抱杆菌(Bacillus);进一步对该菌株做16srDNA序列测定与分析,表明其与已报道的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis Strain KL-073)具有100%的同源性,二者所构建的系统发育树上处于同一个分支.将B215鉴定为枯草芽孢杆菌(B.subtilis).     

一株拮抗香蕉枯萎病菌的细菌HN-1的鉴定和拮抗作用的测定

在香蕉枯萎病园区中,从土壤中分离获得一株细菌HN-1,并进行对峙培养、孢子萌发抑制测定。结果表明：HN-1对香蕉枯萎病菌的菌丝生长、孢子萌发具有良好的抑制效果。经形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列测定和分析,将HN-1鉴定为短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)。与病原真菌对峙培养的结果表明,该菌株对供试的15种植物病原真菌均有很好的抑制作用。     

顶孢霉菌代谢产物对玉米圆斑病菌生长和发育的影响

利用菌丝生长速率法和孢子萌发法研究顶孢霉代谢产物对玉米圆斑病菌生长的抑制能力。结果表明,顶孢霉发酵液对玉米圆斑病菌分生孢子萌发和菌丝生长均有抑制作用。菌丝生长速率测定表明,含有顶孢霉菌代谢产物的培养基（D+P）圆斑病菌菌丝的生长速率低于含有玉米圆斑病菌代谢产物的培养基（Y+P）和空白对照PDA的生长速率,菌丝生长速率分别为65.0、86.5、87.5 mm/d;以Y+P和PDA为对照,D+P对玉米圆斑病菌在第1天和第2天时抑制率最高,均达58%以上;在1 mL PDA体系中,顶孢霉发酵液添加量为0.5 mL时,抑制率可达100%,不同浓度处理间及其与对照处理间顶孢霉发酵液抑制率差异显著（P=0.05）;同一处理不同培养天数顶孢霉发酵液抑制率也有显著差异（P=0.05）。孢子萌发实验表明,经顶孢霉发酵液处理后的玉米圆斑孢子萌发率降低,在发酵液浓度为0.9 mL/mL时,萌发率仅为24%,抑制率可达66.67%, EC50约为68 mL/100 mL,且孢子经发酵液处理后产生畸形,不能正常发育。     

3种分子量的壳聚糖对香蕉枯萎病病原菌室内抑菌活性测定

以香蕉枯萎病病原菌的6个菌株为试验材料，测定3种不同分子量的壳聚糖对香蕉枯萎病病原菌的抑菌活性。结果表明，3种不同分子量的壳聚糖对香蕉枯萎病菌有一定的抑制作用，对香蕉枯萎病菌的菌落形态、菌丝生长和孢子萌发等均有一定的影响。高分子量的抑菌效果优于低分子量的抑菌效果，其中C-290k的抑制效果最好，浓度为1 000 mg/L时对R1-248菌株的抑菌率达90.27％。     

枯草芽孢杆菌B215生物学特性及对香蕉枯萎病的生防效果评价

在室内测定菌株B215对香蕉枯萎病菌菌丝生长和孢子萌发都有良好抑制效果的基础上,优化拮抗菌株的最佳培养条件为:在NA培养基上,装液量为50mL/500mL,最适初始pH值为7.0～7.5,初始接菌量为1%,培养温度为28℃,以便更好地应用于田间试验。以此培养条件为依据,开展拮抗菌株的盆栽小苗实验,选用正交试验L8(27)设计,得出菌株B215对香蕉枯萎病菌的最佳防效组合为:在小苗定植前,用活菌培养液750mL/株浸根,可以降低小区香蕉枯萎病发病率。进一步试验验证结果显示:盆栽试验B215对Foc的防效为62.95%。     

海南大棚西瓜枯萎病病原菌生物学特性及室内毒力测定

对供试菌株海南大棚西瓜枯萎病病原菌尖孢镰刀菌西瓜专化型进行了生物学特性的研究及杀菌剂室内毒力测定。生物学测定结果表明：菌丝在西瓜汁培养基上生长最好;菌丝生长和孢子萌发的最适温度分别为28和30℃;菌丝生长和孢子萌发最适pH值分别为7～8和7～9;光暗交替有利于菌丝生长;孢子致死温度为60℃、5 min;果糖和葡萄糖作为碳源利于菌丝生长;酵母浸粉和蛋白胨作为氮源利于菌丝生长。室内毒力测定结果表明：50%咪鲜胺锰盐WP对西瓜枯萎病菌的抑菌效果最好,其EC50为0.730 9 μg/mL;32.5%苯甲嘧菌酯SC、30%苯甲·丙环唑EC、10%苯醚甲环唑WG、25%溴菌·多菌灵WP和25%溴菌腈WP对海南大棚西瓜枯萎病菌也有较好的抑制效果,其EC50为1.884 7～8.161 0 μg/mL,该研究为田间防治海南大棚西瓜枯萎病提供了基础数据。     

适宜与香蕉轮作防控枯萎病的蔬菜品种初步筛选

香蕉枯萎病发生普遍,危害巨大,选择合理的轮作作物对该病防控意义重大。本研究在25个蔬菜品种接种香蕉枯萎病菌4号生理小种（Fusarium oxysporum f. sp. cubense, Foc 4）后,调查Foc 4对不同种蔬菜的致病性,测定不同时期蔬菜根际土壤中香蕉枯萎病菌的数量;通过菌丝生长速率法和孢子萌发法,测定不同蔬菜根系的水浸提液对Foc 4菌丝生长和孢子萌发的抑制作用,筛选适合与香蕉轮作的蔬菜品种,探索轮作防病的机理。结果表明,所调查的25个蔬菜品种在接种Foc 4后根系发育正常,长势良好。除甘蓝和冬瓜外,其余23个蔬菜品种对Foc 4都没有富集作用。种植大多数蔬菜后,土壤中的尖孢镰孢菌（Fusarium oxysporum）数量呈不同程度的下降趋势,尤其是蒜、香葱、韭菜、香芹、芫茜的根际土壤带菌量大大低于对照土样的带菌量,其次是南瓜、苦瓜、茄子、辣椒、菜豆、萝卜等蔬菜。研究9种蔬菜根系水浸提液对Foc 4生长的影响表明：9种蔬菜根系水浸提液对Foc 4菌丝生长和孢子萌发有不同程度的抑制作用,但浸提液对病菌菌丝生长的抑制效果并不因处理时间的延长而增加。第6天测定时显示,不同蔬菜根系水浸提液对病原菌生长抑制的作用表现为：韭菜>香葱>香芹>大肉西蒜>芫茜>南瓜>朝天椒>苦瓜;当测定时间为16 h时,蔬菜根系水浸提液对孢子萌发的抑制效果表现为：韭菜>香葱>香芹>芫茜>朝天椒>南瓜>苦瓜>大肉西蒜>紫长茄。9种蔬菜中,韭菜根系水浸提液对病菌的抑制效果最好,其抑制率、敏感度都明显优于其他蔬菜;香葱根系分泌物表现出良好的抑菌作用,仅次于韭菜;香芹及芫茜也具有一定的抑菌效果。本试验为筛选适合与香蕉轮作的蔬菜品种提供了依据。     

牛筋果脂溶性成分及其抗氧化活性的研究

应用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对牛筋果[Harrisonia perforata (Blanco) Merrill)]果实的石油醚萃取部分脂溶性成分进行了初步研究。结果显示,石油醚萃取部分共鉴定了29种脂溶性成分,占总峰面积的69.67%,并确定其相对含量;其中含量较高的成分依次是顺-9,12-十八碳二烯醇(12.35%)、棕榈酸(9.67%)、Z-9,17-十八碳烯醛(8.97%)、亚油酸(7.97%)、油酸乙酯(5.81%)、β-谷甾醇(4.88%)、亚油酸乙酯(4.10%)。在此基础上,采用清除DPPH自由基能力的方法测定了醇提物、乙酸乙酯萃取物及石油醚萃取物的抗氧化活性,结果均显示出较强的抗氧化活性,其IC50值分别为40、22和288 μg/mL,由于石油醚萃取物的抗氧化活性远远大于其它萃取物,因此笔者等先行对其进行了研究。     

牛角瓜根的抑菌活性研究

以牛角瓜根为实验材料,采用索氏提取法,以4种不同溶剂(石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇)对牛角瓜的根进行提取,并采用纸片琼脂扩散法对粗提物的抑菌活性进行了评价,供试菌包括白色念珠菌等6种真菌和金黄色葡萄球菌等7种细菌。结果表明:石油醚粗提物对枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、大肠埃希氏菌都表现出良好的抑菌活性,且抑菌效果接近或优于阳性对照氟康唑,对尖孢镰刀菌和鲍曼不动杆菌也表现出良好的抑菌活性;氯仿粗提物对白色念珠菌及粪链球菌表现出良好的抑菌活性;乙酸乙酯粗提物对粪链球菌表现出最好的抑菌活性;甲醇粗提物的抑菌活性较弱。     

圆滑番荔枝叶乙醇提取物不同萃取组分对胡椒瘟病菌的抑菌活性测定

采用液-液分配法对圆滑番荔枝叶乙醇提取物进行萃取分离，得到石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯等不同萃取组分。采用生长速率法测定不同萃取组分对胡椒瘟病菌的抑制作用。结果表明：乙酸乙酯萃取组分对胡椒瘟病菌的抑制作用最强，其中20 mg/mL乙酸乙酯萃取组分对胡椒瘟病菌菌丝生长的抑制率达到74.43%，具有较好的抑菌效果。     

大豆豆渣粗提物清除DPPH自由基活性及其协同效应的研究

用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)-TLC法和酶标仪法对大豆豆渣石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇粗提物的自由基清除活性进行了定性和定量分析,考察了抗氧化剂维生素C、柠檬酸对大豆豆渣乙醇粗提物清除DPPH自由基活性的协同效应。结果表明:大豆豆渣不同极性粗提物均有一定的自由基清除活性,其中乙醇粗提物的自由基清除活性最强,在浓度为10.0 mg.mL-1,于37℃下保温15 min时,对0.4 mg.mL-1的DPPH自由基的清除率可达76.48%;维生素C和柠檬酸对大豆豆渣乙醇粗提物均能产生一定的协同效应,且维生素C的协同作用强于柠檬酸。     

肿柄菊茎叶提取物除草活性的研究

采用培养皿滤纸法,以水田稗（Echinochloa oryzoides）、玉米（Zea mays）、黄瓜（Cucumis sativus）和鳢肠（Eclipta prostrata）为供体植物,测定肿柄菊（Tithonia diversifolia）茎叶水提液的除草活性;以水田稗为供体植物,测定肿柄菊茎叶乙醇提取物的不同溶剂萃取物的除草活性。结果显示,肿柄菊茎叶水提液浓度为0.1 g/mL时,对水田稗和玉米种子萌发具有显著抑制作用,抑制率分别达92％和72％;对黄瓜和鳢肠种子萌发抑制率低。肿柄菊茎叶水提     

用气相色谱—质谱法分析玉米须中化学成分的研究

用水蒸气蒸馏法提取玉米须中的挥发油,采用气相色谱—质谱(GC-MS)联用技术,鉴定出59种化合物,其中主要的化学成分有棕榈酸(17.45%)、乙酸乙酯(7.56%)、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚(5.62%)、糠醛(4.91%)、亚油酸乙酯(3.79%)、5-甲基糠醛(2.75%)、正壬酸(2.62%)、糠醇(2.12%)、香草醛(2.01%)、苯乙醇(1.65%)、苯乙醛(1.54%)、正庚酸(1.48%)、正己酸(1.42%)、六氢金合欢基丙酮(1.32%)、正十五酸(1.29%)和月桂酸(1.02%)。     

辣木叶提取物对百香果生根的影响

[目的]研究辣木叶不同提取物对百香果扦插苗成活率及生根的影响,获得较好的促进百香果生根的提取物。[方法]通过水培法,以百香果插条为供试对象,研究辣木提取物的促生根活性。[结果]不同浓度提取物处理的百香果插条表现出不同的活性,培养至40 d时,均无萎蔫现象。0.5000和1.0000 g/L乙醇提取物、1.0000 g/L石油醚提取物处理的插条生根率达到100%。1.0000 g/L石油醚提取物处理插条生根数最大,达到4.45条/株;0.0625 g/L乙酸乙酯提取物处理的插条表现为最大的生根根长。[结论]为获得较高品质扦插成活苗,建议选用1.0000 g/L石油醚提取物处理插条,既可获得100%的生根率,也可获得较多的生根根数。     

砂培黄灯笼辣椒根系分泌物化学成分鉴定

鉴定黄灯笼辣椒根系分泌物的化学成分,为研究其化感作用及连作障碍的机理提供理论依据。采用砂培法收集黄灯笼辣椒的根系分泌物,柱层析法分离根系分泌物,依次选用石油醚、乙酸乙酯、氯仿和甲醇洗脱根系分泌物并收集各洗脱组分,采用气质联用仪(GC-MS)鉴定各组分的化学成分。研究结果表明,黄灯笼辣椒根系分泌物石油醚组分GC-MS鉴定图谱共出现57个物质峰,相似度大于85%的化学物质共28个;乙酸乙酯组分GC-MS鉴定图谱共出现73个物质峰,相似度大于85%的化学物质共28个;氯仿组分GC-MS鉴定图谱共出现67个物质峰,相似度大于85%的化学物质共27个;甲醇组分GC-MS鉴定图谱共出现55个物质峰,相似度大于85%的化学物质共28个。黄灯笼辣椒根系分泌物中含有烷烃类、脂类、酸类、醇类、酚类、醛类、肟类、吡咯烷酮类、酰胺类和萘胺类化合物。     

Antifungal activity of some plant extracts on Alternaria alternata, the causal agent of alternaria leaf spot of potato

Pure methanol (m) and methanol water (mw) extracts of 5 plants namely: peppermint, eucalyptus, lavandula, Russian knapweed and datura were screened for their antifungal ability against Alternaria alternata, the causal agent of Alternaria leaf spot of potato at 5, 10 and 15% concentrations in vitro. Fungicide mancozeb 0.2% was also used for better comparison. Poisoned food technique and spore germination assay method were used to evaluate the antifungal efficacy of plant extracts. Present findings showed that methanol extracts of eucalyptus, peppermint and lavandula had impressive antifungal effects in inhibiting the mycelial growth as well as spore germination of the pathogen. It was also found that methanol extracts were quite more effective than methanol water extracts in this regard. Methanol extracts of peppermint (15%), lavandula (15%), peppermint (10%) and eucalyptus (15%) demonstrated promising ability in inhibiting the mycelial growth of A. alternata by 0.13, 0.40, 0.43 and 0.50 cm, mycelial growth respectively, while majority of methanol water extracts had either less or no effects in this connection. Spore germination of A. alternata was prominently reduced by methanol extracts, while those of methanol water extracts had very less effects in this regard. Mancozeb (0.2%), methanol extracts of eucalyptus (15%) and peppermint (10%) by 2, 6 and 7% spore germination were best, while methanol water extracts of datura 10, 15 and 5%, lavandula 15 and 10% and also Russian knapweed 5% represented no effect and by 91, 89, 87, 87, 85 and 85% spore germination were at par with control. Findings from this study confirmed that plant extracts can be used as less hazardous natural fungicides in controlling plant pathogenic fungi, thus reducing the dependence on the synthetic fungicides. Methanol extracts of peppermint, eucalyptus and lavandula might be promising materials for natural formulations in controlling Alternaria leaf spot of potato in the field.     

苦丁茶不同提取物抗氧化活性比较及其GC-MS分析

利用气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）,对苦丁茶超声辅助不同有机溶剂（乙醇、乙酸乙酯、石油醚）提取物及超临界CO₂萃取物的体外抗氧化活性（DPPH自由基清除能力、羟基自由基清除活性、超氧阴离子自由基清除活性和ABTS ⁺自由基清除能力）进行比较分析。结果表明,苦丁茶不同提取物DPPH清除能力和超氧阴离子自由基清除活性依次为：超声-乙醇提取物>超临界CO₂萃取物>超声-乙酸乙酯提取物>超声-石油醚提取物,羟基自由基和ABTS ⁺自由基清除能力依次为：超声-乙醇提取物>超声-乙酸乙酯提取物>超临界CO₂萃取物>超声-石油醚提取物。GC-MS结果显示,苦丁茶不同提取物中主要有5类物质,共有49种化学成分,7种共有成分。