一种适用于甜菜大规模快速提取DNA的方法

目前甜菜DNA提取通常使用CTAB法,大多数人仍采取研钵研磨的方法,但是在大批量提取DNA的时候,该方法耗时费力,提取效率较低。为了提高提取DNA的效率以适应大规模PCR的需求,我们创新了使用CTAB提取DNA的方法。该方法为先在离心管放入钢珠,然后把样品放入离心管中,放入到液氮中冷冻后直接使用震荡研磨机研磨后,再利用CTAB法进行提取,结果表明,该法点提取的DNA浓度和纯度均表现较好,并且将提取的DNA用于SSR引物的扩增,所得条带清晰,实验结果较好,可提高效率30%。     

适用于SSR分子标记的玉米单粒种子DNA快速提取新方法

研究了玉米单粒种子DNA的提取新方法,利用该方法提取DNA,液氮、研磨、离心、沉淀、SDS、CTAB及氯仿都不用,一个工作人员提取100粒种子(1个检测样品)DNA只需30min左右,一天可以提取1600粒种子(16个检测样品)的DNA,并且提取的DNA分子量大,不降解,完全可以满足利用SSR分子标记进行DNA指纹分析的需要,为DNA指纹技术在玉米种子纯度及真伪快速鉴定中的广泛应用解决了关键性技术难题。     

球磨机高通量提取甘蔗叶片DNA研究

简便快速地获得高质量、高纯度的DNA模板是进行分子遗传学研究和大批量分子检测的基础。常用的液氮手工研磨提取DNA方法存在着耗时、费力、污染等诸多不足。利用从美国引进的球磨机,根据甘蔗叶片的特点,采用国产钢珠,通过优化实验步骤,建立了一种高通量制备甘蔗叶片DNA的方法,其中,叶片快速研磨使用不锈钢珠的直径为4 mm,对叶片进行液氮预冻,时间为30～45 min,叶片用量为50～100 mg,打磨时间为30～40 s。这种方法缩短了提取DNA的时间,提高了效率,而DNA质量与经典方法相当,能够满足分子生物学研究的需要。     

一种高效、准确测定油菜中维生素C含量的方法

为准确测定出油菜中维生素C的含量，在国标基础上，建立了一种高效、准确测定新鲜油菜维生素C含量 的方法。结果表明：维生素C在测定范围内峰面积与标准液浓度线性关系良好，相关系数为0.9999。油菜维生素C 含量测定的回收率为97.97%~101.40%，相对标准偏差RSD仅为1.84%，说明用该方法重现性良好，具有快速准确、 稳定可靠等特点。贮藏温度越低，维生素C降解的速度越慢，用液氮贮藏样品更有利于维生素C的保存和精准鉴 定；利用液氮冷冻并研磨样品更有利于样品中维生素C的提取，测得油菜中维生素C含量与仅均质化处理相比平均 增加了约16%；液氮中贮藏的样品在不同时间下测定其维生素C含量并无显著变化，测得维生素C含量的RSD均小 于2%。利用此方法可以测定较长时间保存样品中的维生素C，可满足高通量、高准确率的要求，有利于油菜的菜用 营养和育种研究。     

前处理对烟叶中糖及有机酸含量的影响

为了研究不同前处理对烟叶中糖及有机酸含量的影响,比较了液氮研磨烟叶、杀青烟叶、初烤烟叶及鲜烟叶4种样品中糖和有机酸的含量。结果显示,初烤烟和杀青烟样分别与其它处理样品中糖类物质的含量差异达到显著水平,液氮研磨样品与鲜样的糖类物质含量差异不显著;4种处理样品中有机酸含量的差异较大。     

甜菜DNA提取新方法初探

本文报道了一个全新的甜菜DNA提取方法，该方法较以往的甜菜DNA提取方法有所不同。它是利用鲜嫩的花蕾为试材，以略有改进的苯酚／氯仿抽提法提取DNA。利用冷冻研磨或者用玻璃棒直接捣碎试材，来提取DNA。该方法简单，易操作，DNA纯度较高，可以直接用于RAPD分析，实验效果较好。     

小麦幼叶DNA微量快速提取方法的改进

为满足对大批量材料进行分子标记检测的需要,以小麦幼叶为材料,探索了在液氮和无液氮条件下提取DNA方法的改进.结果表明,改进提取法Ⅰ(用液氮)中,水浴中加KCl抽提一次便可得到质量较好的DNA,且液氮用量是常规提取法的1/40～1/30;改进提取法Ⅱ(无液氮)中,水浴后加KCl比水浴前加KCl及不加KCl的RNA含量和杂质含量低,OD260/OD280比值大,DNA浓度和纯度有所提高.两种改进方法提取的DNA经琼脂糖凝胶电泳检测都能得到质量较高的DNA图谱,又经SCAR-PCR扩增均能得到2条片段大小相同的条带.     

改良CTAB法用于提取红麻成熟叶片高质量DNA的研究

红麻处于光合高峰期的成熟叶片中的次生物质含量很高,给DNA的提取造成很大的困难。CTAB法能有效去除多糖杂质,但普通CTAB法用于红麻的DNA提取效果很不理想,为使CTAB法能更好地用于红麻的DNA提取,我们对此方法进行了改进,通过前处理除去大部分的杂质,减小了后续操作的难度。为了验证前处理是否会损失DNA,研究了液氮研磨对材料细胞的破碎程度问题,还讨论了DNA提取中的其它一些相关问题。     

改良CTAB法用于提取红麻成熟叶片高质量DNA的研究

红麻处于光合高峰期的成熟叶片中的次生物质含量很高,给DNA的提取造成很大的困难.CTAB法能有效去除多糖杂质,但普通CTAB法用于红麻的DNA提取效果很不理想,为使CTAB法能更好地用于红麻的DNA提取,我们对此方法进行了改进,通过前处理除去大部分的杂质,减小了后续操作的难度.为了验证前处理是否会损失DNA,研究了液氮研磨对材料细胞的破碎程度问题,还讨论了DNA提取中的其它一些相关问题.     

Different Methods of Extracting Invertase from the Leaves of Hevea brasiliensis(Para Rubber Tree)

比较液氮研磨样品与蛋白抽提液研磨样品对6种提取橡胶树叶片转化酶方法的效果.结果表明:液氮研磨法对转化酶活性影响很大,特别是中性/碱性转化酶和细胞壁结合的酸性转化酶已基本失活,而可溶性酸性转化酶活性丧失也比较严重.利用蛋白抽提液研磨样品,用Hepes-NaOH法提取的可溶性转化酶的酶活性最高,达472.44 μmol (glucose)/[g (FW)·h]；虽然磷酸-柠檬酸法获得的粗酶液的蛋白含量较低,但其酶活性高达441.61 μmol( glucose)/[g( FW)·h];Tris-HCl法提取的细胞壁结合酸性转化酶的酶活性最高,达35.83 μmol( glucose)/[g(FW)·h].从转化酶的比活力看,磷酸-柠檬酸法最佳,所提取的叮溶性转化酶比活力约为Hepes-NaOH法的4倍.本研究结果为进一步完善橡胶树叶片转化酶的提取方法提供重要的指导意义.     

一种快速高效的DNA提取方法研究

DNA提取技术是分子实验的一个重要步骤,快速、高效的植物DNA提取方法是样品需要量大的分子实验的一个关键技术。本实验通过改进传统的DNA提取方法,使用96孔联体试管板,而不是单个离心试管,对叶片进行冷冻干燥后粉碎,无需使用液氮。在实验过程中,使用排枪操作,CTAB法提取DNA。以小麦为例,依据该方法提取幼苗叶片DNA,并选取6对引物对DNA样品进行PCR扩增,使用ABI PRISM 3730 DNA分析仪对扩增产物进行分析,以检测提取的DNA质量。结果表明,本实验的DNA提取方法所得到的PCR扩增条带均有较高的强度。在6对实验引物的扩增结果中,扩增条带强度最好的引物有98%的样品在6 935～16 786 RFU( Relative Fluorescence Unit)之间;扩增条带强度较低的引物有93% 的样品在532～1 111 RFU之间;在所有的PCR扩增反应中,最低PCR扩增条带强度为205 RFU,缺带样品数量平均只有0.8%。按照本实验的方法操作,每人每天可提取上千个样品的DNA。因此,该DNA提取方法是一种高效、快速、能获得高质量DNA的有效方法。     

橡胶树叶片转化酶提取方法的比较

比较液氮研磨样品与蛋白抽提液研磨样品对6种提取橡胶树叶片转化酶方法的效果。结果表明：液氮研磨法对转化酶活性影响很大，特别是中性/碱性转化酶和细胞壁结合的酸性转化酶已基本失活，而可溶性酸性转化酶活性丧失也比较严重。利用蛋白抽提液研磨样品，用Hepes-NaOH法提取的可溶性转化酶的酶活性最高，达472.44 μmol（glucose）/[g（FW）·h]； 虽然磷酸-柠檬酸法获得的粗酶液的蛋白含量较低， 但其酶活性高达441.61 μmol（glucose）/[g（FW）·h]； Tris-HCl法提取的细胞壁结合酸性转化酶的酶活性最高， 达35.83 μmol（glucose）/[g（FW）·h]。从转化酶的比活力看，磷酸-柠檬酸法最佳，所提取的可溶性转化酶比活力约为Hepes-NaOH法的4倍。本研究结果为进一步完善橡胶树叶片转化酶的提取方法提供重要的指导意义。     

玉米叶片DNA快速提取方法改进研究

分子生物学研究需要大量的DNA样品,DNA的快速提取是提高研究效率的关键。研究比较多种植物DNA的提取方法,对部分实验步骤做了修改,建立了适于玉米叶片DNA微量快速提取的新方法。该方法不仅操作步骤简单、速度快、省时间,而且可以确保提取的玉米基因组DNA有足够的浓度和纯度。利用此方法,在一般实验室条件下每人每天可以提取150～200个DNA样品,一个DNA样品可供50～60次PCR反应使用,DNA 质量可以确保一般的PCR扩增,适用于玉米遗传多样性、分子标记辅助选择、引物筛选和分子标记定位等多种研究目的。     

玉米叶片基因组快速提取方法研究

SSR(Simple Sequence Repeat)分子标记技术已经成为玉米常规育种某些性状辅助选择的重要手段,需要对大量个体样本进行标记分析。高效、快速提取植物组织基因组DNA是关键的技术环节。本研究以高油玉米回交世代群体25～30d单株幼叶为材料,建立以EDTA、CTAB、KCl为主要试剂,结合组织研磨棒液氮研磨为主要步骤的基因组DNA快速提取方法,并探讨了将提取的DNA应用于SSR分子标记辅助选择的可行性。     

改良Chelex-100法和CTAB法用于转基因抗草甘膦大豆检测效果的比较

以转基因抗草甘膦大豆为研究材料,分别采用改良Chelex-100法和常规CTAB法提取基因组DNA,以提取DNA的浓度和纯度,同时以PCR扩增大豆的内源基因(lectin)及外源特异性序列(CaMV35S,nos,Cp4-epsps)的效果对两种方法进行比较和评价.结果表明:虽然改良Chelex-100法DNA提取纯度不高,但是提取效率与常规CTAB法相当,而且改良Chelex-100法能够快速在1 h之内从大豆中提取DNA,所提取的DNA可以直接用于PCR扩增反应,PCR扩增产物电泳条带清晰.因此,改良Chelex-100法可以替代CTAB法提取DNA用于转基因检测,该方法具有经济、简便、快速的特点.     

一种同时适用于水稻种子叶片的简单快速DNA提取方法

本文报道了一种同时适用于水稻种子和叶片的简单快速DNA提取方法。该方法通过简单的碾磨、加热、离心等步骤便能制备适合PCR的DNA模板。用该方法单人每小时可以提取48个样品的DNA模板。本研究用该方法提IRT132个水稻种子DNA样品及1096个不同生长阶段的水稻叶片DNA样品,用13对PCR引物进行扩增,种子DNA样品PCR扩增成功率为91．0％,3个不同时期取材的叶片DNA样品PCR扩增成功率均在97．0％以上。该方法提取的DNA也可以进行高分辨率熔解曲线分析。     

水稻基因组DNA简易制备方法

介绍了一种用于PCR的水稻基因组DNA的快速制备方法。该方法只需将少量(1～50mg)样品、适量提取液(500μL)和一粒钢珠放入2mL离心管,在细胞破碎仪中粉碎2min,经离心后可直接取少量(约5μL)上清液作为PCR的模板DNA,也可进一步根据需要实现高质量DNA的提取。该方法具有成本低、操作快速简便等优点,一个人可以在10min内完成96份样品DNA的简易制备,特别适合高通量的分子检测。     

高效液相色谱法测定花生内源激素的改进研究

本实验以花生籽仁为材料,对提取、纯化和利用高效液相色谱法分析测定花生籽仁中内源激素生长素(IAA)、脱落酸(ABA)、赤霉素(GA)和细胞分裂素(6-BA)含量的方法进行改进,针对花生籽仁中脂肪、酚类含量高等特点,对以往的HPLC分析植物内源激素的植物材料前处理方法进行了改进。试材用液氮研磨后以80%预冷的甲醇浸提,提取液利用旋转蒸发仪浓缩,氯仿去除色素,乙酸乙酯提取激素,交联聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)去除酚类杂质,以甲醇和水为流动相,254nm吸收波长下检测内源激素含量。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳方法检测马铃薯类病毒技术的改进

利用往复聚丙烯胺凝胶电泳方法进行类病毒的检测 ,通过对电泳技术的改进和使用液氮研磨、加入皂土等方法改变核酸的提取 ,使该方法在检测灵敏性、准确性、操作性和可行性上都得到了提高 ,更有益于该技术的普及     

茶树修剪物对茶园土壤真菌群落多样性影响研究

茶树修剪物直接还田是茶园管理中常见的栽培措施。本文通过提取不同处理的土壤样品总DNA,以未处理土壤样品为对照,利用变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE）,研究添加茶树修剪物对茶园土壤真菌群落结构多样性的影响。结果显示,各处理土壤样品的DGGE图谱中发现许多公共条带,这些共有条带主要属于Pezizomycotina门、Basidiomycota门、Mortierellomycotina门和Mucoromycotina门;通过DGGE的条带数和亮度进行真菌群落多样性各项指标的比较,显示各处理的丰富度指数和香农-威纳指数均低于对照,表明茶树修剪物的降解产物和茶树本身固有的酚类物质对茶园的真菌群落有一定的抑制作用。