富硒麦芽对大鼠肝癌细胞增殖周期及凋亡的影响

以100 mg·L-1二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌16周,同时分别饲喂含硒0.3、1.0、3.0 mg·kg-1富硒麦芽和含硒3.0 mg·kg-1亚硒酸钠饲料,停止诱癌及补硒处理2周后,处死大鼠.利用流式细胞术分析肝细胞增殖周期和细胞凋亡,探讨富硒麦芽对DEN诱发大鼠肝癌细胞周期及细胞凋亡的影响.结果表明: 与模型对照组比较,富硒麦芽组大鼠S期细胞显著减少,细胞增殖指数显著下降,而G0/G1期细胞显著增多,细胞凋亡率显著升高;与亚硒酸钠组比较,相同硒含量富硒麦芽组G0/G1期细胞和细胞凋亡率显著高于亚硒酸钠组,而S和G2/M期细胞显著低于亚硒酸钠组.证明富硒麦芽能干扰大鼠肝癌细胞增殖周期,阻断DNA合成与复制,使癌细胞在G1期堆积,再诱导G1期细胞发生凋亡,提示抑制癌细胞增殖和促进癌细胞凋亡可能是富硒麦芽发挥其抗癌作用的细胞学基础之一.     

紫杉醇对G2/M期A549细胞4EBP1分子磷酸化的影响

[目的]研究不同浓度紫杉醇对A549细胞周期、凋亡和4EBP1分子磷酸化的影响。[方法]采用不同浓度紫杉醇处理A549细胞,建立凋亡和G2／M期阻滞模型;分别用流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期;用免疫印迹方法分析4EBP1的表达与磷酸化。[结果]G2／M期细胞百分率随紫杉醇浓度的增加而增加,但细胞凋亡率随紫杉醇浓度的增加而下降。随G2／M阻滞的增加,4EBP1分子3组丝／苏氨酸位点磷酸化均增强。[结论j紫杉醇在G2／M期上调A549细胞内4EBP1分子多位点的磷酸化。     

Zeylenone对急性淋巴细胞白血病细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨Zeylenone体外抗急性淋巴细胞白血病(Acute Lymphoblastic Leukemia,ALL)效应及作用的可能机制。方法应用MTT法比较Zeylenone对肿瘤细胞、正常细胞增殖的影响;AO/EB染色观察其对ALL细胞(Reh、RS4;11)凋亡形态学的改变;流式细胞仪检测药物对细胞凋亡及细胞周期的影响。结果 Zeylenone对多种细胞呈现增殖抑制作用,且对ALL细胞株呈现更高的敏感性,而对外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)抑制作用较小,抑制Reh、RS4;11细胞增殖呈时间依赖性和剂量依赖性;Zeylenone能够诱导ALL细胞凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期。结论 Zeylenone体外具有抗ALL细胞增殖的作用,其作用与诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期相关。     

辛伐他汀对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM增殖的抑制作用

目的研究辛伐他汀(SIM)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM体外增殖的抑制作用。方法MTT法检测SIM对HO-8910PM细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析SIM对细胞周期的影响;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学改变。结果SIM抑制HO-8910PM细胞的增殖,细胞被阻滞在G0/G1期;荧光染色法显示经SIM作用后细胞出现变形,染色质浓缩,产生凋亡小体。结论SIM在体外能有效地抑制癌细胞的增殖,其作用可能是通过诱导其凋亡产生的。     

高良姜挥发油对人HL-60细胞株增殖及凋亡的影响

目的 研究高良姜挥发油对人HL-60细胞株增殖及凋亡的影响.方法 采用CKK-8法检测不同浓度的高良姜挥发油对HL-60细胞增殖的抑制效果,流式细胞术检测其对细胞周期的影响,并用Hoechst 33342染色法观察细胞凋亡的形态学改变.结果 高良姜挥发油可呈不同程度地剂量依赖性抑制HL-60细胞株增殖,能浓度依赖性阻滞HL-60细胞于G0/G1期,且随其浓度增加诱导细胞凋亡的形态越明显.结论 高良姜挥发油能抑制白血病细胞株HL-60的增殖,并具有阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡的能力.     

6种生物碱对斜纹夜蛾离体培养细胞的作用方式

通过倒置显微镜观察斜纹夜蛾细胞凋亡小体,采用MTT法测定细胞增殖抑制作用,并使用流式细胞仪检测细胞周期时相,研究了骆驼蓬碱、喜树碱、蓖麻碱、苦参碱、博落回碱和烟碱对斜纹夜蛾离体培养细胞系SL-1的作用方式和细胞毒理。结果表明:骆驼蓬碱5.0μg/mL、20.0μg/mL和喜树碱0.5μmol/L、1.0μmol/L处理后48～60 h,斜纹夜蛾离体培养细胞系SL-1表现出明显的细胞凋亡诱导作用,处理后12～48 h,明显抑制SL-1细胞增殖,流式细胞仪检测显示细胞阻滞于G2/M期;博落回碱和蓖麻碱5.0μg/mL、20.0μg/mL对SL-1具有细胞增殖抑制作用,以20.0μg/mL处理具有细胞周期时相阻滞作用,同样使细胞阻滞于G2/M期,但无明显的细胞凋亡诱导作用;烟碱和苦参碱在5.0μg/mL、20.0μg/mL对SL-1具有细胞增殖抑制作用。     

白藜芦醇对黑色素癌细胞A375生长的抑制作用

探讨自藜芦醇对黑色素癌细胞A375的体外生长的影响和作用机制.利用MTT法分析25、50、100、150和200μmol/L 5个浓度的白藜芦醇对A375细胞增殖的影响,并通过Hoschest染色和荧光显微镜观察A375细胞的形态学变化,流式细胞仪检测各浓度白藜芦醇对A375细胞的细胞周期影响作用.结果表明,白藜芦醇对黑色素癌细胞A375增殖的抑制作用明显,且白藜芦醇对A375细胞在G1期和S期的阻滞作用具有一定的浓度依赖和时间依赖效应,抑制其生长并诱导凋亡,在荧光染色观察到A375细胞出现典型的凋亡细胞形态特征.这表明白藜芦醇对黑色素癌细胞的生长有明显抑制作用,这将为其作为抗癌药物临床治疗黑色素癌提供参考作用.     

二甲双胍、罗格列酮或联合应用对乳腺癌MCF-7细胞周期和凋亡的影响

目的 观察二甲双胍单药、罗格列酮或联合应用对乳腺癌MCF-7细胞周期和凋亡的影响.方法 用浓度为20 mmol/L二甲双胍(二甲双胍组)、100 μmol/L罗格列酮(罗格列酮)及二甲双胍联合罗格列酮(联合用药组)处理MCF-7细胞48h,分别采用MTT法、流式细胞术、Hoechst33258染色法观察细胞增殖、周期、凋亡情况.结果 二甲双胍组、联合用药组的MCF-7细胞增殖被显著抑制,二甲双胍组、罗格列酮组、联合用药组阻滞MCF-7细胞于G0/G1期比例增加,S、G2/M期比例减少,二甲双胍组、罗格列酮组、联合用药组的细胞早期凋亡率分别为(15.3±1.09)％、(12.4±1.73)％、(17.2±1.63)％,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 单用二甲双胍或联合罗格列酮均能抑制MCF-7细胞的增殖,诱导其细胞周期停滞和凋亡.     

苦马豆素对家兔睾丸生精细胞周期的影响

为研究苦马豆素对家兔睾丸生精细胞周期的影响,进一步探讨疯草的中毒机理,将24只雄性家兔随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,试验组分别按照Ⅰ组15%(苦马豆素含量30 mg/kg)、Ⅱ组30%(苦马豆素含量60 mg/kg)、Ⅲ组45%(苦马豆素含量90 mg/kg)的比例添加疯草小花棘豆,对照组仅饲喂苜蓿干草,试验期70 d。分别于攻毒后第14、第35、第70天每次每组随机采集2只家兔的睾丸,通过流式细胞仪测定生精细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果显示,从第35天开始,试验组家兔生精细胞凋亡率均极显著升高(P0.01),其中单倍体细胞和二倍体细胞凋亡率均极显著升高(P0.01),但四倍体细胞数量无显著变化。与对照组相比,中毒家兔睾丸生精细胞数量在G0/G1期升高,在S期降低,而且G1期与S期细胞数量呈显著负相关。说明苦马豆素可导致家兔睾丸组织生精细胞凋亡,且呈现出一定的时间-剂量效应。     

BIX-01294对山羊胎儿成纤维细胞生长状态和组蛋白H3K9二甲基化的影响

为探讨BIX-01294对供核细胞的影响,使用不同浓度的BIX-01294处理山羊胎儿成纤维细胞(Goat embryonic fibroblasts,GEFs),并检测其细胞活力、细胞周期、细胞凋亡、H3K9me2水平和多能性基因的mRNA水平。细胞活力检测结果显示,BIX-01294浓度在1.0μmol/L以下不会影响细胞活力,2.0μmol/L时24h和48h处理组的细胞活力显著下降(P0.05),≥4.0μmol/L时所有处理组的细胞活力均极显著下降(P0.01)。细胞周期和凋亡检测结果显示,H3K9me2下调会引起细胞周期的停滞和正常细胞的减少,其中BIX-01294在大于2.0μmol/L时G0/G1期细胞的比例极显著升高(P0.01),4.0μmol/L时凋亡细胞极显著增加(P0.01)。处理后的细胞H3K9me2水平均极显著下降(P0.01),但大于1.0μmol/L的处理浓度能获得较好的下调效果。处理后细胞Oct4、Sox2和Nanog的mRNA水平均有不同程度的增加,其中Oct4和Nanog的mRNA水平增加极显著(P0.01)。说明:采用1.0μmol/L BIX-01294处理山羊胎儿成纤维细胞,可以下调H3K9me2水平,增加G1/G0期细胞比例,上调细胞多能性基因表达量,而且不影响细胞活力。     

线粒体途径参与FTY720诱导白血病细胞凋亡的研究

为研究FTY720诱导K562细胞凋亡与线粒体途径的关系。体外培养人白血病K562细胞,用不同浓度FTY720处理细胞24 h,台盼蓝染色法检测K562细胞存活率;流式细胞术分析细胞凋亡和线粒体功能。免疫印迹技术检测线粒体相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。收集FTY720处理48 h细胞,流式细胞技术检测细胞周期。结果表明:随FTY720浓度的增加,K562细胞的存活率下降,细胞凋亡增加,线粒体膜电位下降,促凋亡蛋白Bax表达明显增加。细胞周期分析发现,Sub G1期细胞增加,而S期和G2M期细胞减少。表明线粒体途径参与FTY720诱导K562细胞凋亡。     

白藜芦醇对肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用

[目的]探讨白藜芦醇对人肝癌细胞SMMC-7721体外生长的影响和作用机制。[方法]利用MTT法检测不同剂量组的白藜芦醇对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响,通过Hoechst染色和荧光显微镜观察肝癌细胞SMMC-7721细胞核的形态学变化,流式细胞仪测定各浓度组白藜芦醇对肝癌细胞SMMC-7721作用的周期变化与凋亡分析。[结果]白藜芦醇对人体肝癌细胞SMMC-7721的增殖具有抑制作用,且有浓度和时间依赖性;在荧光显微镜下观察到典型的凋亡细胞形态特征;流式方法测定的结果显示,白藜芦醇阻滞肝癌细胞SMMC-7721于S期。[结论]白藜芦醇对人体肝癌细胞SMMC-7721生长具有抑制作用,使其细胞周期阻滞于S期并诱导其凋亡。     

EGF促进绵羊附睾上皮细胞体外增殖的研究

【目的】探讨表皮生长因子(EGF)对体外培养的绵羊附睾上皮细胞(EECs)增殖的影响。【方法】分离培养EECs,利用免疫荧光检测角蛋白18(CK18)对分离的细胞进行鉴定,用CCK-8法测定EGF的最佳作用质量浓度,用RT-PCR检测EECs中附睾分子标记——谷胱甘肽过氧化物酶-5(GPX5)和雄激素受体(AR)基因的表达情况,用流式细胞仪法检测EGF对EECs细胞周期和凋亡的影响。将P_4代EECs分别用表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂Gefitinib、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路抑制剂LY294002和DMSO(对照组)处理后,再用EGF培养,用流式细胞仪法检测细胞周期和凋亡情况。将P_4代EECs分别用EGF(-)、EGF、EGF+Gefitinib和EGF+LY294002处理后,用Western blot检测细胞中EGFR、AKT和叉头盒蛋白O1(FOXO1)磷酸化水平。【结果】分离培养的EECs可表达CK18,细胞纯度较好;EGF对EECs增殖促进效应呈浓度依赖性,用含50 ng/mL EGF培养基培养的EECs具有最高的增殖潜能,且不同传代EECs细胞均可正常表达GPX5和AR;EGF处理S期EECs细胞比例极显著升高(P0.01),凋亡指数显著降低(P0.05)。与对照组相比,Gefitinib组S期EECs细胞比例极显著降低(P0.01),LY294002组S期细胞比例显著降低(P0.05);Gefitinib组EECs细胞的凋亡指数极显著升高(P0.01),而LY294002组EECs细胞的凋亡指数无显著变化。EGF组中EECs细胞的EGFR、AKT和FOXO1磷酸化水平较高;与EGF组相比,EGF+Gefitinib组中EECs细胞的EGFR、AKT和FOXO1磷酸化水平明显降低,而EGF+LY294002组中EECs细胞的AKT和FOXO1磷酸化水平明显降低。【结论】EGF可增强绵羊EECs体外生长活力,其作用机制可能是EGF通过介导EGFR和PI3K/AKT信号通路上调了FOXO1的磷酸化水平。     

Vc对黑色素癌细胞A375生长抑制作用的研究

[目的]探讨Vc对黑色素癌细胞A375的生长抑制作用。[方法]利用MTT法分析不同剂量组的Vc对A375增殖的影响,并通过荧光染色和荧光显微镜观察A375细胞的形态学变化,用流式细胞术检测Vc对各组A375的细胞周期变化。[结果]流式方法测定的结果显示,Vc对黑色素癌细胞A375的增殖具有抑制作用;Vc能以浓度依赖和时间依赖方式阻滞黑色素癌细胞A375细胞于G0/G1期,抑制其生长并诱导凋亡。[结论]Vc对黑色素癌细胞的生长有明显抑制作用。     

羟基磷灰石纳米粒子运载Stat3 shRNA对鼠胶质瘤C6细胞的促凋亡效应

目的探讨羟基磷灰石纳米粒子运载Star3 shRNA对鼠胶质瘤C6细胞的促凋亡作用,并探讨相关机制．方法羟基磷灰石纳米粒子包被的Stat3 shRNA转染到c6胶质瘤细胞内,MTT法检测细胞增殖情况,应用流式细胞术及吖啶橙染色观察细胞周期分布及凋亡情况,TUNEL染色观察细胞的凋亡及增殖情况．结果羟基磷灰石纳米粒子运载Star3 shRNA转染C6细胞后,呈时间依赖性抑制C6细胞生长和增殖．通过流式细胞术检测证实：该质粒可使细胞阻滞在细胞周期的GO／G1期,细胞凋亡率明显增加（P＜0．05）,与对照组比较差异有统计学意义;吖啶橙及TUNEL染色发现其明显促进细胞凋亡（P＜0．05）,与对照组比较差异有统计学意义;结论羟基磷灰石纳米粒子运载Stat3 shRNA体外可明显抑制胶质瘤C6细胞增殖,并促进其凋亡,是治疗胶质瘤较理想的方法．     

单一或连续高温处理对奶牛乳腺细胞的生长及凋亡的影响

用细胞流式、台盼蓝染色、免疫组织化学等方法研究单一高温(40 ℃1 h)或连续高温(40 ℃1 h·d-1)3～7 d对乳腺上皮细胞细胞周期、凋亡及热休克蛋白(HSP70)表达的影响.结果表明:40 ℃1 h单一高温处理乳腺上皮细胞后24 h,G2比例极显著高于对照组(37 ℃)(P＜0.01),细胞死亡率在热处理后6 h达到最大值,并极显著高于对照组(P＜0.01).高温(40 ℃1 h)诱导细胞HSP70的表达,HSP70阳性细胞比率在热处理后3 h达到最大值.连续的40 ℃1 h·d-1诱导细胞产生G2期阻滞;连续4 d以上的40 ℃1 h热处理显著地抑制了细胞的增殖(P＜0.05).结果提示:高温诱导乳腺细胞周期阻滞,促进细胞凋亡,并诱导乳腺细胞HSP70的表达.     

小花棘豆中毒对家兔睾丸生精细胞凋亡的影响

研究小花棘豆中毒对家兔睾丸生精细胞凋亡的影响,进一步探讨小花棘豆的中毒机理。将24只雄性家兔随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,试验组分别按照Ⅰ组15%(苦马豆素含量30 mg/kg)、Ⅱ组30%(苦马豆素含量60 mg/kg)、Ⅲ组45%(苦马豆素含量90 mg/kg)的比例添加小花棘豆,对照组仅饲喂苜蓿干草,试验期70 d。分别于攻毒后第14、35、70天每次每组随机采集2只家兔的睾丸,通过TUNEL法定位,Hoechst 33258荧光染色细胞核,流式细胞仪测定细胞凋亡率和细胞周期。从第35天开始,试验组家兔生精细胞凋亡率均极显著升高(P﹤0.01),表现为细胞膜下陷,细胞器浓缩,细胞核碎裂等,并出现凋亡小体。试验组家兔睾丸单倍体细胞和二倍体细胞凋亡率均极显著升高(P﹤0.01),但四倍体细胞数量无显著变化。与对照组相比,中毒家兔睾丸生精细胞G0/G1期数量升高,S期细胞数量降低,而且G1期与S期细胞数量呈显著的负相关。小花棘豆中毒可导致家兔睾丸组织生精细胞凋亡,且与小花棘豆毒性成分呈现一定的时间-剂量效应。     

靛玉红-3′-单肟对猕猴成纤维细胞增殖和凋亡及周期同步化的影响

【目的】研究靛玉红-3′-单肟(Indirubin-3′-monoxime)对猕猴成纤维细胞增殖、凋亡和周期同步化的影响。【方法】用PI和FITC同时对细胞进行染色,用流式细胞仪检测荧光强度,对细胞内DNA和蛋白质的含量作相对定量,分析细胞在G0,G0+G1,S,G2+M期的分布比例;用BrdU标记法检测靛玉红-3′-单肟处理对细胞增殖的影响,用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡的发生情况。【结果】(1)与处于对数增殖期(对照)的细胞相比,10μmol/L靛玉红-3′-单肟处理30 h后,G0与G0+G1期细胞比例分别由7.27%和84.26%增加为14.21%和94.22%,差异达显著水平。(2)与对数增殖期细胞(BrdU阳性率为80%)相比,靛玉红-3′-单肟处理30 h可显著地抑制细胞的增殖,在后续标记培养24 h期间只有8.15%的细胞呈BrdU阳性,如果是在去除药物的正常条件下标记培养24 h,大多数细胞(58.28%)又可进入增殖状态。(3)与正常培养对照组细胞凋亡率(1.12%)相比,靛玉红-3′-单肟处理组凋亡发生率为1.82%,虽有所增加但差异不显著。【结论】靛玉红-3′-单肟是一种可逆的细胞周期抑制剂,对猕猴成纤维细胞增殖的抑制作用是可逆的,对细胞凋亡发生率没有显著影响。     

siRNA-CyclinE对家蚕细胞增殖的影响

【目的】研究小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)对家蚕卵巢细胞系(BmN)细胞CyclinE基因表达及细胞周期的影响。【方法】合成针对CyclinE基因1 252和568位点的siRNA片段,并利用脂质体法转染家蚕BmN细胞,于共聚焦荧光显微镜下观察转染情况;应用实时荧光定量PCR法检测CyclinE mRNA的表达情况,流式细胞仪检测细胞周期。【结果】siRNA对家蚕BmN细胞的转染效率达80%左右。转染1252-siRNA-CyclinE和568-siRNA-CyclinE 48h后,分别使家蚕BmN细胞CyclinE mRNA表达量降低了68%和90%;流式细胞仪检测结果显示,2个转染组G0/G1期细胞比例显著增大,S期和G2/M期细胞比例显著减小。【结论】在家蚕BmN细胞中导入针对CyclinE的siRNA,可有效抑制CyclinE基因的表达,使细胞周期阻滞于G1期,进而抑制细胞增殖。     

葡萄籽提取物对人鼻咽癌细胞HIF-1α表达的影响

目的 研究葡萄籽提取物(GSE)对鼻咽癌细胞生长及HIF-1α表达的影响.方法 用100 μmol/L CoC12处理鼻咽癌CNE-2Z细胞,建立细胞拟缺氧模型;不同质量浓度GSE干预一定时间后,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,荧光定量PCR和Western blot检测HIF-1α表达.结果 GSE抑制低氧环境下CNE-2Z细胞生长,12.5、25mg/L GSE处理细胞发生G1/S期阻滞,不同质量浓度GSE处理减少CNE-2Z细胞表达HIF-1α蛋白.结论 GSE抑制低氧环境下CNE-2Z细胞HIF-1α表达.