检疫性柑橘冬生疫霉和丁香疫霉的三重 PCR 同步检测

全世界危害柑橘的疫霉有14种,其中冬生疫霉Phytophthora hibernalis和丁香疫霉Phytophthora syringae为我国规定禁止进境的两种检疫性柑橘真菌病害,目前尚未见有此两种病原菌的同步分子检测报道.该研究根据14种柑橘疫霉的18SrRNA,ITS,heat shock protein 90(HSP 90)等基因分别设计了疫霉属的通用引物和此两种检疫性疫霉的特异引物,通过进行反应体系优化,建立了同时检测柑橘上两种检疫性疫霉的特异三重PCR检测方法,并进行了灵敏度试验.用15个柑橘疫霉菌株与甜橙的混合DNA做模板进行模拟带菌试验,结果表明该三重PCR分子检测能实现两种检疫性疫霉菌的同步特异检测,这两种检疫性柑橘疫霉提供了特异、可靠、便捷、适于口岸应用的检测方法,可有效促进柑橘类水果的快速通关.     

菠萝心腐病原疫霉种的鉴定

 1997～2000年,从广州及其周边地区的菠萝心腐植株上分离得到疫霉菌8株,鉴定出3个种,即柑桔褐腐疫霉(Phytophthora citrophthora)1株,烟草疫霉(P.nicotianae)5株和棕榈疫霉(P.palmivora)2株。     

贮藏柑桔上疫霉种的鉴定

1998年至2000年,从广州地区的贮藏柑桔病果上分离得到7株疫霉菌,鉴定出3个种,其中,柑桔褐腐疫霉Phy-tophthora citrophthora(Smith et Smith)Leon4株,柑桔生疫霉P.citricola Saw2株,烟草疫霉P.nicotianae Bread de Haan1株;建议在柑桔贮藏保鲜时,适当地将百菌清或酰苯胺类杀菌剂与常用的苯并咪唑类杀菌剂混合使用来处理果实,以控制疫霉菌的为害。     

贮藏柑桔上疫霉种的鉴定

1998年至2000年,从广州地区的贮藏柑桔病果上分离得到7株疫霉菌,鉴定出3个种,其中,柑桔褐腐疫霉Phytophthora citrophthora (Smith et Smith) Leon 4株,柑桔生疫霉P. citricola Saw 2株, 烟草疫霉P. nicotianae Bread de Haan 1株;建议在柑桔贮藏保鲜时,适当地将百菌清或酰苯胺类杀菌剂与常用的苯并咪唑类杀菌剂混合使用来处理果实,以控制疫霉菌的为害.     

甘肃白兰瓜、西瓜疫霉种的鉴定研究

从甘肃白兰瓜、西瓜上分离出15株疫霉,鉴定出两个种:掘氏疫霉Phytophthoradrechsleri Tuckcr,辣椒疫霉P.capsici Lconian。分离物经过配对培养,均可产生性器官,10株掘氏疫霉为A_1交配型,5株辣椒疫霉为A_2交配型。     

广州地区茄疫病的发生及疫霉种鉴定

 1987～1999年,从广州地区茄的果实、茎、叶及根上分离得到疫霉菌,根据形态特征、培养性状及生理特性等方面研究结果,鉴定出4个种,其中以辣椒疫霉Phytophthora capsici Leon较为普遍,烟草疫霉P.nicotianae Van Breda de Haan次之, 掘氏疫霉P.drechsleri Tucker较少出现,致病疫霉P.infestans (Montagne) de Bary 仅见于春季;此外,种群分布与前作及不同季节有关。     

烟草疫霉两个变种的划分及疫霉属几个生物学性状的研究

本文基于对福建、浙江、江苏、上海等地9个种、51个疫霉菌株的分类研究结果,着重探讨疲霉属中烟草疫霉(phytophthora nicotianae)种内两个变种的划分,温度反应、脱落孢子囊孢囊柄长度等性状在种的鉴定中的作用,以及配对试验中交配菌株种的配对组合与藏卵器大小的关系。指出:单纯根据形态特征无法区分烟草疫霉的两个变种,因而不宜再使用P.nicotianae var.nicotianae和P.nicotianae var.parasitica这二个变种的名称;温度反应是一个不稳定性状,在种的鉴定中只能作为参考依据,菌丝最适、最低生长温度对种的鉴定作用不大;孢囊柄长度性状是稳定的,在种的鉴定中应受到重视。     

花椒流胶病病原疫霉种的鉴定

自花椒流胶病病组织中分离得到３个疫霉菌株，致病性测有明，３株疫霉对花椒致病性极强，对柑桔不致病。根据其形态特征和生物学特性，并与柑桔褐腐疫霉标准菌株菌丝可溶性蛋白电泳图谱比较，这３株花驻胶病病原疫霉为柑桔褐腐疫霉ＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｃｉｔｒｏｐｈｔｈｏｒａＬｅｏｎｉａｎ。     

北京水系中腐霉和疫腐霉种类调查

为研究北京地区水系中腐霉和疫腐霉种类分布,采用叶饵法从北京水系中诱集菌株,共分离到腐霉、疫腐霉182株,利用Single-strand conformation polymorphism (SSCP)进行分析,筛选出不同基因型的代表菌株,并依据形态学特征及ITS序列对这些菌株进行种类鉴定。结果共发现6个已知种和3个可能的新种,其中:湖滨疫腐霉Phytopythium litorale和果胶裂解腐霉Pythium pectinolyticum为国内新记录种;旋柄疫腐霉Pp.helicoides、异丝腐霉P.diclinum、簇囊腐霉P.torulosum和袋囊腐霉P.marsipium为北京地区新记录种。研究结果可为未来监测北京地区水系中病原菌的分布情况提供基础数据。     

花椒疫霉病菌种的鉴定

依据菌落特征、无性与有性繁殖体形态、rDNA-ITS系统发育及病菌的致病性,将分离自陕西、甘肃花椒树干基部腐烂病斑上的疫霉菌(Phytophthora spp.)6个菌系鉴定为3个种:采自甘肃陇南菌系Pwm、Pwb和陕西凤县菌系Pfs2均属于多寄主疫霉(P.multivoraP.M.Scott & T.Jung),陕西凤县菌系PfP和甘肃秦安菌系Pqy为柑橘褐腐疫霉(Phytophthora citrophthora R.E.Sm.& E.H.Sm.),采自陕西凤县的疫霉菌菌系Pfs1为苎麻疫霉(Phytophthora boehmeriae Sawada).各疫霉菌系的形态学鉴定及致病性测定结果与其rDNN-ITS系统发育分析基本一致.     

广州地区九种花卉疫病病原种的鉴定

从广州地区采集月季、杜鹃、卡特利利亚兰、康乃馨、蒲包花、长春花、一品红、百合和绿巨人共９种花卉疫病标本,根据病原菌性和无性形态特征,结合生长温度和菌体可溶性蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳,将它们分别鉴定为：Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｉｔｒｉｃｏｌａ Ｓａｗａｄａ（为害月季）、Ｐ．ｃｉｔｒｏｐｈｔｈｏｒａ（Ｒ．Ｅ．Ｓｍｉｔｈ＆Ｅ．Ｈ．Ｓｍｉｔｈ）Ｌｅｏｎｉａｎ（为害杜鹃）、Ｐ．ｐａｌｒｎｉｖｏｒａ（Ｂｕｔ     

大豆疫霉基因组SSR标记开发

 【目的】开发大豆疫霉基因组SSR标记,为从分子水平深入研究大豆疫霉及其近缘种提供一种理想的分子标记。【方法】用FPCR软件从大豆疫霉全基因组序列中查询SSRs,选择合适的SSR序列用Primer5.0软件设计引物。【结果】从发现的1 234个含有2～4个碱基重复单元的完全SSRs中选出260段设计引物,经10个大豆疫霉分离物基因组DNA检测,有213对(81.9%)扩增出SSR特征条带,其中114(53.5%)对引物扩增出多态性。通用性检测表明,14.6%～28.6%引物分别在选择的8个疫霉种中有效扩增。基于10个SSR标记数据进行聚类分析,结果表明表明这些标记可以完全区分大豆疫霉及其它疫霉。【结论】大豆疫霉基因组SSR标记具有高多态性,是大豆疫霉遗传变异、遗传多样性、及遗传图谱构建等研究理想工具。部分大豆疫霉基因组SSR标记在其近缘种中具有通用性,可以用于疫霉菌的系统进化、鉴定、区分及开发近源种的SSR标记。特别开发的SSR标记,在大豆疫霉基因组中具有准确的位置,将极大地方便大豆疫霉菌功能基因的定位和克隆,以及进行疫霉菌的比较基因组的研究。     

新疆大豆疫霉的来源分析

应用SSR标记对新疆地区大豆疫霉菌（Phytophthora sojae Kaufmann ＆ Gerdemann）的遗传多样性和与美国、黑龙江、福建等3个不同地理来源大豆疫霉菌的遗传关系进行研究。结果表明,新疆地区大豆疫霉菌遗传多样性相对较低,遗传背景单一,推断为外来生物。与大豆疫霉菌美国分离物和福建分离物相比,新疆分离物与黑龙江分离物的遗传关系最近,表明新疆大豆疫霉菌可能从黑龙江传人。     

新疆大豆疫霉菌的毒力组成研究

为明确大豆疫霉菌在新疆的分布和新疆大豆疫霉菌的毒力组成,采用大豆叶碟诱捕法从新疆大豆田土壤中分离大豆疫霉菌,并采用幼苗下胚轴伤口接种法鉴定大豆疫霉菌的毒力。结果共分离到26个大豆疫霉菌株,毒力测定鉴定出20个不同的毒力型,说明新疆的大豆疫霉菌表现出丰富的毒力多样性。新疆大豆疫霉菌对抗病基因Rps1a,Rps1c和Rps1k的毒力频率均为0,因此,可应用这3个抗病基因对新疆大豆疫霉根腐病进行有效控制。     

番木瓜棕榈疫霉核糖体DNA-ITS序列分析

采用真菌核糖体转录间隔区通用引物ITS1和ITS4,PCR扩增了2株分离自广州的番木瓜疫霉菌(Phytoph-thorasp.)的核糖体基因ITS序列,并对PCR产物进行了克隆测序.供试菌株C0506071、C0506072分别克隆出814 bp、830 bp的序列,两菌株ITS序列间的相似同源率为99.62%.将供试菌株的ITS序列与GenBank中登陆的20株疫霉菌株的ITS序列进行聚类分析,结果表明,供试菌株与GenBank注册的AF467093、AJ517463聚在同一分枝上,均为棕榈疫霉(Phytophthora palmivora),其他不同的疫霉种聚在不同的分支上,系统学关系较远.这表明分离自广州的2株番木瓜疫霉菌为棕榈疫霉(Phytophthora palmivora).     

银法利和烯酰吗啉对烟草黑胫病菌的毒力测定及田间防治试验

采用菌丝生长速率法测定了银法利(氟吡菌胺+霜霉威盐酸盐)、烯酰吗啉对7株来自广西不同烟区、对甲霜灵敏感性不同的烟草黑胫病菌的毒力,结果表明银法利、烯酰吗啉对7个烟草黑胫病菌株均具有很好的抑制作用,EC50值范围分别为1.1090～1.9661、0.6218～1.0625 mg/L,两者对甲霜灵敏感型、一般耐药型、耐药型的菌株的毒力无明显差异,说明它们与甲霜灵没有交互抗性.盆栽试验表明银法利和烯酰吗啉对耐甲霜灵菌株引起的黑胫病有良好的防治效果.2008 ～2010年的田间防治试验结果显示,68.75％银法利悬浮剂和50％烯酰吗啉可湿性粉剂对烟草黑胫病具有很好的防效,显著优于常用药剂68％精甲霜灵·代森锰锌水分散粒剂的防效.     

黑龙江省大豆疫霉菌生理小种鉴定及大豆种质的抗性评价

 研究大豆疫霉菌生理小种、大豆种质资源的抗病性和耐病性,旨在为有效的病害防治奠定基础。对来源于黑龙江省5个县(市)和1个国营农场的18个大豆疫霉菌分离物进行生理小种鉴定,共鉴别出5个大豆疫霉菌生理小种,其中两个小种的毒力公式分别为7和6,7,与国际上已报道的1号和13号小种相同,另外3个小种为未报道的新小种,1号小种为佳木斯优势生理小种。在145份黑龙江省大豆种质中,有10个选育品种、6个地方品种和19个育成品系抗1号小种,占鉴定资源的24.14%,其中地方品种中抗病材料仅为10.00%,这表明黑龙江省大豆抗性资源相对较少。在鉴定的选育品种和地方品种中未发现高耐品种。     

我国部分地区大豆疫霉群体遗传分析

为探究我国大豆疫霉菌的遗传多样性,使用13对简单重复序列标记(simple sequence repeats,SSR)引物对来自部分地区的79个大豆疫霉菌分离物进行了DNA指纹分析.13对SSR引物共扩增出33条条带,其中多态性条带比例为97.0%.SSR指纹聚类分析表明:当以相异距离0.79为阈值时,可将79个大豆疫霉菌分离物划分为13个遗传聚类组.多数大豆疫霉菌分离物之间遗传相似性较低,表明我国大豆疫霉在DNA水平上发生了显著的遗传变异,从而具有较丰富的遗传多样性.大豆疫霉菌DNA多态性特征与分离物地理来源之间存在一定相关性,说明不同地区的大豆疫霉菌群体与大豆栽培品种之间的互作很可能是引起大豆疫霉菌发生广泛遗传变异的主要原因.