毁灭炭疽菌RAPD和ISSR-PCR最佳反应体系的建立

对影响PCR反应的主要因子-Md2+、dNTP、Taq酶、引物浓度进行优化,建立起适合于毁灭炭疽菌基因组DNA的RAPD和ISSR反应体系.RAPD反应体系(25μL):Mg2+浓度为2.5 mmol/L,dNTP浓度为200 μmol/L,Taq酶用量为1U,引物浓度1μmol/L.ISSR反应体系(25μL)为:Mg2+浓度为2 mmol/L,dNTP浓度为150μmol/L,Taq酶用量为0.5 U,引物浓度为1.25 μmol/L.     

山杏RAPD反应体系条件的优化

以山杏新鲜叶片为材料,研究了山杏RAPD分析过程中的影响因素,包括Taq酶、Mg2 、dNTP、引物、模板DNA浓度、变性时间、循环次数等,建立了适合山杏RAPD反应的PCR体系,即20μl反应体系中含有Taq酶1.0U、Mg2 2.0mM,四种dNTP各0.1mM,引物0.5μM,模板DNA50ng。扩增程序为:94℃预变性4mins;94℃变性1min,36℃退火1min,72℃延伸1.5mins,10个循环;94℃变性30s,36℃退火40s,72℃延伸60s,30个循环;最后72℃延伸5min。     

蛇莓RAPD与ISSR-PCR反应体系优化

采用单因素试验结合正交试验,对PCR反应体系中的5种主要反应因子Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶、引物、模板DNA浓度进行优化筛选,确立了适合蛇莓基因组DNA的RAPD和ISSR反应体系,RAPD反应体系(20μL):Mg2+1.5 mmol/L、dNTPs 250μmol/L、Taq酶1 U、引物0.2μmol/L、DNA模板60 ng;ISSR反应体系(20μL):Mg2+2.0 mmol/L、dNTPs 250μmol/L、Taq酶0.5 U、引物1μmol/L、DNA模板60 ng。利用确立的体系对24份蛇莓种质进行扩增,结果条带清晰明亮,多态性好。     

单雌蓖麻ISSR-PCR反应体系的建立和优化

以单雌蓖麻提取的基因组DNA为材料,采用单因子试验方法,分别研究了Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶以及模板DNA用量5种因素对ISSR-PCR反应的影响;建立了适合单雌蓖麻IS-SR-PCR扩增的反应体系,即在20μL反应体系中,10×PCR buffer 2.5μL(Mg2+free),模板DNA 20 ng,2.0mmol/L MgCl2,引物浓度1.0μmol/L,dNTP 0.4 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.0 U。     

芫荽RAPD体系优化

以芜萎基因组DNA为模板,对RAPD扩增反应条件进行优化,以期建立适合芜荽的RAPD的最优反应体系,结果表明:PCR扩增体系(总体积20μL)为:模板DNA1.0 ng·μL-1,dNTP 0.45 mmol·L-1,随机引物1.3μmol·L-1,Taq酶0.6 U,Mg2+2.0 mmol·L-1,退火温度39℃,...     

草莓RAPD反应体系的优化

以草莓幼叶为试材,进行RAPD反应扩增体系的优化.对模板、dNTP、引物、MgCl2和Taq DNA聚合酶等条件进行优化.结果表明,在20 μL的反应体系中,以DNA模板用量25 ng,引物用量为0.15 μmol·L-1,dNTP用量为120μmol·L-1,Mg2+用量为2.5 mmol·L-1,Tap DNA聚合...     

朝鲜白头翁RAPD反应体系的优化

采用改进的CTAB法提取朝鲜白头翁的基因组总DNA,建立朝鲜白头翁RAPD分析的PCR反应体系,成功进行RAPD扩增.筛选出的最佳PCR反应体系为:25μL反应体系中包括模板DNA 20ng,dNTP 200μmol/L,引物0.4μmol/L,Mg2+1.5 mmol/L,Taq酶1 U,10×Buffer 2.5μL,其余部分为无菌重蒸馏水.     

七彩鲑RAPD反应体系的构建及优化

以七彩鲑尾鳍为试验材料,对影响七彩鲑随机扩增多态性DNA(RAPD)扩增体系的重要参数进行了优化,建立了七彩鲑RAPD的最适反应体系.七彩鲑RAPD的最佳反应体系为:反应体系25μL,模板DNA的质量浓度4 ng/μL,Mg2+浓度2.0 mmol/L,dNTP浓度0.5mmol/L,引物浓度0.5μmol/L,Taq...     

鸭茅RAPD分子标记反应体系优化

以鸭茅基因组DNA为模板,对RAPD反应体系中的一些重要参数进行摸索和优化实验,建立了一套鸭茅RAPD分子标记的最优化反应体系。即20μl体系中,最终浓度:Mg2+2.0mm/L,dNTP200μmol/L,Taq酶1.0U,引物浓度0.5pmol/μl,模板DNA量为60ng。     

红花基因组DNA的提取及RAPD体系的优化

用多种方法提取红花老叶及嫩叶DNA,进行比较,最后确定老叶DNA的提取用高盐低pH法,嫩叶用Michael等的方法.设计两次正交实验来确定红花RAPD体系中各成分的浓度,最终确定了一个既稳定又能扩增出最多条带的适合红花的RAPD最优体系,即25 μL反应液中,dNTP 200 μM, Mg2+1.5 mM,引物0.8 μM,Taq酶1U,模板30～60 ng.     

高山红景天RAPD反应体系的优化研究

[目的]筛选适合高山红景天的RAPD-PCR反应体系。[方法]以药用植物高山红景天雌株的叶片为材料,采用改良的CTAB法提取基因组DNA,并对影响RAPD扩增反应的各因素进行优化。[结果]结果表明,适合高山红景天的RAPD反应体系为:25μl总体积中含DNA模板20 ng,Mg2+1.5 mmol/L,引物10 pmol,dNTP 100μmol/L,Taq DNA聚合酶1.0 U。[结论]CTAB法在高山红景天可获得质量较好的基因组DNA。     

大白菜RAPD反应条件的优化

RAPD是作物主要农艺性状分子标记及遗传多样性研究的一项重要技术。为了适应大白菜反应体系,本试验以大白菜品种413、96及其F1为试材,对影响RAPD扩增的模板DNA用量、Mg2+浓度、TaqDNA聚合酶浓度、dNTPs浓度、引物浓度等因素进行了优化,结果如下:20μl PCR反应体系,30 ng(1.5μl)DNA模板,3 mmol/L Mg2+,0.01 U/μl Taq DNA聚合酶,0.4 mmol/L dNTPs,0.8μmol/L引物为最佳反应浓度。     

石榴RAPD反应体系优化及亲缘关系研究

利用正交试验设计,从Mg2+、dNTP、引物、酶4种因素3个水平上对石榴RAPD反应体系进行优化,确立了适合石榴RAPD反应体系:在25μl反应体系中,含1×PCRbuffer、2.5mmol/LMgCl2、200μmol/LdNTP、0.2μmol/L引物、50ng模板DNA、0.5UTaq DNA聚合酶。通过梯度PCR测验,确定了适宜的退火温度37℃。利用优化的RAPD反应体系对11个石榴品种进行亲缘关系分析,结果表明,11个品种之间的多态性比较高,变异大。聚类图结果表明,11个品种被明显分为临选1号、净皮甜、新大甜、临选14号;大粒三白甜、大青皮酸、小红皮酸、白花、江石榴、薄皮糙、玉石籽两个类群。因此,这一优化体系适合于石榴品种间的亲缘关系鉴定。     

野生大麦ISSR-PCR反应体系的正交优化研究

利用SPSS建立正交试验体系,从Taq酶、Mg2+离子、dNTP、模板、引物的浓度5个水平对大麦ISSR反应体系进行优化,确定了适合大麦的快速高效ISSR反应体系。试验结果表明,在25μl反应体系中各反应成分为:0.5 U Taq酶,1μmol/L Mg2+,0.2μmol/LdNTP,0.3μmol/L引物,50 ng模板DNA。这一反应体系的建立对利用ISSR-PCR进行大麦种质资源的分类和新基因资源的挖掘打下了坚实的基础。     

卷丹百合RAPD-PCR反应体系的单因素逐项优化研究

[目的]探索建立卷丹百合RAPD-PCR反应的最适体系。[方法]用CTAB法提取卷丹百合的基因组DNA,通过采用单因素逐项优化的方法,对影响卷丹百合RAPD-PCR扩增的反应组分浓度进行优化。[结果]反应结果显示RAPD对模板的适应性很大;体系中Mg2+在1.5~3.0μl都能产生较清晰的RAPD带;dNTP较适合的浓度范围为0.4~1.6μl;引物较适合的浓度范围为1.5~3.0μl;体系中TaqDNA聚合酶在0.1~0.8μl的浓度范围内均有良好的扩增效果。根据上述结果,卷丹百合RAPD-PCR反应最适的反应体系为:20μl的反应体系中含基因组DNA 2.0μl,Mg2+2.0μl,dNTP 1.2μl,引物2.0μl,TaqDNA聚合酶0.2μl。[结论]该研究为在分子水平研究百合种质资源的分类及亲缘关系奠定了基础。     

萝卜EST—SSR反应体系的建立与优化

利用正交设计L16（4^5）对萝卜SSR—PCR反应体系的5因素（Taq酶、Mg^2＋、模板DNA、dNTP、引物）在4个水平上进行优化,获得了最佳反应体系,即20山反应体系中含有0．10mmol／LdNTP,3．0mmol／LMg^2＋,50ng模板,0．500μmol／L引物,1．0UTaq酶。使用优化的反应体系,扩增条带清晰,可满足不同引物组合和萝卜材料的要求。此研究为今后利用SSR技术对萝卜种质资源进行分类、构建遗传图谱和基因定位奠定了基础。     

抗旱型小麦基因组DNA的提取及RAPD反应体系优化

采用CTAB法和SDS法提取抗旱性小麦基因组DNA.结果表明:CTAB法提取的DNA纯度高,RNA和蛋白质含量低,可用于RAPD反应.同时对影响RAPD反应的5个重要因素进行了筛选,确定了RAPD最优反应体系:25μL反应体系为2.5 mmol/L Mg2+,0.2 mmol/L dNTP,10 pmol引物,25 ng模板,0.75 UTaq酶.     

巴旦杏RAPD-PCR反应体系的正交优化

以巴旦杏DNA为模板,利用L25(56)正交设计,研究了dNTPs、DNA模板、Mg2+、Taq酶和随机引物5种RAPD反应组分浓度变化对扩增结果的影响.量化的分析结果表明,正交试验的方法可以较为准确地反映各个因素在不同水平上对RAPD-PCR的影响.试验研究建立的巴旦杏RAPD-PCR最佳反应体系为:25 μL PCR反应体系中, 10×Taq Buffer 2.5 μL, 2.0 mmol/L Mg2+,0.25 mmol/L dNTPs,模板DNA为30 ng,随机引物0.8 μmol/L,Taq聚合酶1.5 U.     

甜菜RAPD反应体系优化及亲缘关系研究

利用正交试验设计,从Mg~(2+)、dNTP、引物、Taq酶和模板5种因素5个水平上对甜菜RAPD反应体系进行优化,确立了适合甜菜RAPD反应体系:25μL反应体系中含1×Buffer、1.0 mmol/LMg~(2+)、1U Taq DNA聚合酶、0.25 mmol/LdNTP、0.4μmol/L随机引物和25 ngDNA模板。利用优化的RAPD反应体系对38个甜菜品种进行亲缘关系分析。结果表明,38个品种之间的多态性比较高,变异大。聚类图结果表明,38个甜菜品种遗传距离的变异范围在0.14～0.72。当以遗传距离0.50来划分时,可将38个品种分为两大类,以遗传距离0.40来划分时,又可以把第2大类分为6个亚类。结果显示,RAPD优化体系适合甜菜亲缘关系鉴定。