AMETH_3452基因在拟无枝酸菌中的系统发育分析

AMETH_3452基因是拟无枝酸菌(Amycolatopsis)中发现的一个放线菌的保守基因,位于拟无枝酸菌属中的环形基因组中间位置。为进一步探究该基因的序列特征并挖掘该基因的应用潜力,本研究将该基因构建在pET28载体上,在大肠杆菌中进行表达,使用蛋白预测网站进行了二级结构和保守区分析,对其直系同源基因在拟无枝酸菌属进行了系统发育分析。AMETH_3452蛋白在大肠杆菌的上清液中可溶性表达。该基因在拟无枝酸菌属的核酸同源性为79.23%~99.02%,在300~500 bp的序列一致性较高。该蛋白序列共269个氨基酸,作为分子标记在76个拟无枝酸菌中进行系统发育分析后发现,东方拟无枝酸菌分支和甲基拟无枝酸菌分支稳定性高,同时可将东方拟无枝酸菌分支分成AORIS和AMEDS 2个可稳定的分支。以上研究将为AMETH_3452基因作为检测环境、动物或临床上的放线菌或系统发育应用研究提供依据。     

基于ICP-MS的拟穴青蟹蜕壳期前后蟹肉Ca2+、Mg2+浓度变化研究

采用石墨微波消解技术处理拟穴青蟹(Scylla paramamosain)蟹肉样品,ICP-MS同时测定Ca、Mg两种元素,标准曲线相关系数均≥0.995,前处理耗时短,消解效果良好。结果表明,拟穴青蟹在硬壳期时体内Ca2+、Mg2+平均含量为471、2 508 mg/kg,而蜕壳后分别为385、1 565 mg/kg,拟穴青蟹蜕壳前后Mg2+浓度差异不显著、Ca2+浓度差异显著。因此,为使拟穴青蟹生长过程中甲壳顺利蜕壳及硬化,建议在养殖池中合理补充Ca2+、Mg2+。     

金属离子对蜜蜂球囊菌几丁质酶活力的影响

探讨了不同金属离子对蜜蜂球囊菌几丁质酶活力的影响.结果表明:在0-100 mmol.L-1范围内,一价金属离子Na+、K+随离子浓度的增大,对几丁质酶活力的影响表现为先促进后抑制;在1-10 mmol.L-1范围内,二价金属离子Mg2+、Mn2+起抑制作用,Zn2+基本没有影响,Ca2+、Fe2+起促进作用;在1-10 mmol.L-1范围内,三价金属离子A l3+起促进作用,Fe3+基本没有影响.     

玉米丝黑穗病菌RAPD分析的引物筛选

采用CTAB法提取了玉米丝黑穗病菌DNA,研究了RAPD最佳优化条件,确定为20μL体系中10×buffer 2μL,25 mmol/L MgCl22μL,dNTP 0.5μL,DNA模板2μL,引物2μL,Taq 0.4μL(5 U/μL),ddH2O 11.8μL,并为玉米丝黑穗病菌RAPD分析筛选出了9个单引物和3个双引物。     

2株内生拮抗细菌对灰霉病菌的抑菌活性研究

采用对峙培养法检测了2株内生拮抗细菌对灰霉病菌菌丝生长的影响,并观察了其发酵液对灰霉病菌孢子萌发及病菌生长的影响,同时测定了其发酵液、细菌悬浮液以及高温处理的发酵液在离体黄瓜上对灰霉病菌生长的抑制作用。结果表明：2菌株能强烈抑制灰霉病菌生长,其发酵液也能明显抑制病菌孢子的萌发和生长,且发酵液高温处理后仍具有较高的抑菌活性。在离体黄瓜片上检测菌株对灰霉病菌的抑制效果,结果表明,2菌株发酵液及其细菌悬浮液均能较好地抑制灰霉病菌生长。     

外源Ca2+、Mg2+、Cu2+和吖啶黄素对刺梨果实维生素C合成的影响

【目的】研究二价金属离子和传统抑制剂对刺梨果实维生素C合成的调控作用。【方法】以‘贵农5号’刺梨为材料,采用离体喂饲和活体注射相结合的方法,研究Ca2+、Mg2+、Cu2+等二价金属离子及吖啶黄素、石蒜碱等有机抑制剂对刺梨果实半乳糖内酯脱氢酶（GalLDH）活性和维生素C（AsA）合成的影响。【结果】Ca2+、Mg2+两种离子对初纯化的GalLDH酶活性有一定的促进作用,Cu2+则显著抑制其活性;当用金属离子与AsA合成底物半乳糖内酯（GalL）共同喂饲果肉时,Ca2+、Mg2+两种离子未有效促进AsA合成,Cu2+处理下的刺梨果肉中AsA含量甚至显著降低;在刺梨果实发育过程中,注射Ca2+对活体果实AsA合成有明显促进作用,Mg2+的作用不明显,而Cu2+依然表现出对AsA合成的抑制作用。吖啶黄素能抑制初纯化GalLDH酶液约70%的活性,而石蒜碱的抑制作用较小（约30%）,但两者在离体喂饲处理中对AsA合成表现出相似的抑制效果;活体注射处理时,吖啶黄素在处理后期对AsA合成表现出较明显的抑制作用,石蒜碱则无此效应。【结论】外源增Ca2+可促进刺梨果实AsA合成和积累,而Cu2+和吖啶黄素则有抑制作用。     

Ca2+对杜仲愈伤组织诱导及增殖效应的影响研究

以杜仲(Eucommia ulmoides)幼茎为外植体,进行杜仲愈伤组织诱导、增殖实验。在培养基中添加不同浓度的Ca2+进行筛选实验,以确定诱导、增殖培养基中的最佳Ca2+浓度。结果表明适度增加Ca2+浓度,可促进杜仲愈伤组织的诱导和增殖,并能改善愈伤组织的生长状态,增加愈伤组织增殖生长量。但若Ca2+浓度超过12.0 mmol/L,促进效果减弱。     

纤维素降解菌协同效应与粗酶液影响因素

高效微生物菌系和适宜反应条件是纤维素生物转化的关键。试验以前期分离获得的纤维素降解菌为基础,研究了降解菌之间的协同效应和粗酶液性质。结果表明,降解菌之间存在协同效应,其中X2与X5混合培养产酶能力达到了0.66 U.mL-1,比单一降解菌酶活力提高了将近1倍;其粗酶液最适反应温度和pH值为25℃和5.0;金属离子络合剂EDTA对酶活力的抑制效果较为明显;Ca2+和Mn2+是粗酶液的激活剂,在研究浓度范围内能够显著提升酶活力。研究结果为纤维素的生物转化提供了重要种质资源和技术参数。     

小麦赤霉病菌拮抗菌XG-6的分离鉴定及其应用

小麦赤霉病是发生在禾谷类作物上十分严重的一类病害,对我国麦类作物的生产影响巨大.病原菌产生的有毒物质DON(脱氧雪腐镰刀菌烯醇)等危害人畜健康,导致小麦产品产量及质量都大幅度下降,进而导致巨大的经济损失.合理开发利用小麦内生菌是一种高效、实惠的赤霉病生物防治方法.研究旨在从小麦内生菌中鉴定得到小麦赤霉病拮抗菌,并对其生长条件进行优化.以湖北荆州市荆州区农高区小麦赤霉病发病地区扬花期健壮的小麦植株为试验材料,通过平板对峙法从小麦根、茎、叶中筛选出7株对禾谷镰刀菌具有拮抗性的内生菌株,其中拮抗能力较高的是XG-6菌株,抑菌圈直径达到31.19 mm.XG-6菌株对火龙果炭疽病菌、棉花立枯病菌、白绢病菌、梨黑斑病菌4种常见病原菌均有抑制效果,表现为广谱拮抗活性,对火龙果炭疸病菌的抑制效果最好;在接种到营养琼脂培养液后的24h内为对数期,24～72h内为稳定期,72h后进入衰退期;菌株适宜生长温度为25～30℃,适宜生长pH为6～9;对氯霉素、氨苄西林钠2种抗生素表现出极强的耐药性;XG-6菌株的16 S rDNA序列含有1509个碱基,根据BLAST比对结果,所分离得到的XG-6菌株认定为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens.     

164株大肠埃希菌耐药性分析

目的分析临床分离的大肠埃希菌株耐药性,为合理选用抗生素提供依据.方法根据NCCLS推荐使用的常用抗生素,采用Kirby-Bauer法检测164株大肠埃希菌对8种抗生素耐药性.结果164株大肠埃希菌耐2～4种抗生素居多,少数菌株可耐5～8种抗生素;对氧哌嗪青霉素、氨苄青霉素、复方磺胺、四环素、诺氟沙星的耐药率分别为45%、39%、32%、30%和24%.讨论大肠埃希菌耐药严重,多重耐药现象普遍,应引起临床高度重视.     

Al~(3+)和Al~(3+)胁迫下Ca~(2+)对小麦幼叶细胞生理功能及保护酶活性的影响

采取水培法分别研究了不同水平的Al3+和在同一水平的Al3+胁迫下不同水平的Ca2+对小麦(Triticum aestivum L.)幼苗地上部分高度、叶片叶绿素含量和净光合速率、保护酶活性、脂质过氧化(MDA含量)和膜透性(电解质泄漏率)的影响.结果表明,随营养液中Al3+水平的增加和处理时间的延长,小麦幼苗地上部分的伸长生长受抑制的程度逐渐加深,叶片叶绿素含量和净光合速率及保护酶活性逐渐下降,MDA含量和电解质泄漏率逐渐上升.Al3+胁迫下,增加Ca2+供应时,Al3+的上述影响被削弱.这些结果暗示,Al3+处理抑制小麦幼苗地上部分的伸长生长及其对光合功能的影响与导致膜质过氧化作用加剧、膜透性增加、保护酶活性下降等有关;在一定程度上,Ca2+具有缓解Al3+毒害作用.     

Mn2+对菌株Y57生长及合成冠毒素的影响

研究了锰离子对冠毒素产生菌Y57生长和产冠毒素的影响,结果表明,在培养基中添加适量锰离子可促进菌株的生长及其冠毒素产量提高,锰离子适宜浓度为1.5 mmol/L,可使冠毒素产量提高38%。     

Ca2+和Sr2+联合处理对油菜抗氧化酶活性的影响

[目的]为了了解环境介质中同时存在Ca2+和Sr2+2种离子时油菜幼苗的抗氧化酶活性的变化。[方法]在石英砂和Hoagland营养液培养体系中,用浓度为0、10、20和40 mmol/L SrCl2及浓度为0、5和10 mmol/L Ca(NO3)2处理3叶龄油菜幼苗。在处理0、7、14和21 d后,分别取样测定POD、CAT和SOD的活性。[结果]在相同的Sr2+浓度下,随着Ca2+浓度的增加,POD活性增加,Ca2+明显缓解Sr2+对油菜幼苗的毒害作用。[结论]该研究从抗氧化角度初步阐明油菜具有较高富集Sr2+能力的机理,为利用油菜对锶污染环境进行植物修复提供理论依据。     

普鲁兰短梗霉N2-3菌株碱性蛋白酶的纯化及性质研究

[目的]对普鲁兰短梗霉N2-3菌株的碱性蛋白酶进行纯化,并对其性质进行研究。[方法]利用层析柱Sephadex G-75与阴离子交换柱DEAE Sepharose Fast Flow纯化菌株N2-3的胞外碱性蛋白酶,并对纯化的酶进行SDS-PAGE凝胶电泳检测,同时对纯化蛋白酶的最适反应温度、温度稳定性、最适反应pH、pH稳定性进行测定,研究金属离子及各种化合物对蛋白酶活性的影响。[结果]试验中N2-3菌株的碱性蛋白酶纯化倍数和回收率分别为2.34和25.9%;SDS-PAGE凝胶电泳显示该酶的分子量约为33 kDa;该酶的最适反应温度和pH分别为52℃和9.0;Mn2+、Mg2+、Na+离子浓度在5 mmol/L时对纯化蛋白酶的酶活有激活作用,Zn2+、Ca2+、K+、Li+对酶活的影响不大,而当存在Fe2+、Fe3+、Cu2+、Co2+、Ag+、Hg2+离子时,蛋白酶活明显降低;苯甲基硫酰氟(PMSF)强烈抑制了该蛋白酶的活性,而乙二胺四乙酸(EDTA)与碘乙酸微弱抑制了该蛋白酶的活性。[结论]为普鲁兰短梗霉N2-3菌株碱性蛋白酶的工业化生产提供了一定的理论基础。     

外源淀粉酶和金属离子对烘烤中烤烟‘KRK26’上部叶淀粉酶比活力和淀粉降解的效应

目的1探究外源淀粉酶和ca26‘、Mn2＋、K＋对烘烤中烤烟‘KRK26’上部叶淀粉酶比活力和淀粉降解的效应。【方法】用分光光度法检测烟叶的淀粉酶比活力和淀粉含量。【结果】8U／g用量的外源α-淀粉酶能在变黄和定色阶段提高烟叶α-淀粉酶的比活力,但在干筋阶段不能,80 U／g用最的外源β．淀粉酶类似地能在变黄阶段和定色早期提高烟叶β．淀粉酶的比活力：烟叶淀粉的降解被外源α-或β-淀粉酶强化。前者的效果优于后者的。1．50mg／ml Ca2＋主要因其对烟叶α-淀粉酶的强化效应而强化烟叶总淀粉酶的比活力,并促进的淀粉降解。4mmol／LMn2＋在变黄至定色早期抑制烟叶α-淀粉酶、在变黄至定色晚期抑制烟叶β-和总淀粉酶,但在定色晚期至干筋早期促进烟叶α-淀粉酶、在于筋晚期促进娴叶β-和总淀粉酶。同时,Mn2＋在变黄阶段妨碍淀粉降解,但在定色早期至于筋期促进。1mg／ml K＋在变黄阶段提很高烟叶α-、β-。和总淀粉酶比活力、但在定色早期至于筋晚期降低,并总是抑制淀粉降解。【结论】适当浓度的外源淀粉酶和Ca2＋能用于在烘烤前处理烤烤叶片以促进叶片淀粉在烘烤中的降解。     

Ca~（2＋）对蚕豆种子萌发及根生长的影响

[目的]研究不同浓度Ca2＋对蚕豆种子萌发、根长以及根尖细胞有丝分裂的影响。[方法]用不同浓度的CaCl2溶液培养蚕豆种子,以蒸馏水培养为对照,统计不同处理下蚕豆种子萌发率;测量根长;根尖固定、染色、压片后进行观察,计算有丝分裂指数。[结果]1.0～5.0 mmol/L Ca2＋对蚕豆种子萌发没有影响,当Ca2＋浓度超过10.0 mmol/L后,随着Ca2＋浓度的增高,蚕豆种子萌发速率降低,但对最终萌发率没有影响;1.0～10.0 mmol/L Ca2＋能不同程度地促进蚕豆根生长和细胞分裂,其中5.0 mmol/L Ca2＋处理的蚕豆根长和有丝分裂指数最高,之后随着Ca2＋浓度的继续增高,根生长和细胞分裂速度开始下降,甚至受到抑制。[结论]Ca是植物体生长的必需元素,但Ca2＋浓度过高不利于植物生长发育,这为合理施用钙肥提供了科学依据。     

热胁迫对葡萄叶片中蛋白激酶活性的影响

 以葡萄品种京秀（Vitis vinifera L. cv. Jingxiu）一年生扦插苗为试材，40℃高温处理30 min，并以25℃为对照，采用体外底物磷酸化方法对叶片中蛋白激酶的活性进行了测定。结果表明，热胁迫处理后，叶片中蛋白激酶在底物髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein，MBP)浓度为0.5 mg·ml-1时，其活性达到最大(7 678.7 cpm)，而后随底物浓度的进一步增加，其活性下降。Mg2+浓度为5 mmol·L-1时，蛋白激酶活性达到最大(8 165.8 cpm)。Ca2+对蛋白激酶活性的影响极弱，Mn2+对蛋白激酶活性的激活没有影响。ATP浓度为50 μmol·L-1时，蛋白激酶的活性最大（7 900.9 cpm），比对照高4.7倍。在以组蛋白-Ⅲ（histone-Ⅲ）为底物时，蛋白激酶的活性很微弱，且Mg2+和Ca2+对蛋白激酶有极弱的激活作用。     

外生菌根真菌Paxillus involutus吸收Cd2+及H2O2对Cd2+内流的调控作用

目的本文研究了外生菌根真菌Paxillus involutus对Cd2+的吸收作用以及H₂O₂对Cd2+内流的调控作用。方法以Paxillus involutus的2种菌株MAJ和NAU为研究材料,利用50 μmol/L CdCl₂对材料进行24 h处理,应用非损伤微测技术测定菌丝的Cd2+和Ca2+离子流。结果结果显示,Cd2+处理后,MAJ和NAU菌丝的Cd2+内流增强,同时也显著促进了Ca2+的内流。Ca2+通道抑制剂(Verapamil、GdCl₃、TEA)处理后,Cd2+和Ca2+内流强度均明显减弱,表明Cd2+是通过钙通透性离子通道(CaPCs)进入菌丝细胞的。Cd2+处理促进了Cd2+和Ca2+的内流,很可能是Cd2+激活了菌丝质膜的CaPCs。Ca2+和Cd2+的竞争性实验结果显示,高浓度的Ca2+抑制菌株MAJ和NAU的Cd2+内流;反过来,测试液中Cd2+浓度的提高也明显降低了Ca2+的内流强度,这证明Ca2+和Cd2+是竞争性地通过CaPCs进入菌丝细胞的。此外还发现,H₂O₂(1.0 mmol/L)能增强菌丝的Cd2+和Ca2+内流,而ROS清除剂DMTU却显著抑制了菌株对Ca2+和Cd2+的吸收,表明H₂O₂在调控菌丝细胞CaPCs介导Cd2+内流的过程中具有重要作用。结论 综上,外生菌根真菌Paxillus involutus对Cd2+具有富集作用并且可以通过H₂O₂激活CaPCs促进Cd2+内流。      

不同钾钙水平对白三叶草和黑麦草产量与品质的影响

运用溶液培养方法研究了不同钾、钙营养水平对白三叶草和多年生黑麦草产量和品质的影响及钾、钙含量间的相互关系。这两种牧草在完全无钾溶液中不能正常生长,溶液钾浓度从0.375～3.0mmol/L,多年生黑麦草干物质产量略有上升,而白三叶草产量没有显著变化,对粗蛋白质含量影响也不明显。表明外液钾浓度达0.375mmol/L就已满足两种牧草生理上的要求。完全无钙时,两种牧草干物质产量很低,白三叶草表现更明显,比0.4mmol·Ca/L处理的低30和以上,说明白三叶草对缺钙更敏感。白三叶草产量在钙浓度为1.0 mmol/L时最高,钙浓度0.4～2.5mmol/L,对多年生黑麦草产量和品质影响不明显。地上部钾含量与钾供应水平呈正相关,与外界钙浓度相关性很小;而钙含量与钾供应水平呈负相关,与钙供应水平呈正相关。     

南极磷虾体内胰蛋白酶的纯化及性质研究

以南极磷虾(Euphausia superb)为研究对象,通过硫酸铵分级沉淀、Phenyl-Sepharose疏水层析、DEAE-Sepharose FF离子交换层析等方法,从南极磷虾体内分离纯化出胰蛋白酶。其纯化倍数为5.44倍,比活力为38.3 U/mg,得率为26%。SDS-PAGE电泳结果显示,该酶的分子质量为28 ku。蛋白酶最适温度为37℃、最适pH为7.5,Mg2+、Ca2+、Mn2+对南极磷虾蛋白酶具有激活性,Zn2+、Cu2+、Fe3+具有酶活抑制性,其中Cu2+的抑制性最强。酶的动力学实验结果表明,以BApNA为底物测得Km为0.073 mmol/L,Vmax为1.44×10-2mmol/L·s,kcat为0.6S-1,kcat/Km为8.22×103,PMSF作为蛋白酶抑制剂,对南极磷虾蛋白酶作用机制为不可逆抑制。