紫菜降血压肽酶法制备工艺的优化

摘要：降血压肽又称为血管紧张素转化酶抑制肽，是具有降血压活性的生物活性肽，对高血压患者有显著疗效。为探讨从紫菜中制备降血压肽的酶法工艺，本实验选用AS．1398中性蛋白酶、胰蛋白酶、复合酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶等6种蛋白酶分别对紫菜进行酶解，通过对其酶解液的ACE抑制活性和水解度的比较，发现采用AS．1398中性蛋白酶酶解的产物ACE抑制活性最高。对AS．1398中性蛋白酶的酶解工艺进一步优化，确定其最佳酶解工艺为：温度50℃、pH值7．5、加酶量E／S10000U·g^-1。在此条件下，酶解4h和10h的酶解产物抑制活性最高均达70％以上，并发现紫菜酶解液的ACE抑制率与水解度的增长不成显著的线性关系。     

虾头内源酶酶解虾肉产物的ACE抑制活性及其降低原发性高血压老鼠血压的效果

虾头内源酶酶解虾肉产物的ACE抑制活性及其降低原发性高血压老鼠血压的效果=Angiotensin I converting enzyme inhibitory activity of shrimp meat hydrolysate by endogenous enzymes from shrimp head and its antihypertensive effects on spontaneously hypertensive rats［刊，中］/洪鹏志（广东海洋大学食品科技学院，湛江524088）,曹文红,郝更新,章超桦//水产学报，—2007，31(1).-76～83 在pH 7.35、温度57.2 ℃、水解时间4 h、虾肉/虾头为1∶1，底物浓度为20%（W/V）的条件下，利用虾头的内源酶酶解虾肉（南美白对虾），制备了具有血管紧张素转化酶（ACE）抑制活性的酶解产物，其对ACE的抑制率为41.9%（2 mg·mL-1）。通过凝胶过滤层析测定出酶解产物的分子量分布较广，在7.4×104至29.7之间。分子量在2.7×103以下的凝胶层析组分占酶解产物氨基酸总量的83.1%。收集的高活性组分分子量在959～338之间，其IC50为0.32 mg·mL-1苯丙氨酸、疏水氨基酸（亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸）和芳香族氨基酸（脯氨酸、酪氨酸和色氨酸）占氨基酸总量的42.33%。体内试验的结果显示，南美白对虾的虾肉虾头内源酶酶解产物经灌喂原发性高血压老鼠后显示较强的降血压活性。 图4表2参13 关键词：南美白对虾；内源酶；血管紧张素转化酶抑制活性；抗高血压作用 E-mail:zhangch@gdou.edu.cn     

中国毛虾ACE抑制肽的初步研究

对以中国毛虾为原料酶法制备具有抑制血管紧张素转换酶(ACE)活性的酶解产物的方法作了探讨。以体外活性(ACE抑制率)为指标,通过正交试验确定胃蛋白酶的最佳酶解条件为pH2.4、温度41℃、酶量900U·g-1底物、底物浓度8%;酶解产物的IC50为0.65mg·mL-1,再分别利用SephadexG 25和SephadexG 15对其进行进一步分离提纯,IC50降至0.084mg·mL-1和0.046mg·mL-1,活性组分中的疏水性氨基酸含量增高,最终活性产物的分子量分布在700～1900。     

血管紧张素转换酶（ACE）的提取与活性验证

在从紫菜中提取制备降血压肽的研究中,为筛选能够抑制血管紧张素转换酶（ACE）活性的功能肽,需要大量ACE进行体外检测。但ACE成本昂贵,本文利用硫酸铵分级盐析法提取猪肺组织中的ACE,测其酶活力为15．45×10^-3U／mg,比活力为33．80×10^-3U／mg。通过卡托普利来验证其抑制效果,抑制率达49．15％。采用本实验室初步制得的紫菜降血压肽对自制ACE和商品ACE的活性进行抑制,测定IC50发现该抑制剂对2种ACE的抑制效果差异不大,且活性较为稳定,因此所提取的ACE粗酶液可直接用于降血压肽的体外检测实验。     

罗非鱼肉双酶分步控制酶解制备血管紧张素转化酶抑制肽的研究

本实验以罗非鱼肉为材料，利用Trypsin、Alcalase2．4L、Pratamex两两复合后，分步控制酶解制备血管紧张素转化酶抑制肽（ACEIP）。以ACE抑制率（Ⅰ值）、氨基酸态氨含量（Cn值）、和TCA可溶性蛋白（短肽）含量（Cp值）为指标对酶解过程进行分析，说明双酶分步控制酶解过程以及产物的特点，指出以单酶控制酶解为基础的双酶分步控制酶解法优于单酶控制酶解法。Trypsin与Alcalase2．4I．、Trypsin与Protamex及Alcalase2．4L与Protamex双酶分步控制酶解产物经稀释40倍后对ACE的最大抑制率分别可达到82．9％、82．9％和91．91％，具有较好的抑制效果。     

酶解罗非鱼鱼皮胶制备降血压肽的研究

为探讨罗非鱼鱼皮胶制备降血压肽的酶解工艺,研究选用Neutrase中性蛋白酶、Alcalase碱性内切蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和复合蛋白酶分别对罗非鱼鱼皮胶进行酶解,对其酶解液的水解度进行比较。结果表明复合蛋白酶的酶解效果最好。对复合蛋白酶的酶解工艺进行单因素优化,确定其最佳酶解工艺为:温度50℃、pH值7.0、料液比1∶5、酶量为底物量的1.5%。在此条件下水解6h时,水解度为60%,酶解产物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制率最高,达到78.96%。     

国家海洋局二所开发出高活性降血压肽

在国际科学基金资助及国家海洋局的支持下，国家海洋局第二研究所研究开发出一种高活性降血压肽。经研究，该所的科研人员发现，鲢鱼和贻贝中含有的肽可以治疗高血压症。他们以鲢鱼和贻贝作原料，采用分步复合酶酶解及活性修饰等先进工艺，从中提取出降血压肽，经冷冻干燥，制剂成型。经过对患有高血压症的老鼠进行试验，证明该药降压效果显著。对病鼠的给药剂量为3g／kg体重，6h后，老鼠的血压平均下降20～25mmHg，最大降幅达30mmHg。经安全性检测，证明此药安全、无毒副作用。     

鳙中焦磷酸盐水解酶的初步研究

本文采用离子色谱方法检测添加的焦磷酸四钠（TSPP）在新鲜碎鳙鱼肉中所发生的水解过程，并研究了焦磷酸盐水解酶（PPase）粗酶的特性。研究结果表明，添加到新鲜碎鳙鱼肉中的TSPP能被水解为单磷酸（Pi）；鳙鱼鱼肉中存在PPase，并且是水溶性蛋白。PPase粗酶水解TSPP的最适温度为50 ℃，最适pH为8.0。Mg2+、Mn2+和Co2+均可以激活PPase，但是Mg2+激活酶能力最强。Mg2+浓度为1mol•L-1时，PPase活性达到了0.023μmol•min-1•mg-1，显著高于其他两种金属离子的激活作用。葡萄糖-6-磷酸（G-6-P）能够强烈抑制PPase活性；EDTA-Na2在浓度小于1 mol•L-1能激活酶，但浓度大于1 mol•L-1时却能够强烈抑制PPase活性。     

翡翠贻贝肉酶解动物蛋白营养评价及其生理活性初探

对翡翠贻贝肉酶解动物蛋白（enzymolytic animal protein,EAP)进行的营养特性研究表明，粗蛋白含量达72．8％（干基），蛋白营养价高，氨基酸价为93（第一限制氨基酸为含硫氨基酸），且富含赖氨酸，精氨酸，维生素，矿物质等；Glu,Asp,Gly等呈味物质含量丰富，是制作营养保健食品或海鲜调味料的理想原料，经动物实验表明，翡翠贻贝肉EAP剂量为320mg.kg^-1体重时，对昆明小鼠移植性肿瘤S－180的抑瘤率可达50．6％，且有增强免疫力的活性。     

3942中性蛋白酶酶解中国毛虾蛋白制备血管紧张素转移酶抑制肽

采用3942中性蛋白酶酶解中国毛虾(Acetes chinensis)蛋白，制备具有抑制血管紧张素转移酶(ACE)活性的多肽。采取正交实验研究料水比、酶量、反应温度、反应时间4个因素对酶解中国毛虾蛋白产物的ACE抑制活性的影响。结果显示，在料水比1：3(体积比)，酶量0．5％，温度45℃，时间8h的水解条件下得到的酶解产物F7的ACE抑制活性最高，其抑制率达到92．86％。用层析柱Sephadex G-25、SP-Sephadex C-50对F7进行分离纯化，选取ACE抑制活性最高的峰进一步用反相高压液相色谱进行纯化，得到单一组分FⅠ。经飞行时间质谱和碰撞诱导裂解分析确定，FⅠ为新型的ACE抑制肽Ser-Pro，IC50值为272μmol／L。     

水溶性牡蛎多糖的降血压活性

牡蛎中含有丰富的多糖。从牡蛎中制备的水溶性多糖经HPLC测定,其单糖组成为葡萄糖,以葡聚糖分子筛测定其分子量为(3.93~10.84)×106 Da。以牡蛎多糖(7g/kg)对高血压模型大鼠灌胃均具有较明显的降低收缩压和舒张压作用。     

海藻降血压肽的作用机制与制备

海藻是我国重要的海洋生物资源,因其含有丰富的活性物质成分而成为开发海洋药物研究的主要方向之一.来源于海藻中的降血压肽,安全无毒、无副作用,对预防和治疗高血压具有良好的效果.本文在介绍海藻中的降血压活性成分和降血压肽的作用机制的基础上,综述了海藻降血压肽的研究进展及其制备过程,并提出其开发应用前景.     

海带蛋白的提取和活性研究

采用5%NaOH、0.15 mol/L NaCl、0.1 mol/L磷酸盐缓冲液、0.15 mol/L NaCl及0.06%纤维素酶和1%SDS溶液提取新鲜海带中的蛋白质,并采用Brrddford的方法测定提取的蛋白质含量.结果表明,采用5%NaOH 0.06%纤维素酶浸泡,然后经超声波破碎,离心取上清液进行100%饱和度的(NH4)2SO4沉淀,对所得沉淀透析后冻干所得海带蛋白质的含量较多.时间飞行质谱表明蛋白质分子量为872～7705 m/z.抑菌试验表明海带蛋白对大肠杆菌、产气杆菌、金色葡萄球菌具有抑制作用.同时,以海带蛋白(5 mg/kg)对高血压模型大鼠灌胃具有良好的降压作用.     

降血压肽的研究进展

本文主要从降血压肽的作用机理、制备方法、分离纯化技术及活性测定手段等方面,结合国内外的相关研究,综述了降血压肽领域的研究进展。并在此基础上,展望了食源性降血压肽于医疗保健方面的发展前景。旨在为降血压肽的进一步深入研究提供依据,为其产业化生产及市场推广提供参考,为降血压治疗提供新的选择。     

利用水产蛋白开发酶解降血压肽

据国家卫生部2002年8月在全国范围内开展的“中国居民营养与健康状况调查”显示，我国目前成人高血压患病率为18．6％，全国现有高血压患者1．6亿，比1991年增加7000万，但目前平均的治疗率和控制率分别为24．7％和6．1％，仍处于较低水平。而且随着人民生活水平的提高和社会节奏的不断加快，高血压患者有年轻化趋势且数量正逐年增加，这一严峻形势引起了社会各方的共同关注。     

Antihypertensive effect of Narezushi, a fermented mackerel product, on spontaneously hypertensive rats

ABSTRACT:   During the fermentation of mackerel to narezushi , the concentration of peptides required to inhibit 50% of the ACE activity in the assay media (IC₅₀), as an index of the angiotensin  I-converting enzyme (ACE) inhibitory activity, was remarkably decreased with a rapid increase in peptide contents. Systolic blood pressure (SBP) in spontaneously hypertensive rats (SHR) decreased between 2 and 4 h after the single oral administration of greater than 10 mg peptide/kg narezushi extract, and recovered to the initial level by 8 h thereafter. The SBP decreased at seven successive daily doses of 10 mg/kg of narezushi extract and then recovered to the initial level 5 days after stopping a total of 10 daily administrations. The extract was administered to five-week-old SHR rats for 70 days and SBP decreased 21 days after starting and continued for 28 days after the end of administration. The peptide-rich fraction from narezushi extract had a powerful antihypertensive effect, whereas the other fraction had a similar, but weak effect.     

一种低值海参蛋白酶解物降血压活性的研究

通过水解低值海参--海地瓜(Acaudina molpadioides)的体壁蛋白,制备出具有显著抗高血压效果的水解产物.海地瓜的体壁蛋白先后被菠萝蛋白酶和alcalase蛋白酶水解,利用超滤技术,把水解产物分级成>2 kDa和<2 kDa两种组分.<2 kDa的组分具有很强的血管紧张素转换酶(ACE)抑制活性,其IC50值为0.615 mg/mL.肾血管性高压大鼠灌胃给药(<2 kDa的组分)1个月后,与模型组相比,其收缩压和舒张压均有明显下降,呈剂量依赖性,其中120 μg/g剂量的降压效果与卡托普利10 μg/g相当.     

鱼降压肽的酶法制备工艺及其理化性质研究

采用高压液相色谱测定降血压肽的血管紧张素转化酶抑制活性，对碱性蛋白酶水解草鱼蛋白制备鱼降压肽进行研究。结果表明，碱性蛋白酶水解草鱼蛋白制备鱼降压肽的较佳工艺条件为：pH9.0、温度50℃、酶与底物比48AU.kg-1、水解度34.52%。鱼降压肽成分分析结果显示，鱼降压肽中可溶性氮含量为81.26%，肽含量为72.81%，脂肪为0.12%，水分为3.54%，灰分为9.47%。鱼降压肽的血管紧张素转化酶抑制活性为70.35%；体积排阻色谱测定鱼降压肽的相对分子质量在124～10581之间，主要集中在124～1062之间；溶解度的测定结果表明，鱼降压肽在pH3.0～11.0时溶解度为96.0%左右，可广泛应用于食品中。 关键词：草鱼； 降压肽；碱性蛋白酶；高压液相色谱；相对分子质量；体积排阻色谱     

Antihypertensive effect of heshiko, a fermented mackerel product, on spontaneously hypertensive rats

ABSTRACT:   During the processing of heshiko , a fermented mackerel product, a rapid increase in peptide content in the extract and a remarkable decrease in the IC₅₀ (the inhibitor concentration to inhibit 50% of enzyme activity) as an index of the angiotensin I-converting enzyme (ACE) inhibitory activity were observed. Systolic blood pressure (SBP) in spontaneously hypertensive rats (SHR) decreased between 2 and 4 h after single oral administration of heshiko extract at a dose of 10 mg/kg as a peptide, and SBP recovered its initial level by 8 h. For single doses of extract at three different levels (5, 10 and 50 mg/kg), SBP similarly decreased after between 2 and 4 h. The decreased SBP at 50 mg/kg was almost equal to that at 10 mg/kg, indicating a low dose dependency for heshiko extract. Through successive administration of heshiko extract or its desalted extract at 10 mg/kg for 10 days, SBP decreased 7 days after the start of administration and it recovered its initial level 5 days after stopping administration. During these periods, the change in ACE activity in blood plasma from SHR administered the extract roughly corresponded to that of SBP, suggesting that ACE inhibition was related to a decrease in SBP. For long-term administration of the extract to 5-week-old SHR for 70 days, SBP decreased 28 days after the start of administration. The decreased SBP remained low for 28 days after stopping administration, whereas the decreased ACE activity recovered its initial level. These results suggest that heshiko extract influences not only ACE inhibition, but also other systems that regulate blood pressure.