西瓜子叶组织培养中四倍体的产生及鉴定

5个二倍体西瓜品种子叶离体培养过程中,外植体分化频率、增殖系数、畸芽率及四倍体频率随基因型、外植体所处部位、激素浓度不同而存在着较大差异.用不定芽叶尖染色体计数可100%检出四倍体.试管苗快繁中四倍体对营养逆境有较强的适应性.     

西瓜子叶组织培养中四倍体的产生及鉴定

５年二倍体西瓜品种子叶离体培养过程中,外植体分化频率、增殖系数、畸芽率及四倍体频率随基因型、外植体所处部位、激素浓度不同而存在着较大差异。用不定芽叶尖染色体计数可１００％要出四倍体。试管苗快繁中四倍体对营养逆境有较强的适应性。     

紫茉莉耐盐突变体筛选的初步研究

以紫茉莉的带节茎段为外植体进行离休培养实验,建立了比较高效的紫茉莉离体再生体系。分析了盐胁迫对紫茉莉不定芽生长的影响,结果表明200 mmol/L NaCl严重抑制了紫茉莉不定芽的生根,故此浓度可作为耐盐突变体的筛选浓度。分析了EMS诱变对紫茉莉不定芽生长的影响,发现经0.8%EMS处理6 h或0.6%EMS处理7 h后,紫茉莉不定芽的致死率在50%左右,因此可以作为紫茉莉突变体筛选的EMS浓度和处理时间。通过合适剂量的EMS诱变和NaCl筛选,初步获得了具有抗性的耐盐紫茉莉突变体植株。     

有斑百合多倍体诱导及鉴定

为了建立野生有斑百合多基因型种子离体多倍体诱导方法及快速、准确和高效的多倍体鉴定技术,本研究在离体培养条件下,以野生有斑百合预培养7 d的无菌萌动种子(2n=2x=24)为材料,用不同含量的秋水仙素溶液进行不同时间的诱变处理。以种子下胚轴明显膨大作为变异植株早期鉴定的标准,通过流式细胞仪检测细胞核DNA含量,并结合染色体计数法对诱导后的植株进行倍性鉴定,探讨在相同的种子萌动状态下,不同含量、不同浸泡时间的秋水仙素诱变效果,并初步建立了种子离体多倍体诱导和鉴定技术流程。结果表明:0.10%的秋水仙素溶液可有效地诱导野生有斑百合萌动种子的染色体加倍,其中以浸泡处理36 h的诱导效果最好,诱导率达44.43%;与二倍体植株相比,四倍体植株表现出叶片肥厚且增宽、叶色深绿、叶表面轻微褶皱、叶柄粗壮、生长缓慢等特征。研究还发现,植物外部形态变化不仅在二倍体和四倍体之间存在,而且在不同基因型的四倍体之间也存在差异。本研究利用下胚轴的膨大作为早期筛选多倍体的有效指标,同时结合直接测定细胞中DNA含量和计数染色体数可快速有效地培育出野生有斑百合同源四倍体植株。本研究建立的离体多倍体诱导流程除可应用于有斑百合种子多倍体的诱导外,也可为其他野生百合种子离体染色体加倍提供参考。      

中华猕猴桃多倍体诱导及其抗旱筛选

中华猕猴桃多在坡地种植,易受干旱境的影响。为提高其抗旱能力,我们拟通过多倍体诱导及抗旱鉴定,筛选出新的抗旱种质。本研究在离体培养条件下,以中华猕猴桃叶片为材料,以不同浓度的秋水仙素为诱导剂,对中华猕猴桃进行多倍体诱导,将二倍体和四倍体组培苗培养在含浓度为70g/L的聚乙二醇(PEG)的继代培养基中,进行模拟干旱胁迫处理。结果表明：168h的处理时间,0.15%浓度的秋水仙素诱导的死亡数较低,诱导效果最好,死亡率为36.67%,诱导率为26.67%;在含PEG的继代培养基中,中华猕猴桃二倍体和四倍体组培苗的生长受到了不同程度抑制;在第十四天,二倍体组培苗叶片干枯卷曲并且脱落,整个根系完全褐化干枯死亡;而四倍体组培苗虽有部分叶子干枯卷曲,但转入正常的生根培养基中,培养后发现猕猴桃植株还可以复绿长出新的根系和叶片。这说明,用秋水仙素对中华猕猴桃的组培苗进行多倍体诱导和PEG筛选,可选育出抗旱种质。     

NaCl胁迫下二倍体和同源四倍体西瓜幼苗DNA甲基化差异分析

【目的】研究二倍体和同源四倍体西瓜幼苗NaCl胁迫后形态学指标差异和DNA甲基化变化情况,分析不同倍性西瓜幼苗之间耐盐差异,结合形态学指标从表观遗传学角度解释二倍体和四倍体抗逆性差异机制。【方法】以3组不同倍性（二倍体、四倍体）西瓜幼苗为研究对象,待长至三叶一心时,用含有0、100、200、300和400 mmol·L^-1 NaCl的1/2 Hoagland营养液处理西瓜幼苗,NaCl处理8 d之后,鉴定西瓜幼苗受到的盐害指数,并运用甲基化敏感扩增多态性（methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP）技术,分析NaCl处理8 d之后二倍体和四倍体西瓜幼苗叶片基因组DNA甲基化水平和模式的变化。【结果】NaCl处理后,形态学指标比较发现,随着NaCl浓度的增加,三组西瓜幼苗的受伤害程度都随着增加,在不同的西瓜品种之间受伤害程度有差异,但是同一品种内同一NaCl浓度下,西瓜幼苗受伤害程度二倍体大于四倍体;从甲基化水平看,西瓜幼苗基因组DNA全甲基化率、半甲基化率、总甲基化率都随着NaCl浓度的增加而降低,同一NaCl浓度处理下甲基化率二倍体大于四倍体,二倍体和四倍体西瓜甲基化水平与其受伤害程度呈正相关;从甲基化模式来看,NaCl胁迫后DNA的去甲基化比率降低,超甲基化比率升高,并且其变化幅度是四倍体大于二倍体,不同倍性西瓜幼苗的甲基化模式与其受伤害程度呈负相关。【结论】NaCl胁迫后西瓜幼苗基因组DNA的甲基化状态发生了变化,并且这种变化与NaCl胁迫程度高度线性相关,西瓜幼苗通过降低甲基化率和降低去甲基化比率来应对NaCl胁迫,四倍体较二倍体有更低的甲基化比率和去甲基化比率,抗逆性四倍体强于二倍体。     

紫茉莉耐盐突变体筛选的初步研究

以紫茉莉的带节茎段为外植体进行离休培养实验,建立了比较高效的紫茉莉离体再生体系.分析了盐胁迫对紫茉莉不定芽生长的影响,结果表明200 mmol/L NaCl严重抑制了紫茉莉不定芽的生根,故此浓度可作为耐盐突变体的筛选浓度.分析了EMS诱变对紫茉莉不定芽生长的影响,发现经0.8％EMS处理6 h或0.6％EMS处理7 h后,紫茉莉不定芽的致死率在50％左右,因此可以作为紫茉莉突变体筛选的EMS浓度和处理时间.通过合适剂量的EMS诱变和NaCl筛选,初步获得了具有抗性的耐盐紫茉莉突变体植株.     

四倍体少籽西瓜栽培特点和技术要求

目前生产上普遍栽培的是二倍体普通有籽西瓜,四倍体西瓜是用二倍体西瓜经人工诱变使西瓜染色体加倍而选育出的多倍体西瓜品种。长期以来,四倍体西瓜总是局限于做三倍体无籽西瓜的亲本,而没有直接应用到生产上。1.四倍体少籽西瓜的发展前景消费市场对瓜类商品的质量要求越来越高     

不同倍性白魔芋植株的细胞学形态观察与核型分析

采用种子浸泡法、根状茎生长点滴液法和离体不定芽混培法3种途径诱导白魔芋四倍体植株,并对二倍体和四倍体植株外部形态、叶片气孔特征和核型进行分析比较．结果表明,与二倍体植株相比,四倍体植株叶片明显变宽、叶形指数变小,叶柄粗短,叶片下表皮气孔及其保卫细胞体积变大、密度减小．植株外部形态特征变异和叶片下表皮气孔密度变小等特征可作为鉴定变异材料的间接方法,四倍体和二倍体均为“2B”核型,可认为四倍体是由二倍体经秋水仙素诱导直接加倍产生的同源四倍体．     

不同倍性白魔芋植株的细胞学形态观察与核型分析

采用种子浸泡法、根状茎生长点滴液法和离体不定芽混培法3种途径诱导白魔芋四倍体植株,并对二倍体和四倍体植株外部形态、叶片气孔特征和核型进行分析比较.结果表明,与二倍体植株相比,四倍体植株叶片明显变宽、叶形指数变小,叶柄粗短,叶片下表皮气孔及其保卫细胞体积变大、密度减小.植株外部形态特征变异和叶片下表皮气孔密度变小等特征可作为鉴定变异材料的间接方法,四倍体和二倍体均为"2B"核型,可认为四倍体是由二倍体经秋水仙素诱导直接加倍产生的同源四倍体.     

西瓜组织培养的研究

为建立西瓜顶芽培养与子叶培养的实验流程,以西瓜子叶、顶芽为外植体,进行了不定芽的诱导、芽的伸长,生根以及再生植株的移栽与嫁接试验,结果表明,顶芽诱志不定芽的诱导率高于子叶,苗龄４－５ｄ,刚刚由黄色较浅绿色的子叶诱导不定芽的诱导率最高,苗龄８￣９ｄ的顶芽诱导产生的不定芽最多;用子叶诱慰定芽的适宜培养基为ＭＳ＝１．０ｍｇ／ＬＢＡ,用顶芽诱导不定芽的适宜培养基为ＭＳ＋３．０ｍｇ／ＬＢＡ＋０．２ｍｇ／ＬＩ     

罗汉果子叶高效再生体系的建立

以无菌萌发罗汉果子叶为外植体,进行罗汉果高效离体再生体系的研究。探讨了不同MS、琼脂含量、不同激素浓度配比、种子萌发时间和活性炭在罗汉果种子萌发、子叶诱导不定芽及试管苗生根方面的影响。结果表明：1／4 MS、0．5％-0．6％的琼脂含量比较适合罗汉果种子萌发,萌发率达89．2％;降低无机盐和蔗糖浓度有利于罗汉果试管苗的生根;最适生根培养基为1／2 MS＋IBA0．5mg／L＋1．5％蔗糖;罗汉果子叶直接诱导不定芽最适合培养基为1／2MS＋6-BA1．0mg／L＋IBA0．1mg／L,分化率达94．8％,平均每块子叶出芽10个;培养基中添加低浓度（0．2％）活性炭有利于生根,但不利于子叶不定芽的诱导;子叶不定芽的分化率还受种子萌发时间的影响,萌发时间以2—4d为宜;试管苗经过炼苗2～4d能极大提高移栽成活率,达91．7％。     

盐生植物盐角草同化枝不定芽的诱导与增殖

【目的】建立并确定盐生植物盐角草(Salicornia europaea L)同化枝不定芽诱导与增殖的试验体系和培养基。【方法】以MS为基本培养基,通过附加不同浓度激素(TDZ、NAA、6-BA)及盐(NaCl)进行盐角草不定芽的诱导,筛选诱导盐角草不定芽的最适激素配比及盐浓度;后期通过对细胞分裂素TDZ浓度(0、1.6、1.8、2.0和2.5 mg/L)的摸索,确定盐穗木不定芽增殖的最适浓度。【结果】盐角草同化枝在含有200 mM NaCl的MS₃(2.0 mg/L TDZ、0.1 mg/L NAA)培养基中不定芽诱导率达32.4%,显著高于(P<0.05)其余组,为最适诱芽培养基。再生的不定芽在含有2.0 mg/LTDZ的培养基中经过30~40 d的培养,不定芽增殖率可达619.5%。盐角草不定芽诱导及增殖最适培养基均为:MS+2.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA+200 mM NaCl。【结论】一定浓度的TDZ、NAA及NaCl组合,可通过直接器官发生途径有效诱导盐角草同化枝不定芽的产生和增殖。     

4种化合物对离体培养二色胡枝子组织分化的影响

以BADH基因为选择标记基因进行遗传转化最适宜的选择剂、抑菌剂种类和浓度,通过不同浓度NaCl、甜菜碱醛、PEG及甜菜碱醛和NaCl的不同组合等进行胡枝子子叶节分化,茎段增殖以及生根培养,发现NaCl和甜菜碱醛都能抑制二色胡枝子的子叶节分化、茎段增殖和生根,可作为遗传转化中的选择剂。培养基中添加0.8g/L NaCl就能完全抑制二色胡枝子子叶节和茎段增殖,可作为遗传转化过程中子叶节和茎段增殖阶段的选择剂浓度。培养基中添加0.5g/L NaCl能抑制生根,适合作为离体培养生根阶段的选择剂浓度。随着培养基中甜菜碱醛浓度的增加,子叶节分化能力下降,当甜菜碱醛达到1.5g/L时子叶节不再分化,这可作为以甜菜碱醛为选择剂时子叶节分化阶段的最佳筛选。培养基中同时添加NaCl和甜菜碱醛时,NaCl 0.7g/L+甜菜碱醛0.3g/L就抑制了离体培养过程中茎段增殖和生根,比较适合二色胡枝子离体培养时茎段增殖和生根的筛选浓度。对头孢霉素的研究发现:培养基中添加200~300mg/L头孢霉素对离体培养的二色胡枝子子叶节分化影响不大,培养基中添加100mg/L的头孢霉素对离体培养的二色胡枝子茎段增殖和生根无显著影响。     

西瓜花药培养中不定芽的诱导与增殖

[目的]探讨西瓜不定芽的诱导与增殖。[方法]在西瓜花药愈伤组织诱导的基础上,研究不定芽的诱导与增殖。[结果]MS+2.0mg/L 6-BA+1.0 mg/L KT+0.1 mg/L IAA培养基可以使愈伤组织再分化成不定芽。不定芽在培养基MS+0.5 mg/L 6-BA中进行增殖,随着继代培养次数的增加,玻璃化和黄化现象变得更加严重。采取降低6-BA浓度甚至不添加任何激素、提高琼脂的含量、增加光照时间与强度等措施,可以有效减少西瓜不定芽的玻璃化现象。[结论]当培养基中细胞分裂素与生长素的比例为10∶1~100∶1时,由西瓜愈伤组织诱导出不定芽的可能性较大。     

西葫芦双单倍体自交一代离体再生研究

以西葫芦DH12-11409双单倍体植株自交后代种子为试材,研究不同激素组合、外植体类型和苗龄对诱导西葫芦不定芽再生以及不定芽生根的影响。结果表明,取5d龄西葫芦双单倍体黄绿色子叶的子叶节为外植体,在MS+30g/L Suc+8g/L Agar+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA培养基上诱导不定芽效果最好,诱导率高达90.0%,分化系数为8.5;生根培养基则以MS培养基中添加0.05或0.1mg/L NAA为宜;5~6片真叶再生植株经驯化移栽成活率高达90.0%,为再生植株驯化移栽的最佳时期。     

4种化合物对离体培养二色胡枝子组织分化的影响(英文)

以BADH基因为选择标记基因进行遗传转化最适宜的选择剂、抑菌剂种类和浓度,通过不同浓度NaCl、甜菜碱醛、PEG及甜菜碱醛和NaCl的不同组合等进行胡枝子子叶节分化,茎段增殖以及生根培养,发现NaCl和甜菜碱醛都能抑制二色胡枝子的子叶节分化、茎段增殖和生根,可作为遗传转化中的选择剂。培养基中添加0.8 g/L NaCl就能完全抑制二色胡枝子子叶节和茎段增殖,可作为遗传转化过程中子叶节和茎段增殖阶段的选择剂浓度。培养基中添加0.5 g/L NaCl能抑制生根,适合作为离体培养生根阶段的选择剂浓度。随着培养基中甜菜碱醛浓度的增加,子叶节分化能力下降,当甜菜碱醛达到1.5 g/L时子叶节不再分化,这可作为以甜菜碱醛为选择剂时子叶节分化阶段的最佳筛选。培养基中同时添加NaCl和甜菜碱醛时,NaCl 0.7 g/L+甜菜碱醛0.3 g/L就抑制了离体培养过程中茎段增殖和生根,比较适合二色胡枝子离体培养时茎段增殖和生根的筛选浓度。对头孢霉素的研究发现:培养基中添加200~300 mg/L头孢霉素对离体培养的二色胡枝子子叶节分化影响不大,培养基中添加100mg/L的头孢霉素对离体培养的二色胡枝子茎段增殖和生根无显著影响。     

西瓜组织培养快速繁殖的初步研究

以西瓜无菌苗的顶芽为外植体进行了不定芽的诱导、继代培养增殖、伸长、生根以及试管苗移栽实验。结果表明:用苗龄7～8d的无菌苗上的顶芽诱导的不定芽数最多;用带完整子叶的顶芽诱导不定芽的效果最好;附加BA2.0mg/L的MS培养基为最佳不定芽诱导培养基;MS附加BA0.5mg/L、IAA1.0mg/L为最佳继代增殖培养基;伸长的芽在附加IAA0.2mg/L或IBA0.3mg/L的1/2MS培养基上易诱导生根;试管苗直接移栽至沙质土中,成活率达70%。     

辣椒子叶不定芽的诱导及发生发育的组织学观察

以辣椒子叶切块为外植体,在添加5 mg/L6-BA和0.5 mg/LIAA的MS不定芽诱导培养基上诱导出愈伤组织后分化为不定芽,然后将丛生芽转移至添加2.0 mg/LGA3和2.0 mg/LZT的不定芽伸长培养基上,不定芽显著伸长。组织切片观察结果表明,辣椒子叶不定芽发生于愈伤组织表层。