龙荔基因组DNA的提取及ISSR-PCR体系的建立与优化

应用改良的CTAB法提取龙荔基因组DNA,探讨龙荔ISSR-PCR扩增反应体系的建立和优化。结果表明,经过改良的CTAB法提取龙荔基因组DNA效果良好,所提取的DNA纯度较高,符合ISSR-PCR反应的要求;龙荔ISSR-PCR最佳反应体系（反应总体积20μl）：1×Buffer缓冲液（含适量Mg^2＋）,1 UTaqDNA聚合酶,0.20 mmol/L dNTP,0.25μmol/L引物,DNA模板70-80 ng/μl,退火温度53-54℃。     

槟榔基因组DNA提取及ISSR反应体系的优化

以槟榔为试验材料,用改良的CTAB法提取基因组DNA,并设置不同梯度分别对每个PCR反应因子做了相应的试验.结果表明:改良的CTAB法提取的槟榔基因组纯度高、质量好;同时,建立了适合槟榔ISSR-PCR反应体系,即20μL PCR反应体积中,模板DNA浓度为30 ng/μL,浓度为2.5 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.0 U,dNTPs浓度为0.4 mmol/L,引物为浓度为0.8μmol/L.     

珙桐基因组DNA的提取及ISSR-PCR体系的优化

采用改良的CTAB法提取珙桐基因组DNA,并采用正交试验设计方法优化其ISSR-PCR反应体系。结果表明：改良CTAB法提取基因组DNA的质量符合ISSR-PCR扩增反应的要求。最佳反应体系为：20μL反应液中含有2.0μL10×buffer、2.75 mmol/L Mg^2＋、0.125 mmol/L dNTPs、0.7μmol/L引物、0.75 UTaq酶和40 ng模板;PCR反应参数为：94℃5 min;94℃30 s,53.2℃45 s,72℃1 min,共40个循环;72℃7 min。     

4种油松针叶DNA提取方法的比较

采用SDS法、简易提取法、高盐沉淀法和改良的CTAB法从油松(Pinus tabulaeformis)针叶提取基因组DNA,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法和PCR检测提取的DNA质量.结果表明,改良的CTAB法提取的油松针叶基因组DNA浓度和纯度高,适合用于ISSR-PCR分析,优于其他3种提取方法.     

槟榔基因组DNA提取及ISSR反应体系的优化

以槟榔为试验材料,用改良的CTAB法提取基因组DNA,并设置不同梯度分别对每个PCR反应因子做了相应的试验。结果表明：改良的CTAB法提取的槟榔基因组纯度高、质量好;同时,建立了适合槟榔ISSR-PCR反应体系,即20μLPCR反应体积中,模板DNA浓度为30ng/μL,Mg2＋浓度为2.5mmol/L,TaqDNA聚合酶1.0U,dNTPs浓度为0.4mmol/L,引物为浓度为0.8μmol/L。     

小桐子基因组DNA的提取及ISSR-PCR反应体系的优化

为从小桐子嫩叶中提取高质量的基因组DNA.采用改良CTAB法提取的基因组DNA通过OD260/OD280比值测定,琼脂糖凝胶电泳和ISSR-PCR扩增检测,结果表明改良CTAB法提取的DNA纯度高.可作为ISSR分子标记的模板.同时,采用正交设计的方法,对影响小桐子ISSR-PCR反应体系中的4个因素(引物、Taq DNA Polymerase、10xBuffer(含Mg2 )、dNTPs)在3个水平上进行优化试验.建立了适合小桐子的既稳定又能扩出最多数量谱带的ISSR最优反应体系,即20μl的反应体系中含有30ng模板DNA、0.2mmol/L dNTP、0.3 U Taq酶Polymerase、0.8μmol/L Primer、3.0hanoi/L10×Buffer(含Mg2 ).     

5种金边瑞香基因组DNA提取方法比较研究

[目的]研究不同提取方法对金边瑞香基因组DNA提取质量的影响,筛选最佳提取方法。[方法]以金边瑞香叶片为试材,以SDS法、改良CTAB法、SDS-CTAB法、高盐低pH法和尿素法5种方法提取基因组DNA,并从DNA纯度、浓度、酶切电泳结果和ISSR-PCR扩增产物电泳等方面进行比较分析。[结果]高盐低pH法和尿素法提取的金边瑞香基因组DNA富含蛋白质和多糖等杂质,DNA纯度低;SDS法提取的基因组DNA含有一些酚类物质和盐等杂质,DNA纯度较低;改良CTAB法提取的基因组DNA纯度较高,但浓度和产率低。SDS-CTAB法提取的基因组DNA纯度、浓度和产率最高,酶切和ISSR-PCR产物电泳检测效果最好。[结论]SDS-CTAB法提取的金边瑞香基因组DNA质量与产量最佳,可以满足后续分子生物学研究的需求。     

利用改良CTAB法提取卷丹百合鳞叶基因组DNA

为了获得高质量卷丹百合鳞叶基因组DNA,在传统CTAB法的基础上进行了改良和优化,筛选出较理想的DNA提取方法.结果表明:用改良CTAB法提取的卷丹百合鳞叶基因组DNA电泳条带清晰,无降解现象,D260 nm/D280 nm为1.6 ～1.9,用于ISSR-PCR扩增时其稳定性和可重复性都很好,说明DNA纯度和产率完全满足PCR扩增分析的要求.     

珠子参新鲜和干燥块茎DNA提取方法的比较研究

为探索提取新鲜和干燥珠子参根茎基因组DNA的最佳方法,分别采用CTAB法、改良CTAB法、改良SDS法和高盐低pH法分别提取新鲜和干燥的珠子参根茎DNA后,采用紫外分光光度计法、琼脂糖凝胶电泳和ISSR-PCR扩增检测DNA质量。结果表明,采用4种方法均可从珠子参根茎中提取出DNA,但提取效果差别较大。CTAB法提取的新鲜根茎DNA浓度最大为487.52 ng·μL~(-1),高盐低pH法提取的干燥根茎DNA浓度最低为92.63 ng·μL~(-1);改良CTAB法提取的DNA其A260/280值为1.92和1.76,其他方法提取的DNA其A260/280值均小于1.8。从新鲜根茎提取的DNA浓度高,纯度好,质量优于干燥根茎提取的DNA;对于干燥根茎采用改良CTAB法提取DNA效果最好,提取的DNA可用于后续ISSR-PCR实验。     

观光木基因组DNA提取方法的研究

观光木(Tsoongiodendron odorum Chun)植物体内酚类物质和蛋白质含量较高,影响了基因组DNA提取的产量。采用改良CTAB法对观光木基因组DNA进行提取,经过紫外吸收、琼脂糖凝胶电泳、ISSR标记和双酶切检测,结果表明,改良CTAB法提取的基因组DNA吸光值OD260/OD280为1.80～1.90,DNA无降解现象和杂质污染;ISSR-PCR扩增的条带多而且清晰;基因组DNA双酶切彻底。说明此方法提取的DNA质量较高,符合ISSR和AFLP标记对基因组DNA质量的要求。     

适于ISSR-PCR扩增的松毛虫基因组DNA的提取

为了方便稳定地获得松毛虫基因组DNA,寻找适合于松毛虫ISSR-PCR扩增的DNA的提取方法,分别用SDS-蛋白酶K法和CTAB法对松毛虫雌成虫进行基因组DNA的提取。结果显示:用SDS-蛋白酶K法提取的基因组DNA带型整齐,无降解,DNA得率和纯度都较高,操作简单无需纯化,用于ISSR扩增时其稳定性和重复性都很好;而用CTAB法提取出的DNA浓度低,杂质较多,琼脂糖凝胶电泳甚至检测不出,此方法提取的DNA作为ISSR反应模板时需要进行纯化。     

贵州石笔木DNA提取与ISSR-PCR反应体系的建立

[目的]利用ISSR技术对贵州石笔木的遗传多样性进行分析。[方法]以贵州石笔木种子、新鲜叶片和干燥叶片为试材,采用改良的CTAB法和SDS法提取贵州石笔木基因组DNA,并对提取DNA的浓度和纯度进行测定。通过单因子梯度试验,筛选出优化、稳定的ISSR-PCR反应体系。[结果]利用CTAB法和SDS法从石笔木叶片中提取DNA时,鲜叶和干燥叶片提取的DNA质量和浓度略有差别,CTAB法提取的浓度稍大而蛋白残留稍多,SDS法提取的DNA量稍少但质量最高。而从种子中提取的DNA无论质量还是浓度均较差,但尚可满足ISSR分子标记试验。贵州石笔木的适宜ISSR-PCR反应体系为2μl的10×Buffer,模板DNA 40 ng,dNTP 0.25 mmol/L,Taq酶1 U,引物0.2μmol/L,总体积为20μl。[结论]该ISSR技术体系适用于贵州石笔木遗传多样性分析。     

龙牙百合DNA的提取及ISSR-PCR体系的建立

[目的]研究龙牙百合总DNA的提取方法,建立优化的ISSR-PCR反应体系和程序,为种质资源研究奠定基础。[方法]利用改良的CTAB法提取龙牙百合基因组DNA,并对影响ISSR扩增反应的各因素进行优化。[结果]获得了高质量的龙牙百合基因组DNA;优化的龙牙百合ISSR-PCR反应体系为,25μl体系中含60 ng模板DNA,0.4μmol/L ISSR引物,2.0 mmol/L Mg2+,1.5 UTaq酶,0.2 mmol/LdNTPs;反应程序为,94℃预变性5 min;然后进行40个循环:94℃变性50 s,52℃复性45 s,72℃延伸75 s;循环结束后72℃延伸8 min。[结论]建立了适合于龙牙百合的ISSR-PCR反应体系及程序,为种质资源研究奠定了基础。     

浙江红山茶总DNA提取及ISSR-PCR引物筛选

[目的]筛选出简易的DNA提取方法及适合于所有浙江红山茶种质材料进行ISSR分析的有效引物。[方法]采用改良的CTAB法提取基因组DNA,参考其他山茶科植物的50个ISSR引物,对来自浙江、福建、江西、安徽10个居群中共20份浙江红山茶种质材料进行了PCR扩增。[结果]改进的CTAB法可简单、快速地提取到高纯度DNA产物;筛选出的20条引物多态性丰富、条带清晰且可重复性良好。共扩增出337条DNA谱带,其中281条为多态性带,占总扩增带数的83.4%,平均每个引物扩增出16.85条谱带。[结论]所筛选的20条引物可有效应用于浙江红山茶种质资源材料的ISSR分析。     

浙江红山茶总DNA提取及ISSR-PCR引物筛选

[目的]筛选出简易的DNA提取方法及适合于所有浙江红山茶种质材料进行ISSR分析的有效引物。[方法]采用改良的CTAB法提取基因组DNA,参考其他山茶科植物的50个ISSR引物,对来自浙江、福建、江西、安徽10个居群中共20份浙江红山茶种质材料进行了PCR扩增。[结果]改进的CTAB法可简单、快速地提取到高纯度DNA产物;筛选出的20条引物多态性丰富、条带清晰且可重复性良好。共扩增出337条DNA谱带,其中281条为多态性带,占总扩增带数的83.4%,平均每个引物扩增出16.85条谱带。[结论]所筛选的20条引物可有效应用于浙江红山茶种质资源材料的ISSR分析。     

黔产苦参ISSR-PCR反应体系正交优化研究

[目的]确定适合苦参稳定的ISSR-PCR反应体系。[方法]采用经典的CTAB法提取苦参新鲜幼嫩叶片DNA;针对Mg2+、d NTPs、引物、模板DNA和Taq DNA聚合酶进行正交设计L_(16)(4~5),优化黔产苦参ISSR-PCR反应体系。[结果]最适ISSR-PCR反应体系为:模板DNA 90 ng、0.4μmol/L引物、2.0 mmol/L Mg~(2+)、TaqDNA聚合酶0.5 U、0.5 mmol/L d NTPs。[结论]建立的苦参ISSR-PCR反应体系,经过19份苦参样品检验,证明该体系稳定可靠,可用于苦参遗传多样性分析。     

水稻DNA快速提取及RAPD分析体系的优化

以水稻幼苗为材料,比较了3种不同DNA提取方法,获得了一种以CTAB法为基础的DNA的简便、快速提取方法,并对RAPD反应体系进行了优化。结果表明,改良CTAB法所提取的DNA产量高、质量好,完全能够满足RAPD分析的要求。通过对DNA模板、Mg2+、dNPT、Taq DNA聚合酶浓度等因素的试验,对水稻RAPD分析体系进行了优化。新建的分析体系扩增谱带清晰、多态性强,稳定性好。     

诺丽叶片DNA的提取及ISSR-PCR 反应体系的建立

[目的]提取诺丽（Morinda citrifoliaLinn.）叶片DNA,并建立ISSR-PCR反应体系。[方法]以3份采自海南、4份采自美国的诺丽种质的叶片为材料,对其DNA提取和ISSR分子标记方法进行了研究。[结果]采用改进的CTAB DNA微量提取法,可以得到高质量的诺丽叶片基因组DNA。用14条不同的ISSR引物对所提取的诺丽基因组DNA进行了ISSR分子标记分析,其中7条引物在诺丽DNA中可扩增出多态性产物。[结论]建立了诺丽叶片基因组DNA快速、高效的提取方法和ISSR标记体系,可为ISSR分析应用于诺丽遗传研究奠定良好的基础。     

胡萝卜ISSR反应体系优化的研究

以改良CTAB法提取胡萝卜基因组DNA作为ISSR-PCR模板,通过单因素试验建立了一套适合胡萝卜ISSR-PCR的优化的反应体系,即25μL反应液中含10×buffer2.5μL,2.0mmol.L-1Mg2＋,200μmol·L-1dNTPs,Taq酶1.5U,引物0.5μmol·L-1,DNA模板20ng。PCR扩增程序为：94℃预变性4min,94℃变性40s,48～58℃退火45s,72℃延伸2min,进行35个循环,72℃延伸8min,在16℃保存。应用该优化反应体系筛选出了24条有效引物。