免疫亲和柱净化高效液相色谱法测定坚果中黄曲霉毒素

建立了免疫亲和柱净化高效液相色谱法测定坚果中黄曲霉毒素B1,B2,G1和G2总量。样品用甲醇—水提取,经免疫亲和色谱柱纯化,应用液相色谱法检测。试验结果表明:空白样品分别按照5.2,26,52μg/kg添加黄曲霉毒素,回收率为81.3%～96.0%,精密度<10%,黄曲霉毒素B1,B2,G1和G2的检测灵敏度分别为0.10,0.05,0.10,0.15μg/kg。免疫亲和柱净化高效液相色谱法测定坚果中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2总量,是一种简单、快速和准确的方法。     

高效液相色谱法测定谷物中黄曲霉毒素

样品经石油醚和甲醇水溶液提取后,部分甲醇水溶液用三氯甲烷提取,浓缩后用三氟乙酸衍生,C18色谱柱分离,荧光检测器检测。对添加三个浓度黄曲霉毒素的玉米样品进行加标回收试验,4种毒素B1、G1、B2、G2的回收率均在78.2%～103.6%之间,试验结果表明,此方法定量准确,精密度高,可用于黄曲霉毒素的检测。     

酶联免疫法(ELISA)测定月饼中黄曲霉毒素B_1

采用酶联免疫法对月饼中黄曲霉毒素B_1含量进行测定,并对该方法的线性、灵敏度、回收率和重现性进行验证;黄曲霉毒素B_1标准品在1.00~50.00 g/kg范围内线性良好,Y=-40.291C+88.365,R~2=0.998 4,该方法对黄曲霉毒素B_1的最低检出含量为1.00 g/kg,不同含量添加所得回收率为96.7%~105.0%,重复性好,精密度为1.96%。通过对9个不同产品特性月饼中黄曲霉毒素B_1的测定,发现所有样品均有检出,但黄曲霉毒素B_1的含量均小于5.00 g/kg。结果表明,酶联免疫检测方法测定快速、定量准确、重现性好,可高效率地定量检测大量市售月饼中黄曲霉毒素B_1的含量。     

黄曲霉毒素B_1检测能力验证分析

为确保实验室对黄曲霉毒素B1实验项目的检测能力,保证检测结果的可靠性,实验室在CNAS认可周期内参加了黄曲霉毒素B1能力验证活动。对能力验证的定义、目的、实施过程、统计方法及结果评价进行了介绍,并对黄曲霉毒素B1能力验证的测量结果进行了不确定度分析。黄曲霉毒素B1能力验证Z比分数为ZA=0.18、ZB=-1.35,能力验证获得满意结果。结果表明我中心黄曲霉毒素B1实验数据准确、可靠,CNAS认可项目有效。     

黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测试纸卡和仪器技术性能优化研究

基于时间分辨荧光微球制备的黄曲霉毒素B₁荧光定量快速检测试纸卡,通过两线及三线试纸卡灵敏度与重复性的对比,筛选出效果更优的三线试纸卡,并对三线试纸卡不同性能要求进行检测验证。结果表明,黄曲霉毒素B₁三线试纸卡检出限与定量限符合要求,准确度、重复性、稳定性等均达到更优的效果,更能满足检测需求。     

液相色谱串联质谱同时测定饲料中6种霉菌毒素技术研究进展

饲料中霉菌毒素是中国畜禽养殖业中存在的主要危害因素之一。在饲料中常见、且对动物健康造成严重损害的霉菌毒素有6种,即黄曲霉毒素B1、呕吐毒素、T-2毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、伏马毒素B1。笔者全面深入分析了国内外对这6种主要霉菌毒素检测技术的最新研究,对其方法过程和性能特点(提取剂、净化方法、定量方法、回收率等)进行了系统比较,为建立饲料中这6种霉菌毒素高效、经济、环境友好的同时检测技术标准提供经验。     

饲料中主要霉菌毒素液相色谱串联质谱同时测定技术研究进展

饲料中霉菌毒素是我国畜禽养殖业中存在的主要危害因素之一。在饲料中常见、且对动物健康造成严重损害的霉菌毒素有6种,即黄曲霉毒素B1、呕吐毒素、T-2毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、伏马毒素B1。本文全面深入分析了国内外对这6种主要霉菌毒素检测技术的最新研究,对其方法过程和性能特点(提取剂、净化方法、定量方法、回收率等)进行了系统比较,为我国建立饲料中这6种霉菌毒素高效、经济、环境友好的同时检测技术标准提供经验。     

利用计算机模拟分子对接技术探究粮食中黄曲霉毒素的毒理效应

黄曲霉毒素是一类化学结构类似的小分子化合物,均为二氢呋喃香豆素的衍生物,主要存在于土壤、动植物和各种坚果中,是霉菌毒素中毒性最大,对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素,而黄曲霉毒素的毒理机制始终不是很明确。计算机分子对接是模拟受体和底物之间通过能量匹配和几何匹配而相互识别的过程,其被广泛运用于虚拟筛选活性物质以及初步判断分子活性和毒性等领域,并对我们进行实体分子活性毒性试验起到了重要的指导作用。利用计算机分子对接软件Discovery Studio 3.1client,将6种常见黄曲霉毒素分子B1、B2、M1、M2、G1、G2与其具有强亲和性的蛋白进行虚拟对接实验,而这些蛋白在细胞凋亡、激素代谢、免疫抑制以及消化系统功能方面有重要的作用。通过本实验能够初步模拟黄曲霉毒素分子毒性作用位点,对于其毒理机制研究有重要的辅助作用。     

粮仓内稻谷及稻谷籽粒中黄曲霉毒素B1分布情况研究

研究了特定仓内稻谷黄曲霉毒素B1的分布以及稻谷的糙米、糠粉、精米中黄曲霉毒素B1的分布.结果表明:在粮仓内的各层和各点,稻谷中黄曲霉毒素B1的分布极不均匀,含量在0.8μg/kg～88.1μg/kg之间;稻谷籽粒中黄曲霉毒素B1主要分布在糙米的皮层(糠粉),占90%以上.     

酿造酱油生产过程中黄曲霉毒素的分析与控制研究

以大豆、小麦、麸皮等为原料,经过米曲霉等菌株发酵制成的调味品,酱油的整个生产过程都有污染黄曲霉毒素的可能。通过检测酱油生产过程中不同阶段半成品中黄曲霉毒素的总量,针对黄曲霉毒素的检测结果,分析其污染的原因,并实施相应的措施,控制黄曲霉毒素的污染。     

不同剂量黄曲霉毒素B1对奶牛瘤胃混合微生物发酵的抑制作用

(目的)本文通过体外发酵培养, 测定发酵液中pH、总挥发性脂肪酸、氨态氮、气体成分及各种纤维素酶活等指标,探讨黄曲霉毒素B1（AFB1）对瘤胃微生物代谢的影响。（方法）试验通过瘤胃微生物在体外静态培养中添加不同浓度的AFB1(0 μg/mL,0.1 μg/mL,1 μg/mL,10 μg/mL)后,检测培养体系中微生物的活性变化情况。（结果）试验结果表明AFB1对苜蓿发酵的抑制作用强于对玉米发酵的作用。添加AFB1会降低瘤胃中氨态氮浓度（p<0.05）; 总挥发性脂肪酸的产量也会随AFB1添加量的增加而减少,并且在玉米底物组中总挥发性脂肪酸产量高于苜蓿底物组32.1%%（p<0.05）;随着AFB1添加量的增多,乙酸、丙酸、丁酸和戊酸产量逐渐下降（p<0.05）,且高剂量二甲基亚砜（DMSO）的添加可导致苜蓿和玉米发酵生成的异戊酸摩尔比例分别升高30%和20%; 同时AFB1会减少甲烷的产量并且对羧甲基纤维素酶活和微晶纤维素酶酶活也有抑制作用（p<0.05）。（结论）说明随着黄曲霉毒素量的增大,瘤胃液中微生物的活性会受抑制,尤其是纤维性饲料的发酵。     

酶联免疫吸附法测定黄曲霉毒素B_1不确定度的评定

采用ELISA方法测定黄曲霉毒素B1,结合分析测试中测量不确定度及评定的方法程序,对测定过程中重复测量、工作曲线拟合、电子天平、酶标仪等引入的不确定度分量进行评定,计算出黄曲霉毒素B1的合成不确定度为8.57×10-2,有效自由度为5,扩展不确定度为0.22。结果表示为(9.69±0.22)ng/g。     

花生种子白藜芦醇含量与黄曲霉产毒抗性的关系

选用抗黄曲霉产毒的花生品种(系)和高产毒品种(系), 采用强产毒菌株AF2202人工接种水分吸涨的花生种子, 培养7 d后,测定接种和未接种的花生种子中白藜芦醇及黄曲霉毒素含量,探讨白藜芦醇与花生种子黄曲霉产毒抗性之间的关系。结果表明,抗黄曲霉产毒花生品种(系)的白藜芦醇含量较高,平均为37.3 µg kg^–1,高产毒品种含量相对较低,平均为13.3 µg kg^–1,抗、感品种之间存在显著差异。吸胀处理后抗产毒花生品种(系)白藜芦醇含量提高2.0倍,感病品种(系)仅提高1.6倍,对不同品种(系)处理后的种子二次接种,令黄曲霉毒素含量下降37.6%~75.8%,但吸胀处理后抗产毒品种(系)的黄曲霉毒素含量仍低于感病品种(系)。相关分析表明,花生白藜芦醇含量与黄曲霉毒素含量呈显著负相关,并且在离体培养基中添加浓度大于3.0 μg mL^–1的白藜芦醇可导致黄曲霉菌产毒量大幅下降,说明白藜芦醇对黄曲霉产毒具有抑制作用。     

九种植物精油对黄曲霉抑制作用的比较

为筛选高效抑制黄曲霉的植物精油，采用固体培养和液体培养相结合的方式从黄曲霉生长速率及延滞期、菌体超微结构、黄曲霉毒素B1合成量等方面比较了9种植物精油（川穹、肉桂、大茴香、安息香、丁香、香茅、芫荽、百里香、柠檬草精油）对黄曲霉的抑制效果。结果表明：肉桂精油的抑菌效果最强，对黄曲霉生长和产毒的抑制率达100%，其次为柠檬草、丁香、百里香精油，能使黄曲霉生长的延滞期从(0.02±0.01) d延长至(11.27±0.34)~(12.64±0.08) d，并使生长速率降低了91.43%~97.83%，黄曲霉毒素B1合成量下降了86.74%~88.40%，同时观察到这4种精油对黄曲霉菌丝体和孢子造成严重损伤，引起细胞塌陷收缩，内容物泄漏。说明肉桂、柠檬草、丁香、百里香精油能有效抑制黄曲霉类真菌，可用于食品中黄曲霉类真菌及其毒素的控制。     

黄曲霉毒素B_1标准溶液的制备和定值

对黄曲霉毒素B1（AflatoxinB1）标准溶液进行研制，结果表明：研制的AFTB1标准溶液具有良好的稳定性、均匀性，定位结果准确可靠。     

siRNA干涉技术在黄曲霉毒素抑制中的研究

构建真菌基因敲除突变体的传统方法周期较长,为了快速检测和高通量筛选具有特定功能的目标基因,本研究利用小分子RNA干涉技术,沉默了黄曲霉毒素生物合成关键基因,有效降低了黄曲霉毒素B₁(AFB₁)的生物合成。通过设计合成人工小干涉RNA(artificial siRNA),特异靶向黄曲霉毒素合成路径的关键基因aflR,将siRNA直接转化黄曲霉原生质体,有效沉默了黄曲霉毒素合成的关键调控基因aflR,并导致AFB₁的合成明显减少。利用特异靶向黄曲霉毒素合成路径中其他11个靶标基因的siRNAs,通过原生质体转化方法可直接沉默这些基因,沉默后这些基因的转录水平均显著降低,其中hypC和aflW两个基因沉默后AFB₁的生物合成量与对照相比下降显著。此外,利用特异靶向黄曲霉毒素合成基因簇外基因的siRNA,如pks-nrps基因,通过siRNA干涉技术沉默该基因同样可显著降低AFB₁的合成。因此,本研究借助小分子RNA干涉技术,建立了一种快速检测和高通量筛选黄曲霉毒素生物合成路径相关基因的反向遗传学方法。     

统计过程控制结合HACCP对苦荞饭中黄曲霉毒素防控的研究

应用统计过程控制（SPC）技术结合危害分析与关键控制点（HACCP）对苦荞饭生产过程中黄曲霉毒素污染进行有效防控，采用酶联免疫法测定黄曲霉毒素B1含量。以贵州某食品有限公司苦荞生产车间为例，确定生产过程中黄曲霉毒素污染的关键控制点为原料采收（CCP1）和加水造粒（CCP2），对这两个关键控制点进行SPC监控，通过控制图法分析确定影响质量波动的因素，提出相应的控制方法和控制参数，从原料、设备、仓库、人员4个方面提出了黄曲霉毒素的控制方法，并对控制效果进行评估。结果表明：SPC作为苦荞饭生产过程中黄曲霉毒素污染控制工具，原料采收阶段过程能力指数Cpk由0.28提升为1.62，加水造粒阶段过程能力指数Cpk由0.16提升为1.79，工序能力均提高到一级，不合格产品数量明显降低。     

农作物收获前黄曲霉毒素污染与控制措施

黄曲霉毒素(aflatoxin,AFT)是曲霉属真菌产生的一大类生物毒素,是危及食品安全和人类健康的主要物质之一。农产品收获前黄曲霉毒素污染是热带、亚热带地区普遍存在的问题,其中在玉米、花生、棉籽、辣椒籽和一些木本坚果及其产品中尤为严重。国内外现有研究结果表明,多种因素可影响作物收获前黄曲霉毒素污染,其中干旱和高温的综合胁迫是最主要的环境因素。作物抗性对降低毒素污染具有重要作用。综合运用分子生物学及常规育种技术改良作物品种对黄曲霉菌侵染或产毒的抗性以及对其他病虫害及干旱的抗(耐)性,是解决黄曲霉毒素污染问题的重要途径。作物生产过程中病虫害的防治和合理的田间管理是作物收获前黄曲霉毒素污染的有效防控措施。     

黄曲霉毒素B_1胁迫相关小鼠肝脏线粒体蛋白的初步研究

为了加强经黄曲霉毒素B1感染后肝脏线粒体差异表达蛋白的检测,以助于预防中毒的爆发和扩散,以黄曲霉毒素感染小白鼠,10周后提取小白鼠的线粒体蛋白,通过蛋白质双向电泳技术研究黄曲霉毒素对小鼠线粒体蛋白组差异表达的影响。双向电泳结果发现有31个蛋白质点发生显著变化,其中有新出现或明显上调的7个蛋白质点以及缺失的或明显下调的6个蛋白质点。这些点大多处于5.2~9.0pI值范围内,分子量处于8~165ku之间。据此推测,毒素可能通过改变这些蛋白表达量,从而影响线粒体的功能,进而对小鼠产生毒性作用。