共查询到20条相似文献,搜索用时 828 毫秒
1.
新城疫病毒(NDV)四平株、昌黎株、青岛株、F48E8株分别接种9日龄SPF鸡胚增殖,蚀斑纯化(3代),生物学特性鉴定及结合基因序列分析,表明NDV四平株、昌黎株、青岛株均为强毒株。经差数、蔗糖密度梯度离心提纯病毒,分别提取RNA,利用一对特异性引物及RT-PCR方法,一次性扩增出 NDV四平株、昌黎株、青岛株和 F48E8株的全长 HN基因,分别将该HN基因克隆入载体pKS(-)并进行测序。序列分析表明,这4个毒株HN基因核苷酸长度均为1713bp,编码571个氨基酸,其中四平株和 F48E8株含有5个糖基化位点,青岛株和昌黎株含有 6个糖基化位点,四平株含有 12个半胱氨酸残基,而昌黎株、青岛株和F48E8株含有13个半胱氨酸残基。3个野生毒株与F48E8相比较,核苷酸序列同源性为85.7%-99.3%,推导的氨基酸序列同源性为 89.5%-98.8%,其中 NDV四平株与标准强毒 F48E8同源关系最近,核苷酸同源性为 99.3%,推导的氨基酸同源性为 98. 8%。 相似文献
2.
新城疫病毒F48E8株核衣壳蛋白基因的克隆及其酶切分析 总被引:2,自引:0,他引:2
根据已发表的新城疫病毒(NDV)核衣壳蛋白(NP)基因序列,设计合成1对长度为32mer的引物。RT-PCR扩增NDVF48E8株、Ulster株、LaSota株的NP基因,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,均呈现1条长1.5kb左右的特异性带。将F48E8株扩增产物克隆入pUC18载体,经限制性内切酶分析证实为NP基因。 相似文献
3.
构建了表达速发型新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)和血凝素-神经氨酸酶(HN)糖蛋白的鸡痘重组病毒TROVAC-NDV。SPF鸡免疫试验表明,一次注射得组病毒有使鸡产生大量血凝抑制(HI)抗体。并能维持8周以上,而且重凤苗能诱导对经肌肉和呼吸道途径攻击NDV的免疫力。带母滞病毒(FPV)的免疫力,但NDV的特异性体液应签水平降低。 相似文献
4.
新城疫病毒F48E9株HN基因核苷酸序列 总被引:5,自引:0,他引:5
本研究采用 Sanger's 双脱氧末端终止法测定了新城疫病毒国内标准强毒株 F48 E9 血凝素神经氨酸酶基因 c D N A 的核苷酸序列,推导出其氨基酸序列。 F48 E9 H N 基因编码区全长为 1713bp,单一的开放阅读框编码571 个氨基酸的糖蛋白。含有6 个潜在的与天门冬酰胺( N)连接的复合寡聚糖和高甘露糖寡聚糖结合位点,其中有 5 个簇集在蛋白分子的 C末端一半内,有13 个半胱氨酸残基。发现6 个 F48 E9 特有的氨基酸残基,37 位 F( L)、38 位 S( A)、60 位 L( P)、105 位 S( N)、443 位 A( T)、571 位 I( V),这些位点除了 60 位的 P有两株为 S以外,其它的在 13 株已知序列中均为高度保守序列。 相似文献
5.
新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因的克隆 总被引:2,自引:0,他引:2
以提纯的我国标准UDVF48E8强毒株基因组RNA为模板、化学合成的融合蛋白(F)基因特异寡核苷酸为引物,反转录合成F基因cDNA,并采用同聚物加尾的方法克隆到细菌质粒pGEM3Zf(-)。经AIX平板筛选和酶切分析,并用F基因片段核酸探针作dot-blot检测,共获得插入片段长度在0.6 ̄2.8kb之间的阳性克隆34个,其中插入片段大于1.5kb的阳性克隆8个。用多种限制性内切酶对阳性克隆pF7 相似文献
6.
将新城疫病毒(NDV)的融合蛋白(F)基因或血凝素-神经氨酸酶(HN)基因插入到火鸡疱疹病毒(FVT)的一个非必需基因中,构建了重组HVT株。NDV抗原的表达受来自劳斯肉瘤病毒的一种强启动子的调控。1日龄腹腔内(IA)接种表达NDV融合蛋白的重组HVT的鸡不仅产生免疫学反应,而且在28日龄可抵抗嗜神经NDV强毒株Texas GB的致死性肌肉攻毒(保护率>90%)。表达NDV HN的重组HVT仅能提 相似文献
7.
8.
新城疫病毒F48E9株HN基因的克隆与酶切分析 总被引:9,自引:0,他引:9
为深入探讨新城疫病毒(NDV)的结构与功能的关系,扩增和克隆了F48E9株NDV的HN基因。首先以提取的F48E9株NDV基因组RNA为模板逆转录合成第一链cDNA,然后用HN基因特异性引物作PCR扩增HNcDNA,结果得到1条分子量约1.8kb的DNA带,与NDVHN基因的大小一致。Southernblot杂交进一步证实其为HN特异性cDNA。随后采用平端连接法将其克隆到pSV·Sportl质粒中,应用限制性内切酶EcoRI、ScaⅠ、MluⅠ、ApaⅠ、PstⅠ、和SmaⅠ对NDVF48E9株HNcDNA重组质粒作单酶或双酶切,结果表明,NDVF48E9株HN基因较HitchnerB1株的HN基因缺少1个MluⅠ位点(705bp左右),多1个PstⅠ位点(802bp左右)。 相似文献
9.
不同新城疫病毒F48E8、N-79、LaSota和分离株X以1∶10000稀释接种9日龄SPF鸡胚,每胚0.2ml,结果发现,F48E8和分离株X毒力较强,可在50小时左右致死鸡胚,LaSota和N-79较弱。F48E8和X株接种鸡胚的肌肉、肝脏、脑和尿囊液均有大量病毒存在,而N-79和LaSota只在尿囊液中有大量病毒存在,胚体病毒极少。 相似文献
10.
新城疫病毒F48E9株及东北地区流行株F基因遗传变异分析 总被引:16,自引:4,他引:12
采用异硫氰酸胍/酚/氯仿抽提一步法,提取新城疫病毒(NDV)F48E9株及2个东北地区分离株DB3、DB5基因组RNA,并以其为模板经反转录合成F基因cDNA第1链,再利用PCR技术分段增出F基因的cDNA。F48E9、DB3和DB5株F基因的cDNA经酶切修饰后,插入pUC19的多克隆位点中,转化感受态E。cdi DH5a,经相对分子质量比较、酶切分析及PCR等鉴定方法筛选出F48E9、DB3和 相似文献
11.
不同新城疫病毒F48E8、N-79、La Sota和分离株X以1:10000稀释接种9日龄SPF鸡胚,每胚0.2ml,结果发现,F48E8和分离株X毒力较强,可在50小时左右致死鸡胚,La Sota和N-79较弱,F48E8和X株接种鸡胚的肌肉,肝脏,脑和尿囊液均有大量病毒存在,而N-79和La Sota只在尿囊液中有大量病毒存在,胚体病毒极少。 相似文献
12.
新城疫病毒强毒株的分离与鉴定 总被引:35,自引:2,他引:33
从发病率为100%、病死率为97%的鸡群中分离到1株病毒。该病毒凝集鸡红细胞的作用可被新城疫标准阳性血清所抑制,证明所分离的毒株为新城疫病毒。鸡胚半数致死量、最小致死量致死鸡胚的平均时间、1日龄雏鸡脑内致死指数、6周龄雏鸡静脉致死指数、血凝解脱及血凝素热稳定性等试验表明,分离毒为新城疫病毒强毒株,其毒力比标准强毒F48E8株还强。血凝抑制试验和中和试验表明,分离毒的血凝性与F48E8相同,但中和特性与F48E8有较大差异 相似文献
13.
14.
从鹤壁某患病鸡群中分离到一株病毒(HB97),该病毒用单克隆抗体鉴定为新城疫强毒株。但其抗原性与新城疫F48E8株有明显差异。经过对F基因的扩增、克隆、测序及与其他毒株的 F基因序列比较,表明该毒株为新城疫基因Ⅶ型。这为更好地控制和预防新城疫提供了依据。 相似文献
15.
新城疫病毒F48E9株F基因主要功能区的核苷酸序列分析 总被引:12,自引:2,他引:10
本试验首先以NDVF48E9株的基因组RNA为模板,逆转录合成F基因cDNA第一链,再通过PCR技术扩增F基因的cDNA,然后将其克隆到质粒pUC19中,经分子量比较、酶切分析、PCR等方法证明,我们已经获得了NDVF48E9株F基因的阳性克隆。经初步序列分析,FA段核苷酸序列与参考株(D26/76)序列同源性为89%,FB段同源性为91%。二者的氨基酸序列表明,F48E9株F蛋白裂解位点与其它强毒株裂解位点氨基酸组成相同,即112RRQRR116F117。这两段序列中包含的三个Cys残基和三个潜在的糖基化位点都相当保守。 相似文献
16.
新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因的分离克隆及在原核细胞中的… 总被引:8,自引:4,他引:4
用SPF鸡胚繁殖新城疫病毒(NDV)F46E9株(强毒)、LaSotaE4株(弱毒)、对病毒进行纯一提RNA。用1对均为27个碱基的引物进行RT-PCR,扩增出了2个毒株的融合蛋白裂解位点(Fc)基因。将Fc基因定向克隆人pUCLaFc,用EcoRI/Sal I双酶切法、PstI单酶切法、PCR法和核酸探针法对其进行了鉴定。将鉴定好的LaSotaE4Fc基因定向导入表达载体质粒pBV221,aqt 相似文献
17.
采用常规的血清学试验和特异性RT-PCR方法对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况进行4年多的监测,分离鉴定出多株H4亚型禽流感病毒。对其中的A/Duck/Yangzhou/216/2002(简称Dk/YZ/216/02)、A/Duck/Yangzhou/526/2003(简称Dk/YZ/526/03)、A/Duck/Yangzhou/36/2004(简称Dk/YZ/36/04)的血凝素基因和Dk/YZ/526/03、Dk/YZ/36/04的神经氨酸酶基因进行了克隆测序,并与GenBank中收录的其它序列进行了比较,遗传进化结果表明Dk/YZ/216/02的血凝素基因(HA)与毒株Tk/Minnesota/833/80(H4N2)同源性最高,而Dk/YZ/526/03和Dk/YZ/36/04的血凝素基因(HA)均与Budgerigar/Hokkaido/1/77(H4N6)同源性最高;而神经氨酸酶基因(NA)遗传进化分析结果表明Dk/YZ/36/04(H4N6)的NA基因与毒株Pigeon/Nanchang/8-142/2000(H3N6)同源性最高,而Dk/YZ/526/03(H4N2)的NA基因与Dk/Hokkaido/13/00(H9N2)同源性最高,3株禽流感病毒的HA推导的氨基酸剪切位点序列均为P-E-K-A-S-R,为典型低致病性禽流感病毒的特征序列,与对SPF鸡的致病力试验相吻合。 相似文献
18.
19.
采用腹腔的接种1次脾内注射禽呼肠孤病毒(ARV)蛋白免疫小鼠,经3次融合后,共筛选8株分泌抗禽呼肠孤病毒(单克隆抗体杂交瘤细胞株,这8株McAb均可与ARVS1133株,FDO株发生反应,而与IBDV,MDV,EDS-76病毒不发生反应,经亚类鉴定,AE7,AF8,BD1,DH10,EE5为IgG1;AD6,CG4为IgC2a,AG7为IgG2b。腹水效价在10^3~10^5之间。 相似文献
20.
用单克隆抗体(MAb)作酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光试验(IFA)、病毒中和(VN)试验及兔疫沉淀试验证明了牛病毒性腹泻病毒(BVDV)致细胞病变株87-2552(现地分离)与NADL和Singer(原型株)之间的抗原差异。两个抗BVDV87-2552株的MAb(D11和B7)能强烈中和现地分离株,并对该病毒的48-KDa糖蛋白呈特异性。这两个MAb有不同的亚型,D11为免疫球蛋白G1 相似文献