优良玉米杂交种金玉818指纹图谱构建及其纯度鉴定

为构建优良杂交玉米新品种金玉818的指纹图谱,筛选适用于该品种真实性和纯度鉴定的SSR引物,利用SSR分子标记技术构建指纹图谱,筛选引物对金玉818种子进行纯度鉴定,并对鉴定结果进行验证。结果表明:在40对标准SSR引物中筛选出25对多态性好、清晰稳定的引物构建金玉818指纹图谱,筛选出15对适用于该品种真实性和纯度鉴定的引物,其中最佳引物是bnlg16lk8、umc1125y3、umc1429y7、phi053k2、umc1147y4和bnlg2305k4;利用phi053k2、bnlg16lk8和umc1429y7鉴定金玉818种子的纯度分别为92.5%、92%和93.5%,引物间鉴定结果吻合度高,结果可靠。     

SSR标记在糯玉米品种鉴定上的应用

采用NY/T 1432—2014《玉米品种鉴定技术规程SSR标记法》中的20对简单重复序列(SSR)引物对市场上抽检的苏玉糯11、苏玉糯901、苏玉糯13、苏玉糯14、苏玉糯639等5个糯玉米品种进行真实性鉴定。结果表明,每个抽检品种与标准品种至少有6个差异位点,这5个品种均与相应的标准品种不同;此外,umc1545y2、umc1335y5、umc2105k3、umc1705w1、umc1125y3、umc2007y4、phi053k2、bnlg2305k4等8对引物多态性较好,在今后糯玉米品种鉴定中可优先采用。     

玉米杂交种新科910指纹图谱构建及其纯度鉴定

利用60对分布于玉米10条染色体上的引物,对新科910及其父母本进行SSR分析。从中筛选出15对条带清晰、重复性好的引物,用于构建新科910指纹图谱,并将其数字化,计算出出现相同指纹图谱的概率为4.44×10~(-16),概率极低,说明以这15对引物构建的新科910指纹图谱鉴定其真实性是可行的。这15对引物分别是phi96100y1、umc2105k3、bnlg2291k4、umc1705w1、bnlg2305k4、bnlg161k8、phi299852y2、umc2160k3、umc1125y3、bnlg240k1、umc2084w2、umc1231k4、phi041y6、umc1432y6、umc2163w3。其中,umc1705w1、bnlg2305k4、umc1432y6、umc2084w2、phi041y6、umc2163w3这6对引物可用来鉴定新科910纯度。任选1对引物umc2084w2用来检测新科910的纯度,结果为97.30%,与预期结果(97%)基本相符。因此,用这6对引物来鉴定新科910纯度是可行的、结果是可信的。     

浙江省7个特用玉米品种的SSR纯度检测

以浙江省7个特用玉米品种为材料,选用38对玉米SSR引物进行纯度检测。共筛选差异性引物23对,其中,umc1125y3,bnlg1520K1,phi233376y1,phi041y6等引物在多个品种中表现多态性。经SSR检测7个特用玉米品种超甜3号、超甜4号、浙甜6号、浙甜8号、浙糯玉1号、浙糯玉3号、浙糯玉4号的纯度分别为87.0%,96.8%,96.5%,98.9%,89.3%,95.8%和99.0%。     

玉米SSR标记的多重PCR试验分析

以玉米自交系4011为试验材料,选用玉米SSR核心引物20对,利用单重SSR分子标记技术体系,采用逐步递加引物对的方法,尝试了二重、三重、四重、五重、六重PCR试验.结果筛选出了6个适宜六重PCR扩增的SSR标记组合:phi053/umc2084/umc1196/bnlg1154/mmc0151/bnlg1025、umc1231/umc1196/phi053/umc1222/mmc0151/bnlg1025、umc1231/umc1196/phi053/umc1222/bnlg240/bnlg1025、umc1231/umc1196/phi053/umc1222/1154/bnlg249、bnlg1451/umc1196/phi053/umc1019/phi072/bnlg1025、bnlg1451/umc1196/phi053/umc1545/bnlg2291/bnlg1025.这些标记组合的PCR扩增和PAGE电泳检测良好,从而可提高SSR标记检测的效率,并且降低试验成本.     

沃玉964玉米品种SSR指纹图谱的构建

以玉米品种沃玉964及其亲本为试验材料,进行了沃玉964玉米品种SSR指纹图谱的构建研究。结果表明,从72对玉米SSR引物中筛选出在沃玉964双亲间多态性好、重复性高的6对引物(分别为Phi090、umc2105、bnlg2305、umc1125、phi065和umc1506),可用于沃玉964的真实性检测,同时可为鉴定种子纯度提供参考。该方法准确可靠、实用性强,为生产上沃玉964真实性的快速、有效鉴定提供了科学依据。     

利用SSR技术鉴定玉米杂交种“家佳荣2号”的种子纯度

【目的】玉米杂交种子的纯度直接影响农作物的产量、品质和农户的收成,建立一套简单、快速、准确、可靠的纯度鉴定方法十分必要。【方法】本试验以‘家佳荣2号’玉米杂交种及其父母本为材料,采用幼叶CTAB法和碱煮法提取DNA两种方法,利用SSR标记技术从20对玉米纯度鉴定标准SSR引物中筛选应用于‘家佳荣2号’种子纯度鉴定的引物,同时人为掺入其他品种籽粒以验证特异引物的可靠性。此外,同步采用公认的田间小区种植鉴定法研究‘家佳荣2号’的种子纯度,比较室内和田间种植鉴定的纯度差异。【结果】采用幼叶CTAB法提取得到的DNA比碱煮法效果更好;筛选得到引物phi072k4和bnlg2291k4是‘家佳荣2号’种子纯度鉴定的特异性引物,掺杂验证结果可靠,‘家佳荣2号’室内SSR鉴定纯度为96.4%,田间种植鉴定的纯度为97.5%,2种方法结果高度一致。【结论】幼叶CTAB法提取DNA更适合玉米种子纯度的分子鉴定;SSR方法可用于玉米杂交种纯度的室内快速鉴定。     

豫玉22玉米杂交种子纯度的SSR和SNP分子比较鉴定

为研究豫玉22玉米杂交种子的SSR和SNP两种分子标记纯度鉴定方法,为快速有效鉴定玉米种子纯度提供依据。采用SSR荧光标记法和SNP分子标记的KASP技术对豫玉22玉米杂交种子进行基因组DNA提取、引物筛选、基因型分析、纯度鉴定。豫玉22的SSR特异性引物为umc2007y4和bnlg161k8,纯度鉴定结果为97.92%。SNP特异性引物MaSNP64和MaSNP245纯度鉴定结果是98.44%。SSR和SNP分子标记鉴定豫玉22玉米杂交种子纯度的最佳方法,为拓展玉米杂交种纯度鉴定方法具有指导意义。     

利用SSR标记鉴定玉米杂交种南校18号种子纯度

以南校18号玉米杂交种及其亲本自交系为材料,对胚芽和干种子的DNA进行提取,对24对SSR引物进行筛选,获得适合该杂交种纯度鉴定的SSR引物。结果表明,在快速检测中,从干种子胚提取DNA更加便捷、快速,无DNA降解,可用于PCR扩增反应;24对SSR引物中,有3对特异性引物6mmc0241、umc2025、phi323152可用于南校18号杂交种和亲本自交系的纯度鉴定。因此,应用SSR标记结合单籽粒DNA快速提取方法,可以快捷、准确地鉴定玉米杂交种种子纯度。     

构建玉米新品种新科19指纹图谱的SSR引物筛选

以玉米新品种新科19及其亲本为材料,从50对玉米SSR引物中筛选出在新科19双亲之间多态性明显、重复性较好的5对引物bmc1792、bnlg1496、umc2105、bnlg2291和phi065,可用于鉴定新科19的真实性,同时为鉴定该种子的纯度提供参考。该方法具有准确可靠、实用性强等优点,可为生产上杂交种新科19真实性的快捷有效鉴定提供科学依据。     

基于 SSR 分子标记的‘汇丰 2 号’辣椒杂交种子纯度和真实性鉴定

【目的】‘汇丰 2 号’辣椒为杂交一代新品种，具有中早熟、抗病性强、耐储运和品质佳等特性，深受农户和消费者喜爱。为保障种子质量，拟建立一套快速、简便的种子纯度和真实性鉴定方法。【方法】基于辣椒基因组已公开的 SSR 分子标记资源，以‘汇丰 2 号’父、母本为材料，筛选多态明显、条带清晰且扩增稳定的 SSR 标记，对‘汇丰 2 号’杂交种子进行纯度鉴定，并结合田间形态鉴定验证分子标记鉴定的准确性。此外，利用筛选出的 SSR 标记对‘粤红 1 号’、‘汇丰 1 号’、‘汇丰 2 号’和‘汇丰 5 号’4 个品种进行真实性鉴定。【结果】筛选出 2 个 SSR 标记 L0143 和 L0622，其多态明显，且条带清晰、扩增稳定。其中，标记L0143 在母本 W2280 中 PCR 扩增条带为 149 bp，在父本 W2102 中的扩增条带为 141 bp；标记 L0622 在母本和父本中的扩增条带分别为 208 bp 和 196 bp。2 个标记单独使用时均可以准确鉴定‘汇丰 2 号’种子纯度，且 2个标记同时使用可以将‘粤红 1 号’、‘汇丰 1 号’、‘汇丰 2 号’和‘汇丰 5 号’4 个品种区分开，即可鉴定它们的真实性。【结论】筛选出的 SSR 分子标记 L0143 和 L0622 能够快速、准确、低成本、有效的对‘汇丰 2 号’杂交种子进行纯度和真实性鉴定，该鉴定方法操作简单，能够替代传统杂交种子纯度和真实性鉴定的方法，具有较高的商业应用前景。     

SSR标记鉴定玉米品种真实性及纯度的研究

[目的]探讨杂交玉米及其亲本种子真实性和纯度的分子检测判读标准。[方法]以16个玉米杂交种及其双亲和202个骨干自交系为引物筛选材料,分别构建3个杂交种和3个自交系人工群体的验证试验材料,用CTAB法提取幼苗叶片DNA,选137对SSR引物进行SSR扩增及产物检测,用于玉米品种的真实性鉴定和纯度检测,并与同批移栽至大田的种植鉴定结果相比较。[结果]从137对SSR引物中筛选出了多态性信息含量（PIC值）高、扩增条带清晰和重复性好的20对一级和20对二级核心引物,用一级核心引物对杂交种人工群体进行真实性鉴定,根据一级核心引物的扩增结果,从中选取3对（phi080、umc1196、umc2084）表现较好的引物用于杂交种人工群体的纯度检测。ssR分子检测结果与田间种植鉴定结果具有高度一致性。[结论]利用SSR标记技术鉴定玉米品种真实性和纯度的方法是可行的。     

利用SSR技术鉴定苏玉20的纯度

苏玉20是江苏省农业科学院2004年选育成功的高产优质玉米杂交种.以苏玉20玉米杂交种及其亲本为材料,从80对玉米SSR引物中筛选出在苏玉20双亲之间多态性明显、重复性较好的4对引物bnlg1306、phi065、bnlg2291和umc1590用于苏玉20纯度鉴定.这4个SSR标记特异性好,且人为掺杂与田间鉴定均与利用SSR标记鉴定结果高度一致.尤其是,这些引物同时可以用于郑单958的纯度鉴定并可以区分苏玉20和郑单958杂交种.因此,该方法具有准确可靠、实用性强等优点,为生产上杂交种苏玉20纯度的快捷有效鉴定提供了科学依据.     

SSR标记技术鉴定‘新食葵7号’品种纯度的研究

以‘新食葵7号’及其双亲的DNA为模板,对100对SSR引物进行筛选,以期为生产应用提供准确、便捷的杂交种种子纯度鉴定方法。SSR多态引物标记521在‘新食葵7号’母本产生特异条带大小为482bp,父本为447bp;标记563在母本上特异条带大小为352bp,父本为384bp,分子鉴定的纯度和田间鉴定纯度基本一致,通过SSR引物筛选,得到可以区分父本、母本和杂交种的标记引物521和563,这2个引物标记可有效鉴定‘新食葵7号’杂交种种子的纯度。     

山西省主推玉米杂交种纯度鉴定SSR核心引物的筛选

选用10对SSR核心引物对18份山西省玉米杂交种进行DNA指纹分析,并综合考虑多态性和杂合率,认为umc1590和umc1196这2对引物可鉴定17个品种纯度,phi402893,phi102228,phi233376,p-phi072,umc1066和phi022也可作为纯度鉴定的引物。建议采用umc1590,phi402893,phi233376,phi022这4对引物对18个杂交种纯度进行检测。     

基于 SSR 分子标记的‘粤秀 3 号’黄瓜杂交种子纯度及真实性鉴定

【目的】‘粤秀 3 号’黄瓜具有生长势强、产量高、抗病及抗逆性强的特点，是华南地区推广面积较多的品种，本研究以期为其建立一套快速、准确、有效的种子纯度鉴定方法。【方法】利用 200 对 SSR 引物，根据杂种带为父母本互补带型的原则，对‘粤秀 3 号’黄瓜及其亲本进行特异性 SSR 标记物的筛选。将种子纯度鉴定结果与田间生物学鉴定结果进行比较，鉴定所筛选 SSR 引物的准确性。选取‘中农 108’‘园丰 6 号’‘津绿 5 号’‘中农 8 号’‘津研四号’5 个黄瓜品种种子及其他 49 份黄瓜种质材料，与‘粤秀 3 号’黄瓜品种同时检测，对所筛选的 SSR 引物特异性进行鉴定。【结果】从 200 对引物中筛选出符合父母带间成互补带要求的两对 SSR 引物（3B-10 和 2B-41）。3B-10 引物经 PCR 扩增后产生 160 bp 的母本特异条带（P1-A）及 190 bp 的父本特异条带（P2-B），测序比对这两条特异性条带，发现 P2-B 在 49~79 bp 处比 P1-A 多了 5 个 6 碱基的简单重复序列。2B-41 引物经 PCR 扩增后产生 218 bp 的母本特异条带（P1-C）和 206 bp 的父本特异条带（P2-D），经测序比对后发现，与 P2-D 相比，P1-C 在 120~131 bp 处有 12 个碱基的缺失。表明两对 SSR 引物均可有效区分‘粤秀 3 号’杂交种子及其父母本，可快速准确地鉴定‘粤秀 3 号’黄瓜种子纯度。此外，两对 SSR 引物的种子纯度鉴定结果均与田间生物学鉴定结果一致。两对引物均可有效区分‘粤秀 3 号’黄瓜种子与‘中农 108’‘园丰6 号’‘津绿 5 号’‘中农 8 号’‘津研四号’5 个黄瓜品种种子及其他 49 份黄瓜种质资源。但 3B-10 在 49 份种质资源中多态性较高，故 SSR 标记 2B-41 更适用于‘粤秀 3 号’的真实性鉴定。【结论】3B-10 和 2B-41 两对 SSR 引物可快速、准确、有效地对‘粤秀 3 号’杂交种子纯度进行鉴定，鉴定操作较简单、成本较低，可替代传统杂交种子纯度鉴定的方法，其商业应用价值极高。     

SSR分子标记鉴定青花菜杂交种‘津青一号’的纯度

以青花菜新品种‘津青一号’及其亲本为试验材料,用SSR分子标记技术鉴定杂交种种子纯度,从50对SSR引物中,筛选出了1对在杂交种和父、母本之间存在显著差异的引物(L21),该引物扩增片段电泳条带清晰可辨,且杂交种含有父、母本的特异互补带型。利用该引物对108株‘津青一号’杂交种进行纯度鉴定,结果为96.30%,与大田形态鉴定结果 98.15%相比,SSR标记与大田种植鉴定结果基本一致。这表明,引物L21可用于‘津青一号’的纯度鉴定。     

NaCl预处理对糯玉米发芽期耐盐性的影响

糯玉米作为一种主要谷物和重要的工业原料,在我国的粮食安全和工业生产中发挥着重要作用。本研究以‘沪玉糯2号’和‘沪玉糯3号’为试材,利用质量浓度为0(CK)、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%的NaCl溶液对糯玉米种子进行预处理,分析其在质量浓度为0、0.5%、1.0%、1.5%NaCl胁迫下的种子萌发特性。结果表明:无预处理情况下,与对照相比,‘沪玉糯2号’在1.5%NaCl胁迫下其发芽率开始显著下降,而‘沪玉糯3号’则在0.5%NaCl胁迫下开始显著下降; NaCl预处理对‘沪玉糯2号’种子正常萌发影响较小,而2.0%NaCl预处理可能损害‘沪玉糯3号’种子的正常萌发;在0.5%盐胁迫下,1.5%NaCl预处理显著提高了‘沪玉糯3号’的耐盐性;在1.5%盐胁迫下,0.5%NaCl预处理提高了‘沪玉糯2号’的耐盐性,其他预处理则降低了其耐盐性,而1.0%、1.5%和2.0%NaCl预处理显著提高了‘沪玉糯3号’的耐盐性。综上,不同NaCl溶液预处理对提高盐敏感糯玉米品种的耐盐性更为有效。     

利用SSR-BSA技术筛选玉米粗缩病抗性基因分子标记

采用网棚集团接种法,对感病自交系苏951和抗病自交系87-1的P1、P2、F1和F2群体进行了玉米粗缩病抗病性鉴定.并用168对引物进行了亲本间SSR-PCR扩增,其中48对引物在亲本间表现多态性.然后利用这些多态性引物检测F2的抗池和感池,只有6个SSR标记在F2的抗池和感池之间表现出多态性.这6个标记为: 5号染色体上的Blng1237(Bin5.05-5.06)、umc1941(Bin5.06)、phi087 (Bin5.06)、umc1155 (Bin5.05) 和9号染色体的phi065(Bin9.03)、umc1505(Bin9.07).进一步利用这6个SSR标记检测了465个经抗病性鉴定的F2单株的基因型,其中Blng1237和phi087明显表现为偏分离.其余4个标记用于分析表型鉴定表现为抗的181个F2单株的基因型,并对每一标记的分离数值与其相应的孟德尔理论比例(共显性1∶2∶1)相比较,进行χ2适合度检验.结果表明,umc1155、umc1505这2个标记可能与抗性基因有关.     

应用SSR标记技术鉴定强盛16号玉米单交种纯度

试验以强盛16号玉米单交种及相应亲本自交系和20对玉米SSR位点引物为材料,筛选出了适合该杂交种纯度鉴定的SSR位点引物。结果表明,bnlg2331引物的扩增产物呈现双亲互补的特征谱带,易于区分杂交种和亲本自交系。并通过对单籽粒DNA提取等技术环节的改进,建立了一套简单、快速、准确、可靠的种子纯度鉴定方法。