三叶崖爬藤DNA提取及RAPD引物筛选

采用CTAB法提取三叶崖爬藤基因组DNA,用琼脂糖凝胶电泳进行纯度检测,选择条带清晰的模板进行RAPD试验.设计PCR扩增程序,构建RAPD反应体系,在PCR仪上进行扩增反应,通过琼脂糖凝胶电泳检测筛选出4条具有多态性的RAPD引物.     

高粱DNA的提取纯化及抗丝黑穗病基因的初步分析

[目的]为快速选育抗病高粱新品种提供理论依据。[方法]采用CTAB法提取高粱基因组DNA,运用RAPD分子标记技术对高粱的抗丝黑穗病基因进行初步分析。[结果]琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,采用CTAB法提取高粱叶片DNA有较好的提取效果。通过对70个随机引物进行筛选,获得了34个具有多态性扩增谱带的RAPD引物,确定为适宜引物。34个适宜引物共扩增出107条谱带,平均每个引物扩增出3.1条谱带,使高粱基因组呈现出1种多态性。[结论]高粱抗丝黑穗病基因的RAPD扩增谱带集中分布在600～3 000 bp。     

枸杞属两个种的RAPD遗传多态性分析

采用优化的CTAB法提取宁杞1号和黑果枸杞的叶片基因组DNA,利用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测所得DNA的浓度和纯度,并进行PCR扩增。从101个引物中筛选出12个10 bp的随机引物对这两种枸杞的DNA样品进行RAPD扩增,共得到111条谱带,61条表现出多态性,多态性比率达54.95%。结果表明,宁杞1号与黑果枸杞的相似系数S=0.618,遗传距离D=0.382。     

绣线菊属植物的DNA提取和RAPD引物筛选

以10种绣线菊属植物资源为材料,分别用SDS法、高盐低pH法及改良的CTAB法对幼嫩叶片进行DNA提取并进检测比较,利用经过检测的模板对RAPD引物进行筛选。结果表明：采用改良的CTAB法提取的DNA可以用于RAPD分析。对200条10碱基的RAPD引物进行了初筛和复筛,筛出了30条扩增多态性强、稳定性好的引物,作为全部基因组的扩增引物。     

牡丹的基因组DNA提取与ISSR引物筛选

为了研究牡丹种质资源的遗传多样性和DNA鉴定,采用ISSR标记的方法来进行试验,即采用改良的CTAB法从成熟干燥的牡丹叶片中提取基因组DNA,其质量检测采用琼脂糖凝胶电泳法和超微量分光光度计法,用优化的ISSR-PCR反应系统,对加拿大哥伦比亚大学(University of British Columbia,UBC)公布的220条ISSR引物进行筛选.结果表明,从6个牡丹品种的叶片中提取的DNA浓度范围在30×10-3～100×10-3μg/μL之间,DNA样品纯度D260 nm/D280 nm比值在1.7～1.9之间;从220条ISSR引物中筛选出了12条适合牡丹的扩增结果好的引物,选出的引物扩增条带清晰、多态性高、重复性好.说明提取的DNA质量较好,该改良的CTAB法适用于从蛋白质和酚类物质含量较高的植物材料中提取基因组DNA;筛选出的12条ISSR引物为进一步研究牡丹资源的遗传多样性奠定了基础.     

地黄品种遗传多样性RAPD分析

用CTAB法提取10个地黄品种幼叶的基因组DNA，用紫外分析法和琼脂糖凝胶电泳方法检测基因组DNA的纯度、大小和浓度。结果表明，从80条RAPD引物中分别筛选出适合于地黄RAPD标记分析的引物17条。17条RAPD引物对10个地黄品种（系）扩增出177条带，多态条带比率（PPB）为61．58％，平均多样性指数（I）为0．3135，遗传相似系数（GS）在0．63～0．93，平均GS为0．7545。RAPD标记的聚类分析结果，将10个地黄品种分为2类：第1类含有6个品种，包括组培85—5、大田85—5、组培9302、金白地黄、金状元和大田9302；第2类含有4个品种，包括北京1号、大红袍、地黄9104和野生地黄。     

不同方法提取葡萄基因组DNA的比较

本试验采用三种不同的方法提取葡萄幼叶基因组DNA,即:改良的CTAB法、高盐法和SDS法。并通过紫外/可见分光光度计检测、琼脂糖凝胶电泳检测、RAPD-PCR扩增对三种方法提取的DNA进行定量、定性分析和综合比较。结果表明,三种不同的方法提取葡萄幼叶DNA均能满足RAPD扩增要求,扩增效果为:CTAB高盐法SDS法。因此,改良的CTAB法是一种适合新疆葡萄基因组DNA提取的最佳方法。     

羌活基因组DNA提取方法

[目的]探索一种用于RAPD分析的羌活基因组DNA提取方法。[方法]分别采取CTAB法S、DS法和改良的CTAB法提取羌活基因组DNA,通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳和RAPD分析对提取的DNA进行检测。[结果]3种方法均能有效地从羌活中获得较高产量的DNA,以改良的CTAB法所得的DNA纯度最高,此法提取的羌活基因组DNAOD260/OD280为1.8~2.0,DNA干重得率约为0.235μg/mg。[结论]改良的CTAB法更适于羌活基因组DNA的提取,可以完全满足RAPD扩增的需要。     

小麦干种子基因组DNA的提取及效果研究

分别采用试剂盒和CTAB法提取小麦干种子基因组DNA,DNA样品经紫外光谱吸收、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增检测。结果表明,试剂盒提取DNA操作过程快速简便、成本较低,DNA产率和纯度优于CTAB法。通过多重PCR技术分别以小麦LMW-GS亚基Glu-B3位点和黑麦碱secalin-p基因的特异引物进行扩增,均能够扩增出清晰的目标条带,提取的基因组DNA能够满足分子检测的实验要求。     

6种葫芦科瓜类蔬菜亲缘关系的RAPD分析

以6种葫芦科(Cucurbitaceae)瓜类蔬菜为试验材料,优化基因组DNA提取条件,用RAPD技术分析不同瓜类蔬菜基因组DNA的遗传多样性。结果表明:改良SDS法和改良CTAB法均能成功提取DNA,后者提取的DNA产量高,纯度较好,适合遗传多样性研究。用60条随机引物进行扩增筛选,有8条引物扩增条带清晰,呈现多态性,共扩增出94个条带,大小为200~3 000 bp。RAPD104软件显示:苦瓜与丝瓜、黄瓜、茭瓜、南瓜和佛手瓜的成对遗传距离指数分别为0.4393,0.4583,0.6000,0.5735,0.7306。NTSYS-PC程序的UPGMA聚类分析表明:同属的南瓜和茭瓜亲缘关系最近,其次是苦瓜与丝瓜;苦瓜与黄瓜亲缘关系较近,与南瓜和茭瓜较远,与佛手瓜亲缘关系最远。     

乌头种质资源遗传多样性的RAPD分析

为了探讨乌头(Aconitum carmichaeli Debx.)种质资源的遗传多样性和亲缘关系,我们收集了来自于云南和四川的23份种质资源,采用2%CTAB法提取乌头总基因组DNA,用15个RAPD随机引物进行分析。15个引物共扩增出242个DNA片段,多态性片段202个,占总扩增片段比率为83.5%,平均每个引物可扩增出13.47个多态性DNA片段。供试材料的遗传相似系数在0.155~0.940之间,表明乌头种质资源具有丰富的遗传多样性。在遗传相似系数0.582处将23份供试材料划分为9个类群,其中15份聚为一个大类,其余8份各自聚为一类。RAPD分析可作为构建乌头DNA指纹图谱的有效方法。     

降香黄檀SRAP分子标记的引物筛选

采用改良CTAB法提取降香黄檀基因组DNA,选用4个降香黄檀DNA作模板,对256个SRAP引物组合进行筛选。以条带清晰、多态性丰富为引物筛选原则,最后共筛选出25个组合作为降香黄檀SRAP分子标记的核心引物,为后续SRAP分析提供依据。     

贺兰山紫蘑菇基因组DNA提取方法研究

[目的]研究适合于贺兰山紫蘑菇（Corinarius rufo-olivaceus）基因组DNA的提取方法。[方法]通过采用改良CTAB法Ⅰ、改良CTAB法Ⅱ、SDS法、Doyle-Doyle法和KI法5种基因组DNA提取方法,分别提取贺兰山紫蘑菇的基因组DNA,用DU800核酸蛋白检测仪测定其DNA含量、浓度和纯度,并通过琼脂糖凝胶电泳进行提取结果比较。[结果]5种不同的提取方法均能提取该紫蘑菇的基因组DNA,其中KI法提取的DNA纯度、浓度和得率为最好。[结论]KI法是贺兰山紫蘑菇（C.rufo-olivaceus）DNA提取的适宜方法,该法具有简单、便捷、省时、适合基因组DNA大量提取的特点。     

安徽桑树品种全基因组DNA提取方法研究

旨在获得一种高效、稳定、廉价的DNA提取方法。以安徽桑树品种嫩叶为材料,以CTAB法提取其基因组DNA,并用紫外分光光度计、凝胶电泳、PCR 扩增等方法进行鉴定。研究结果表明：提取的DNAA260/A280比值在1.80~1.90 之间,DNA得率约为0.187~0.275 μg/mg,以提取的DNA为模版,PCR能够获得清晰的目的条带。证明CTAB法提取的DNA质量较好,能满足后续分子生物学操作的需要。     

"顽拗"植物春石斛基因组DNA的提取研究

提取“顽拗”植物春石斛的基因组DNA,并对其进行质量检测。［方法］采用普通CTAB法、试剂盒法和改良CTAB法提取10个春石斛品种的基因组DNA,然后分别用紫外分光光度计法、琼脂糖凝胶电泳法和荧光AFLP法对3种方法所提取的基因组DNA质量进行检验。［结果］改良CTAB法所提取春石斛基因组DNA得率较高,基本排除了春石斛体内多糖等次生代谢物质对基因组DNA质量的干扰,完全能满足AFLP等分子生物学试验对DNA质量的要求;其他2种方法所提取的基因组DNA则不能满足试验要求。［结论］改良CTAB法为较好的适合春石斛基因组DNA提取的方法。     

32个银杏品种的RAPD遗传多态性及其分类

以32个银杏(Ginkgo bilobaL.)品种的鲜叶为材料,提取其总DNA,从56个随机引物中筛选出8个单引物和4对双引物进行RAPD扩增.以随机扩增多态性DNA(RAPD)标记方法进行遗传多样性分析,用NTSYS-pc2.10e软件计算样品间的Dice相似性系数,并按UPGMA法进行了聚类分析.结果表明,8个单引物和4对双引物扩增共得到85个位点,其中81个(95%)是多态性的,说明供试样品在DNA水平上有很高的遗传多样性.32个供试的样品可分为两大类,北京梅核、南雄上矽(雄)、华口大白果为一类,其它的为第二类.在四个泰兴品种中泰兴2号和泰兴3号的相似性系数为0.968,表明它们的遗传关系比较近.本研究在分子生物学方面为银杏的品种分类和遗传多样性提供了一些新依据.     

西南桦硅胶干燥叶DNA提取方法比较

采用常规CTAB法、CTAB硅珠法、核分离法、二次抽提法、改良CTAB法对富含多糖的西南桦干叶进行DNA提取,并将DNA进行电泳检测及RAPD分析,结果表明：不同提取方法结果差异较大,CTAB硅珠法得率最低,为0.4～11.6μg/g;核分离法和二次抽提法较常规法去除多糖效果好,得率高;改良CTAB法得率最高,为171.2～364.8μg/g,电泳条带最清晰,RAPD扩增结果最好,适合干叶西南桦基因组DNA提取。     

提取玫瑰基因组DNA几种方法的比较

为了找到一种方便、快捷且经济高效的玫瑰叶片基因组DNA提取方法,为玫瑰后期的分子生物学研究奠定良好基础,以不同品种的玫瑰幼嫩叶片为材料,分别利用CTAB法、SDS法、改良CTAB法、试剂盒法4种方法提取玫瑰基因组DNA,经过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法对所提DNA的质量和产量进行检测比较。结果表明：4种方法均可从玫瑰叶片中提取到DNA,改良CTAB法作为对常规方法的改进,在保证经济实用的前提下提取到的DNA质量最好,浓度最高;而试剂盒法作为一种快速提取植物基因组DNA的新兴方法,虽然产量略低,费用略高,但操作步骤简单,耗时短,毒害小,高效快捷。各实验室可根据实际情况选择适宜的方法。     

牡丹·芍药DNA提取方法研究

[目的]筛选一种适合牡丹、芍药基因组DNA的提取方法。[方法]以新鲜的牡丹、芍药叶片为材料,采用CTAB法和SDS法提取基因组DNA,通过紫外光谱分析法、琼脂糖凝胶电泳及PCR扩增等检测方法对牡丹、芍药基因组DNA的提取方法进行筛选。[结果]在牡丹、芍药基因组DNA的提取过程中,叶片内的酚类、色素、丹宁、糖类等物质与DNA结合,影响DNA的提取质量。在这两种DNA提取方法中,SDS法略好于CTAB法。SDS法DNA得率虽低,但其纯度高,去糖去蛋白等杂质比较干净,且在未加RNA酶的情况下,RNA污染较少,在进行PCR扩增时,能得到比较理想的产物。[结论]取材时间是影响DNA提取质量的关键因素之一。在提取牡丹、芍药基因组DNA时应该取完全展开的幼嫩叶片。     

不同方法提取大豆基因组DNA的效果比较

[目的]采用不同方法对大豆基因组DNA进行提取,为大豆基因组DNA的提取提供参考。[方法]采用CTAB法、SDS法和高盐低pH值法对大豆基因组DNA进行提取,对提取的DNA进行光密度、紫外光谱、琼脂糖凝胶电泳和DNA限制性内切酶图谱等的检测。[结果]光密度和光谱检测结果表明,SDS法的提取量和纯度均优于CTAB法和高盐低pH值法;琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,SDS法提取的基因组DNA谱带较CTAB法和高盐低pH值法提取的基因DNA谱带粗、亮、重复性好;限制性内切酶检测结果表明,3种方法所得基因组DNA均能被胁谢Ⅲ和EcoRI酶切,但SDS法所得基因组DNA的酶切效果最好。l结论ISDS法的提取效果明显优于CTAB法和高盐低pH值法。