猫瘟热诊断及免疫的研究——Ⅲ.猫源细小病毒细胞培养BEI灭活疫苗区域性免疫试验

自1987年以来,先后在安徽、江苏、贵州、河南、山东和陕西等11个地区(场)应用猫源细小病毒(FNF-8株)细胞培养BEI灭活疫苗进行区域性免疫试验,共注射水貂、猫、犬、貉和狐等1685只(次)。经近3年的流行病学调查和抽样血清抗体检测表明:疫苗是安全的;注苗后2个月,血清HI抗体均增长1～7个滴度,两次接种疫苗的猫最高血清HI抗体达2~(10);控制了疫情。3年来再未见发病,预防效果比较满意。     

犬细小病毒母源抗体及其对免疫接种的影响

犬细小病毒母源抗体可通过胎盘和初乳转移给仔犬。初生犬一周内血清中母源抗体HI效价为1:128～1:256,6用龄时HI效价降至1:8～1:32。母源抗体效价>1:16时接种犬细小病毒灭活苗。仅有33％的犬产生免疫应答;HI≤1:16时,对接种灭活苗或弱毒苗均产生免疫应答。     

不同鸡新城疫疫苗免疫鸡血清HI抗体的测定

将试验鸡分成3个试验组和1个对照组。A组鸡接种鸡新城疫系疫苗,B组鸡接种油乳剂灭活苗,C组鸡接种鸡新城疫系疫苗,并在接种疫苗后第3、4、5、6、7、9、11、13、15、20、25d采取各组鸡血并分离血清,检测HI抗体。结果表明,接种系疫苗的组,HI抗体效价均值从4.67log2上升到10log2,接种后第5d开始上升,接种后第11d达到峰值,持续6d保持高滴度抗体水平。接种系疫苗的组,HI抗体效价均值从4.67log2上升到7log2,接种后第4d开始上升,接种后第9d达到峰值。接种油乳剂灭活苗的组,HI抗体效价均值从4.67log2上升到9.33log2,接种后第5d开始上升,接种后第11d达到峰值,持续16d保持高滴度抗体水平。系疫苗HI抗体效价上升快,效价高,较适合于紧急接种,油乳剂灭活苗HI抗体效价可在高水平维持较长时间,较适合于预防接种。     

犬细小病毒细胞毒蜂胶佐剂灭活抗原对山羊的免疫效果研究

应用犬细小病毒(CPV)细胞毒,F81细胞系传代培养增殖病毒,以该细胞毒液经甲醛灭活后制备成蜂胶佐剂灭活抗原,用以免疫山羊,观察其免疫效果.结果显示,以5mL/只恒定剂量接种山羊,经4次连续免疫后CPV抗体水平整体较低,第28天测定HI效价在27(1∶3128),而以5mL/只递增剂量4次连续免疫山羊后,抗体水平整体较高,第28天测定,抗体HI效价在29(1∶512),较恒定剂量免疫组高2个滴度水平.结果表明,采用犬细小病毒细胞毒蜂胶佐剂灭活抗原高免山羊可获得高效价的特异性抗血清.     

犬细小病毒灭活疫苗的制备及免疫效果观察

以新分离的两种不同亚型CPV为毒种制备浓缩灭活苗和未浓缩灭活苗,通过与商品化弱毒苗的比较评价灭活疫苗的免疫效果。将CPV-S5（New CPV-2a）与CPV-1401（New CPV-2b）毒株扩大培养后浓缩灭活,制备了两种浓缩与两种未浓缩水溶剂灭活疫苗;将灭活疫苗和商品化二联弱毒苗分别接种5周龄HI阴性幼犬,分别在免疫后7 d、14 d、21 d、28 d测定HI抗体效价;首免36 d后取其中4只犬二免,其他犬进行攻毒。结果显示,各免疫组在第7天HI均高于1∶80,浓缩组显著高于未浓缩组,初步表明CPV灭活苗效果与抗原的浓度有直接的关系;灭活疫苗组与商品化弱毒苗组均差异显著;免疫组的犬均存活,而HI阴性犬死亡,经检测死亡犬CPV为阳性,表明制备的CPV灭活苗产生的特异性免疫应答均能抵抗强毒的攻击,对犬起到良好的免疫保护;二免后其HI抗体效价极显著提高,有效抗体能维持5个月,更有效的对免疫犬群进行保护。     

重组禽流感灭活苗和禽流感灭活苗对鸡免疫效果的观察

用重组禽流感灭活苗接种10日龄、14日龄和21日龄的SPF鸡,接种后HI抗体效价无显著差异。将H5N1和H5N2疫苗分别接种21日龄SPF鸡,结果表明,H5N1和H5N2均能刺激SPF鸡产生较高的HI抗体;分别接种三黄鸡,接种后21 d,H5N1能刺激三黄鸡产生较高的HI抗体;而H5N2不能刺激三黄鸡产生合格的HI抗体,与SPF鸡免疫组相比差异显著。经过二次接种,HI抗体平均为8.9 log2,与SPF鸡组接种后42 d的各组相比差异不显著,而与一免后21 d的各组HI抗体效价相比差异显著。表明应用禽流感灭活苗对三黄鸡免疫接种,必须进行二免方可达到理想免疫效果,而应用重组禽流感灭活苗对三黄鸡进行免疫接种,一次免疫即可获得较高的HI抗体效价。     

鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗与同类产品的免疫效力比较

将鸡新城疫、禽流感（H9亚型,SY株）二联灭活疫苗与市售同类对照苗分不同剂量皮下注射接种30日龄SPF鸡,免疫后定期采血,分离血清,通过检测血清中ND和AI的HI抗体水平比较各组鸡抗体产生期、抗体高峰及免疫持续期,并进行不同血凝抗原检测HI抗体结果的对比。试验鸡血清样品检测结果显示,免疫鸡抗体产生期为免后2周内,免后8周和5周ND和AI的HI抗体滴度分别达到峰值,抗体至少可持续28周以上,两种灭活苗之间免疫效果基本相当。     

二乙烯亚胺对猪细小病毒的灭活作用

使用新型灭活剂二乙烯亚胺(binary ethylenimine,BEI)对猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)进行了灭活试验,通过ST传代细胞接种法观察病毒灭活后是否出现细胞病变,并结合血凝试验检测灭活效果,确定最佳灭活方法。用3～5日龄乳鼠检测BEI灭活后的病毒培养物和相应制备疫苗的安全性,并用豚鼠检测该灭活工艺制备疫苗的效果,与传统甲醛灭活进行了比较。结果显示,终浓度为1‰的BEI在32℃情况下经20 h即可彻底灭活PPV病毒;BEI灭活的病毒制备的疫苗免疫豚鼠较甲醛灭活病毒产生较高的血凝抑制抗体。     

禽流感病毒BEI灭活疫苗制备与免疫效果

使用浓度为0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%和0.6%的二乙烯亚胺(BEI)37℃灭活禽流感病毒(Re-5株)24h,经灭活效果检测BEI浓度≥0.5%可以完全灭活病毒。0.5%的BEI和0.2%的甲醛灭活禽流感病毒,以相同配方制备疫苗,免疫效力比较研究结果显示,按照规程要求免疫21d后采血HI效价分别为8.35log2和7.66log2,BEI灭活疫苗的抗体水平要高于甲醛灭活疫苗。本研究为禽流感灭活疫苗灭活工艺研究提供了依据。     

鸡减蛋综合症油乳剂灭活苗保存期试验的研究

为了观察EDS-76油乳剂灭活苗的最佳保存期,用4批EDS-76油乳剂灭活苗（批号0701、0702、0703、0704）分别置0～4℃、11～20℃（室温）,经保存0、1、2…369、12个月后,检查其物理性状,并按1个免疫剂量免疫EDS-76阴性的120日龄的伊莎褐母鸡,免疫后30日检测血清中HI抗体。结果表明,这4批灭活苗于0～4℃和11～20℃分别保存12个月和3个月,物理性状不变;O～4℃保存9个月和12个月HI抗体有所下降,仍能达到较高的抗体滴度水平,起到免疫保护作用;在11～20℃保存3个月时HI抗体,下降到7．9Log2左右,但仍远远高于保护水平;因此,本疫苗保存期为0～4℃暂定为1年,11～20℃暂定为3个月。     

猎豹禽流感疫苗免疫效果初探

为明确猎豹对禽用禽流感疫苗免疫的效果,笔者对我园7只成年猎豹进行禽流感疫苗免疫试验,使用重组禽流感病毒H5亚型二价灭活苗(Re-6株+Re-7株),1mL/只,分2点皮下注射,在连续2次基础免疫和1次补强免疫后,将7只猎豹随机分成两组,其中2只按时强免、5只空免对照,采用血凝抑制试验(HI)法对猎豹血清抗体进行检测。高峰期H5亚型Re-6平均抗体滴度在2~9~2~(11)之间,最高可达2~(11)以上,抗体滴度2~8以上可以保持11个月;高峰期H5亚型Re-7平均抗体滴度在2~7~2~8之间,2~4及以上可保持11个月。因此,针对猎豹的禽流感免疫计划,1mL/只,6个月加强免疫一次是安全有效的,理论上安全抗体滴度可以保持11个月左右。     

鸡禽流感和新城疫双针免疫试验

本试验旨在对同时接种禽流感灭活苗和鸡新城疫油乳剂灭活疫苗的鸡群免疫效果进行评价。结果表明,禽流感灭活苗和新城疫同时接种雏鸡,其中新城疫使用新城疫Ⅳ系苗首免,用新城疫油乳剂灭活苗二免后,可产生高水平的抗体,且抗体维持时间长,能较好地抵抗病毒的攻击。接种雏鸡后,可使原有抗体水平相差悬殊的鸡群产生高效价、较为整齐的抗体,免疫6个月后,HI抗体仍在6lloogg2以上。     

口服PHA复合物对犬细小病毒免疫效果的影响

为了更好地指导犬细小病毒病的防治,减少犬患细小病毒病的几率,通过实验验证PHA复合物对犬细小病毒疫苗是否有增强其免疫效果的作用,并拟定出实验观察的具体实施方案。实验选用年龄2～3岁、体重4kg左右的未经免疫或者免疫已过期的健康犬12条,随机分成对照组A和实验组B,每组6条。实验组每条犬皮下注射1头份英特威二联苗并口服PHA复合物0.1mg/kg体重,对照组每条犬皮下注射一头份英特威二联苗。各组在免疫接种前及接种后7、14d,分别颈前静脉采血,分离血清用CPV-Ab金标试纸条测定其抗体滴度,计算阳转率并进行t检验:接种后7d,A组阳转率为33.33%,B组阳转率为50%,实验组与对照组相比,阳转率有所提高,但是t检验时差异不显著;接种后14d,A组和B组的阳转率均为83.33%,但A组抗体滴度≥1∶64的有50%,B组抗体滴度≥1∶64的有66.66%,A组抗体滴度在较低的水平1∶32～1∶64之间波动,而B组抗体滴度在较高的抗体水平1∶64～1∶128之间波动。说明PHA复合物与英特威二联苗联用,可提高犬对英特威二联苗的抗体应答能力,对防治犬细小病毒病有重要作用。     

口服PHA复合物对犬细小病毒免疫效果的影响

为了更好指导犬细小病毒病的防治,减少犬患细小病毒病的几率,通过试验验证PHA复合物对犬细小病毒疫苗是否有增强其免疫效果的作用,并拟定出试验观察的具体实施方案。试验选择年龄2至3岁、体重4 kg左右的未经免疫或者免疫已过期的健康犬12只,随机分成对照组A和试验组B,每组6只。试验组每只犬皮下注射一头份英特威二联苗并每千克体重口服PHA复合物0.1 mg,对照组每只犬皮下注射一头份英特威二联苗。各组在免疫接种前及接种后第7天和第14天,分别颈前静脉采血,分离血清用CPV-Ab金标试纸条测定其抗体滴度,计算阳转率并进行t检验。接种后第7天,A组阳转率为33.33%,B组阳转率为50%,试验组与对照组相比,阳转率有所提高,但是t检验时差异不显著;接种后第14天,A组和B组的阳转率均为83.33%,但A组抗体滴度≥1∶64的有50%,B组抗体滴度≥1∶64的有66.66%,A组抗体滴度在较低的水平1∶32～1∶64之间波动,而B组抗体滴度在较高的抗体水平1∶64～1∶128之间波动;说明PHA复合物与英特威二联苗联用可提高犬对英特威二联苗的抗体应答能力,对防治犬细小病毒病有重要作用。     

鸡减蛋综合症油乳剂灭活苗保存期试验的研究

为观察四元材料制备的EDS-76油乳剂灭活苗的最佳保存期,用4批EDS-76油乳剂灭活苗(批号 200001、200002、200003、200004),分别置0～4 ℃、11～20 ℃(室温),经保存0、1、3、6、8、9、12个月后,检查其物理性状,并按1个月免疫剂量免疫EDS-76阴性的120日龄的伊莎褐母鸡,免疫后25日检测血清中HI抗体.结果表明,这批苗于0～4 ℃和11～20 ℃分别保存12个月和8个月,物理性状不变;4℃保存9个月和12个月HI抗体有所下降,仍能达到较高的抗体滴度水平,起到免疫保护作用;在11～20 ℃保存3个月时HI抗体下降到8Log2左右,但仍远远高于保护水平;因此,本疫苗保存期4℃暂定为1 a,11～20 ℃暂定3个月.     

两种灭活方法制备的猪肺炎支原体灭活疫苗的免疫效果比较

为对比使用甲醛、二乙烯亚胺（BEI）两种灭活方法制备的猪肺炎支原体灭活疫苗对猪的呼吸道发病率、肺部病变记分、饲料转化率、日增重、以及猪血清抗体水平等指标的影响,将120头健康仔猪随机分成三个试验组和一个对照组,于7、21日龄对试验组的仔猪进行疫苗接种,所有猪于20、50、80及140日龄采血分离血清,检测血清中猪肺炎支原体抗体水平。结果显示,用BEI灭活的疫苗在呼吸道发病率、肺部病变记分、饲料转化率、日增重、以及猪血清抗体水平等各项指标均好于甲醛灭活的疫苗（P<0.05）,与进口疫苗无显著差异。试验表明,使用BEI灭活方法制备的猪肺炎支原体灭活疫苗的免疫效果好。     

用HN亚单位疫苗预防ND

用含有表达NDV HN的重组杆状病毒的汕乳剂苗接种小鸡,可产生血凝抑制反应(HI)和抗NDV的中和抗体。用活的重组病毒接种较用经β—丙内酯灭活的组重病毒接种所获得的HI抗体滴度要高,但较存活的或β—丙内酯灭活的NDVB_1株的HN浓缩     

禽流感灭活疫苗的研制与疫苗免疫试验

将分离到的３个不同毒株禽流感病毒分别接种９～１０日龄鸡胚,收获尿囊液,经甲醛灭活,配以油佐剂制成油乳剂灭活疫苗,接种５周龄的非禽流感疫苗免疫鸡,注苗后无不良反应。免疫后每周采血一次,测ＨＩ抗体,结果表明免疫后７天抗体普遍上升１～２个滴度,１４天平均抗体水平在７．５ｌｏｇ２以上,２１天抗体水平在８～９ｌｏｇ２以上,免疫后２１天攻毒,免疫组鸡无临床症床和死亡,对照组出现临床症状,但未死亡,攻毒一周后,     

重组SEA增强H5亚型禽流感灭活疫苗对肉鸡的免疫效果研究

为评价重组葡萄球菌肠毒素A(rSEA)对H5亚型禽流感病毒(AIV)灭活疫苗免疫效果的影响,本研究以原核表达的rSEA为免疫增强剂,制备成含有rSEA高(167 μg/0.5 mL)、低(16.7 μg/0.5 mL)两种剂量的AIV油乳剂灭活苗,分别免疫7d龄肉鸡,通过检测免疫鸡AIV HI抗体滴度及外周血CD4+/CD8+值评价其免疫效果.HI 抗体检测结果显示,免疫后2周高剂量组HI抗体平均滴度为5.6 log2,低剂量组为4.2 log2,而无rSEA疫苗对照组为2.9 log2(p＜0.01);同时在免疫后前4周,rSEA免疫组的HI抗体平均滴度及峰值与对照组相比均差异显著(p＜0.05).T淋巴细胞亚群检测结果显示,肉鸡免疫高剂量rSEA的灭活苗后,其外周血CD4+百分含量及CD4+/CD8+值均显著高于对照组(p＜0.05).上述结果表明,rSEA作为AIV灭活苗免疫增强剂,能够快速诱导较高的HI抗体滴度,同时也可增强细胞免疫反应,有效缩短免疫空白期,使肉鸡短时间内产生较强的免疫应答反应.     

禽流感高免球蛋白的制备及应用研究

应用H9N2亚型禽流感病毒(AIV)油乳剂灭活苗6个不同剂量免疫30周龄SPF蛋鸡,通过血凝抑制(HI)和琼脂免疫扩散(AGP)试验监测血清及卵黄抗体消长规律,确定2.0 mL为最适免疫剂量。首免后第18天血清与卵黄中抗体同时升至第一高峰,此时加强免疫。二免后1周,效价达到第二高峰,用常规抽提法从高抗体滴度卵黄中提取高免球蛋白(IgY)。中和试验(NT)表明:IgY具有中和病毒感染的作用,且中和抗体滴度随HI滴度的降低而降低;给鸡肌肉注射后6 h能检测出血清的HI抗体,24 h达到峰值,维持7 d,第13天血清中HI抗体消失。104个EID50的AIV(H9N2)攻毒,同时用HI价为214的IgY的10倍系列稀释物分5组进行保护试验,确定HI价为214的IgY保护范围在100倍稀释与10倍稀释之间。IgY系列保护试验表明HI价28为完全保护的最低滴度;在攻毒的前1天及至攻毒后第5天接种IgY均能100%保护。攻毒保存期试验证明,所制得的高免球蛋白4 ℃可以保存6个月,-20 ℃可保存1年。