不同细胞进行牛血清中牛病毒检测的比较试验

选出最适合牛血清中外源病毒增殖的细胞,用于牛血清中病毒检测,可以提高血清中病毒的检出率,以确保用于疫苗生产的牛血清是安全可靠的。将牛腹泻病毒、牛腺病毒、牛细小病毒、牛副流感病毒、呼肠孤病毒和狂犬病毒接种到培养好的MDBK细胞、VERO细胞、BT细胞中,逐日观察细胞的病变情况,待观察到10%细胞出现病变或者培养7天后,进行免疫荧光染色,选择出适合用于此六种病毒增殖的细胞系。结果显示BT细胞对所有病毒敏感,vero细胞对BAV、BVDV病毒不敏感,MDBK对REO、BVDV、RV三种病毒不敏感。综合比较后,选择BT细胞为BPIV、BPV、BAV、BVDV的增殖及实验用细胞,vero细胞为REO、RV的增殖及实验用细胞,为了提高血清中病毒的检出率,可以选用多种细胞进行同时实验。     

羊痘病毒致宿主细胞病变研究进展

羊痘病毒是一种在细胞质中进行复制的DNA病毒,可侵染上皮细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞、羔羊睾丸细胞和肾细胞等多种细胞并致细胞病变,形成胞浆包涵体。目前,已知的羊痘病毒宿主细胞不少,因此,对羊痘病毒所致宿主细胞病变做一综述,对认识羊痘病毒对体内外宿主细胞的不同作用及影响有一定帮助。同时,结合近年来对羊痘病毒宿主细胞的进一步认识,讨论了研究相关体外试验的必要性及可能性。     

猪细小病毒病的流行与诊制

1病原 猪细小病毒感染是由猪细小病毒引起的母猪繁殖机能障碍的传染病。猪细小病毒属于细小病毒科细小病毒属,病毒粒子呈圆形或六角形,无囊膜,直径约20纳米,核酸类型为单股脱氧核糖核酸。本病毒在猪的原代细胞如猪肾、睾丸细胞等以及传代细胞上生长繁殖,并可出现细胞病变,用免疫荧光技术可查出胞浆中的病毒抗原。病毒在细胞中可产生核内包涵体,病毒能凝集人、猴、豚鼠、小鼠和鸡等动物的红细胞。     

牛细小病毒的分离鉴定及在不同细胞中的复制动力学研究

本研究旨在获得牛细小病毒分离株,并对牛细小病毒(BPV)在不同细胞中的复制动力学进行探讨,为牛细小病毒疫苗的开发筛选出合适的病毒株及适宜病毒扩增的细胞株。将96批次牛血清样品分别接种于BT细胞中,盲传3代,逐日观察细胞病变(CPE),对出现典型细胞病变的样品采用直接免疫荧光法检测;分离得到1株牛细小病毒,并且对这株病毒的红细胞凝集特性进行分析。通过将牛细小病毒接种在Vero、BT和MDBK 3种细胞中,筛选出适合牛细小病毒培养用的细胞株。结果,通过对96批次牛血清样品接种于BT细胞进行病毒分离培养,获得4株病毒阳性株,使用直接免疫荧光法检测,获得1株牛细小病毒,进行红细胞凝集试验,这株牛细小病毒能凝集豚鼠、马、人的红细胞,但不能凝集家兔、山羊和鸡的红细胞。这株牛细小病毒在BT细胞中可稳定传代,在MDBK和Vero细胞中盲传3代仍未检测到牛细小病毒。结果表明,通过细胞体外培养法分离得到1株牛细小病毒,可以作为牛细小病毒疫苗制备的病毒株,对这株牛细小病毒在不同细胞中的复制动力学的研究结果表明,BT细胞是最适合培养这株牛细小病毒的细胞,候选细胞株MDBK和Vero细胞不适合这株牛细小病毒的扩大培养。本研究为牛细小病毒疫苗的开发奠定了基础。     

3种中药成分组方体外抗新城疫病毒作用研究

在已知的3种具有较强抗新城疫病毒(NDV)作用的中药成分组方的基础上,利用细胞病变观察与MTT比色相结合的方法,研究这3种组方对NDV吸附DF1细胞及其增殖、释放过程的影响。结果显示:在吸附阻断试验中,3种组方均能阻碍病毒吸附细胞或阻断已吸附上细胞的病毒进入细胞,说明组方浓度、组方加入方式和病毒吸附时间均能够影响病毒对细胞的感染;在复制抑制和病毒释放阻断试验中,测定的试验组OD570值显著高于相应的病毒对照组,说明3种组方均能够抑制病毒的增殖和阻碍病毒的释放。结果表明,3种组方能够阻断NDV吸附细胞和/或干扰病毒的增殖和释放而表现抗病毒作用。     

非洲猪瘟病毒入侵细胞机制的研究进展

病毒进入宿主细胞的机制决定了病毒的趋向性和发病机理,病毒感染细胞包括吸附、穿入、脱壳、复制、组装及子代病毒颗粒的释放等步骤,对病毒入侵机制研究可以为开发有针对性的预防策略提供思路。非洲猪瘟病毒作为一种有囊膜双链DNA病毒,其入侵宿主细胞的机制与其他病毒有一定的相似之处,同样也有其特殊性。目前,人们对非洲猪瘟病毒与宿主细胞相互作用,特别是入侵机制的了解仍然非常有限。为此,本文就ASFV入侵细胞的有关研究进展进行了综述,以期为非洲猪瘟病毒致病机制相关研究提供参考。     

猪细小病毒体外培养研究进展

猪细小病毒是引起母猪繁殖障碍的重要病原之一。细胞培养法是体外分离纯化病原最基本的方法。本文介绍了病毒细胞模型的建立、细胞模型在病毒诊断中的应用、病毒在细胞培养模型上培养条件的优化等,并分析了病毒与细胞模型相互作用、抗病毒药物在细胞模型上的研究进展。     

蓝舌病病毒16型毒株在不同细胞中的增殖特性研究

为研究蓝舌病病毒16型毒株在不同细胞中的增殖特性,本实验将BTV-16型毒株接种在BHK-21、Vero、C6/36传代细胞系及山羊肾原代细胞,通过细胞敏感性试验、病毒感染生长曲线以及qRT-PCR方法检测BTV-16型毒株在上述不同细胞中的复制效率和增殖情况。试验结果表明,BTV-16型毒株在BHK-21、Vero、C6/36及山羊肾原代细胞中均能增殖,但产生CPE的时间及病毒滴度有所差异。病毒在BHK-21、Vero细胞上病变较快,山羊肾原代细胞次之,C6/36细胞病变不明显。从病毒滴度和核酸检测结果来看,病毒在BHK-21细胞中的增殖效率与Vero细胞基本一致,并且病毒在这两种细胞中的增殖效率明显高于在山羊肾原代细胞和C6/36细胞。本试验为蓝舌病病毒分离、抗原制备、致病性以及反向遗传学研究提供了细胞学研究基础。     

3种禽类呼肠孤病毒血清学相关性及致细胞病变差异分析

本研究旨在研究3种不同疾病型禽类呼肠孤病毒间的抗原性关系及病毒的培养特性。作者通过血清中和试验测定了禽呼肠孤病毒(ARV S1133株)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV 9710株)、新型鸭呼肠孤病毒(NDRV NP01株)3种禽类呼肠孤病毒的血清学相关性,统计抗原相关性R值;并应用部分禽胚原代细胞及哺乳动物传代细胞对这3种病毒的培养特性进行了初步研究。结果表明,3种病毒株之间的R值很小,抗原相关性较低;三者具有广泛的细胞亲嗜性,能在多种细胞中增殖,并产生细胞病变,但病毒致细胞病变特征有所差异,ARV和NDRV均以巨融合为主,而MDRV则以细胞圆缩坏死为主。上述结果表明导致禽类不同疾病的ARV、MDRV和NDRV三者之间的抗原相关性较低,病毒的细胞培养特性也不同,细胞病变类型的差别提供了一种初步鉴别禽类呼肠孤病毒的方法。     

犬瘟热病毒在MA-104、Marc-145、Vero3种细胞内增殖效果的比较

试验比较了MA-104、Marc-145、Vero 3种猴肾细胞增殖犬瘟热病毒的敏感性,按常规方法将犬瘟热病毒(CDV-XN112株)分别接种于MA-104、Marc-145、Vero 3种细胞,通过观察细胞病变,确定收毒时间,比较病毒滴度。结果表明,犬瘟热病毒可在MA-104、Marc-145、Vero 3种细胞内增殖,并出现典型细胞病变,效价均达到104.5TCID50/0.1mL以上,而Vero细胞增殖犬瘟热病毒更为经济高效,是增殖该病毒的理想细胞。     

塔里木马鹿茸间充质干细胞体外培养及细胞特性的研究

鹿茸间充质干细胞是一类新发现的干细胞。为获得鹿茸间充质干细胞的生物学特征,建立鹿茸间充质干细胞体外培养模式,通过采用改良组织块细胞培养法对生长30 d的塔里木马鹿茸间充质层细胞体外分离培养,观察细胞形态特征,MTT比色法检测细胞生长特点。结果表明:间充质层样品组织块于1 d完全贴壁,贴壁后培养2 d即可观察到组织块边缘迁出少量细胞,贴壁后培养3 d,大量的间充质干细胞从组织块中迁出,并不断增殖,在组织块贴壁后5 d细胞生长融合。传代培养的2~6代细胞在培养到96 h细胞增殖达到高峰。原代培养细胞呈梭形,细胞核呈椭圆形,细胞呈菊花状排列生长;传代细胞形态呈梭形、不规则形,且排列无规则。本研究结果将为鹿茸间充质干细胞的后续研究奠定基础。     

昆虫干细胞研究进展

干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,按照其来源可分为胚胎干细胞和成年干细胞。昆虫中也同样存在多种干细胞。开展昆虫干细胞自我更新、发育命运决定、分化潜能等特性以及其与周围微环境相互关系的研究,对农林害虫的生物防治、经济昆虫的遗传育种以及一些生物反应器材料的利用,甚至对于人类疾病的治疗等都具有重要意义。以模式生物果蝇为主,介绍了昆虫干细胞的相关研究进展,重点集中在果蝇各种组织干细胞的鉴定与识别方面,包括研究较成熟的生殖腺内干细胞、中肠干细胞、马氏管干细胞、神经母细胞和造血干细胞。同时介绍了对干细胞维持起重要调控作用的各种信号途径的研究进展。这些昆虫干细胞的研究成果将为开展家蚕等鳞翅目昆虫的干细胞研究提供启示。     

The Influence of Ovarian Stromal/Theca Cells During In Vitro Culture on Steroidogenesis,Proliferation and Apoptosis of Granulosa Cells Derived from the Goat Ovary

Early follicular development is closely related to oocyte‐granulosa cells‐ovarian stromal cells/theca cells. The aim of the present study was to investigate the effects of ovarian cortical, medullary stromal and theca cells on oestradiol and progesterone biosynthesis, proliferation and apoptosis of goat ovary granulosa cells in vitro. Using Transwell coculture system, we evaluated steroidogenesis, cell proliferation and apoptosis, and some molecular expressions regarding steroidogenic enzyme, luteinizing hormone receptor and apoptosis‐related genes in granulosa cells. The results indicated that ovarian stromal/theca cells were able to stimulate oestradiol and progesterone production, promote cell proliferation and inhibit apoptosis of granulosa cells. Among all the three kinds of cells, theca cells affected strongly on granulosa cell function, and ovarian medullary stromal cells had the weakest effect on granulosa cells. These findings would provide an important knowledge of cell interaction among follicular cells during follicular development.     

羊膜对山羊角膜缘上皮细胞培养影响的研究

比较完整羊膜和去上皮羊膜、不同冻存时间的羊膜对山羊角膜缘上皮细胞体外培养的影响,筛选出羊膜最适处理方法。将山羊角膜缘组织块分别接种于完整羊膜、去上皮羊膜、新鲜去上皮羊膜、冻存30 d去上皮羊膜、冻存90 d去上皮羊膜、冻存180 d去上皮羊膜上,比较在完整羊膜和去上皮羊膜及不同冻存时间羊膜上角膜缘上皮细胞的生长特性和组织结构。试验结果显示,在去上皮羊膜上角膜缘组织块贴壁和细胞增殖能力较完整羊膜强,角膜缘上皮细胞在2组羊膜上均能形成多层结构,但完整羊膜上形成的组织表层角质化较严重;在冻存30 d羊膜上角膜缘组织块贴壁和细胞增殖能力较新鲜羊膜、冻存90 d羊膜、冻存180 d羊膜强,角膜缘上皮细胞在各组羊膜上均形成多层结构,其结构无明显差异。结果表明,冻存30 d去上皮羊膜是构建组织工程人工角膜最适的羊膜载体材料。     

间充质干细胞的免疫调节特性及其应用研究进展

间充质干细胞(MSCs)是一种具有自我复制和多向分化潜能的多能干细胞,具有低免疫原性和免疫抑制作用,并能优先归巢于损伤组织,促进组织修复.体内外研究显示MSCs可影响T细胞、B细胞、自然杀伤细胞、抗原提呈细胞等免疫细胞功能,减轻器官移植后免疫排斥,有望在移植免疫领域得到广泛应用.论文概述了间充质干细胞的生物学特性,免疫...     

Morphological observation of canine natural killer cells mediated cytotoxicity.

The cytotoxic effects of canine NK cells on CL-1 target cells were examined by scanning electron microscopy (SEM). NK cell mediated cytotoxicity on CL-1 target cells was detected by 51Cr release assay. SEM showed that a canine NK cell extended projections to the CL-1 target cell. Furthermore, the surface of CL-1 target cells changed a mesh-like structure. Therefore, the cytotoxic effects of canine NK cells on CL-1 target cells were morphologically demonstrated.     

A role of pituitary adenylate cyclase activating polypeptide (PACAP) as a regulator of paracrine interactions between folliculo-stellate cells and gonadotropes through the control of activin-follistatin interactions

Pituitary folliculo-stellate (FS) cells were able to modify the effect of activin-A on gonadotropes through the paracrine factor, follistatin. The present study was aimed to examine whether a hypothalamic peptide, pituitary adenylate cyclase activating polypeptide (PACAP), could be a regulator of this paracrine interaction. Co-culture of FS cell-originated cell line TtT/GF cells with rat anterior pituitary cells showed faint inhibitory effect on the stimulatory action of activin-A on FSH secretion. When PACAP was added to the culture during the co-culture period, however, the presence of TtT/GF cells caused significant suppression of the effect of activin-A on FSH secretion. Conditioned-media (CM) from TtT/GF cells, obtained by incubation of TtT/GF cells in the presence or absence of PACAP, were next added to the cultures of anterior pituitary cells alone. CM from TtT/GF cells without PACAP treatment revealed slight, but not significant, suppressive effect on activin-induced increases in FSH secretion and the percentage of FSH cells. Meanwhile, CM from PACAP-treated TtT/GF cells attenuated both effects of activin-A. Furthermore, the inhibitory effect of the CM was neutralized when follistatin antibody was present in the culture. These results suggest that PACAP is able to regulate the paracrine action of FS cells on pituitary gonadotropes. Besides expressing direct actions on pituitary endocrine cells, PACAP may have roles as a regulator of cell-to-cell interactions within the pituitary gland.     

Of stem cells and germ cells

Stem cells have an intrinsic capacity to self-renew and can differentiate to at least one specialized cell type. Different types of stem cells exist that can be cultured in vitro. The identity of the stem cells is marked by their origin and differentiation potential. Germ cells have similarities with pluripotent stem cells but are of a special order: They do not self-renew and are already differentiated, but they have the capacity to form a complete new organism after fertilization. This review focuses on pluripotent stem cells and discusses possibilities of generating pluripotent stem cells from germ cell precursors and possibilities of generating germ cells from stem cells. As it accompanies a plenary lecture at the 15th annual ESDAR Conference 2011, the overview is focused on stem cells from farm animal species and on results from my own research group.     

饲养层细胞对胚胎干细胞的影响及其分离培养的影响因素

胚胎干细胞及其相关研究是生命科学领域中最有活力、最有影响力、最有应用前景的研究方向之一，它与遗传工程，转基因技术等相结合具有重大的理论意义与实践价值。饲养层细胞在胚胎干细胞分离培养的过程中起着异常重要的作用。作者结合实践经验就饲养层细胞对胚胎干细胞的影响进行了概述，介绍了饲养层细胞的分类，并分析了饲养层细胞分离培养的影响因素。