鸡球虫病四价活疫苗对毒害艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫的免疫效果观察

为评价一种商品化鸡球虫病四价活疫苗[柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)、毒害艾美耳球虫(E.necatrix)、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫]对E.necatrix和E.tenella的免疫保护效果,本研究基于试验鸡血便记分、存活率、相对增重率、病变值、卵囊值及抗球虫指数(ACI)等指标对其免疫效果进行检测.结果表明,免疫攻虫组抗E.necatrix和E.tenella的ACI分别为157.3和135.6,均低于160,表明该球虫疫苗抗两种球虫的效果均为低效.然而,免疫攻虫组鸡血便数量、血便记分、增重、卵囊产量和病变记分等指标均优于阳性对照组.综合指标显示,该疫苗对E.necatrix和E.tenella具有一定的免疫保护力,但单纯采用疫苗并不能够达到防控鸡球虫病的目的.     

柔嫩艾美耳球虫AMA1基因DNA疫苗的免疫保护效果

本研究旨在评价表达柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)顶膜抗原1(Apical membrane antigen 1,Et AMA1)基因的DNA疫苗对雏鸡柔嫩艾美耳球虫人工感染的免疫保护效果。将Et AMA1基因和鸡IFN-γ基因插入真核表达载体p CAGGS中,分别构建了真核表达重组质粒p CAGGS-Et AMA1和p CAGGS-Et AMA1-IFN-γ。将重组质粒p CAGGS-Et AMA1转染进293T细胞中,经间接免疫荧光和Western blot实验鉴定,观察其在体外表达情况。将p CAGGS-Et AMA1和p CAGGS-Et AMA1-IFN-γ于7日龄和14日龄腿部肌肉注射免疫雏鸡,21日龄人工感染1×104个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,第29日龄时处死试验鸡,以平均增重、卵囊产量和病变记分来评价重组质粒的免疫保护效果。结果显示,p CAGGS-Et AMA1转染的293T细胞出现明显的红色荧光;两种真核表达重组质粒免疫组鸡的平均增重与未攻虫组的平均增重差异不显著,不具有统计学意义,而未免疫攻虫组则与未攻虫组在增重方面差异具有显著统计学意义;免疫组鸡相较于未免疫攻虫组在病变记分方面显著下降;免疫组的卵囊减少率分别为67.43%和72.89%;p CAGGSEt AMA1-IFN-γ组在增重、盲肠病变记分和卵囊减少率方面都优于p CAGGS-Et AMA1组,但差异不具有统计学意义。表明构建的2种重组质粒对雏鸡柔嫩艾美耳球虫感染有一定的免疫保护效果。     

不同佐剂和免疫途径对柔嫩艾美耳球虫SO7抗原免疫保护效果的影响

利用PGEX-6P-1融合表达系统将SO7基因在大肠杆菌中进行融合表达,对表达产物进行初步纯化和复性,制备免疫原。分别使用不同剂量的人参总皂甙和重组γ-干扰素以及弗氏完全佐剂作为免疫佐剂,于5日龄、12日龄和19日龄对雏鸡进行3次免疫,同时设立蛋白口服免疫组、蛋白皮下注射免疫组、卵囊口服免疫组、未免疫未攻毒组和未免疫攻毒组作对照,于26日龄用105个柔嫩艾美耳球虫卵囊进行攻毒,8d后扑杀,对各组的存活率、相对增重率、病变减少率、相对卵囊产量和抗球虫指数ACI等指标进行统计分析,比较免疫保护效果。与非免疫攻毒组以及不加佐剂的免疫攻毒组相比,佐剂使用后各组的增重、病变记分、相对卵囊产量、ACI等指标均有一定的改善,对柔嫩艾美耳球虫的人工感染可以提供部分保护。3种佐剂中,γ-干扰素和人参总皂甙能增强重组蛋白的免疫保护效果,且佐剂的剂量对免疫保护的效果有一定的影响,以5000Uγ-干扰素效果最佳,效果与E.tenella活卵囊免疫相当,弗氏完全佐剂的免疫增强效果不明显。单独使用重组蛋白皮下注射或口服免疫,虽有一定的保护作用,但不明显。一定剂量的γ-干扰素对SO7抗原的免疫保护效果起明显的增强作用,是一个具有很好临床应用前景的新型佐剂。     

鸡柔嫩艾美耳球虫海南株SO7基因表达产物的免疫保护效果观察

为研究鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,E.tenella)海南株SO7基因原核表达产物对E.tenella攻击的免疫保护效力,分别于8和16日龄采用SO7基因可溶性重组蛋白和包涵体重组蛋白经肌肉注射两次免疫文昌鸡公雏,同时设立攻虫对照组和空白对照组;其中,免疫组和攻虫对照组雏鸡于27日龄接种5×10~4个E.tenella卵囊,观察其诱导产生的保护力。结果显示,与攻虫对照组相比,SO7可溶性蛋白组雏鸡的相对卵囊产量降低了82.9%,攻虫至试验结束的增重增加了76.3%,盲肠病变减少了29.8%;SO7包涵体蛋白组雏鸡的相对卵囊产量降低了60.4%,攻虫至试验结束鸡增重增加了42%,盲肠病变减少了18.7%。结果表明,E.tenella海南株SO7基因在大肠杆菌中的表达产物对鸡柔嫩艾美耳球虫的攻击有一定的免疫保护作用,且SO7可溶性蛋白的抗球虫效力优于包涵体蛋白。     

穿心莲片对鸡柔嫩艾美耳球虫感染的防治作用

穿心莲作为清热解毒类中药,具有抑制炎症、抗感染等药理活性,其对鸡球虫感染所致肠道炎症的作用尚不清楚。本文以柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)接种制作雏鸡球虫感染模型,在接种前1d至接种后6d连续口服给予不同剂量的穿心莲片剂(50mg,100mg,200mg)。试验结果表明,200mg组中感染鸡的血便排出推迟了1d,且明显降低了血便记分和粪便卵囊排出量,盲肠病变记分也相应降低。对E.tenella感染引起的增重以及中枢免疫器官(胸腺、法氏囊)指数的下降有回升作用,且表现出一定的剂量效应。不同剂量组的抗球虫指数均低于160。这说明穿心莲片能减轻雏鸡E.tenella的感染程度,但未达到中效抗球虫药的疗效。     

柔嫩艾美耳球虫杨凌株3-1E基因表达产物的初步免疫效果研究

用柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella子孢子表面抗原基因原核细胞表达产物免疫雏鸡,观察其对球虫攻击的免疫保护作用.将可溶性重组蛋白和包涵体重组蛋白经肌肉注射分别于7日龄、14日龄两次免疫罗曼小公雏,同时设攻虫对照组和空白对照组,于第2次免疫后1周(28日龄)用1 ×104个E.tenella卵囊进行攻毒,观察其诱导产生的保护力.结果表明,3-1E可溶性蛋白组免疫无论从卵囊计数、盲肠病变计分和相对增重均优于包涵体免疫组.说明3-1E基因在大肠杆菌中的表达产物对鸡柔嫩艾美耳球虫的攻击有一定的免疫保护作用.     

毒害与巨型及毒害与柔嫩艾美耳球虫间在免疫方面的相互影响

本研究以黄羽肉鸡为实验动物,以死亡率、平均肠道病变记分、平均增重、相对增重率、相对卵囊产量、抗体水平等为评价指标,分别研究了毒害艾美耳球虫与巨型艾美耳球虫(两者在裂殖生殖阶寄生部位相同)、毒害艾美耳球虫与柔嫩艾美耳球虫(两者在配子生殖阶段寄生部位相同)间在免疫上的相互影响。结果显示:毒害艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫混合免疫的保护效果比毒害艾美耳球虫单独免疫好,虽略低于巨型艾美耳球虫单独免疫,但仍具有免疫保护性;毒害艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫混合免疫的保护效果比毒害艾美耳球虫单独免疫好,与柔嫩艾美耳球虫单独免疫相比无明显差异。结果表明巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫对毒害艾美耳球虫的免疫均具有一定的协同效应;毒害艾美耳球虫对巨型艾美耳球虫的免疫有一定负面影响,而对柔嫩艾美耳球虫的免疫无影响。     

鸡柔嫩艾美耳球虫YL株多次传代后的致病性研究

为研究多次传代后的鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)YL株的致病性,分别以不同剂量的36代次柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊感染7日龄雏鸡,通过临床症状、死亡率、血便程度、潜隐期、盲肠病变、平均增重及每克粪便卵囊数(OPG)对其致病性进行评价.结果显示,不同剂量孢子化卵囊感染雏鸡均在感染后3d～4d出现血便,球...     

鸡球虫重组蛋白rEnApiAP2对鸡免疫保护效果的观察

将毒害艾美耳球虫重组蛋白rEnApiAP2单独免疫(单免)或分别与柔嫩艾美耳球虫重组蛋白rEtGAM56或rEtGAM59联合免疫(联免)雏鸡,同时设rEtGAM56单免、rEtGAM59单免、未免疫攻虫和空白组为对照,分别攻毒害艾美耳球虫或柔嫩艾美耳球虫,以成活率、排出血便数、平均增重、相对增重率、病变记分、卵囊减少率、抗球虫指数(ACI)和血清抗体水平为指标,评价rEnApiAP2单免及与rEtGAM联免的免疫保护效果。结果显示：各试验组的成活率均为100%;与未免疫攻虫组比较,各免疫组鸡排血便堆数减少、平均增重增加。在rEnApiAP2单免组间,低剂量组的相对增重率(82.36%)、卵囊减少率(73.88%)和抗球虫指数(155.26)均为最高,平均病变记分最低(1.71)。攻毒害艾美耳球虫后,联免组的ACI值均大于相应的单免组,其中rEnApiAP2与rEtGAM56联免组的ACI值(169.83)最高。攻柔嫩艾美耳球虫后,rEnApiAP2单免组的ACI值(128.37)低于rEtGAM56、rEtGAM59单免组(130.12、151.88),rEnApiAP2与rEtGA...     

ETMIC-2基因表达产物对人工感染柔嫩艾美耳球虫雏鸡的保护及病理学研究

采用大肠杆菌表达鸡艾美耳球虫微线蛋白(ETMIC—2)，对石歧杂小公雏在1、2周龄按分组以不同剂量分别肌注免疫，3周龄人工感染强毒柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊，4周龄全部捕杀，进行增重、盲肠病变和免疫淋巴器官病理组织学观察。结果表明，全部试验组增重率均高于红对照组，其中两组超过白对照组；盲肠病变均低于红对照组；免疫淋巴器官发生不同程度的增生，尤其是胸腺，盲肠扁桃体及脾脏，淋巴滤泡增大，淋巴细胞明显增殖。此结果可以提示，适量的ETMIC—2基因表达产物免疫雏鸡后，再进行柔嫩艾美耳球虫的强毒攻击，能刺激机体的免疫淋巴组织器官产生免疫应答反应，对机体具有较好的保护力。     

8301多糖配合柔嫩艾美耳球虫诱导雏鸡保护性免疫的研究

本文观察了８３０１多糖对鸡柔嫩艾美耳球虫活卵囊免疫效力的影响。结果表明，８３０１多糖配合鸡柔嫩艾美耳球虫活印囊免疫雏鸡后７天，应用强毒攻击，雏鸡存活率为１００％，增重率为７１．０７％，抗球虫指数为１７０．５５。单用柔嫩艾美耳球虫活卵囊免疫的雏鸡存活卒、增重率及抗球虫指数分别为６６．７％、４６．２７％及１１４．９３。在明８３０１多糖能增强鸡球虫免疫的效力。     

鸡柔嫩艾美耳球虫SO7基因的原核表达及动物免疫试验

为了研究鸡柔嫩艾美耳球虫SO7基因原核表达重组蛋白的免疫效力,分析其在鸡抗柔嫩艾美耳球虫感染中对鸡平均增重、抗球虫指数(ACI)、减少盲肠病变和卵囊数量中的作用,从柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊中提取总RNA作为模板,用RT-PCR扩增出SO7基因片段,再应用DNA重组技术将SO7基因克隆到原核表达载体pET32a(+)中并用IPTG诱导表达。SDS-PAGE结果显示,pET32a(+)-SO7表达的目的蛋白约为40ku,主要以包涵体形式存在。用纯化的重组蛋白进行动物免疫试验显示,SO7重组蛋白在鸡抗柔嫩艾美耳球虫感染中有较好的免疫保护作用,能够显著提高鸡柔嫩艾美耳球虫感染鸡的平均增重和抗球虫指数(ACI),对减少盲肠病变和卵囊数量也有部分作用。     

鸡柔嫩艾美球虫DNA疫苗pcDNA4．0（C）-pEtK2-IL-2对其他球虫的交叉保护力

将柔嫩艾美球虫DNA疫苗pcDNA4．0（c）-pEtK2-IL-2以50μg分别对14日龄和21日龄雏鸡进行胸部肌肉注射免疫，28日龄对各未免疫组与免疫组鸡分别口服接种柔嫩艾美球虫、巨型艾美球虫、堆形艾美球虫和毒害艾美球虫孢子化卵囊，36日龄剖杀，分析比较免疫保护效果。结果显示，柔嫩艾美球虫攻毒免疫试验组与柔嫩艾美球虫攻毒未免疫对照组比较，增重、盲肠病变记分、OPG值差异显著（P〈0．05），免疫保护效果明显，抗球虫指数（ACI）达186．50；而巨型艾美球虫、堆形艾美球虫和毒害艾关球虫攻毒免疫试验组的ACI分别为147．85、142．71和153．82，增重、盲肠病变记分、OPG值和ACI与相应的攻毒未免疫对照组比较，均有不同程度改善，免疫保护效果不明显。表明，该DNA疫苗对柔嫩艾美球虫的攻击具有完全免疫保护作用，而对巨型艾美球虫、堆形艾关球虫、毒害艾美球虫的攻击具有部分交叉保护力。     

益生菌对柔嫩艾美耳球虫感染鸡保护效果研究

接种柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)孢子化卵囊和益生菌,以血便记分、存活率、体增重和抗球虫指数为指标,探讨益生菌的抗球虫活性。在接种第7天后检测结果显示,益生菌抗球虫指数为137,能降低球虫感染鸡的血便记分,减轻鸡盲肠组织病理学结构的损伤,提高球虫感染鸡体增重和存活率,提示益生菌可以辅助应用于临床球虫病的防治。     

白头翁不同提取物及复方抗鸡柔嫩艾美耳球虫研究

以存活率、相对增重率、盲肠病变记分、卵囊值和抗球虫指数为判定指标,考察白头翁不同提取物及复方对鸡柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊致病性的影响(体外试验)和抗鸡柔嫩艾美耳球虫感染效果(体内试验)。体内、体外试验结果均表明,白头翁不同提取物及复方均能提高相对增重率,降低盲肠病变计分和卵囊值。抗球虫指数(ACI)检测表明,白头翁不同提取物及复方对球虫孢子化卵囊有微弱的抑杀效果,对鸡柔嫩艾美耳球虫感染预防效果较差,不宜作为鸡柔嫩艾美耳球虫病的预防和治疗药物。     

柔嫩艾美耳球虫对禽流感疫苗的免疫增强作用研究

为了研究柔嫩艾美耳球虫对雏鸡免疫禽流感疫苗的免疫增强作用,试验将7日龄AA肉鸡随机分为4组,每组20只,1组试验鸡皮下注射柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,同时免疫禽流感H5亚型灭活疫苗;2组试验鸡皮下注射柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,同时免疫磷酸盐缓冲液;3组试验鸡皮下注射磷酸盐缓冲液,同时免疫禽流感H5亚型灭活疫苗;4组试验鸡皮下注射磷酸盐缓冲液,同时免疫磷酸盐缓冲液。在免疫后第7,14,21,28天,各组随机取5只鸡采血、称重,采集胸腺、脾脏、法氏囊,计算免疫器官指数,采用血凝抑制试验检测血清中禽流感抗体效价。结果表明:各组试验鸡的平均体重差异不明显,柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊与禽流感灭活疫苗共免疫不会影响试验鸡的日增重;柔嫩艾美耳球虫与禽流感疫苗联合免疫可以促进雏鸡免疫器官的生长发育,提高雏鸡免疫器官指数和禽流感抗体效价。说明柔嫩艾美耳球虫可以调节机体对疫苗的免疫反应,促进雏鸡的体液免疫应答。     

重组鸡干扰素对E.tenella卵囊免疫后肠上皮组织结构的影响

取AA肉鸡,在其7日龄和14日龄时分别给予柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)孢子化卵囊进行首免和二免,并同时肌肉注射5 000 U重组鸡γ干扰素(rCh IFN-γ)后,于21日龄以同源E.tenella攻虫。试验结果表明,rCh IFN-γ协同球虫活卵囊免疫可减少由于球虫病造成的体质量下降,降低OPG值和肠道病变记分,提高抗球虫指数(AC I);同时还发现,rCh IFN-γ能够显著增加肠道绒毛高度、肠隐窝深度、刷状缘厚度(=α0.05)。由此表明,rCh IFN-γ可以减轻由于球虫感染所造成的肠道黏膜损伤,促进肠道的吸收功能,进而减轻球虫病所造成的增重损失,对球虫活卵囊疫苗的免疫有一定的免疫增强效果。     

重组鸡γ干扰素对E.tenella卵囊免疫后肠上皮组织结构的影响

取AA肉鸡，在其7日龄和14日龄时分别给予柔嫩艾美耳球虫（E．tenella）孢子化卵囊进行首免和二免，并同时肌肉注射5000U重组鸡γ干扰素（rChIFN-γ）后，于21日龄以同源E．tenella攻虫。试验结果表明，rChIFN-γ协同球虫活卵囊免疫可减少由于球虫病造成的体质量下降，降低OPG值和肠道病变记分，提高抗球虫指数（ACI）；同时还发现，rChIFN-γ能够显著增加肠道绒毛高度、肠隐窝深度、刷状缘厚度（α=0．05）。由此表明，rChIFN-γ可以减轻由于球虫感染所造成的肠道黏膜损伤，促进肠道的吸收功能，进而减轻球虫病所造成的增重损失，对球虫活卵囊疫苗的免疫有一定的免疫增强效果。     

我国不同地方品种鸡(Gallus gallus domesticus)对柔嫩艾美耳球虫的易感性

旨在比较不同品种鸡(Gallus gallus domesticus)对柔嫩艾美耳球虫的易感性差异。选取26日龄无球虫感染的24个我国地方品种鸡和国外引进品种隐性白羽鸡各45只,分别分为2个感染组和1个非感染对照组,每组15只。感染组每只鸡嗉囊内接种1×105个孢子化柔嫩艾美耳球虫卵囊,基于感染鸡的死亡率、相对增重率、肠道病变记分、卵囊产量和抗球虫指数(ACI)等指标,评价不同鸡种对柔嫩艾美耳球虫的易感性。25个鸡种中,狼山鸡、藏鸡、大骨鸡、萧山鸡、文昌鸡、安义瓦灰鸡、白耳黄鸡、仙居鸡、大围山微型鸡和金湖乌凤鸡易感性最低,ACI介于56.80~85.76,表现为未发生死亡或死亡率低,相对增重率高,肠道病变记分低,但卵囊产量相对较高(藏鸡除外)。隐性白羽鸡、清远麻鸡、惠阳胡须鸡、固始鸡、北京油鸡、瓢鸡和汶上芦花鸡易感性最高,ACI介于-11.64~18.67之间,表现为死亡率较高(北京油鸡除外),相对增重率较低,肠道病变记分和卵囊产量较高(固始鸡除外)。其余8个品种易感性中等,ACI介于29.81~53.36。不同品种鸡对柔嫩艾美耳球虫的易感性存在较大的差异,且肉用型品种较蛋肉兼用型品种易感性高。     

柔嫩艾美耳球虫Serpin基因的原核表达及其免疫保护效果研究

为评价Serpin基因重组表达产物对预防鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,E.tenella)感染的效果,克隆和表达E.tenella Serpin基因,对表达产物进行初步纯化和复性,制备免疫原.设计了重组蛋白肌肉注射组、重组蛋白口服组、重组蛋白滴鼻组3个试验组以及红、白对照组.分别于7、14和28日龄对雏鸡进行3次免疫,35日龄时用3×104个E.tenella孢子化卵囊攻虫,第7天末宰杀,对各组的存活率、相对增重率、卵囊减少率、ACI等指标进行统计分析.结果表明,各免疫组的平均增重与红对照组相比均有显著增加(P＜0.05),其中以重组蛋白肌肉注射组增重最多,相对增重率为66.73％,优于其他免疫组;各免疫组卵囊产量较红对照组均有显著的下降,其中重组蛋白肌肉注射组卵囊减少率最高,为30.01％;各免疫组ACI均明显高于红对照组,其中以重组蛋白口服组最高,但仍低于160,暗示Serpin蛋白并不是一个理想的球虫疫苗保护性抗原.