日粮中裂殖壶藻油配伍外源性EPA对草鱼幼鱼脂肪酸组成、FAD、ELO基因表达及脂质代谢的影响

摄食含有裂殖壶藻硬脂油日粮的草鱼可能通过节省DHA合成所需的能量和促进脂解作用供应能量以减少蛋白质分解的共同作用下,刺激蛋白质沉积,获得比摄食鱼油更好的生长效果。为探究草鱼日粮中应用富含DHA的裂殖壶藻硬脂油后是否需要配伍EPA及其可能机制,实验配制5组等氮等能日粮饲养草鱼[(22.70 g±0.80) g]49 d,分别以鱼油(F-O);藻油硬脂(S-O);藻油硬脂(DHA)∶EPA=3∶2(SE1-O);藻油硬脂(DHA)∶EPA=1∶1(SE2-O);EPA(E-O)提供5组饲料中的0.52%n-3长链多不饱和脂肪酸(LC PUFA)。结果显示:(1)增重率(WG)、特定生长率(SGR)及饲料系数(FCR)在各组间均无差异;(2) S-O组肌肉粗蛋白含量显著高于E-O组;(3) S-O组肌肉DHA含量显著高于F-O组、SE1-O组和E-O组;(4)动脉粥样硬化指数在各组间无显著差异,SE2-O组血栓形成指数显著高于F-O组,S-O组和SE2-O组胆固醇血症指数显著低于F-O组;(5) E-O组的腹腔脂肪细胞显著大于F-O组和SE1-O组,且甘油三酯水解酶(ATGL)和肉碱棕榈酰转移酶(CPT1)转录水平显著下调;肌肉中的脂肪酸去饱和酶(FAD)转录水平在E-O组显著高于S-O组,脂肪酸延长酶(ELO)转录水平在S-O组显著下调。研究表明,裂殖壶藻油单独或配伍EPA使用对草鱼生长、n-3 LC PUFA含量及脂肪组织水解无显著影响。仅以EPA为n-3LC PUFA来源时,会减弱脂肪组织的水解并降低肌肉粗蛋白的含量。日粮中高水平的DHA会减弱机体合成LC PUFA的能力。相对于EPA,草鱼可能更需要DHA,生产中可以单独使用裂殖壶藻油,而无需配伍EPA。     

不同规格野生黄鳍金枪鱼肌肉营养分析与评价

探究不同规格黄鳍金枪鱼(Thunnus albacares)肌肉营养成分及品质差异,实验以野捕的 3种规格黄鳍金枪鱼J1 (4.2±1.2) kg、J2 (22.5±2.5) kg和J3 (50.8±3.9) kg为研究对象,通过常规生化分析方法对金枪鱼肌肉的常规营养成分、氨基酸、脂肪酸及矿物质元素进行比较分析。结果显示,(1) J1组水分含量显著高于J2、J3组;J2、J3组粗蛋白含量显著高于J1组(P<0.05);J3组粗脂肪含量显著高于J1、J2组(P<0.05)。(2)检出19种常见氨基酸,氨基酸含量最高的为谷氨酸(3.04~ 3.25 g/100 g),必需氨基酸中含量最高的为赖氨酸(2.02~2.15 g/100 g),最低的为色氨酸(0.31~ 0.45 g/100 g)。非必需氨基酸含量J3>J2>J1 (P<0.05);必需氨基酸、呈味氨基酸含量J1组显著低于J3组(P<0.05)。依据氨基酸评分(AAS),缬氨酸为第一限制性氨基酸;以化学评分(CS)为评分标准,J1、J2组第一限制性氨基酸为色氨酸,J3组为苯丙氨酸+酪氨酸。(3)各组共检出25种脂肪酸,以多不饱和脂肪酸(PUFA)为主,含量最高的为二十二碳六烯酸(DHA),占总脂肪酸含量的37.46%~39.18%。DHA含量J3组显著高于J1、J2组;二十碳五烯酸(EPA)含量J2、J3组显著高于J1组;DHA∶EPA比值J1组显著高于J2、J3组(P<0.05)。单不饱和脂肪酸(MUFA)含量J3>J2>J1;PUFA含量J3组显著高于J1、J2组(P<0.05)。PUFA/饱和脂肪酸(SFA)、n-3系多不饱和脂肪酸/n-6系多不饱和脂肪酸(n-3/n-6)比值J2、J3组显著高于J1组(P<0.05)。h/H比值J3组显著高于J1、J2组(P<0.05)。(4) J2、J3组Na、Ca含量显著高于J1组,J1组K含量最高且显著高于J2、J3组(P<0.05)。4种重金属元素均低于食品中建议的最大允许限量,其中Fe含量最大的为J3组,且J3>J2>J1 (P<0.05);Cu含量最大的为J3组,且显著高于J1组(P<0.05)。综合分析,大规格黄鳍金枪鱼具有更好的营养质量,本研究为居民膳食的选择及黄鳍金枪鱼人工配合饲料的配制提供了科学依据。     

江蓠、浒苔、藻渣和菌渣替代鱼粉对红鳍东方鲀幼鱼生长性能、相关生化指标的影响

本实验旨在研究江蓠(Gracilaria verrucosa)、浒苔(Enteromorpha prolifera)、藻渣和菌渣替代鱼粉对红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)幼鱼生长性能、血清和肝脏生化指标和体组成的影响。实验共制成6种等氮、等脂的饲料,以含鱼粉60%为对照组1和45%鱼粉的为对照组2,分别将10%的江蓠、浒苔、藻渣、菌渣与植物蛋白质配合后替代对照组1饲料中30%的鱼粉,投喂初始体重为(17.33±0.55) g的红鳍东方鲀幼鱼56 d。结果显示,1)浒苔组特定生长率(SGR)显著高于其他5组(P<0.05),藻渣组SGR显著高于对照组2和江蓠组(P<0.05),与对照组1和菌渣组无显著差异(P>0.05);对照组1和浒苔组饲料效率(FER)显著高于对照组2和菌渣(P<0.05),与江蓠和藻渣组无显著差异(P>0.05);对照组1的蛋白质沉积率(PPV)和蛋白质效率(PER)显著高于对照组2和菌渣组(P<0.05),与江蓠、浒苔和藻渣组无显著差异(P>0.05)。2)各组血清和肝脏中谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性均无显著差异(P>0.05)。各组血清丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性均无显著差异(P>0.05)。3)菌渣组鱼体粗蛋白质含量显著高于藻渣组(P<0.05),与对照组1、对照组2、江蓠和浒苔无显著差异(P>0.05);浒苔和藻渣组鱼体粗脂肪含量显著高于对照组2 (P<0.05),与对照组1、江蓠和菌渣组无显著差异(P>0.05)。综合来看,将10%江蓠、浒苔、藻渣和菌渣与植物蛋白质配合后替代饲料中30%的鱼粉对红鳍东方鲀幼鱼的生长性能无不良影响,并且浒苔可以显著提高红鳍东方鲀的生长性能。     

混合微藻替代鱼油对大菱鲆幼鱼生长性能、体组成及肠道部分生化指标的影响

本实验以大菱鲆(Scophthalmus maximus)幼鱼[(39.69±0.25) g]为研究对象,探究由裂壶藻(Schizochytrium sp.)和拟微绿球藻(Nannochloropsis sp.)组成的混合微藻替代鱼油对幼鱼生长性能、体组成、肠道消化水平及抗氧化能力的影响,以确定混合微藻替代鱼油的适宜比例。通过在基础饲料中添加不同比例的混合微藻,分别替代0、25%、50%和100%的鱼油,制成4组等氮等脂的实验饲料(分别命名为D1、D2、D3和D4),每组饲料设3个重复,实验周期为12周。结果显示,随替代比例的提高,大菱鲆幼鱼的增重率(WGR)和饲料效率(FE)呈下降趋势,D1、D2和D3组的特定生长率(SGR)和FE无显著性差异,但均显著高于D4组(P<0.05);肝体比(HSI)在D1组达到最大值,且显著高于其他各组(P<0.05);存活率(SR)和肥满度(CF)在各组之间无显著差异(P>0.05)。随着混合微藻替代鱼油比例的升高,全鱼和肌肉粗脂肪含量呈先升高后降低的变化趋势,且D4组显著低于D1组(P<0.05);大菱鲆幼鱼鱼体中C20:4n-6和n-6 PUFA含量显著升高,在D4组均达到最大值,且显著高于对照组(P<0.05)。而EPA、DHA和n-3 PUFA含量随之显著下降,对照组(D1)含量显著高于其他各组(P<0.05);肌肉中C20:4n-6和DHA含量在不同实验组间无显著性差异(P>0.05),EPA和n-3 PUFA含量呈显著降低趋势(P<0.05)。肠道脂肪酶活力在D3组达到最大值,显著高于对照组(P<0.05),肠道胰蛋白酶活力也是在D3组最高,但与对照组无显著性差异(P>0.05)。与D1组相比,D3组肠道中酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LZM)活力和补体C3含量均显著升高(P<0.05)。肠道中超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)和过氧化氢酶(CAT)活力随替代比例的提高呈先升高后降低的趋势,均在D3组达到最大值,显著高于D1组(P<0.05),而肠道中丙二醛(MDA)含量在不同实验组间并未表现出显著性差异(P>0.05)。综上所述,混合微藻替代50%的鱼油并不会对大菱鲆幼鱼的生长性能产生负面影响,同时可以提高肠道的消化性能、抗氧化能力和非特异性免疫能力。     

饲料中添加不同水平的维生素E对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)亲鱼繁殖性能及后代质量的影响

在饲料中分别添加0、200、1200 mg/kg的维生素E(DL-α-生育酚乙酸脂形式)配制成Ec、El和Eh三种试验饲料,饲喂3龄半滑舌鳎亲鱼(雌性1.58±0.19 kg/尾、雄性0.20±0.05 kg/尾)70 d,探讨饲料中添加不同水平的维生素E对半滑舌鳎亲鱼繁殖性能的影响。结果显示,饲料中添加1200 mg/kg的维生素E(Eh组)不仅可以促进亲鱼性腺的发育,提高亲鱼产卵量、浮卵率、受精率、孵化率以及初孵仔鱼长度,而且影响仔鱼质量,仔鱼的成活率、12 d仔鱼长度、生存活力等方面均要高于对照组。而饲料中添加200 mg/kg的维生素E(El组)只对亲鱼性腺的发育和初孵仔鱼长度有一定的促进作用,对亲鱼产卵量、浮卵率、受精率、孵化率没有显著影响(P>0.05)。随饲料中维生素E的增加,血清中SOD的活性显著升高(P<0.05),MDA含量则显著下降(P<0.05)。此外,El和Eh试验组卵中干物质、维生素C的含量,以及卵子脂肪酸中PUFA、n-3PUFA、n-3HUFA和n-6PUFA的含量均要高于Ec组,El和Eh试验组之间的没有显著性差异(P>0.05)。结果表明,在半滑舌鳎亲鱼饲料中添加适量维生素E会亲鱼促进性腺的发育,增加产卵量,提高卵子和仔鱼的质量。在本试验中Eh组(1200 mg/kg)亲鱼的繁殖性能要优于Ec组(0 mg/kg)和El组(200 mg/kg)。     

卤虫无节幼体的营养强化对半滑舌鳎稚鱼生长、消化酶及相关激素水平的影响

通过投喂经蛋氨酸及裂壶藻强化的卤虫,研究其对半滑舌鳎稚鱼(初始体长1.67±0.14cm)生长性能、主要消化酶活性(淀粉酶、胃蛋白酶、类胰蛋白酶)、碱性磷酸酶活性及胆囊收缩素(CCK)、甲状腺素(T4)、三碘甲状腺原氨酸(T3)和皮质醇浓度的影响.试验设3个实验组(蛋氨酸组、裂壶藻组和蛋氨酸加裂壶藻组),分别投喂经蛋氨酸、裂壶藻及蛋氨酸十裂壶藻强化的卤虫,对照组投喂未经强化的卤虫.试验进行16d,每4d取样1次.结果显示,裂壶藻组的体长和体重在试验结束时处于最高水平,体重显著高于对照组(P＜0.05),体长在12d时显著高于其他组(P＜0.05).裂壶藻组碱性磷酸酶活力在16d时显著高于蛋氨酸组和对照组,类胰蛋白酶活力在16d时显著高于其他组(P＜0.05),T3含量在12d时显著高于蛋氨酸组及对照组,T4水平在12d时显著高于对照组(P＜0.05).蛋氨酸加裂壶藻组淀粉酶活力在12d时显著高于蛋氨酸组(P＜0.05).对照组的CCK含量在4d时显著高于蛋氨酸组和蛋氨酸加裂壶藻组(P＜0.05),12d显著高于3个实验组,16d时显著高于裂壶藻组(P＜0.05).蛋氨酸组的皮质醇含量在4d时显著低于其他3个试验组(P＜0.05),8d和16d时显著低于对照组及蛋氨酸加裂壶藻组(P＜0.05).其碱性磷酸酶、淀粉酶活力及T4和T3水平在试验前期都较高,说明蛋氨酸强化的卤虫投喂对半滑舌鳎稚鱼的生长及激素水平有较微弱的促进作用,可能是由于卤虫无节幼体含有的蛋氨酸基本可以满足鱼体生长需要.     

微藻粉替代鱼油对星斑川鲽幼鱼生长、体组成和生理指标的影响

为探讨微藻粉替代鱼油对星斑川鲽(Platichthys stellatus,Pallas 1788)幼鱼生长、体组成和生理指标的影响,以鱼油为主要脂肪源配制基础饲料(FO),分别用裂壶藻粉(SO)、微绿球藻粉(NO)及两种藻粉的混合物(MO)替代鱼油中的DHA、EPA,不足部分用玉米油补齐,制成4种等氮等能的实验饲料,投喂星斑川鲽幼鱼(初始体重7.35 g±0.03 g)90 d。结果显示,与FO组相比,SO组的生长性能无显著差异(P0.05),NO组和MO组特定生长率、蛋白质效率和脏体比显著降低(P0.05),饲料系数显著增大(P0.05);MO组的全鱼粗蛋白含量显著高于其他组(P0.05),FO组与MO组的全鱼粗脂肪含量显著高于其他组(P0.05),FO组背肌粗灰分含量显著低于其他组(P0.05);藻粉替代鱼油对肌肉和肝脏脂肪酸组分影响显著,肌肉的C16:0和DHA含量与其在饲料中所占的百分比呈显著正相关(r=0.973,0.967,P0.05),C14:0和C16:1n-7呈极显著正相关(r=1.00,0.996,P0.01),肝的C18:2n-6、n-6 PUFA和DHA/EPA呈显著正相关(r=0.983,0.976,0.977,P0.05),C16:1n-7呈现极显著正相关(r=0.992,P0.01);NO组和MO组血清谷丙转氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)和碱性磷酸酶(ALP)的含量较FO组显著降低(P0.05),NO组血清谷草转氨酶(AST)和葡萄糖(GLU)含量显著低于其他组(P0.05)。研究表明,本实验条件下裂壶藻粉可以替代星斑川鲽幼鱼饲料中的鱼油而不对其生长和生理指标产生负面影响,并且在一定程度上能提高星斑川鲽的营养价值。     

饲料中不同水平维生素A对半滑舌鳎亲鱼繁殖性能及后代质量的影响

在饲料中分别添加0、20、100 IU/g的维生素A(视黄醇乙酸酯形式)配制成Ac、Al和Ah 3种试验饲料饲喂3龄半滑舌鳎亲鱼[雌性(1.58±0.18)kg/尾、雄性(0.20±0.05)kg/尾]70 d,探讨饲料中不同水平的VA对半滑舌鳎亲鱼繁殖性能的影响。结果显示,Al组和Ah组雌鱼性腺成熟率均要高于Ac组;相对产卵量Al组最高,Ac组最低;Al和Ah组的受精率和孵化率均显著高于Ac组(P0.05);Al组的卵上浮率、初孵仔鱼长度、仔鱼的成活率和仔鱼生存活力指数(SAI)均显著高于Ac组和Ah组(P0.05);随饲料中VA的增加仔鱼畸形率虽有增加趋势,但无显著性差异(P0.05);而卵巢、肝脏和卵子中VA的含量和血清中SOD的活性均随饲料中VA的增加而显著提高(P0.05)。此外,Al组和Ah组卵子中维生素C的含量以及卵子脂肪酸中n-3HUFA、n-6PUFA和PUFA的含量均要高于Ac组。综上所述,饲料中添加适量VA可促进半滑舌鳎亲鱼性腺的发育,提高产卵量,改进卵子和仔鱼的质量;本研究中Al组(20 IU/g)亲鱼的繁殖性能要优于Ac组(0 IU/g)和Ah组(100 IU/g)。     

稻田和池塘养殖禾花鲤肌肉营养与品质分析

为评估不同养殖环境对禾花鲤(Cyprinus carpio)肌肉营养与品质的影响,采用国标法检测稻田和池塘2种养殖环境下禾花鲤肌肉常规营养成分、质构特性、氨基酸和脂肪酸组成。结果显示,池塘组禾花鲤肌肉粗蛋白和粗脂肪含量显著高于稻田组(P<0.05),水分含量显著低于稻田组(P<0.05),灰分含量2组差异不显著(P>0.05);池塘组肌肉粘性显著高于稻田组(P<0.05),内聚性和剪切力显著低于稻田组(P<0.05),其他质构指标2组间差异不显著(P>0.05);肌肉氨基酸测定结果显示,池塘组氨基酸总量(?TAA)、鲜味氨基酸(DAA)、必需氨基酸(EAA)、非必需氨基酸(NEAA)显著高于稻田组(P<0.05),?EAA/TAA和?EAA/NEAA显著低于稻田组(P<0.05),2组禾花鲤必需氨基酸构成比例均符合FAO/WHO标准;在鲜味氨基酸含量方面,池塘组主要的4种呈味氨基酸含量均显著高于稻田组(P<0.05)。根据氨基酸评分(AAS)和化学评分(CS)标准,2组禾花鲤肌肉第一、二限制性氨基酸均分别为色氨酸(Trp)和缬氨酸(Val);在脂肪酸测定结果中显示,池塘组单不饱和脂肪酸(∑MUFA)含量显著高于稻田组(P<0.05),但多不饱和脂肪酸(∑PUFA)、EPA+DHA和∑n-3PUFA/ ∑n-6PUFA显著低于稻田组(P<0.05)。综上所述,池塘和稻田养殖条件下,禾花鲤均为优质的蛋白质来源,但不同养殖环境对禾花鲤肌肉营养与品质有显著影响。从常规营养成分、氨基酸评分方面看,池塘养殖条件下禾花鲤肌肉营养价值更高;从脂肪酸角度来看,稻田养殖禾花鲤肌肉具有较高的EPA+DHA含量以及n-3/n-6多不饱和脂肪酸比例,更适合高血脂和心血管疾病等患者食用,从质构性来看,稻田养殖环境下禾花鲤肌肉更具嚼劲。     

饲料中n-3 PUFA/n-6 PUFA比值对罗氏沼虾幼虾生长性能和抗氧化能力的影响

为探讨饲料多不饱和脂肪酸n-3 PUFA/n-6 PUFA比值对罗氏沼虾幼虾生长性能、虾体肌肉组成、抗氧化能力、血清生理指标以及消化能力的影响，实验设计了n-3 PUFA/n-6 PUFA比值分别为0.37 (D1)、0.59 (D2)、0.93 (D3)、1.51 (D4)和4.38 (D5)的5种等氮等脂饲料饲喂罗氏沼虾幼虾8周，每组设4重复，每个重复40尾虾 。结果显示，饲料n-3 PUFA/n-6 PUFA比值对罗氏沼虾幼虾存活率 (SR)无显著影响；实验虾终末体重 (FW)、增重率 (WGR)和特定生长率 (SGR)随饲料n-3 PUFA/n-6 PUFA比值增加先升后降，均在D3组最高；且D3组虾有最大的肝胰腺蛋白酶活性及脂肪酸合成酶活性。虾体肌肉粗蛋白质、水分和灰分含量不受饲料n-3 PUFA/n-6 PUFA比值影响，但总脂肪含量在D3组显著高于其他组；各组虾体肌肉的n-3 PUFA/n-6 PUFA比值的变化趋势与饲料的n-3 PUFA/n-6 PUFA比值变化趋势呈正相关。随饲料n-3 PUFA/n-6 PUFA比值增加，实验虾血清和肝胰腺中超氧化物歧化酶 (SOD)活性、总抗氧化能力 (T-AOC)和血清铜蓝蛋白 (CP)含量均呈现先升后降趋势，并在n-3 PUFA/n-6 PUFA比值为0.93~1.51时达到最大，但丙二醛 (MDA)含量持续上升；D1组血清总胆固醇 (T-CHO)和甘油三酯 (TG)含量显著高于其他组；血清谷草转氨酶 (AST)和谷丙转氨酶 (ALT)活性先降后升，且D3组最低。研究表明，饲料适宜的n-3 PUFA/n-6 PUFA可显著提升罗氏沼虾生长性能和抗氧化能力，对增重率和特定生长率进行折线回归，建议罗氏沼虾幼虾饲料中最适n-3 PUFA/n-6 PUFA比值为0.86~0.94。     

牟氏角毛藻和海洋红酵母对玉足海参浮游幼体发育、生长及成活率的影响

研究了利用牟氏角毛藻(Chaetoceros muelleri)和海洋红酵母(Rhodotorula sp.)单独投喂和按照一定比例混合投喂对玉足海参浮游幼体生长、发育以及成活率的影响。将牟氏角毛藻液与海洋红酵母稀释液按照4：0、3：1、2：2、1：3和0：4的体积比混合后投喂玉足海参浮游幼体,依次标记为A、B、C、D和E组。结果表明,仅投喂角毛藻的A组幼体的生长和发育速度最快,实验开始后该组幼体可以在第10 d进入大耳幼体阶段,第18 d进入樽形幼体阶段;同时,A组幼体的成活率最高,至实验结束时其平均成活率为58.73±2.75%。相比之下,整个实验过程中D和E组幼体一直停滞在小耳幼体阶段,且无法形成球状体;其中E组幼体的体长一直呈负增长状态,至实验结束时其平均成活率仅为22.22±5.50%。总体来说,随着饵料中海洋红酵母比例的增加,玉足海参浮游幼体的生长、发育及成活率均受到不利影响。因此,海洋红酵母并不适合作为替代饵料用于玉足海参浮游幼体培育。     

Effects of chloramphenicol, erythromycin, and furazolidone on growth of Isochrysis galbana and Chaetoceros gracilis

This study focused on determining the effects of antibiotics on microalgae used as food for scallop larvae. Six different dose levels of chloramphenicol, erythromycin, and furazolidone were added to cultures of Isochrysis galbana and Chaetoceros gracilis. An in vivo experiment was subsequently conducted to determine the effect of chloramphenicol and erythromycin on larval survival of the Pacific calico scallop Argopecten ventricosus in tanks and on the population of its associated bacteria. Results showed that growth of I. galbana was not significantly affected by chloramphenicol or erythromycin at the test doses of 0.5, 1.0, 3.0, 6.0, 9.0, and 12.0 mg/l. C. gracilis was significantly sensitive to erythromycin and chloramphenicol at doses higher than 0.5 and 3.0 mg/l, respectively. Furazolidone inhibited the growth of both I. galbana and C. gracilis at all test doses. Results showed that exposure of scallop larvae to a dose of 6 mg/l chloramphenicol or erythromycin did not significantly affect growth of I. galbana, significantly enhanced survival of the scallop larvae, and inhibited the growth of Vibrio spp. in tanks. This study demonstrated the adverse effect of chloramphenicol, erythromycin and furazolidone on I. galbana and C. gracilis microalgae but the positive effect on survival of the scallop larvae, decreasing associated bacterial population.     

An assessment of the aquaculture potential of the tropical sponges Rhopaloeides odorabile and Coscinoderma sp.

Sponge aquaculture offers the opportunity to provide a sustainable supply of bath and industrial sponges and mitigate the environmental effects of over-harvesting. The potential to develop sponge aquaculture is diverse given the variety of sponge species. However, amenability to culture and the selection of appropriate culture methods are species specific and need to be determined to provide the platform for commercial success. In this study the survival (in situ and ex situ), growth rates (in situ), and recovery processes (ex situ) were measured for explants of two sponge aquaculture candidates, Rhopaloeides odorabile Thompson et al. and Coscinoderma sp. [Phylum Porifera: Order Dictyoceratida: Family Spongiidae], cultured in the Palm Islands Group of the central Great Barrier Reef. Sponge survival was dependent on the species, experiment duration, and method of culture. For both species the highest mortality occurred within days of excision of sponge material from parent stock, and mortalities were negligible after 78 days. After 78 days, R. odorabile had highest survival ex situ (75%) and lowest in situ (60%). In contrast, Coscinoderma sp. had the lowest survival ex situ (30%) and highest in situ (90%). The total growth of R. odorabile (146.0 ± 40.3%) and Coscinoderma sp. (195.9 ± 39.8%) was not significantly different over the 21 month experimental period, but was highly variable between explants from the same individual. Both species demonstrated initial size dependent growth rates with smaller explants growing fastest over the first 78 days. Explant recovery rates were rapid for both species with a protective layer of collagen forming over the surface within 24 h. This layer was replaced by pinacoderm between 3 and 41 days after excision as the subsurface tissue reorganised to recreate a functional surface for each species, including redevelopment of the aquiferous system within 41 days for R. odorabile. R. odorabile and Coscinoderma sp. both show potential for commercial aquaculture, however, further research is required to reduce initial mortality rates and the high variability in growth rates between explants.     

芽孢杆菌R1共培养对嗜水气单胞菌NJ-1毒力基因表达的影响

为探讨芽孢杆菌潜在的淬灭靶点,本研究通过芽孢杆菌R1与嗜水气单胞菌NJ-1共培养,并对NJ-1生物量、信号分子产生量、毒力因子基因和群体感应(QS)关键调控基因表达量进行检测。结果显示:1NJ-1单独培养时,信号分子BHL和HHL的产量与NJ-1生长趋势一致,在27 h时达到峰值并启动Lux R表达,进而调控毒力因子金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、肠毒素、气溶素和血溶素等表达,其在27~30 h时呈现峰值表达,通路Qse B在27~30 h启动表达,48 h时达到峰值,而种间调控Lux S基因表达一直处于低水平状态;2与芽孢杆菌R1共培养时,仅痕量AHLs信号分子被检出,毒力因子相关基因表达量均显著下调;Lux R表达受抑制,Lux S在36 h时表达量显著上调,未影响Qse B正常表达;3AHLs与R1共培养可被显著降解。研究表明,芽孢杆菌R1抑制NJ-1毒力因子相关基因表达可能与其对NJ-1多QS系统进行调控相关联。     

血卵涡鞭虫单克隆抗体的制备与初步应用

用血卵涡鞭虫可溶性抗原免疫BALB/c小鼠,经常规融合、间接ELISA方法筛选,将所得阳性克隆再经3次亚克隆后,共获得3株针对血卵涡鞭虫的单克隆抗体(2B₂、3G₄、4G₇),单克隆抗体亚类鉴定表明,三者为IgG类抗体。用筛选的杂交瘤细胞株制备小鼠腹水抗体,其细胞上清及腹水效价分别为5.12×10^-4和8.00×10^-4。进一步利用单克隆抗体建立间接荧光抗体方法对单抗特异性进行鉴定,阳性虫体被染上黄绿色荧光,而正常梭子蟹血淋巴则未被染色。用单克隆抗体和多克隆兔抗血清以羊抗鼠HRP-IgG为酶标抗体,建立了检测血卵涡鞭虫的双抗体夹心ELISA方法,该方法对血卵涡鞭虫阳性标本检测符合率为100%。结果表明,制备的单克隆抗体效价高、特异性好,可用于血卵涡鞭虫的早期临床诊断。     

Perkinsus sp. infestation in carpet-shell clams, Ruditapes decussatus (L), along the Portuguese coast. Results from a 2-year survey

This study characterises Perkinsus atlanticus disease prevalence and intensity within the economically important beds of the clam Ruditapes decussatus along the Iberian Atlantic coast. Samples were collected from five different sites along the Portuguese coast (Ria Formosa, Ria do Alvor, V.N. Milfontes, Aveiro, Lagoa de Obidos) and in Galicia (Ria de Arosa) between winter 2000/2001 and 2002/2003. The infection level was evaluated by the Ray Fluid Thioglycollate medium (RFTM) method using the body burden assay. In addition, the measure of the condition index (CI) (percentage between the edible part and the total weight of the clams) was conducted to investigate a possible correlation between this parameter and the intensity of the infection. However, no clear relationship between infection intensity and condition index (CI) could be determined although a significant decline in CI was found for heavily infected clams. Results of a 2-year survey demonstrate the presence of Perkinsus sp. in all sampling sites albeit with different intensities. Sites where human interference was minimal showed the lowest levels of infection. There were no significant differences in Perkinsus sp. infection intensity between samples collected in winter and summer, in contrast with several studies describing higher intensities at the end of the summer. Nevertheless, major differences were observed from year to year and site to site, indicating that factors other than those responsible for seasonal climatic variations might affect the prevalence and the intensity of Perkinsus sp. infection.     

湛江沿海五种石斑鱼线粒体DNA的RFLP分析

In this paper, genetic diversity of intraspecies, and genetic relationship of interspecies in Epinephelus spp. (E. merra, E. fario, E. awoara, E. akaara and E. septemfasciatus) were assessed by using mitochondrial DNA restriction fragment length polymorphisms (mtDNA RFLPs).The samples were collected from the coastal area of Zhanjiang,Guangdong province. MtDNA was extracted from the fresh liver tissue by applying a difference centrifugation procedures. Using 17 restriction enzymes with 5-or 6-bp recognition sites, the purified mtDNA was cleaved by single enzymes. These enzymes included BamH Ⅰ，Bgl Ⅰ，Bgl Ⅱ，Dra Ⅰ，EcoR Ⅰ，EcoR Ⅴ，Hind Ⅲ，Kpn Ⅰ，Mlu Ⅰ，Pst Ⅰ，Pvu Ⅱ，Sal Ⅰ，Sca Ⅰ，Sma Ⅰ，Sty Ⅰ，Xba Ⅰ and Xho Ⅰ. The phylogenetic analysis was done using the Neighbor joining(NJ) method and Unweighted pairgroup method with arithmetic mean(UPGMA) method. Genetic diversity indices such as haplotype diversity (h), average genetic distance between haplotypes (P) and nucleotide diversity (π) were calculated using Nei and Li's segment method to quantify the genetic diversity within species. There were 8, 5, 8, 5 and 2 haplotypes detected within E. merra, E. fario, E.awoara, E.akaara and E. septemfasciatus, respectively. The haplotype diversity (h) was 0.8943, 0.6186, 0.9242, 0.6927 and 0.1820,respectively. The average genetic distance between haplotypes (P) was 0.62%±0.31%, 0.64%±0.37%, 1.12%±0.55%,0.72%±0.42% and 0.45%, respectively. And the nucleotide diversity (π) was 0.22%, 0.13%, 0.46%, 0.17% and 0.04%, respectively. The wild groupers in the Zhanjiang Coastal Area exhibited a relative higher level of genetic diversity. The net genetic distance between species (P_net) was 0.0694（E. merra - E. fario）,0.1337（E. merra - E. awoara）,0.1090 E. merra -E. akaara）, 0.1286（E. merra - E. septemfasciatus）,0.1590（E. fario -E. awoara）,0.0825（E. fario -E. akaara）,0.1153（E. fario - E. septemfasciatus）,0.1131 E. awoara - E. akaara）,0.0724（E. awoara -E. septemfasciatus） and 0.1336（E. akaara - E. septemfasciatus）. Both NJ and UPGMA methods yielded an identical phylogenetic tree for the five species. The E. merra and E. fario first clustered together, then joined with E. akaara, and finally clustered with E. awoara and E. septemfasciatus.     

石磺繁殖生物学的实验研究

用实验室小型试验、贝类育苗场生产性试验和自然群体实地观察的方法，结合养殖池塘内石磺（Onchidium sp.）繁殖习性跟踪观察，2年内研究了沪浙地区石磺的繁殖季节，繁殖方式，繁殖力，受精卵的发育孵化，水温和盐度对胚胎发育的影响，胚胎停止发育现象，幼虫发育及变态前形态变化，对石磺繁殖生物学作了比较系统的实验研究。结果显示石磺雌雄同体，雄性先熟，异体交配，体长5 cm体重10 g以上的个体为繁殖的主要群体，其生物学最小型为体长3.1 cm和体重3.5 g；交配期多在气温22 ℃以上的5月中下旬至9月下旬，6～8月为繁殖盛期。产卵前经过5～10 h的求爱和1～5 h的交配过程，交配后15 d左右产出受精卵，多在大潮日至小潮日期间3～5 d内的晚间产卵；繁殖期具有6个明显的产卵高峰。卵群表面积15～30 cm²，每平方厘米卵群含卵子2 650±300个，每个卵群含卵子4.4～8.0万粒。水里与潮湿环境中卵群孵化率没有明显差异；26～35 ℃的水温下，卵群孵化时间10～14 d，水温23 ℃以下石磺胚胎出现停止发育的现象。适合卵群孵化的海水盐度为6～20，孵化出膜2～3 d后的面盘幼虫开始摄食单胞藻。自由生活面盘幼虫经23 d培育后出现明显的革质膜；变态后的幼体可能存在不断蜕去革质膜的过程，面盘幼虫的变态过程和变态条件仍有待研究。     

sodA、sodB和KatG在嗜水气单胞菌抗氧化胁迫中的协同作用

以嗜水气单胞菌野生株B11和基因稳定沉默株sodA-RNAi、sodB-RNAi和KatGRNAi为研究对象,比较野生株和沉默株在不同氧化胁迫条件下sodA,sodB和KatG表达的相关性及与细菌生长和存活的相关性,以探讨抗氧化胁迫基因在细菌抵御氧化胁迫过程中的作用和机制。结果显示,无氧化胁迫条件下sodA、sodB和KatG中任何一个基因被沉默后,其余两个基因的表达均受到显著抑制,说明这些抗氧化胁迫基因在表达上密切相关。在外源H2O2胁迫下,sodA、sodB和KatG中任何一个基因被沉默后,其他两个抗氧化胁迫基因的表达均表现为显著上调;在甲基紫晶(MV)诱导的内源性活性氧(ROS)胁迫下,各沉默株中sodA或sodB的表达水平总体表达为上调,但是在KatG的表达却呈现下调,说明sods的表达在细菌抵御内源性ROS的损伤中更具重要性。在H_2O_2胁迫下,随着H_2O_2浓度的增加,野生株B11的存活率仍然保持在较高的水平,而沉默株sodA-RNAi、sodB-RNAi和KatG-RNAi的存活率则显著降低;此外,菌株生长曲线显示,sodA、sodB和KatG的表达可影响嗜水气单胞菌生长曲线延滞期的长短。在不同浓度MV诱导的ROS胁迫下,野生株B11和沉默株KatG-RNAi的存活率仍然保持在较高的水平,沉默株sodA-RNAi和sodB-RNAi的存活率则显著降低,但4株菌仍然能保持一定的生长能力。研究表明,在不同氧化胁迫条件下,细菌可通过不同抗氧化胁迫基因的协同作用,共同抵御ROS的损伤,在H_2O_2的胁迫下,KatG对嗜水气单胞菌的生存更为重要,而在MV诱导的内源性ROS胁迫下,sod的表达对嗜水气单胞菌生存的贡献更为突出。     

团头鲂tf和tfr1a基因启动子克隆及转录调控分析

为探索鱼类转铁蛋白基因tf和转铁蛋白受体基因tfr1a的转录调控机制,本实验以团头鲂为研究对象,在其全基因组数据库中获取tf和tfr1a基因序列,对2个基因候选启动子区转录因子结合位点及CpG岛进行预测,通过PCR方法克隆得到tf和tfr1a基因近端启动子区不同长度片段,连接至pGL3-Basic/pEGFP-1载体,瞬时转染入Hela细胞,并采用双荧光素酶报告基因检测系统进行检测。结果发现,团头鲂tf基因启动子区无CpG岛位点,而tfr1a基因启动子区有2个CpG岛位点。成功构建9个tf和10个tfr1a不同长度启动子片段的重组质粒,经双荧光素酶报告基因系统检测发现,tf启动子核心区域为-268^+56 bp,且-1 308^-1 102 bp片段可能存在正调控该基因表达的转录因子结合位点;tfr1a启动子核心区域为-224^+48 bp,且+48^+92 bp可能存在抑制该基因转录的负调控元件,而-1 229^-1 219 bp区域可能存在促进tfr1a基因表达的正调控转录因子结合位点。