凝胶电泳法(SDS-PAGE)测定乳与乳制品中β-乳球蛋白的含量

建立一种快速、准确测定乳与乳制品中β-乳球蛋白含量的SDS-PAGE方法.β-乳球蛋白标准溶液在0.238-7.128 mg/L范围内呈线性相关(r=0.99),具有良好的重复性(RSD＜10%).液态奶及奶粉的检出限分别为24 mg/100mL、240 mg/100g.通过对β-乳球蛋白的重复性和灵敏度实验,表明SDS-PAGE方法具有操作简单、准确可靠的特点,适用于乳与乳制品中β-乳球蛋白含量的测定.     

高效液相色谱法测定乳品中乳铁蛋白的含量

建立乳品中乳铁蛋白高效液相色谱的测定方法。采用pH值为7.0磷酸盐缓冲溶液做为提取剂,C_(18)色谱柱分离,不同浓度的乙腈-0.5 mol/L的氯化钠溶液-三氟乙酸的二元系统进行梯度洗脱。每100g奶粉(或每100mL液态奶)中乳铁蛋白添加量为5~10 mg时,回收率大于90%。定量限为0.5 mg/100g。该方法具有结果准确,操作简便,重复性好等优点,可用于乳品中乳铁蛋白的检测。     

乳与乳制品中脂肪酸测定方法的比较研究

分别采用乙酰氯/甲醇-甲苯体系和罗兹-哥特里法提取脂肪-甲酯化的方法测定乳与乳制品中的脂肪酸。对两种方法测定的回收率、精密度等进行了比较。通过对奶粉、营养米粉、乳清粉、干酪、黄油等实际样品的测定,样品中饱和脂肪酸及单不饱和脂肪酸两种方法测定结果差别不大,对于多不饱和脂肪酸,乙酰氯/甲醇-甲苯体系有较好的提取效果。     

牛乳铁蛋白多克隆抗体的制备、纯化及定量检测

本试验旨在制备高纯度和特异性的牛乳铁蛋白多克隆抗体,为鉴定并定量检测牛奶样品中及奶牛乳腺组织中合成的乳铁蛋白提供试验材料。选用4只健康新西兰大白兔,初次免疫乳铁蛋白4周后进行加强免疫,每2周加强免疫1次,待血清达到抗体效价后,对兔进行心脏采血并分离血清,利用饱和硫酸铵法和蛋白A树脂纯化抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western-blot)法分别用于鉴定纯化后抗体的纯度和特异性。测定纯化后抗体效价,并绘制抗体抑制曲线。最后利用所得抗体对市售液态奶、奶牛乳腺组织匀浆液、奶粉样品中的乳铁蛋白进行定量检测。结果表明,本试验制备的兔抗牛乳铁蛋白多克隆抗体纯度较高、特异性较强,抗体浓度为11.02 mg/m L,效价达到1∶128 000;采用该抗体测定的乳腺组织样品中乳铁蛋白浓度为16.13μg/g,液态奶中接近于0μg/g,奶粉中为5.28μg/g。总之,本试验采用经过饱和硫酸铵法和蛋白A树脂2步纯化后得到了纯度较高、特异性较强的兔抗牛乳铁蛋白多克隆抗体,可以用于牛奶等产品的乳铁蛋白鉴定。     

乳及乳制品中牛乳铁蛋白含量测定方法比较研究

目的 探讨两种不同检测方法测定乳与乳制品中牛乳铁蛋白的含量及应用研究。方法 对比高效液相色谱（HPLC）法和超高效液相色谱串联质谱（UPLC- MS/MS）法测定生鲜乳、调制乳、超高温瞬时灭菌乳、含乳饮料和奶粉样品等乳及乳制品中牛乳铁蛋白的含量,并对测定结果进一步比较和分析原因。结果 两种测定方法均具有较高回收率和较优的重现性,但两者方法对实际样品的测定结果具有一定差异性。结论 HPLC法测定牛乳铁蛋白是通过肝素亲和柱纯化富集乳铁蛋白,测定的是非热变性牛乳铁蛋白的含量;而UPLC-MS/MS法测定的是热变性和非热变性牛乳铁蛋白的含量,不受热处理加工工艺的影响。实验室可针对不同检测目的选择不同方法进行定量研究。     

高效离子色谱法测定乳及乳制品中低聚果糖含量

建立离子色谱法定量测定乳及乳制品中低聚果糖的方法,应用CarboPacTMPA1(4mm×250mm)阴离子交换柱、氢氧化钠和醋酸钠淋洗液梯度淋洗、脉冲安培检测器检测。6次测定液态奶中低聚果糖的含量,相对标准偏差小于9%,3种糖的加标回收率在94.8%～103.6%之间。本方法简单快捷,适用于乳及乳制品中低聚果糖含量的检测。     

分离自蒙古国发酵乳制品的保加利亚乳杆菌产酸特性及发酵乳的酸组分

以保加利亚乳杆菌生产菌株结合实验室不同分离源的库存菌株为研究对象,评价保加利亚乳杆菌后酸化过程.选取12株分离自蒙古国不同地区发酵乳制品中保加利亚乳杆菌菌株结合1株商业菌株为研究对象并发酵酸奶,在发酵完成后的低温贮藏阶段(0～48 h、7d、14d和21 d),分别测定菌株发酵酸奶所需时间、贮藏期间滴定酸度、pH值以及采用反相高效液相色谱法测定有机酸含量,综合发酵产酸特性和酸奶后发酵过程中酸组分含量变化,最终得到弱后酸化菌株IMAU20458.     

酸奶营养品质提升的加工工艺研究

牛奶中含有丰富的活性营养物质,包括乳铁蛋白、免疫球蛋白、乳过氧化物酶、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白等。传统工艺生产的酸奶经过高温杀菌,活性营养物质几乎完全损失。为了避免这一情况,本文推出一种新的酸奶生产工艺,生产出的酸奶可保留大部分活性营养物质。首先将牛奶的乳脂进行分离,乳脂部分进行125 ℃、5 s杀菌,脱脂牛奶部分进行75 ℃、15 s杀菌,将两部分料液混合后加入菌种发酵至酸度75~85°T,破乳后冷却后熟8 h以上。经测定,新工艺酸奶中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、乳铁蛋白、免疫球蛋白、乳过氧化物酶含量分别为966 mg/L、1 963 mg/L、23.4 mg/L、102 mg/L、1 025 U/L,远高于传统工艺酸奶的68 mg/L、200 mg/L、0.7 mg/L、14 mg/L、0 U/L。通过对比新工艺与传统工艺酸奶保质期内的活菌数、黏度、酸度和口感,并无显著差异。     

乳制品中糠氨酸和乳铁蛋白常用检测方法综述

为了推动奶业振兴,2016年国家奶业科技创新联盟发起实施了推动奶业可持续发展的专项研究项目——优质乳工程,它涵盖了创建优质乳标识制度、推动奶牛养殖技术升级,全面实施乳制品加工工艺标准化监管3个方面。其中优质乳标识制度提出了以活性酶类、活性蛋白和糠氨酸为核心的优质乳制品品质的评价方法。目前,在糠氨酸和乳铁蛋白检测中常用的检测方法有高效液相色谱法、液相色谱质谱联用法、毛细管电泳质谱联用法等。高效液相色谱法是最常用的检测方法,但前处理时间长且过程复杂,对样品纯度要求较高;液相色谱质谱联用法灵敏度高,但设备昂贵,对操作人员要求较高;毛细管电泳质谱法对生物大分子具有较好分离检测效果,但是毛细管电泳和质谱接口还存在一定缺陷,维护成本较高,检测重复性差。本文阐述了优质乳中糠氨酸和乳铁蛋白的检测方法,比较了方法的优缺点,旨在为进一步开发优质乳中糠氨酸和乳铁蛋白检测新方法提供参考。     

利用高效液相色谱仪测定猪乳中乳清蛋白含量的方法及其应用

为了建立快速准确检测猪乳中溶菌酶、乳铁蛋白、α-乳白蛋白、血清白蛋白和β-乳球蛋白高效液相色谱方法,采用0.1%三氟乙酸水溶液为流动相A,0.1%三氟乙酸乙腈溶液为流动相B进行程序洗脱,用Xbridge~(TM) Sneild RP C18色谱柱对α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和溶菌酶进行分离检测,用Supelcosil C18色谱柱对乳铁蛋白和血清白蛋白进行分离检测。结果显示:5种乳清蛋白分离良好,在25~1 000 mg·L~(-1)范围内呈良好线性,标准曲线回归系数均大于0.99,RSD小于5%,回收率在91%~97%,溶菌酶、乳铁蛋白、α-乳白蛋白、血清白蛋白和β-乳球蛋白的检测限分别为0.2、4.0、0.6、0.3和1.0 mg·L~(-1);对猪乳中乳清蛋白进行测定显示,β-乳球蛋白、溶菌酶、乳铁蛋白和血清白蛋白含量在母猪分娩后16 d内逐渐降低,其含量均在母猪分娩后第1天最高,分别为17.2、0.224、2.0和15.6 g·L~(-1),在第16天含量最低,分别为5.6、0.092、0.5和3.6 g·L~(-1);α-乳白蛋白含量在母猪分娩后逐渐升高,在第7天时含量达到最高为3.3 g·L~(-1),随后降低,保持在3.1 g·L~(-1)。结果表明:建立的乳清蛋白高效液相色谱法,能够快速准确检测猪乳中5种乳清蛋白的含量。     

高效液相色谱-荧光检测器法测定乳和乳粉中尿素含量

建立了高效液相色谱-荧光检测器法测定乳及乳粉中尿素的方法.样品经乙醇水溶液提取后,在酸性条件下与9-羟基呫吨衍生反应,以乙腈和乙酸钠溶液做流动相,C18反相色谱柱分离,荧光检测器λex为213 nm和λem为308 nm测定,外标法定量.结果表明:在0.1～10.0 μg/mL范围内线性良好,R2＞ 0.999,配方奶粉和液态奶中加标回收率分别为104％～106％和83.4％～101％,RSD分别为2.1％～5.7％和3.2％～4.9％.在乳粉和液态奶中方法检出限分别为30 mg/kg和12 mg/kg.该方法简便、快速,灵敏度高,结果准确可靠,检验数据重现性好.     

高效液相色谱法快速测定乳与乳制品中4种香兰素类化合物

建立乳与乳制品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的反相高效液相色谱分析方法。用乙腈作为提取剂,氮吹浓缩,正己烷除脂净化,以C18反相色谱柱分离,20 mmol/L乙酸铵缓冲溶液（pH 5.6）-乙腈-甲醇为流动相,采用梯度方式洗脱,紫外检测波长267 nm,外标法定量。结果表明：4 种香兰素类化合物在0.05～5.00 μg/mL范围内线性良好,液态乳、乳粉、发酵乳、乳酸菌饮料、雪糕和干酪样品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的定量限均为0.2 mg/kg,检出限均为0.06 mg/kg;液态乳、乳粉、发酵乳、乳酸菌饮料、雪糕和干酪中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素添加量为0.2～2.0 mg/kg时,加标回收率分别为80.6%～110.0%、80.1%～109.6%、80.4%～109.5%、80.1%～105.9%,相对标准偏差分别为1.87%～7.70%、1.45%～9.80%、1.66%～9.52%、1.16%～9.52%。本方法快速、准确、重复性好、操作简便,适用于乳制品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的含量测定。     

牛初乳中乳铁蛋白粗提工艺的优化研究

利用盐析和有机溶剂沉淀相结合的方法对牛初乳中的乳铁蛋白进行初步的分离,采用单因素试验和正交试验的方法对影响分离效果的因素进行了试验研究,研究结果表明:用pH值8.5、80%的硫酸铵溶液进行盐析,然后用60%的乙醇浓度进行沉淀,分离的效果较好。SDS-PAGE凝胶电泳结果表明,乳铁蛋白的纯度大约为48%,分子量大约为78000Da。     

乳铁蛋白及其生物学功能

1　乳铁蛋白的来源与分布乳铁蛋白 (Ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ ,简称ＬＦ)是一种铁结合性糖蛋白 ,1 960年首先由Ｇｒｏｖｅｓ从牛乳中分离获得。各种哺乳动物都能产生ＬＦ ,但其浓度因物种而异。人乳中含量特别丰富 ,初乳中高达 7ｇ Ｌ ,常乳中为 1ｇ Ｌ。在缺铁母体中ＬＦ浓度正常 ,而在蛋白质营养不良的母体中 ,ＬＦ浓度降低。牛乳中ＬＦ含量要比人少得多 ,初乳中为 1ｇ Ｌ ,随着泌乳的进行 ,浓度迅速下降。山羊、马、猪、小鼠和天竺鼠乳中ＬＦ的浓度也很低 ,如猪的变化范围是1 2ｇ Ｌ(初乳 )～ 0 3ｇ Ｌ(常乳 )。ＬＦ是一种分泌性蛋白质 …     

初乳中乳铁蛋白的分离纯化及鉴定

乳铁蛋白(Lactoferrin,Lf)是一种具有许多独特生理功能的铁结合糖蛋白,主要存在于哺乳动物的各种外分泌物中,如乳汁、眼泪等,乳汁尤其是初乳中Lf的含量很高。因此,从来源丰富的牛初乳中提取Lf,把它作为功能性成分应用于食品和畜牧生产中,具有广阔的前景。本试验通过等电沉淀、盐析和层析分离等方法从牛初乳中分离Lf,并用SDS-PAGE、Western Blot检测和鉴定,结果我们得到了80 ku的乳铁蛋白,其纯度90%,符合工业化生产要求。本试验建立的方法简便、经济、安全,可用于乳铁蛋白的工业化生产。     

乳铁蛋白及其生物学功能

1 乳铁蛋白的产生与分布乳铁蛋白(Lactoferrin，简称LF)是一种铁结合性糖蛋白，1960年首先由Groves从牛乳中分离获得。各种哺乳动物都能产生LF，但其浓度因物种而异。人乳中含量特别丰富，初乳中高达7 g/L，常乳中为 1 g/L。在缺铁母体中LF浓度正常，而在蛋白营养不良的母体中，LF浓度降低。牛乳中LF含量要少得多，初乳中为1 g/L，随着泌乳的进行，浓度迅速下降。山羊、马、猪、小鼠和天竺鼠乳中LF的浓度也很低，如猪的变化范围是1.2 g/L(初乳)～0.3 g/L(常乳)。LF是一种分泌性蛋白质，它不仅合成于乳腺，在浸润粘膜表面的多数主要…     

卫生部批准四种新型食品添加剂

卫生部发布今年第六号公告,批准了竹叶抗氧化物、喹啉黄、海萝胶、乳铁蛋白4个食品添加剂新品种, 30个扩大使用范围、使用量的品种,并公布了119种食品用香精的名单,新规定从即日起开始实施。在4个新品种中,竹叶抗氧化物可用于食用油脂、肉制品、水产品、膨化食品,最大使用量不超过0.5g/kg;喹啉黄作为着色剂,可用于预调酒,最大使用量为100mg/L;海萝胶为增稠剂,可用于胶基糖果,最大使用量为10g/kg;乳铁蛋白可用于婴儿配方奶粉、较大婴儿和幼儿配方奶粉,最大使用量为30-100mg/100g。     

绵羊乳与其他乳种营养成分及乳清蛋白组分差异性分析

为研究绵羊乳与其他乳种之间营养成分及乳清蛋白组分的差异性,以山羊乳、牛乳、人乳为对照,分析不同泌乳阶段的湖羊乳、东佛里生羊乳及其杂交一代羊乳的乳清蛋白组成差异,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)和非变性-PAGE(Native-PAGE)分析标志性差异蛋白。结果表明:不同品种、不同泌乳阶段绵羊乳之间以及不同乳种之间的蛋白质、脂肪、乳糖等宏量营养素含量存在显著差异(P0.05),含量变化呈现趋势性;SDS-PAGE分析表明,绵羊乳和人乳的标志性差异蛋白为β-乳球蛋白和乳铁蛋白,绵羊乳和山羊乳的标志性差异蛋白为α-乳白蛋白,绵羊乳和牛乳的标志性差异蛋白为免疫球蛋白G重链;Native-PAGE分析表明,绵羊乳与山羊乳乳清蛋白之间存在1条差异性条带,绵羊乳与人乳、牛乳乳清蛋白之间存在3条差异性条带。     

干酪乳杆菌的筛选及其在褐色活性乳饮料中的应用

以产酸速度、pH2.5人工胃液耐受性、pH8.0人工肠液耐受性、0.3％胆盐耐受性,对传统发酵乳制品中分离的298株干酪乳杆菌进行筛选,并对其在褐色活性乳饮料中的应用进行评价.结果表明:共有1 1株干酪乳杆菌在脱脂乳中产酸速度显著快于其他菌株(P＜0.05),其中IMAU60143、IMAU70020和IMAU10510具有优良的人工胃肠液和胆盐耐受能力(P＜0.05),此3株干酪乳杆菌在褐色活性乳饮料中具有良好的贮藏稳定性,其中IMAU70020于4℃贮藏28d活菌数仍大于5.0×108CFU/g.     

乳铁蛋白检测方法研究进展

乳铁蛋白是一种重要的多功能蛋白,具有抗菌、抗肿瘤、抗过敏、调节免疫等多种生物学活性,相关基础研究及产品开发已经引起了广泛关注.因此,乳铁蛋白检测方法也备受关注.尤其是不同方法各自的优势、灵敏度、准确度及稳定性等方面具有一定的差异,这也直接影响着该方法的适用范围.本研究对适合不同类型生物样品中乳铁蛋白的检测技术进行了阐述,主要有分光光度法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法、高效亲和色谱法、高效毛细血管电泳法以及表面等离子共振技术等检测技术,并分析比较了这些检测技术的不同优缺点,以期能为乳铁蛋白的研究与开发实践中选择恰当的检测方法提供一定的参考.